应用DHPLC与SSCP法检测苯丙氨酸羟化酶外显子7基因突变

苯丙氨酸羟化酶（phenylalanine hydroxylase，PAH：EC1．14．16．1）是体内苯丙氨酸转化为酪氨酸的关键酶。PAH肽链合成障碍导致其活性降低或缺如，造成苯丙氨酸（Phe）羟化受阻，Phe在体内蓄积。编码PAH的基因发生突变是导致PAH肽链合成障碍，使其活性降低或缺如的原因。单链构象多态性（single—strand conformation polymorphism，SSCP）是检测DNA突变的一种常用技术，该方法既可检测已知突变，又可筛查未知突变基因或进行连锁分析。     

先天性巨结肠中EDNRB和EDN3的表达

目的：探讨血管内皮素-B受体抗体（endothelin-Breceptor，EDNRB），血管内皮素-3抗体（endothelin-3，EDN3）在先天性巨结肠（Hirschsprung’s disease，HD）的分布情况及其意义。方法：结合光镜下肠壁的形态特征，应用免疫组化技术对33例临床病理确诊为先天性巨结肠的病变肠段及10例正常结肠行免疫组化染色，比较EDNRB和EDN3的染色结果和分布特点。结果：EDNRB和EDN3在肠段血管内皮和平滑肌上有表达。两者在正常肠段的表达高于HD肠段上的表达。在不同类型HD肠段上的表达程度有不同程度的差异，其中EDNRB在长段型、短段型HD中表达均较常见型HD中的表达少，EDN3在短段型HD中表达较常见型HD肠段表达少（P〈0．01）。结论：EDNRB、EDN3基因与先天性巨结肠的发生及类型相关，对先天性巨结肠的临床诊断与治疗提供新的研究方向。     

肠神经嵴干细胞发育与先天性巨结肠关系研究

先天性巨结肠(HD)也称为先天性肠无神经节细胞症,是小儿外科常见的消化道畸形,普遍认为其主要发病机制与胚胎时期肠神经嵴干细胞(ENCCs)迁移、发育、存活异常有关[1],且与造成正常肠神经系统(ENS)发育异常有关。HD的发病机制尚未完全明了,国内外均对其发病原因进行了大量研究,普遍认为,ENCCs发育异常是HD发病的主要原因之一,现将影响ENCCs发育的因素综述如下,进一步探讨HD的病因。     

改良先天性巨结肠根治术对预防术后并发症的影响

目的:探讨经肛门内扩约肌和直肠后壁肌鞘切除对预防巨结肠根治术后巨结肠性肠炎的作用.方法:回顾性分析2002-06～2006-06我院46例经肛门巨结肠根治术患儿的手术以及诊疗经过.结果:46例巨结肠中35例获得成功,无并发症发生,11例出现并发症,其中小肠结肠炎3例,术后吻合口瘘1例,直肠肌鞘感染1例,便秘2例,肛周红斑及糜烂4例,均经治疗痊愈,随访2个月～4年,2例全结肠型每日排便3～5次,1例轻度污粪,其余患儿肛门无狭窄,每日排便1～3次,生长发育正常.结论:改良先天性巨结肠根治术较经肛门Soave巨结肠根治术更安全易行,可有效预防术后便秘和肠炎的发生.     

先天性巨结肠遗传学研究进展

先天性巨结肠（hirsehsprung’s disease,HD）又称肠管无神经节细胞症（aganglionosis）,是一种儿童常见的肠道发育畸形,发病率为1／5000。它是由于肠壁黏膜下层神经丛和肌间神经丛中神经节细胞缺失导致的先天性肠道堵塞性疾病。临床表现为完全性或不完全性肠梗阻症状,严重影响小儿的生活质量,甚至危及生命。近年来,HD发病率有所上升,引起国内外学者的重视。     

经肛门治疗先天性巨结肠

目的　介绍一种治疗儿童先天性巨结肠 (HD)的新术式———经肛门一期Soave巨结肠根治术。方法　应用经肛门一期Soave根治术治疗HD患儿 2 0例并短期随访。结果　经肛门一期Soave根治术费时 ,但从术后禁食时间、静脉滴注抗生素时间、发热天数、术后住院天数、术后排便情况及短期并发症等恢复指标上有显著优越性。结论　经肛门一期Soave根治手术创伤小 ,术后患儿恢复快 ,并发症少 ,腹部无瘢痕 ,对于短段型和常见型婴儿HD ,该术式安全可靠 ,值得推荐     

家族性肥厚型心肌病大家系肌球蛋白结合蛋白C3基因突变筛查

目的 研究一汉族家族性肥厚型心肌病(FHCM)家系患者的致病基因突变位点,分析其基因型与表型关系.方法 收集到一规模较大的FHCM家系,共5代89位成员,采集到67份血样.用primerexperss 2.0软件设计引物扩增肌球蛋白结合蛋白C3( MyBPC3)基因的各外显子及相邻内含子区,产物纯化后应用美国ABI PRISM 3700 DNA自动测序仪进行测序,用Autoassembler 2.0软件将测序结果与MyBPC3的基因组序列进行比较、分析.结果 该家系共14例患者(4例已去世,其中2例是年轻时猝死),在世的10例患者左心室壁厚度均超过13 mm.符合常染色体显性遗传病的特点.经突变筛查,发现2处碱基改变,经检索国家生物技术信息中心单核苷酸多态性数据库,这些碱基改变均为多态性.结论 MyBPC3基因不是该家系的致病基因,反映了肥厚型心肌病的遗传异质性,需对其他可能的候选致病基因进行筛查.     

醋氯芬酸结肠靶向微丸体外溶出特性研究

目的 对醋氯芬酸结肠靶向微丸体外溶出特性进行研究。方法 采用高效液相色谱法进行测定,色谱柱为Ｃ₁₈柱,流动相为甲醇-0.02 mol·L^-1磷酸盐缓冲液（55：45）(磷酸调pH值3.80),检测波长为275 nm。结果 在5～160 μg·mL^-1浓度范围内,峰面积对浓度有良好的线性关系,日内RSD≤3.00%,日间RSD≤3.69%,回收率为99.69%。醋氯芬酸结肠靶向微丸在0.1 mol·L^-1盐酸中基本不释药,在磷酸盐缓冲液中随pH值升高释药速率迅速加快。结论 该方法准确,重现性好,醋氯芬酸结肠靶向微丸具有明显结肠定位释药作用.     

1型糖尿病线粒体基因突变的研究

目的：探讨线粒体基因突变在天津地区1型糖尿病中的发生率及其与1型糖尿病的关系。方法：随机抽取30例1型糖尿病患者，27例健康者为对照组，提取其外周血总的DNA，以聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）及克隆法检测线粒体基因ND1、ND4及tRNA^LEU（UUR）3 243突变。结果：糖尿病组发现1例3394T→C突变（3．3％），1例12026 A→G突变（3．3％），1例tRNA^LEU（UUR）3 243A→G突变（3．3％）。对照组未发现线粒体基因突变者。2组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：1型糖尿病中3 394T→C突变、12026A→G突变可能是线粒体基因变异的一种多态性表现，tRNA^LEU（UUR）3243A→G突变所致的线粒体糖尿病是1型糖尿病中的一种独特亚型。     

变性高效液相色谱分析技术对乳腺癌易感基因突变位点检测的敏感性和特异性

目的探讨变性高效液相色谱分析技术对乳腺癌易感基因突变位点检测的敏感性和特异性。方法收集202例诊断为原发性乳腺癌女性患者,同时采用PCR/DNA测序法和变性高效液相色谱分析技术检测对所有患者进行BRCA1基因突变的筛查,以PCR/DNA测序法作为金标准,评估变性高效液相色谱分析技术的敏感性和特异性。结果本研究202例乳腺癌标本中,PCR/DNA测序法发现BRCA1基因突变例数为76例,变性高效液相色谱分析技术结果也为阳性例数为73例,敏感性为96.1%;PCR/DNA检测结果为阴性的总共126例标本,采用变性高效液相色谱分析技术,结果也为阴性的总标本例数为120例,特异性为95.2%。两种检测方法敏感性(100%vs 96.1%,P=0.265)和特异性(100%vs 95.2%,P=0.226)无统计学差别。结论与传统检测方法相比采用变性高效液相色谱分析技术检测乳腺癌易感基因BRCA1具有较高的敏感性和特异性,值得推广。     

RP-HPLC法测定冻疮乳膏中硝苯地平的含量

目的:建立RP-HPLC法测定冻疮乳膏中硝苯地平的含量。方法:采用KromasilC18色谱柱,流动相为乙腈:水(70:30),流速1mL/min,检测波长350nm。结果:硝苯地平在48.0-72.0μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9999),低、中、高浓度的加样回收率分别为(99.98 1.78)%、(100.19±0.49)%、(100.18±0.89)%(n=5)。浓度为48.0、60.0、72.0μg/mL的硝苯地平日内RSD分别为0.91%、0.24%、0.70%(n=5);日间RSD分别为0.89%、0.63%、0.36%(n=5)。结论:本法简便、快捷、准确,适用于冻疮乳膏的质量控制。     

反相高效液相色谱法测定血中阿米替林及其代谢产物

用带有254nm紫外检测器的高效液相色谱仪,反相色谱法测定血清中阿米替林及其代谢产物去甲替林,E-10-OH-阿米替林,E-10-OH-去甲替林和N-去甲基去甲替林浓度。方法为碱化血清,以乙醚提取后挥干,残留物溶解后注入国产色谱柱(YWG-C_(18)) 。用盐酸赛庚啶做内标。各测定物的日内回收率为89.2-110％,变异系数小于8.8％。日间回收率为95.1-111％,变异系数小于9.6％。最低检测限为2ng,血清中最低有效测定浓度为20ng/ml。本法适用于科研或临床监测血药浓度。     

用HPLC法测定人血浆中头孢吡肟的浓度

目的:建立测定人血浆中头孢吡肟浓度的HPLC法。方法:色谱柱为Kromasil C_(18)柱(250 mm×4．6 mm, 5μm),流动相为甲醇-乙腈-水(5:4:91),流速1．0 mL/min,检测波长254 nm。以对乙酰氨基酚为内标,血浆样品用高氯酸沉淀蛋白质后取上清液进样分析。结果:头孢毗肟峰面积与血药浓度在1．0～200．0μg/mL范围内线性关系良好(r=0．9999)。日内RSD＜6％(n=5),日间RSD＜10％(n=5)。低、中、高3种浓度(2．0、50．0、150．0μg/mL)的方法回收率分别为(111．33±2．36)％、(100．95±0．51)％和(98．50±0．91)％,提取回收率分别为(104．21±2．15)％、(96．67±0．49)％和(94．72±0．87)％。结论:本方法简便、快速、准确、精密度好,可用于头孢吡肟的临床药动学研究。     

中药川芎HPLC指纹图谱分析方法的研究

目的建立川芎药材的指纹图谱的分析方法。方法采用HPLC/UV方法测定川芎药材提取物的指纹图谱,并对10批不同来源的川芎进行了比较。结果确定了川芎药材指纹图谱的高效液相分析条件,建立了川芎指纹图谱。结论HPLC指纹图谱分析方法可简便鉴别不同来源的川芎药材。     

高效液相色谱法测定人血浆中左布比卡因的浓度

目的建立高效液相色谱法测定人血浆中左布比卡因的浓度。方法以罗哌卡因为内标,色谱柱为Hypersil C_(18)柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相采用0.01 mol·L~(-1)磷酸二氢钾-乙腈(87:13,V:V,pH=3.4),流速2.0 mL·min~(-1),检测波长为210 nm,柱温40℃。结果标准曲线方程为Y=0.310 1 X+ 0.008 9,r=0.999 7,左布比卡因的质量浓度在0.012 5～2 mg·L~(-1)范围内呈良好的线性关系,最低检测限为0.01 mg·L~(-1);方法回收率在96%～105%之间;日间、日内精密度RSD均<5%。结论本方法可用于临床上左布比卡因血药浓度的监测和药动学研究。     

高效液相色谱法测定阿伐斯汀在小猎兔犬的血药浓度

目的:建立测定Beagle(小猎兔)犬血浆中阿代斯汀药物浓度的测定方法。方法:Beagle犬单次经口给予阿代斯汀胶囊8 mg后,以高效液相色谱法测定其血药浓度,采用DASv2．0软件拟合其药动学参数。结果:阿伐斯汀的血药浓度范围在3．4～572μg·L~(-1)内线性关系良好;定量限为3．4μ,g·L~(-1),日内和日间误差均不超过15％。结论:高效液相色谱法测定阿伐斯汀血药浓度,方法简单、准确,可以用于阿伐斯汀在Bealge犬的药动学研究。     

RP-HPLC法测定人体液中他唑巴坦浓度及其药动学应用

目的 :建立测定体液中他唑巴坦浓度的 HPLC方法 ,并应用于哌拉西林 /他唑巴坦健康人体的药代动力学研究。方法 :10名男性健康志愿者单剂量静脉滴注 4.5 g哌拉西林 /他唑巴坦钠 ,采用反相高效液相色谱 ( RP-HPLC)法测定血浆样品和尿中他唑巴坦药物浓度。 结果 :滴注完成即刻浓度 ( cm ax)为 ( 3 4.3 3± 8.0 5 )μg/m l,清除半衰期 ( t1 /2β)为 ( 0 .94± 0 .16) h,分布容积 ( Vd)为 ( 15 .43± 3 .82 ) L/kg,清除率 ( Clr)为 ( 15 .2 0± 2 .5 4) L /h,血药浓度 -时间曲线下面积 ( AUC)为 ( 4 2 .41±7.45 ) h·μg· ml-1 。结论 :他唑巴坦的体内过程符合二室开放模型 ,他唑巴坦主要以原形经肾脏排出体外 ,8h累积尿排百分率为 ( 78.68± 5 .84) %。     

高效液相色谱法测定人血浆中阿莫地喹的浓度(英文)

目的:建立高效液相色谱法测定人血浆中阿莫地喹的浓度。方法:分析柱采用KromasilC18(150mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇∶水∶三乙胺∶磷酸∶(21∶77.5∶1∶0.5),流速为1.0mL·min-1,检测波长为294nm,内标为羟氯喹。结果:阿莫地喹和羟氯喹的保留时间分别为5.82min,8.56min。该法在10～1000μg·L-1浓度范围内有良好的线性关系(r=0.9998,n=9),最低检测限为5μg·L-1,提取回收率为75.5%～82.7%,方法回收率为97.0%～104.8%。日内精密度的RSD<6.0%,日间精密度的RSD<7.5%。结论:该法简单,灵敏适合于阿莫地喹的药动学研究。     

血浆同型半胱氨酸的检测和与缺血性心脑血管疾病的关系

目的：建立高效液相色谱荧光检测法测定人血浆中同型半胱氨酸(Hcy)的方法，并探讨血浆Hcy与缺血性心脑血管疾病之间的关系。方法：采集30例健康者，60例冠心病患者和30例脑梗死患者血浆，用β-巯基乙醇对血浆中各种形式的Hcy进行还原，用邻苯二甲醛(OPA)对Hcy进行柱前衍生化，经反相液相色谱分离后，用荧光检测法检测Hcy的含量。结果：血浆中Hcy与其他成份分离良好，回收率高，样本中Hcy浓度在0～100μmol／L范围内有良好的线性关系。冠心病与脑梗死患者血浆Hcy水平显著高于健康者。结论：高效液相色谱荧光检测法快速、简便、实用，可以满足临床及科研要求，血浆Hcy水平升高可能是缺血性心脑血管疾病的发病因素之一。