黄芪多糖对浆细胞样树突状细胞功能及成熟的影响

目的:通过体外实验研究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对浆细胞样树突状细胞(Plasmacytoid dendritic cell,pDC)功能及成熟的影响,为进一步阐明黄芪多糖的免疫学活性提供依据。方法:从健康志愿者外周血分离单个核细胞,流式细胞仪分选pDC,加入0、50、100、200mg/L的黄芪多糖共孵育,24小时后收集上清液,应用酶联免疫吸附试验检测pDC分泌的IFN-α、TNF-α、IL-6量,5天后收集细胞,应用流式细胞仪检测树突状细胞(Dendritic cell,DC)表型CD11c、CD80、CD86阳性率、光镜观察DC的形态、扫描电镜观察DC的超微结构。结果:黄芪多糖显著提高pDC分泌的IFN-α、TNF-α、IL-6量,并且呈黄芪多糖浓度依赖性(P0.05);黄芪多糖可促进pDC向DC的分化和成熟,并呈黄芪多糖浓度依赖性(P0.05)。结论:黄芪多糖能够增强pDC的功能,并促进其向DC的分化和成熟。     

雷公藤内酯醇对浆细胞样树突状细胞功能及成熟的影响

目的 通过体外试验研究雷公藤内酯醇(triptolide)对浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cell,pDC)功能及成熟的影响,为进一步阐明雷公藤内酯醇的免疫学活性提供依据.方法 从健康志愿者外周血分离单个核细胞,流式细胞仪分选pDC,加入0、5、10、30 μg/L的雷公藤内酯醇共孵育,24 h后收集上清液,ELISA检测pDC分泌的IFN-α、IL-6、TNF-α量,5 d后收集细胞,流式细胞仪检测树突状细胞表型CD11c、CD80、CD86阳性率,光镜观察DC的形态,扫描电镜观察DC的超微结构.结果 雷公藤内酯醇显著降低pDC分泌的IFN-α、IL-6、TNF-α,并呈雷公藤内酯醇浓度依赖性(P＜0.05);雷公藤内酯醇可抑制pDC向DC的分化和成熟,并呈雷公藤内酯醇浓度依赖性(P＜0.05).结论 雷公藤内酯醇能够降低pDC的功能,并抑制其向DC的分化和成熟.

Abstract：

Objective To explore the mechanism of immunomodulatory activity of triptolide on healthy volunteers peripheral blood mononuclear cells (PBMC)-derived plasmacytoid dendritic cells (pDCs). Methods Healthy volunteers-derived pDCs were sorted by flow cytometry, then incubated with triptolide (0, 5, 10, 30 μg/L). After 24 hours, we detected the concentration of IFN-α, IL-6, TNF-α using ELISA. After 5 days, the cultrural cells were collected and analyzed by flow cytometry, light microscope and electron microscope scanning. Results Triptolide-treated pDCs secreted lower level of IFN-α,IL-6 ,TNF-α, triptolide could inhibit pDCs differentiation to DCs which displayed more immature morphology and immunophenotypes than untreated-pDCs. Conclusion Triptolide could decrease the immune function of pDCs, inhibit differentiation and maturation of pDCs.     

载脂蛋白A-I对树突状细胞表型及功能影响

目的:探讨载脂蛋白A-I(ApoA-I)对人外周血树突状细胞(PBDC)及体外培养的单个核诱导的树突状细胞(MD-DC)的影响及其机制。方法:采用免疫磁珠法,直接分离PB-DC或通过GM-CSF,IL-4诱导生成MDDC,DC经ApoA-I,LPS或TNF-α刺激后,用流式细胞技术(FCM)检测树突状细胞表面协同刺激分子表达的变化及细胞的吞噬能力;酶联免疫吸附法(ELISA)检测DC分泌的细胞因子;CFSE法检测经刺激后DC对T细胞增殖的影响。结果:分离高纯度PBDC,并成功诱导生成未成熟MDDC;经FCM检测,ApoA-I刺激后的PBDC和MDDC膜表面CD83分子表达上调,同时MDDC表面的CD40、CD86及MHC-Ⅱ分子的表达均增强;吞噬能力减弱;IL-12和TNF-α的分泌增加;并且可以诱导Th细胞的增殖。结论:在体外ApoA-I可以诱导PBDC和MDDC的成熟、活化,刺激其分泌细胞因子,发挥其免疫应答中抗原呈递,促进Th分化的作用;通过该作用ApoA-I可能参与了动脉粥样硬化的发生,发展中的免疫应答。     

黄芪多糖对树突状细胞表型及功能成熟的影响

目的 通过体外试验研究黄芪多糖（Astragalus mongholicus, ASP） 对树突状细胞（dendritic cells，DC）功能调节的机制，为进一步阐明黄芪多糖的免疫学活性提供依据。方法 应用流式细胞仪检测技术、扫描电镜技术、酶联免疫吸附试验检测DC表型和功能的各种指标。结果 本实验应用小鼠骨髓来源的DC，通过体外试验证明了黄芪多糖能够提高DC表面分子CD11c和MHCⅡ的表达，并且呈黄芪多糖浓度依赖性；空白组DC的吞噬功能很强，LPS组DC和黄芪多糖处理组DC吞噬功能都明显下降；黄芪多糖能够促进DC白细胞介素-12（IL-12）的表达；电镜观察DC的超微结构，可见黄芪多糖处理组DC突起增多，形态上更加成熟。结论 本实验结果证实了黄芪多糖能促进小鼠骨髓来源的DC表型及功能的成熟。     

Aurora蛋白激酶抑制剂VX-680对人肝癌细胞HepG2细胞间同质黏附力和迁移能力的影响

目的:研究Aurora蛋白激酶抑制剂VX-680对人肝癌细胞HepG2细胞间同质黏附力和迁移能力的影响。方法:分别设立实验组和对照组:实验组加VX-680,总共设置3个浓度组(3.125μmol/L组、6.25μmol/L组和12.5μmol/L组);对照组加DMSO。采用细胞缓慢聚集实验和分离实验观察不同浓度VX-680对HepG2细胞间黏附能力的影响。通过划痕愈合实验检测不同浓度VX-680对Hep G2细胞迁移能力的影响。Western blot检测HepG2细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。结果 :细胞缓慢聚集实验结果显示,相比对照组,各实验组细胞所形成的细胞团块数均明显减少(P0.01)。细胞分离实验结果显示,随着VX-680浓度的升高,N_(TC)/N_(TE)的比值逐渐降低,即细胞间黏附能力逐渐增强。划痕愈合实验结果显示,相比对照组,随着VX-680浓度的升高,细胞划痕愈合能力逐渐减弱。Western blot实验结果显示HepG2细胞中E-cadherin的表达随着VX-680浓度的升高而增加(P0.05)。结论 :VX-680可以增加人肝癌细胞HepG2细胞间的同质黏附力,同时抑制其迁移。     

蛋氨酸脑啡肽对树突状细胞表型及功能的影响

目的:通过体外细胞株研究蛋氨酸脑啡肽(Methionine-enkephalin,MENK)对树突状细胞(Dendritic cell,DC)功能调节的机制,为进一步阐明蛋氨酸脑啡肽的免疫活性提供依据。方法:应用扫描电镜技术、酸性磷酸酶活性检测、流式细胞仪检测技术、酶联免疫吸附试验检测DC表型和功能的各种指标。结果:本实验应用小鼠髓系DC2.4细胞株,电镜观察DC的超微结构,可见10-12mol/L蛋氨酸脑啡肽处理组DC突起增多,形态上更加成熟;DC表面MHCⅡ、CD86和CD40的表达增加;酸性磷酸酶活性降低;DC白细胞介素12(IL-12)的表达增加(P0.05)。结论:本实验结果证明了适宜浓度的蛋氨酸脑啡肽促进小鼠髓系DC2.4的表型及功能的成熟。     

乳凝集素对脐带血树突状细胞功能的调节作用

目的研究乳凝集素(lactadherin)对未成熟树突状细胞吞噬功能以及对成熟树突状细胞刺激初始T细胞增殖能力等方面的调节作用。方法 ficoll密度梯度离心法分离脐带血单个核细胞,加入细胞因子IL-4、GM-CSF、TNF-α(成熟组应用)诱导分化为树突状细胞(dendritic cell,DC),阳性对照组分别在第0天或第5天起加入lactadherin,各组均培养至第7天时收集细胞,流式细胞仪检测各组未成熟DC吞噬FITC-DEXTRAN的能力,MTT法检测各组成熟DC刺激初始T细胞增殖能力的变化。结果同时加入lactadherin诱导培养时,未成熟DC对抗原(FITC-DEXTRAN)的吞噬功能增强,在培养第0天时即加入lactadherin组培养完成后吞噬功能增强更为明显;成熟组DC刺激初始T细胞增殖的能力也较无lactadherin组明显增强(P<0.001),且以第5天加入组培养完成时刺激增殖作用更为显著。结论 lactadherin能够增强DC细胞的免疫功能,包括未成熟时的抗原吞噬摄取和成熟时刺激T细胞增殖,激活适应性免疫应答等。     

早期脂多糖干预对大鼠树突状细胞表型和功能的影响

目的探讨早期脂多糖(LPS)干预对大鼠树突状细胞(DC)表型和功能的影响。方法用rrIL-4和rrGM-CSF体外诱导骨髓前体细胞,成熟组于第6天加入LPS1μg/mL,干预组分别于第0、3、6天连续加入LPS1μg/mL,对照组不加LPS,第7天收集细胞。采用免疫细胞化学方法、流式细胞术、同种淋巴细胞刺激试验和RT-PCR进行表型和功能鉴定。结果与对照组相比,MHC-Ⅱ、CD80、CD86、IL-12的表达和刺激同种T淋巴细胞增殖的能力在成熟组明显增高而干预组明显降低(P<0.01),Dextran-FITC摄取能力在成熟组明显降低而干预组明显增高(P<0.01)。结论早期LPS干预可抑制大鼠DC成熟,获得纯度更高的未成熟DC,为进一步研究免疫耐受奠定了基础。     

microRNA-27a对树突状细胞表型及功能的影响

目的:研究microRNA-27a(miR-27a)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激的小鼠树突状细胞(Dendritic cell,DC)的成熟和细胞因子分泌的影响。方法:小鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,im DC)转染miR-27a的模拟物(miR-27a mimics)后,用LPS刺激24 h,采用流式细胞仪检测其表面共刺激分子CD80、CD86及MHCⅡ表达,ELISA方法检测其上清中的IL-12p70及IL-10蛋白水平,RT-PCR方法检测其细胞内IL-12p40及IL-10 mRNA水平,混合淋巴细胞反应(MLR)检测其刺激T细胞增殖能力。结果:与未处理的im DC比较,LPS刺激24 h后的DC表面的共刺激分子CD80、CD86及MHCⅡ表达均显著增高(均P0.001);LPS刺激24 h后,与对照组比较,转染miR-27a mimics细胞的共刺激分子CD80、CD86及MHCⅡ表达均显著降低(均P0.001),且显著抑制IL-12分泌(P0.01)、促进IL-10分泌(P0.05),并显著减弱LPS刺激的DC促CD4+T细胞增殖的能力(P0.01)。结论:miR-27a影响小鼠树突状细胞的成熟以及细胞因子的分泌。     

干扰NaV1.9对RAW264.7细胞增殖、吞噬和迁移的影响

目的 应用RNA干扰技术沉默RAW264.7小鼠巨噬细胞中电压门控性钠通道(VGSCs/NaVs)α亚单位NaV1.9基因,建立稳定干扰细胞株,并观察其对细胞增殖活性、吞噬能力和迁移功能的影响.方法 通过LipofectamineTM2000将短发夹RNA(shRNA)干扰质粒转染至RAW264.7细胞,经G418筛选获得稳定细胞株.用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定干扰效率,CCK-8法测定稳定细胞株的增殖活性,流式细胞术检测细胞的细胞周期及吞噬能力,Transwell小室法检测细胞的迁移功能.结果 成功建立稳定干扰NaV1.9的细胞株,RT-PCR法鉴定干扰效率达80％.CCK-8法及流式细胞术结果显示,降低NaV1.9的表达使细胞增殖活性下降(P＜0.05);流式细胞术结果显示,抑制NaV1.9的表达使细胞吞噬能力降低(P＜0.05);Transwell小室法结果显示,干扰NaV1.9的表达使细胞迁移能力减弱(P＜0.05).结论 建立了稳定干扰NaV1.9的RAW264.7细胞株,下调NaV1.9的表达使巨噬细胞增殖活性、吞噬能力和迁移功能显著降低.     

低氧对间充质干细胞生物学特性的影响

机体内间充质干细胞(MSC)处于相对低氧环境(体积分数为1％～7％)与常氧环境(体积分数为20％)时表现出不同的生物学特性.低氧诱导因子1α(HIF-1α)作为低氧环境下的主要转录调控因子,广泛参与细胞的增殖、分化、凋亡、糖酵解及血管生成等方面的调控.近年来发现,HIF-1α在对MSC存活、分化及迁移的调控中起重要作用.MSC处于低氧环境时,通过对HIF-1α及其下游基因的调控,可提高MSC的存活率,促进其成软骨分化,抑制成脂分化,增强迁移能力,但对成骨分化能力的影响仍存在争议.不同组织来源、氧体积分数及诱导培养条件等均会对MSC的生物学特性造成影响.因此不同实验结果的比较应在统一的实验条件基础上进行.拟从低氧对MSC的增殖、凋亡、分化及迁移的影响作一综述.     

LPS持续刺激对小鼠骨髓树突状细胞成熟的影响

目的　研究LPS持续刺激对小鼠骨髓树突状细胞 (DC)成熟的影响。方法　小鼠骨髓细胞用GM CSF培养 7d ,持续刺激组全程加入LPS ,短期刺激组在最后 48h加入LPS ,对照组不加LPS。流式细胞仪检测细胞表型和细胞摄取抗原的能力 ,ELISA检测细胞产生的细胞因子 ,混合淋巴细胞培养检测细胞提呈抗原的能力。结果　用LPS持续刺激的小鼠骨髓DC表达MHCⅡ、CD86、CD80和CD11c等分子和分泌TNF α和IL 12 (p70 )的能力并未增加 ,吞噬FITC OVA的能力显著升高 ,刺激同种异基因T细胞和刺激同种同基因T细胞增殖的能力亦显著低于LPS短期刺激组。结论　LPS持续刺激可抑制DC的发育成熟 ,可能是持续严重感染时免疫功能低下的原因     

Functional analysis of the CD300e receptor in human monocytes and myeloid dendritic cells

The CD300e surface molecule, originally termed immune receptor expressed by myeloid cells (IREM)‐2, was reported to associate with the DNAX‐activating protein (DAP) 12 adaptor in co‐transfected cells, and is capable of signaling. In the present report, we investigated in detail the function of CD300e in monocytes and myeloid DC (mDC) freshly isolated from peripheral blood of normal blood donors. Upon engagement by an agonistic mAb, CD300e triggered an intracellular calcium mobilization and superoxide anion O production in monocytes. Activation via CD300e provided survival signals that prevented monocyte and mDC apoptosis, triggered the production of pro‐inflammatory cytokines and upregulated the expression of cell surface co‐stimulatory molecules in both cell types. Moreover, CD300e activation of mDC enhanced the alloreactive response of naive T cells. Overall, our data formally support the notion that CD300e functions as an activating receptor capable of regulating the innate immune response in myeloid cells.     

分化抑制蛋白1在小鼠树突状细胞肉瘤细胞分化中的作用

目的 研究降低分化抑制蛋白1(Id.1)的表达在树突状细胞肉瘤(DCS)细胞分化中的作用.方法 通过RNA干扰技术来降低DCS细胞株中Id-l蛋白的表达,Western blot和real.timePCR分别检测该蛋白在蛋白水平和mRNA水平L的变化;倒置显微镜下观察降低Id.1蛋白表达后DCS细胞形态的变化;Casy细胞计数分析仪检测细胞大小的分布情况;流式细胞仪检测细胞周期的变化.通过Western blot和免疫组织化学检测树突状细胞的分化标志如Id-2、CD86、CDllc、MHC II的变化.生长曲线及四甲基偶氮唑盐(MTY)法检测DCS细胞的增殖情况的变化;通过TransweH和克隆形成率测定分别观察降低Id-1蛋白前后细胞侵袭、成瘤能力的变化.以不加siRNA的空白组和无关 对照siRNA作阴性对照,以诱导分化剂丁酸钠作为阳性对照.结果 降低Id-1蛋白表达后DCS细胞分枝增多,细胞体积明显增大,核质比下降,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少(P<0.01),树突状细胞分化标志Id-2、CD86等表达上调,细胞增殖受到抑制,侵袭、成瘤能力减弱(P<0.01).结论 通过RNA干扰技术降低Id-1基因的表达,可以促进恶性实体肿瘤细胞的分化,降低恶性程度.     

人外周血树突状细胞对LAK细胞杀伤活性的影响

从人外周血中分离出树突状细胞，体外观察了其对ＬＡＫ细胞活性的影响。发现：５×１０２～１×１０４／ｍｌ树突状细胞对ＬＡＫ细胞活性起增强作用，而５×１０４～１×１０５／ｍｌ树突状细胞却抑制ＬＡＫ杀伤活性。这说明人外周血树突状细胞对ＬＡＫ细胞活性起双相性调节作用。     

miR-214对人舌鳞状细胞癌增殖能力影响的体外实验研究

目的 研究microRNA-214(miR-214)对舌癌AW13516细胞增殖能力的影响及其相关机制.方法 建立MIR(miR-214 mimics)组、NC(阴性转染)组及无转染对照(MOCK)组细胞.采用RT-PCR法检测各组miR-214水平;Western印迹法检测HM1、PCNA、cyclin D1的表达,采用MTT实验检测细胞增殖能力;采用软琼脂集落形成实验和平板克隆形成实验检测细胞形成克隆的能力;采用流式细胞术观察各组细胞凋亡比例变化.结果 与阴性转染组和无转染对照组相比,miR-214 mimics干预AW13516细胞后,MIR组miR-214表达水平明显升高(P＜0.05),PIMl、PCNA、cyclin D1蛋白表达水平降低,细胞增殖能力明显降低,克隆形成能力明显减弱,凋亡比例明显升高(P＜0.05).结论 miR-214可能通过降低PIM1水平下调PCNA、cyclin D1蛋白表达,抑制舌癌AW13516细胞的增殖能力并促进其凋亡.     

The phosphodiesterase type-5 inhibitor,tadalafil, improves depressive symptoms,ameliorates memory impairment,as well as suppresses apoptosis and enhances cell proliferation in the hippocampus of maternal-separated rat pups

Early adverse experiences resulting from maternal separation may lead to neuronal cell death and eventually cause memory impairment. Maternal separation has been used to create a valid animal model of early life stress and a depression-like syndrome. The phosphodiesterase (PDE)-5 inhibitor, tadalafil (Cialis), is a widely prescribed agent for the treatment of erectile dysfunction. In this study, we investigated the effects of tadalafil on apoptosis and cell proliferation in the hippocampal dentate gyrus of rat pups following maternal separation. Specifically, the immobility time in the forced swim test was increased in the maternal-separated rat pups, and tadalafil treatment decreased the immobility time. The rat pups in the maternal separation group had deceased memory function compared to the rat pups in the maternal care group, and tadalafil treatment increased memory function of the rat pups in the maternal separation group. Apoptotic cell death in the hippocampal dentate gyrus was significantly increased in the maternal-separated rat pups, and tadalafil treatment suppressed maternal separation-induced apoptosis. In contrast, cell proliferation in the dentate gyrus was significantly decreased in the maternal-separated rat pups, and taldalafil treatment increased cell proliferation. The present results suggest that tadalafil improves depressive symptoms and alleviates memory impairment by suppressing apoptotic neuronal cell death and enhancing cell proliferation in maternal-separated rat pups.     

Subversion of plasmacytoid and myeloid dendritic cell functions in chronic HCV infection

Insufficient elimination of the hepatitis C virus (HCV) during acute infection results in chronic disease in the majority of patients due to weak virus-specific immune responses. Dendritic cells (DC) play a central role in recognition of HCV and in induction of innate and adaptive immune responses. In this study, we evaluated the frequency and functions of plasmacytoid dendritic cells (PDC) and myeloid dendritic cells (MDC) in patients with chronic HCV infection. We found that both the numbers and IFNalpha production capacity of blood PDC were significantly reduced in patients with chronic HCV infection compared to normal controls. While the frequency of MDC was not affected in chronic HCV, the allostimulatory capacity of monocyte-derived MDC was significantly decreased compared to normals. Lipopolysaccharide (LPS)-induced maturation improved the allostimulatory capacity of HCV infected patients' MDC that still remained significantly lower compared to normal controls. Our experiments revealed that MDC defects can be induced by HCV core and NS3 proteins suggesting virus-induced mechanisms for the DC defects in HCV infection. Finally, using toll-like receptor 2 (TLR2) and TLR4 deficient or mutant mice, we demonstrated that TLR2 but not TLR4 was critical in recognition of HCV core and NS3 proteins by innate immune cells. Further, TLR2 recognition of HCV core and NS3 was not augmented by co-expression of the TLR co-receptor, CD14. These data demonstrate that both PDC and MDC functions are impaired in patients with chronic HCV infection and DC defects are likely related to interaction of HCV viral products with innate immune cells.     

mPer2对小鼠B16黑色素瘤细胞增殖作用的影响

目的:研究mPer2对小鼠黑色素瘤细胞B16增殖作用的影响。方法:将构建好的mPer2全长表达质粒(pcDNA3.1-mPer2)转染入小鼠黑色素瘤细胞B16中,并以pcDNA3.1空质粒转染为对照,通过平板克隆形成实验和MTT法检测两组细胞的增殖情况。结果:平板克隆形成实验和MTT法检测结果均显示Period2转染组小鼠黑色素瘤细胞B16较空质粒对照组明显降低。结论:mPer2的高表达能显著性的抑制小鼠黑色素瘤细胞B16的生长。