精氨酸修饰壳聚糖基因纳米粒子对血小板GMP-140表达的影响

目的 考察精氨酸修饰壳聚糖基因纳米粒子(ACGN)对血小板GMP-140表达的影响.方法 制备精氨酸修饰的壳聚精(ACS)并朋红外光谱对其进行表征;用共沉降的方法制备精氨酸修饰壳聚糖基因纳米粒子,用凝胶电泳阻滞实验对精氨酸修饰壳聚精与DNA的相互作用进行研究;用酶联免疫双抗夹心法测定血小板α颗粒膜蛋白-140(GMP-140)表达来考察精氨酸修饰壳聚糖基因纳米粒子对血小板激活的影响.结果 红外光谱结果显示精氨酸成功地接枝到壳聚糖上,在正负电荷比≥2:1时,ACS能完全阻滞DNA的迁移,表明所有的DNA均已被ACS完全包覆.壳聚糖基因纳米粒子(CGN)和ACGN在体外均不引起血小板的激活,但在体内则都引起轻微血小板激活.结论 精氨酸修饰壳聚糖纳米粒子对血小板GMP-140的表达没有引起明显的变化,有望成为一种新型的、安全的非病毒基因载体.     

精氨酸修饰壳聚糖基因纳米粒子对血小板GMP-140表达的影响

目的 考察精氨酸修饰壳聚糖基因纳米粒子（ACGN）对血小板GMP-140表达的影响.方法 制备精氨酸修饰的壳聚精（ACS）并朋红外光谱对其进行表征;用共沉降的方法制备精氨酸修饰壳聚糖基因纳米粒子,用凝胶电泳阻滞实验对精氨酸修饰壳聚精与DNA的相互作用进行研究;用酶联免疫双抗夹心法测定血小板α颗粒膜蛋白-140（GMP-140）表达来考察精氨酸修饰壳聚糖基因纳米粒子对血小板激活的影响.结果 红外光谱结果显示精氨酸成功地接枝到壳聚糖上,在正负电荷比≥2：1时,ACS能完全阻滞DNA的迁移,表明所有的DNA均已被ACS完全包覆.壳聚糖基因纳米粒子（CGN）和ACGN在体外均不引起血小板的激活,但在体内则都引起轻微血小板激活.结论 精氨酸修饰壳聚糖纳米粒子对血小板GMP-140的表达没有引起明显的变化,有望成为一种新型的、安全的非病毒基因载体.     

精氨酸修饰壳聚糖基因纳米粒子对血液补体活性和溶血作用的影响

目的 考察精氨酸修饰壳聚糖基因纳米粒子（ACGN）对血液补体活性和溶血的影响.方法 将精氨酸接枝到壳聚糖上制备精氨酸修饰的壳聚糖,用共沉降的方法制备精氨酸修饰壳聚糖基因纳米粒子,用光子相关光谱检测精氨酸修饰壳聚糖基因纳米粒子的粒径,用凝胶电泳阻滞实验对精氨酸修饰壳聚糖与DNA的相互作用进行研究,并考察壳聚糖基因纳米粒子（CGN）和ACGN在体内外对血液补体活性和溶血作用的影响.结果 精氨酸修饰壳聚糖在电荷比为2∶1时能有效地完全包覆DNA,并形成粒径大约为120～180nm的纳米粒子,ACGN和CGN在体内外对红细胞没有明显的破坏作用,在体外对补体系统均没有明显的影响作用,但在体内引起补体的轻微升高.结论 ACGN在体内外没有引起明显的补体激活和溶血作用,有望成为一种新型的、安全的非病毒基因载体.     

精氨酸修饰的壳聚糖作为基因载体的跨膜机制研究

目的研究证实精氨酸修饰壳聚糖（ACS）制备的载基因纳米粒子显著地提高壳聚糖（CS）基因载体的转基因效率,该文进一步探索ACS摄人及跨膜机制对基因转染效率的影响。方法用荧光标记的CS或者ACS与荧光素酶质粒DNA复合制备CS载基因纳米粒子[壳聚糖载基因纳米粒子（CGN）,精氨酸修饰壳聚糖载基因纳米粒子（ACGN）];与大鼠平滑肌细胞系A10细胞、不同跨膜通道的抑制剂（氯丙嗪、非律平和Dynasore）共孵育,以评价其基因递送的跨膜途径。通过与不同跨膜途径的抑制剂共转染,观察不同跨膜通道对转基因效率的影响。结果ACGN细胞摄入量是CGN的2倍[（1.534±0．016）μg／mg蛋白质US（0．755±0．007）μg／mg蛋白质1。与CGN相比,ACGN内吞通道有所改变,非律平（质量浓度5μg／mL,小窝蛋白内吞通道的特异抑制剂）能显著地抑制ACGN的细胞摄入（46．6％）和转基因效率（48．2％）,而小窝蛋白内吞通道对CGN作用不明显。结论实验数据显示,ACS改变了基因载体的内吞通道,促进了基因纳米粒子的细胞摄入量,同时也大幅度地提高了转基因效率。     

N-亚甲基磷酸化壳聚糖与DNA相互作用的研究

目的探讨双亲性壳聚糖衍生物与质粒DNA通过自组装的方式形成基因纳米粒子的可行性,考察载体与质粒DNA的相互作用机制,为开发安全高效的非病毒载体提供新的途径。方法合成了一种双亲性壳聚糖衍生物N-亚甲基磷酸化壳聚糖(NMPCS),利用复凝聚的方法制备NMPCS/DNA纳米粒子复合物。用傅立叶变换红外光谱、核磁共振谱等手段对NMPCS进行了表征,通过凝胶电泳阻滞实验、动态光散射、原子力显微镜、圆二色谱等实验对NMPCS与质粒DNA之间的相互作用进行研究。结果经傅立叶变换红外光谱及核磁共振谱分析表明,改性后的壳聚糖的特征基团有显著变化,证明了亚甲基磷酸基团成功的引入。NMPCS与DNA能自组装形成类似球形的基因纳米粒子。结论壳聚糖基双亲性分子可能与细胞膜中的双亲性分子具有潜在相容性,使得载体/DNA复合物通过一种膜的去组装过程跨越细胞膜而最终表达,从而有望研制出高效的非病毒载体。     

壳聚糖及其修饰物载基因纳米粒子对人初始CD4+T细胞分化的影响

目的 考察壳聚糖及烷基化修饰壳聚糖载基因纳米粒子对人初始CD4+T细胞是否有促分化作用.方法 将壳聚糖或烷基化修饰壳聚糖与去除内毒素的质粒DNA按N/P比为4∶1的比例通过静电作用制备载基因纳米粒子,然后将纳米粒子与人初始CD4+T细胞共孵育,于12、24、48 h以后分别取上清,离心,检测上清中细胞因子IL-4和IF...     

RGD肽表面修饰壳聚糖载基因纳米粒子的体外实验研究

目的 将Arg-Gly-Asp(RGD)肽偶联到壳聚糖(cH)材料表面,并制备成包载质粒DNA的纳米粒子,以未偶连RGD的壳聚糖载质粒DNA作为对照,进行体外内皮细胞转染,观察其是否能提高对内皮细胞的转染效率.方法 以1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基丁二酰亚胺(NHS)为偶联剂,通过酰胺键将RGD肽偶联到壳聚糖表面,对其进行表征,并以未偶连RGD的壳聚糖作为对照,制备载pEGFP-C1质粒DNA纳米粒子,比较2者对Hy926细胞的转染效率.结果 壳聚糖-RGD(CH-RGD)载基因纳米粒子转染Hy926细胞的效率明显高于未偶连RGD的壳聚糖载基因纳米粒子(35.7%vs 14.3%,P<0.001).结论 RGD肽表面修饰壳聚糖载基因纳米粒子可用于体外细胞转染,其对细胞的转染效率明显优于未偶连RGD的壳聚糖.     

RGD肽表面修饰壳聚糖载基因纳米粒子的体外实验研究

目的 将Arg-Gly-Asp(RGD)肽偶联到壳聚糖(cH)材料表面,并制备成包载质粒DNA的纳米粒子,以未偶连RGD的壳聚糖载质粒DNA作为对照,进行体外内皮细胞转染,观察其是否能提高对内皮细胞的转染效率.方法 以1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基丁二酰亚胺(NHS)为偶联剂,通过酰胺键将RGD肽偶联到壳聚糖表面,对其进行表征,并以未偶连RGD的壳聚糖作为对照,制备载pEGFP-C1质粒DNA纳米粒子,比较2者对Hy926细胞的转染效率.结果 壳聚糖-RGD(CH-RGD)载基因纳米粒子转染Hy926细胞的效率明显高于未偶连RGD的壳聚糖载基因纳米粒子(35.7%vs 14.3%,P<0.001).结论 RGD肽表面修饰壳聚糖载基因纳米粒子可用于体外细胞转染,其对细胞的转染效率明显优于未偶连RGD的壳聚糖.     

RGD肽表面修饰壳聚糖载基因纳米粒子的体外实验研究

目的 将Arg-Gly-Asp(RGD)肽偶联到壳聚糖(cH)材料表面,并制备成包载质粒DNA的纳米粒子,以未偶连RGD的壳聚糖载质粒DNA作为对照,进行体外内皮细胞转染,观察其是否能提高对内皮细胞的转染效率.方法 以1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基丁二酰亚胺(NHS)为偶联剂,通过酰胺键将RGD肽偶联到壳聚糖表面,对其进行表征,并以未偶连RGD的壳聚糖作为对照,制备载pEGFP-C1质粒DNA纳米粒子,比较2者对Hy926细胞的转染效率.结果 壳聚糖-RGD(CH-RGD)载基因纳米粒子转染Hy926细胞的效率明显高于未偶连RGD的壳聚糖载基因纳米粒子(35.7%vs 14.3%,P<0.001).结论 RGD肽表面修饰壳聚糖载基因纳米粒子可用于体外细胞转染,其对细胞的转染效率明显优于未偶连RGD的壳聚糖.     

RGD肽表面修饰壳聚糖载基因纳米粒子的体外实验研究

目的 将Arg-Gly-Asp(RGD)肽偶联到壳聚糖(cH)材料表面,并制备成包载质粒DNA的纳米粒子,以未偶连RGD的壳聚糖载质粒DNA作为对照,进行体外内皮细胞转染,观察其是否能提高对内皮细胞的转染效率.方法 以1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基丁二酰亚胺(NHS)为偶联剂,通过酰胺键将RGD肽偶联到壳聚糖表面,对其进行表征,并以未偶连RGD的壳聚糖作为对照,制备载pEGFP-C1质粒DNA纳米粒子,比较2者对Hy926细胞的转染效率.结果 壳聚糖-RGD(CH-RGD)载基因纳米粒子转染Hy926细胞的效率明显高于未偶连RGD的壳聚糖载基因纳米粒子(35.7%vs 14.3%,P<0.001).结论 RGD肽表面修饰壳聚糖载基因纳米粒子可用于体外细胞转染,其对细胞的转染效率明显优于未偶连RGD的壳聚糖.     

Evaluation of the coagulation properties of arginine-chitosan/DNA nanoparticles

Arginine-chitosan conjugate (Arg-CS) was demonstrated to mediate significantly elevated expression of the transgenes in comparison to chitosan (CS). However, little is known about the hemocompatibility of Arg-CS/DNA nanoparticles (ACGN). This study evaluated the coagulation properties of the ACGN and CS/gene nanoparticles (CGN) by looking at the impact of the nanoparticles on the activated partial thrombin time (APTT), prothrombin time (PT), thrombin time (TT), and hemolysis ratio (HR). It demonstrated that both ACGN and CGN, at the concentration containing 50 μg/mL of DNA, led to moderate increases of APTT but no obvious change in PT and TT in vitro. Intravenous injection of CGN or ACGN (125 μg of DNA content/100 g of body weight) into rat did not result in any significant changes in PT but moderately increased APTT and TT. ACGN was demonstrated to be a slightly stronger inhibitor of blood coagulation as compared to CGN. No obvious hemolysis was induced by the nanoparticles. Taken together, the results in the present study indicated that introduction of arginine moieties into chitosan enhanced its anticoagulant property, which would be beneficial for applications in direct contact with blood.     

Evaluation of the impact of arginine-chitosan/DNA nanoparticles on human naive CD4+ T cells

Previous studies showed that arginine-conjugated chitosan (ACS)/DNA nanoparticles (ACGN) mediated significantly higher expression of the transgenes when compared with chitosan (CS)/DNA nanoparticles (CGN). However, the interactions between ACGN and immune cells still remain poorly understood. The present study investigated whether ACGN affected the initial differentiation direction of human naive CD4(+) T cells, either directly or indirectly. It was demonstrated that both ACGN and CGN induced slightly higher production of IL-12 by THP-1 cells in the order of ACGN > CGN. However, this macrophage stimulating activity was much less significant when compared with lipopolysaccharide and did not impact on the differentiation of the naive CD4(+) T cells separated from the nanoparticles and THP-1 cells by a 0.1-μm diameter polycarbonate semipermeable membrane, which allows the pass through of macromolecules including IL-12. It also demonstrated that, when directly exposed to naive CD4(+) T cells, none of the nanoparticles induced either the activation of the naive CD4(+) T cells in the absence of recombinant human IL-4 (rhIL-4) or IFN-γ (rhIFN-γ) that induce naive CD4(+) T cell polarization or any changes in the differentiation direction of the naive CD4(+) T cells in the presence of the corresponding cytokines.     

Arginine conjugation affects the endocytic pathways of chitosan/DNA nanoparticles

Previous reports showed that arginine-rich peptides and oligoarginines facilitated the cellular internalization of DNA and proteins. A number of studies demonstrated that arginine-conjugated chitosan (CS)/DNA nanoparticles (ACGN) mediated significantly higher expression of the transgenes when compared with CS/DNA nanoparticles (CGN). However, the underlying mechanisms remain poorly understood. In the current study, the endocytic pathways through which cells internalize ACGN and CGN were explored by incubating the fluorescent CGN or ACGN with A10 cells in the presence of a variety of inhibitors of different endocytic pathways. The data accumulated in the current study revealed that conjugation of arginine moieties onto CS molecules enhanced the cellular uptake of the polymer/DNA nanoparticles and their transgenic efficacy, probably due to changes in the endocytic pathways, which led to the preference of internalization of ACGN by the caveolin-mediated endocytosis in comparison with that of CGN. These findings provide further support to the previous observations that ACGN mediated much higher expression of the transgenes when compared with CGN.     

壳聚糖基因纳米粒子的细胞摄入和体外毒性研究

用分子量为50kDa和400kDa的壳聚糖分别和[α-32P]dATP标记的质粒DNA,在不同的N/P比下,通过复凝聚方法形成基因纳米粒子。对形成的壳聚糖基因纳米粒子(Chitosan gene nanoparticle,CGN)进行表征,评价CGN体外细胞毒性,研究两种壳聚糖形成的基因纳米粒子被A10和K562细胞摄入的量和速度。结果表明:(1)随着壳聚糖分子量和N/P比的增大,形成的基因纳米粒子更易于进入细胞,同时显示纳米粒子的zeta电位与细胞摄入量之间存在关联性;(2)壳聚糖基因纳米粒子的毒性远远小于商品化的细胞转染试剂Lipofectamine2000。     

不同剂量阿托伐他汀对2型糖尿病患者血小板活性的影响

目的研究不同剂量阿托伐他汀对2型糖尿病患者血小板活性的影响。方法用酶联免疫吸附法(ELISA)测定2型糖尿病患者外周血中血栓素B2(TXB2)、血小板颗粒膜蛋白140(GMP-140)的水平,并比较不同剂量阿托伐他汀对它们的影响。结果阿托伐他汀能显著降低2型糖尿病患者外周血中TXB2、GMP-140的水平,增大剂量效果更显著,而对肝功能及血肌酸磷酸激酶(CK)影响不大。结论阿托伐他汀对2型糖尿病患者血小板活化有抑制作用,其抗血小板活性作用在一定范围内随着剂量的增加而加强,同时具有良好的安全性。     

不同剂量阿托伐他汀对急性冠脉综合征患者体内炎症反应、血小板活性及纤溶活性的影响

目的观察不同剂量阿托伐他汀对急性冠脉综合征(ACS)患者外周血中总胆固醇(TC)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、血栓素B2(TXB2)、血小板颗粒膜蛋白-140(GMP-140)、血浆纤溶酶原激活剂抑制物-1(PAI-1)水平及血浆组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)活性的影响。探讨阿托伐他汀对ACS防治的可能机制及不同剂量阿托伐他汀的安全性。方法ACS患者65例,在拜阿斯匹林、氯吡格雷等基础治疗外随机分为三组,分别给予阿托伐他汀10mg/d、20mg/d、40mg/d睡前服用。入院第1天、第14天分别抽取空腹静脉血16ml。测定hs-CRP、IL-6、TXB2、GMP-140、t-PA、PAI-1及TC、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、肌酸激酶(CK)。采用SPSS13.0统计软件对检测结果的组间及治疗前后进行比较。结果三组TC、hs-CRP、IL-6、TXB2、GMP-140、PAI-1治疗后均有下降、t-PA活性上升,治疗后三组间比较亦有差异;而三组治疗前后CK、ALT、AST组间无显著差异,治疗后无显著上升,以上结果均有统计学意义。结论阿托伐他汀对ACS患者血脂及炎症反应、血小板活性、纤溶活性有积极作用,并在一定范围内随着剂量的增加而加强,同时具有良好的安全性。