分子生物学技术检测MRSA的研究进展

耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)是引起医院与社区获得性感染的主要致病菌之一,近年来呈不断蔓延趋势.由该菌引起的感染不仪使患者的住院时间延长,经济负担加重,而且病死率也升高.因此,快速、准确地对MRSA做出榆测鉴定,能预防和控制MRSA的感染,降低患者的医疗费用,降低病死率等均具有重要的意义.近年来,利用分子生物学技术对细菌的耐药基因进行检测,不仅准确率高、且能快速得出结果.本文就分子生物学诊断技术在MRSA中的检测与临床应用评价作一综述.     

分子生物学技术检测MRSA的研究进展

耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)是引起医院与社区获得性感染的主要致病菌之一,近年来呈不断蔓延趋势。由该菌引起的感染不仅使患者的住院时间延长,经济负担加重,而且病死率也升高。因此,快速、准确地对MRSA做出检测鉴定,能预防和控制MRSA的感染,降低患者的医疗费用,降低病死率等均具有重要的意义。近年来,利用分子生物学技术对细菌的耐药基因进行检测,不仅准确率高、且能快速得出结果。本文就分子生物学诊断技术在MRSA中的检测与临床应用评价作一综述。     

多重PCR直接鉴定临床标本中的耐甲氧西林葡萄球菌

目的：应用多重PCR直接鉴定临床标本中的耐甲氧西林葡萄球菌（MRS），利于迅速的诊断和治疗。方法：采用QiaAmpDNABlood MiniKit，从血培养瓶、尿液、穿刺液的肉汤增菌液、脓汁、痰、阴道及子宫颈分泌物直接迅速提取制备模板DNA：通过多重PCR技术扩增标本的meca基因和葡萄球菌16SrRNA基因。结果：287例葡萄球菌感染的临床标本中，金黄色葡萄球菌的meca基因阳性率为54．4％（55／101），凝固酶阴性葡萄球菌meca基因阳性率为58．6％（109／186）。从模板DNA制备到多重PCR产物的检测不到4h。结论：建立的基于DNA分离和多重PCR检测MRS的技术具有敏感、快速、特异的特点，是一种可靠的实验诊断手段。     

应用多重聚合酶链反应对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌进行SCCmec基因分型

目的应用多重聚合酶链反应（PCR）对临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec基因型及亚型进行分型。方法收集本院2005年2月至7月临床分离的112株金黄色葡萄球菌，应用PCR扩增mecA基因检测MRSA，用多重PCR检测MRSA的SCCmec的基因型及亚型。用全自动微生物分析仪进行药敏试验。结果72株金黄色葡萄球菌的mecA基因阳性，确定为MRSA，阳性率为64．3％（72／112）。SCCmecⅢ和SCCmecⅢA的阳性率分别为68．1％（49／72）和20．8％（15／72），H16和H56为SCCmecⅡ，H19为SCCmecⅣ，5株MRSA没有被分型。携带SCCmecⅡ、SCCmecⅢ或SCCmecⅢA的菌株均为多重耐药株，而携带SCCmecⅣ的菌株除对B内酰胺类药物耐药外，对其他类别的抗菌素敏感。结论本院分离的MRSA以SCCmecⅢ和SCCmecⅢA为主。多重PCR对MRSA进行SCCmec基因分型结果可靠，适合临床实验室。携带SCCmecⅡ、SCCmecⅢ或SCCmecⅢA的临床分离株耐药性严重。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌快速检测方法的比较

目的 筛选出快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcous aureus,MRSA)的实验方法.方法 从天津医科大学附属肿瘤医院细菌室菌库中提取源自肿瘤患者感染的44株金黄色葡萄球菌,利用苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法、微量肉汤稀释法、Etest法、青霉素结合蛋白2a(penicillin-binding protein 2a,PBP2a)乳胶凝集法5种表型检测MRSA方法进行检测,并与PCR方法进行比较.结果 PCR法检测mecA基因,确定MRSA 36株;以PCR作为金标准,苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法和苯唑西林微量肉汤稀释法检测出MRSA均为32株,敏感度和特异度均为88.9%和100%;E试验检测出MRSA为33株,敏感度与特异度分别为88.9%、87.5%;PBP2a乳胶凝集法检测出MRSA 29株,敏感度与特异度分别为80.5%、100%.结论 PBP2a乳胶凝集法比上述试验报告周期缩短24 h,是一种快速、简便、特异度好且便于临床试验室推广开展的检测MRSA方法.     

MRSA前瞻性监测控制院内传播分析

目的 了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染状况,为控制院内传播提供科学依据.方法 采用前瞻性监测,及时发现MRSA相关病例并分析来源及危险性,督导临床做好隔离工作.结果 监测MRSA 171株,其中93株(54.39%)来于院外,78株(45.61%)来自院内.菌株来源依次为呼吸科、康复科、神经内科、ICU、干部病房.结论 前瞻性监测能及时掌握MRSA感染动态,落实MRSA感染控制制度,有效控制院内传播.     

应用MRSA ID产色琼脂培养基等四种方法检测和鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的比较MRSAID产色琼脂培养基及其他3种方法检测和鉴定甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（MRSA）。方法选择临床118株葡萄球菌用（118株葡萄球菌中金黄色葡萄球菌108株，凝固酶阴性葡萄球菌10株）细菌鉴定仪鉴定到种，用MRSAID琼脂筛选法、苯唑西林平板筛选法、头孢西丁纸片法比较MRSA的检测情况，同时检测金黄色葡萄球菌的mecA基因作为金标准，同时用大肠埃希菌ATCC25922，金黄色葡萄球菌ATCC25923，铜绿假单胞菌ATCC27853和粪肠球菌ATCC29212做干扰试验。结果金黄色葡萄球菌用PCR检测其meeA基因，共检测到80株阳性菌株；用MRSAID琼脂筛选法符合率为100％，苯唑西林平板筛选法符合率为97．5％，头孢西丁纸片法符合率为100％；有1株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）和1株凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）对MRSAID琼脂的显色有干扰，出现了浅绿色的细小菌落。用标准菌株做对照均没有生长。结论MRSAID琼脂平板可以对MRSA进行主动快速监测。     

实时荧光定量聚合酶链反应快速检测MRSA的应用研究

目的研究实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床应用。方法收集2017年1月至2018年12月重庆市南川区人民医院患者体液标本分离培养的446例金黄色葡萄球菌,采用实时荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌nuc基因和mecA基因。结果 446例金黄色葡萄球菌均检出nuc基因,符合率为100.00%。经全自动细菌培养鉴定出的96例MRSA中均检出mecA基因,检出符合率为100.00%。在全自动细菌培养鉴定及药敏分析仪上检出的甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌中有2例检测到mecA基因,其检测正确率为97.96%(96/98)。结论实时荧光定量PCR检测MRSA耗时短,正确率高,用于临床快速鉴定MRSA有明显优势。     

聚合酶链反应检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因

建立聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔＳ．ａｕｒｅｕｓ，ＭＲＳＡ）ｍｅｃＡ基因的技术。四种ＤＮＡ提取方法检测灵敏度依次为超声裂解法（５×１０５ＣＦＵ／ｍｌ）、溶菌酶表面活性剂法（５×１０６ＣＦＵ／ｍｌ），表面活性剂法（１×１０７ＣＦＵ／ｍｌ）和直接煮沸法（１×１０８ＣＦＵ／ｍｌ），直接煮沸法具有简便性。引物的正链位于１８１～２００、负链位于３１１～３３０，序列分别为５＇－ＧＡＡＡＴＧＡＣＴＧＡＡＣＧＴＣＣＧＡＴ，５＇－ＧＣＧＡＴＣＡＡＴＧＴＴＡＣＣＧＴＡＧＴ，其扩增产物长度为１５０ｂｐ。五种常见菌证明本法具有较高特异性。苯唑青霉素ＭＩＣ水平与ｍｅｃＡ基因之间具有很好的相关性，ＭＩＣ≥４μｇ／ｍｌ的２２株菌均检出ｍｅｃＡ基因，提示苯唑青霉素常规检测ＭＲＳＡ的可行性。ＰＣＲ方法对于隐匿型耐药株的检出具有重要价值。     

多重聚合酶链反应检测耐甲氧西林葡萄球菌

目的应用一种敏感快速的多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）,检测耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）和凝固酶阴性葡萄球菌（ＭＲＣＮＳ）。方法临床分离的北京地区金黄色葡萄球菌１２３株,ＭＲＣＮＳ１２２株,用溶壁素和蛋白酶Ｋ制备模板ＤＮＡ,设计葡萄球菌甲氧西林耐药的决定基因,金黄色葡萄球菌独有的一个辅助基因和细菌中均有的１６ＳｒＲＮＡ基因引物,通过多重ＰＣＲ技术对标本进行扩增。结果１２３株金黄色葡萄球菌的ｆｅｍＡ基因１００％（１２３／１２３）阳性,ｍｅｃＡ基因阳性的占１８．７％（２３／１２３）,１２２株ＭＲＣＮＳ的ｆｅｍＡ１００％（１２２／１２２）阴性,ｍｅｃＡ阳性的占２４．６％（３０／１２２）。１６ＳｒＲＮＡ基因片断在多重ＰＣＲ中作为内部参照避免了假阴性结果的出现。结论建立的多重ＰＣＲ技术检测ＭＲＳＡ和ＭＲＣＮＳ具有敏感、快速、特异的特点,是一种可靠的实验诊断手段。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药机制及检测方法研究进展

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是引起医院感染的重要病原菌之一，其感染巳成为临床治疗中颇为棘手的问题，MRSA感染、乙型肝炎和获得性免疫缺陷综合征被列为世界范围内三大最难解决的感染性疾患，成为各国学者关注与研究的热点。本文结合分子生物学技术的发展，就MRSA的耐药机理及检测方法的研究进展作一综述。     

建立检测血液中EC、KP、SA和MRSA的多重PCR方法

目的建立快速检测血液中常见致病菌包括大肠埃希菌(EC)、肺炎克雷伯菌(KP)、金黄色葡萄球菌(SA)及耐甲氧西林SA(MRSA)的多重聚合酶链反应(PCR)方法,有利于败血症的及时治疗。方法建立多重PCR方法对EC phoA基因、KP mdh基因、SA femA基因和MRSA mecA基因进行检测,并将16SrDNA作为致病菌感染对照。结果采用建立的多重PCR方法进行检测的特异性为100%,EC检测限为2.75×102CFU/mL,KP为2.43×103 CFU/mL,SA为3.13×102 CFU/mL,MRSA为3.03×102 CFU/mL;用多重PCR方法和传统血培养方法对300个血标本进行检测,传统血培养方法检测出187个血标本内阳性,多重PCR方法有4个血标本为假阴性,未能被检出。结论建立的多重PCR方法可简便、及时地检测血流感染中的EC、KP、SA和MRSA。     

一种快速检测医务人员鼻前庭中MRSA 及MRCNS的方法评估

目的:评价一种快速检测医务人员鼻前庭中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的方法的临床应用价值.方法:对近期医院发生葡萄球菌感染较多科室(ICU、神经外科)的医务人员鼻前庭进行采样和培养后,同时用VITEK-32全自动微生物分析仪法、直接多重PCR检测法对其进行鉴定,并以常规细菌培养 + VITEK-32全自动微生物分析仪法检测结果为标准,评价直接多重PCR检测法的敏感性、特异性.结果:用仪器法从102名医务人员的鼻拭子中分离到金黄色葡萄球菌16株(MRSA14株,MSSA 2株),MRCNS 38株;直接多重PCR检测法共检测出金黄色葡萄球菌14株(MRSA 13株,MSSA 1株),MRCNS检出33株.结论:直接多重PCR法灵敏度较高、特异性强、简单快速,适用于直接快速检测医务人员鼻前庭中MRSA 和MRCNS,该方法对加强医务人员医院感染的预防与控制有重要的意义.     

社区医院与三级综合医院MSSA与MRSA的耐药率比较

目的 统计分析社区医院与三级综合医院MSSA与MRSA构成比及耐药率,为葡萄球菌感染合理用药提供依据.方法 采用纸片扩散法,按照CLSI标准判断金黄色葡萄球菌(SA)对抗菌剂的耐药性并统计MSSA及MRSA耐药情况.结果 社区医院检出74株金黄色葡萄球菌中有35株为MRSA,构成比47.3%,三级综合医院检出301株金黄色葡萄球菌中有189株为MRSA,构成比为62.8%.药敏结果显示,甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)门诊的耐药率综合医院均比社区医院高,尤其是庆大霉素和红霉素耐药率分别为35.5%与5.9%;80.6%与35.3%.MSSA住院的耐药率红霉素、克林霉素及复方新诺明三类药物社区医院高于综合医院,尤其是克林霉素耐药率为68.2%与43.2%.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)综合医院与社区医院住院患者比较庆大霉素、克林霉素耐药率都增高,分别是88.0%与74.2%;92.7%与77.4%.两院均未检出对万古霉素耐药的菌株.结论 三级综合医院MRSA占SA中的比例明显高于社区医院,MRSA耐药率明显高于MSSA.目前社区与三级综合医院金黄色葡萄球菌耐药严重,临床应根据药敏结果合理使用抗菌剂.     

MRSA和MSSA氨基糖苷类药物耐药性和耐药基因检测

目的比较耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(M RSA)和甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(M SSA)对氨基糖苷类药物耐药性和耐药基因携带的不同。方法运用K-B法和PCR方法分别对16株M RSA和24株M SSA 4种氨基糖苷药物(丁胺卡那霉素、奈替米星、庆大霉素、妥布霉素)耐药性和氨基糖苷类耐药基因进行检测。结果M RSA与M SSA对氨基糖苷类药物耐药率分别为93.8%,62.5%,100%,100%和0.0%,0.0%,29.2%,33.3%,三种氨基糖苷类药物耐药基因aac(6')/aph(2')、aph(3')III、an t(4',4')携带率分别为68.8%,62.5%,6.3%和29.2%,8.3%,0.0%。结论M RSA较M SSA对氨基糖苷类药物有着更高的耐药性和耐药基因携带率。M RSA较M SSA对氨基糖苷类药物存在着更为复杂的耐药机制。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌多重耐药基因检测

目的 了解金黄色葡萄球菌（金葡菌）β内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类抗生素耐药基因的分布特点，评估耐药性基因型与表型测定法的相关性。方法 聚合酶链反应（PCR）测定本地分离100株金葡菌的β内酰胺类耐药基因mecA、氨基糖苷修饰酶基因aae（6′）／aph（2″）、aph（3′）-Ⅲ、ant（4′，4″）、大环内酯类23s rRNA甲基化酶基因erm、四环素类核糖体保护蛋白基因tetM的发生率，纸片扩散法测定苯唑西林、庆大霉素、红霉素、四环素的耐药性。结果 100株受试菌中mecA阳性66株（MRSA），最常见的耐药基因是erm＋tetM，存在于89．4％的MRSA中，最少见的是ant（4′，4″），存在于4．5％的MRSA中，MRSA的aae（6′）／aph（2″）、aph（3′）-Ⅲ、erm、tetM检出率分别为97．.％、72．7％、100％、89．4％，明显高于MSSA的11．8％、2．9％、44．1％、8．8％；66株MRSA中，43株（65．2％）同时检出aae（6′）／aph（2″）、aph（3′）-Ⅲ、erm、tetM4种基因，58株（87．9％）同时检出aae（6′）／aph（2″）、erm、tetM3种基因，34株MSSA中，仅2株（5．9％）同时检出aae（6′）／aph（2″）、erm、tetM3种基因；苯唑西林、庆大霉素、红霉素、四环素与其相应的耐药基因mecA、age（6′）／aph（2″）、erm、tetM的符合率分别为96％、99％、96％、84％，81株红霉素表型耐药菌中79株（97．5％）为大环内酯．林可霉素．链霉菌素B（MLS8）结构型耐药。结论耐药基因在金葡菌中均可检出，金葡菌对氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类抗生素耐药与苯唑西林耐药紧密相关，大环内酯类主要是结构型耐药，基因型与表型测定有较高的符合率。     

术后MRSA肺炎的危险因素分析

目的分析术后耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）肺炎相关危险因素,以制定有效的防护措施。方法回顾性收集2007年10月—2008年12月我院急症和择期手术后确诊为肺炎的406例病人的资料,用SPSS软件分析术后MRSA肺炎相关危险因素。结果确诊MRSA肺炎33例,检出率为8.12%,死亡8例,病死率24.2%。单因素相关分析筛选出术后MRSA肺炎发病的8项可能危险因素：年龄≥60岁、住院≥20 d、广谱抗生素使用〉10 d、颅脑手术、气管插管或切开（未行机械通气）、机械通气、深静脉置管、抑酸剂的应用。多因素Logistic回归分析提示,住院≥20 d、广谱抗生素使用〉10 d、颅脑手术、气管插管或切开是术后MRSA肺炎发病的独立危险因素。结论住院≥20 d、广谱抗生素使用〉10 d、颅脑手术、气管插管或切开是术后MRSA肺炎发病的独立危险因素,需要综合预防才能降低其发病率。     

耐甲氧西林葡萄球菌的临床检测

目的探讨沈阳地区耐甲氧西林葡萄球菌（ＭＲＳ）的感染情况，流行特征，应用ＭＲＳ鉴别培养，聚合酶链反应产和的酶联检测（ＥＤ－ＰＣＲ）及常规药敏试验法。结果从７５株葡萄球菌中同耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）１０株，耐甲氧西林血浆凝固酶阴性力葡萄球菌（ＭＲＣＮＳ）１３株。１０株ＭＲＳＡ的血浆凝固酶型别主要集中在Ⅳ型，Ⅱ型次之，结论 沈阳地区耐甲氧西林葡萄球菌染较为严重（２３／７６），主要的血浆凝固酶     

MRSA杀白细胞素基因检测和SCCmec分子流行病学调查

目的 了解我院临床分离的耐甲氧西林金葡菌(MRSA)葡萄球菌染色体mec基因盒(staphyloccoccal cassette chromosome mec,SCCmec)的分布和杀白细胞毒素(Panton-Valentine Leukocidin,PVL)基因的携带状况.方法 收集我院2005年10月-2006年6月从临床标本中分离的30株MRSA(mecA基因阳性).运用多重PCR检测SCCmec的基因型和亚型;PCR扩增PVL基因;纸片扩散法检测MRSA对10种抗菌药物的耐药性.结果 30株MRSA中,SCCmecⅡ型6株(20.0%);SCCmecⅢ型15株(50.0%);SCCmecⅣa型1株和SCCmecⅤ型2株.6株MecA基因阳性菌株未能分型.PVL总阳性率36.7%(11/30),其中SCCmecⅡ1株、SCCmecⅢ5株、SCCmecⅣa 1株,SCCmecⅤ2株、未分型2株.SCCmecⅡ型和SCCmecⅢ型菌株除对β内酰胺类抗生素耐药以外,对其他抗菌药物呈现多重耐药.SCCmecaⅣa和SCCmecⅤ型的菌株除对β内酰胺类抗生素耐药以外,对其他类抗菌药物均敏感.结论 我院临床分离MRSA的SCCmec型别主要以SCCmecⅢ和SCCmecⅡ为主;PVL基因的阳性率较高;携带SCCmecⅡ和SCCmecⅢ的MRSA对抗菌药物呈现多重耐药现象.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性分析

目的了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的耐药情况。方法对临床分离的金黄色葡萄球菌进行耐药性分析。结果共分离出金黄色葡萄球菌137株，MRSA的分离率为37．2％。MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）对常用抗生素的耐药率明显不同，未发现万古霉素敏感性降低的金黄色葡萄球菌。结论治疗金黄色葡萄球菌感染时应筛查MRSA，根据药敏试验结果选择抗菌药物，延缓细菌耐药性的产生，控制耐药菌株的播散和流行。