Pinl抑制剂Juglone对食管癌EC1细胞增殖的抑制作用

目的:测定Pin1抑制剂(Juglone)对食管癌细胞EC1生长增殖的影响,探讨Juglone的抗肿瘤作用.方法:体外培养人食管癌细胞系EC1,用MTT试验观察细胞生长增殖状况,流式细胞仪检测细胞周期以及细胞凋亡.结果:MTT试验表明,Juglone对EC1细胞生长有明显的抑制作用,且抑制作用随作用浓度和作用时间增加而增强.流式细胞仪检测表明,加入Juglone培养48 h后,EC1细胞出现G2期阻滞.Juglone药物(10、20、30 μmol/L)培养48 h后,EC1细胞的凋亡率明显增加,与对照组相比有统计学意义(9.06%,32.88%,53.18% vs 8.77%.均P<0.05).结论:Pin1抑制剂Juglone可以通过抑制Pin1表达从而抑制食管癌细胞的增殖,Pin1抑制剂有望成为新型的抗肿瘤治疗靶点.     

谷胱甘肽与顺铂合用对肝癌细胞HepG_2增殖及凋亡的影响

目的 探讨谷胱甘肽 (GSH) 与顺铂 (CDDP) 联合应用对人肝癌细胞HepG_2细胞增殖及凋亡的影响.方法 应用酸性磷酸酶法 (APA) 检测细胞生长抑制率;用倒置显微镜观察经CDDP、GSH处理后的细胞形态学改变;采用流式细胞术研究GSH与CDDP合用对细胞周期的影响;AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞凋亡率;罗丹明123染色检测线粒体膜电位 (Δψm) 变化.结果 GSH与CDDP联合应用可以明显抑制HepG_2细胞增殖,癌细胞出现凋亡形态变化,其作用明显高于GSH组与对照组细胞,且不低于CDDP单独给药组;GSH与CDDP联合应用引起Δψm更明显地下降.结论 GSH与CDDP联合用药不降低CDDP对肝癌细胞的作用,其诱导肝癌细胞HepG_2凋亡的作用可能是通过线粒体通路实现的.     

雷公藤内酯醇、顺铂对骨肉瘤细胞体外增殖的影响

目的 研究中药制剂雷公藤内酯醇（TP）和顺铂（PDD）对骨肉瘤（MG63）细胞增殖的抑制作用，寻求骨肉瘤的中西医结合治疗方案。方法 将TP与PDD单独及联合于MG63细胞．采用MTT法检测细胞抑制率。结果 TP在1～125μg／ml的范围内对MG63细胞生长有明显抑制作用；PDD在1～20μg／ml的范围内对MG63细胞生长有明显的抑制作用；TP1～15μg／ml和PDD1μg／ml联合对MG63细胞生长有明显抑制作用；与对照组比较。P均〈0．01；TP10～15μg／ml和PDD1μg／ml联合细胞抑制率明显高于单用；二者单独及联合对细胞抑制率的影响均有明显时间依赖性。结论TP与PDD单独及联合均可抑制骨肉瘤细胞的增殖。     

鸦胆子油逆转奥沙利铂耐药胃癌SGC-7901细胞对奥沙利铂的敏感性

目的探讨鸦胆子油增加奥沙利铂(OXA)耐药胃癌SGC-7901细胞(SGC-7901/COXA)对OXA敏感性的效果。方法 (1)建立SGC-7901/COXA细胞株。首先通过让细胞持续接触药物的培养方法,并逐渐增加OXA的浓度,建立SGC-7901/COXA细胞株。(2)计算鸦胆子油及OXA对SGC-7901/COXA细胞增殖抑制率及药物的IC_(50)。取对数生长期SGC-7901/COXA细胞,培养24 h,然后加入不同浓度的鸦胆子油、OXA,继续培养48 h后应用CCK8试剂测定各孔光吸收值(A),取平均值,计算两药单独对SGC-7901/CDDP细胞增殖抑制率及药物的IC_(50)。(3)计算两药联合后SGC-7901/COXA细胞增殖抑制率、IC_(50)逆转倍数。选择适宜的鸦胆子油浓度与不同浓度OXA联合,重复CCK8法,计算两药联合后SGC-7901/COXA细胞增殖抑制率、IC_(50)、逆转倍数。结果鸦胆子油、OXA对SGC-7901/COXA细胞增殖具有抑制作用,该作用与浓度呈正相关。鸦胆子油、OXA对SGC-7901/COXA细胞的IC_(50)分别为91.39μg/ml和5.37μg/ml。鸦胆子油联合不同浓度OXA后对SGC-7901/COXA细胞增殖抑制作用明显增强,联合用药后OXA的IC_(50)降为1.29,逆转耐药倍数为4.16,因此SGC-7901/COXA对OXA敏感性明显增强。结论鸦胆子油与OXA联合后SGC-7901/COXA对OXA的敏感性增加,相对单独使用易产生耐药性的缺点,两者联合后能有效提高SGC-7901/COXA对OXA的敏感性。     

表皮生长因子受体抑制剂吉非替尼对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂吉非替尼对食管癌EC9706细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法将EC9706细胞培养并加入不同浓度的吉非替尼处理不同时间后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率;Annexin V-FITC/PI双染法、流式细胞仪检测细胞凋亡率。PI染色、流式细胞仪检测细胞周期。结果吉非替尼对食管癌EC9706细胞增殖具有明显的抑制作用,且表现为剂量和时间依赖性;吉非替尼组细胞凋亡率明显高于正常对照组,且随着吉非替尼剂量的增加,凋亡率逐渐增加(P0.05);与对照组相比,10μg/ml吉非替尼处理24 h后的EC9706细胞,处于G0/G1期细胞比例明显增加,处于S期细胞比例明显减少(P0.05)。结论吉非替尼对食管癌EC9706细胞具有明显的增殖抑制作用,其机制与诱导凋亡及阻滞细胞周期有关。     

姜黄素联合奥沙利铂对人胃癌BGC-823细胞的作用

目的观察姜黄素联合奥沙利铂增强对人胃癌BGC823细胞生长抑制及杀伤作用,并探讨其与Fas蛋白的关系。方法采用不同浓度姜黄素和奥沙利铂单独或联合作用于BGC-823胃癌细胞,分别应用CCK-8法检测细胞生长抑制率,Annexin V-FITC/PI双染色检测BGC-823细胞凋亡率,流式细胞术检测Fas蛋白表达及采用分光光度法检测Caspase-3酶活性变化。结果姜黄素和奥沙利铂明显抑制细胞的增殖,呈剂量依赖性,联合作用组显著高于单独用药组;两药均可增强胃癌BGC-823细胞凋亡率,联合作用组显著高于单独用药组;两药均可增强Fas蛋白表达。联合作用组显著高于单独用药组;两药均可增强Caspase-3酶活性,联合作用组显著高于单独用药组。结论姜黄素联合奥沙利铂可显著增强对BGC823胃癌细胞的增殖抑制作用,并可增强诱导细胞凋亡作用,其机制可能与上调Fas蛋白的表达、增强Caspase-3活性有关。     

Juglone对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞增殖及细胞周期的抑制作用

目的测定Pin1抑制剂(Juglone)对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞生长增殖及细胞周期的影响,讨论Ju-glone的抗鼻咽癌肿瘤的作用效果。方法体外培养人鼻咽癌CNE-2Z细胞,采用MTT实验观察细胞生长增殖状况,流式细胞仪检测细胞周期。结果 MTT测定结果显示,Juglone对人鼻咽癌细胞株CNE-2Z细胞生长有明显的抑制作用,并且随着时间的延长和作用浓度的升高,其抑制作用也逐渐增强;流式细胞仪分析检测结果显示,加入Juglone培养24 h后造成CNE-2Z细胞G1期阻滞,48 h后,CNE-2Z细胞G2/M期阻滞(P<0.01)。结论 Juglone有抑制鼻咽癌细胞增殖和细胞周期阻滞的作用,有望为鼻咽癌防治提供候选药物。     

环氧合酶-2选择性抑制剂NS-398诱导食管癌细胞EC 9706凋亡及其机制的探讨

目的 观察环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂NS一398对食管癌细胞株EC 9706增殖及凋亡的影响,砌究其对凋亡抑制蛋白Survivin和Caspase-3表达的影响,探讨NS-398诱导Ec 9706细胞凋亡的作用机制.方法 NS-398作用EC 9706细胞后,MTT法测定NS-398对人食管癌EC 9706细胞增殖的抑制率;DNA片段分析法和流式细胞仪检测细胞凋亡;免疫细胞化学检测Survivin和Caspase-3蛋白表达变化.结果 NS-398(10～100μmol/L)对EC 9706细胞生长有抑制作用,随浓度升高、时间延长抑制作用增强,并诱导EC 9706细胞凋亡,呈剂量-时间效应关系;NS-398可降佴Survivin蛋白表达,增加Caspase-3蛋白表达.结论 NS-398可诱导人食管癌细胞株EC 9706凋亡,其机制可能与下调Survivin表达及激活Capase-3表达有关.     

厄洛替尼联合Survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的探讨厄洛替尼联合Survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549增殖的影响。方法选用Survivin siRNA转染和厄洛替尼单独或联合应用于人肺腺癌细胞A549,作用48 h后,应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测其对细胞增殖的抑制作用,免疫组化法观察Survivin蛋白表达的变化。结果 Survivin siRNA转染和厄洛替尼两者单独或联合应用于人肺腺癌细胞A549作用48 h后,两种因素单独或联合应用都对细胞增殖有明显的抑制作用,其抑制率分别为（47.68±4.09）%、（60.28±3.23）%、（78.14±4.34）%,较对照组差别有统计学意义（P〈0.01）,并能明显降低细胞内Survivin蛋白的表达水平,联合应用较两者单独应用对细胞增殖的抑制作用更显著（P〈0.01）,对Survivin蛋白表达的抑制作用更强。结论应用siRNA沉默Survivin表达可以提高肺腺癌细胞对厄洛替尼的敏感性。     

芦荟大黄素联合氟尿嘧啶对人胃癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨芦荟大黄素(AE)与5-氟尿嘧啶(5-FU)体外协同作用及对人胃癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 MTT法检测药物对细胞增殖抑制作用;光镜观察细胞生长状态,计数细胞分裂指数;电镜观察药物对细胞超微结构的影响;TUNEL法检测细胞凋亡.结果 AE单独应用对细胞的增殖抑制作用弱,与5-FU合用明显抑制细胞生长,呈剂量依赖性;药物作用48 h后,联合用药组细胞分裂指数显著降低,可见大量细胞皱缩,胞膜界限模糊,核膜消失,核质浓缩及凋亡小体形成;TUNEL法分析显示,联合用药组细胞凋亡率为(69.4±4.1)%,与AE组[(15.7 4±1.9)%]、5-FU组[(33.5±2.8)%]比较差异显著(P<0.05).结论 AE与5-FU联合应用能有效抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡,二药具有协同增效作用.     

p15INK4B基因转染联合亚砷酸对人食管鳞癌的协同抑制作用

目的探讨p15^INK4B（p15）基因转染与亚砷酸（As2O3）联合应用对人食管鳞癌细胞系EC109细胞增殖和凋亡的影响。方法脂质体介导将pcDNA3．1（＋）-p15转染EC109细胞，稳定筛选后加入2μmol／LAs2O3。PCR检测外源p15基因cDNA，Western印迹法检测转染细胞P15蛋白的表达。用MTT、集落形成实验和透射电镜检测p15基因转染联合As2O3对EC109细胞增殖和凋亡的影响，流式细胞仪检测EC109细胞周期分布和凋亡率。结果与二者单独应用相比，联合应用可明显抑制EC109细胞体外生长速度，集落形成率明显降低（P〈0．01），联合作用3d后发生更为明显的G1／S阻滞，G1期比例显著升高（P〈0．05），S期比例明显降低（P〈0．05），凋亡率明显升高（P〈0．01）。透射电镜发现二者联合应用诱导EC109发生更明显的细胞凋亡。结论p15基因转染与As2O3联合应用可以进一步增强对人食管鳞癌EC109细胞的抑制作用和诱导凋亡作用。     

曲古菌素A对食管癌EC1细胞增殖和细胞周期的影响及其分子机制

目的:探讨不同浓度曲古菌素A对食管癌细胞系EC1 细胞增殖、细胞周期的影响及其对细胞周期调控基因p21 WAF1/CIP1 表达的影响. 方法:用0.3,0.5,1.0 μmol/L 的TSA 处理EC1 细胞,MTT 检测TSA 作用24 、48 h 对EC1 细胞的抑制作用,流式细胞仪检测0.3,0.5,1.0 μmol/L 的TSA 作用24 h 后EC1 细胞周期的改变,Western blot 法检测p21 WAF1/CIP1 变化. 结果:TSA 在0.5 μmol/L 以上时对EC1 细胞有抑制作用;0.3 μmol/L TSA 处理细胞后细胞周期与对照组相比,无明显变化;0.5 μmol/L TSA 处理EC1 细胞后,G0/G1期细胞较对照组明显增加,S 期细胞较对照组明显减少(74.56% ±1.34% vs 62.12%±0.52%;14.52%±1.81% vs 27.50%±0.66%,均P <0.05);0.5,1.0 μmol/L TSA 处理细胞后p21 WAF1/CIP1 表达明显增加(均P<0.05). 结论:一定浓度的TSA 对人食管癌细胞EC 具有的增殖抑制作用,引起EC1 细胞发生G0/G1 期阻滞,其部分机制与p21 WAF1/CIP1 上调有关.     

阿司匹林与二甲双胍对人结肠癌SW480细胞株的联合作用探讨

目的观察联合阿司匹林(Aspirin,ASA)与二甲双胍(Metformin,MET)对人结肠癌SW480细胞株的抑制作用,并探讨两者之间的相互作用方式。方法采用MTT法及流式细胞术检测空白对照组、ASA组、MET组及ASA与MET共同作用组对人结肠癌SW480细胞增殖及细胞凋亡的影响。结果单独使用ASA、MET对结肠癌SW480抑制率及其凋亡率均高于空白对照组,且72 h时抑制率及其凋亡率均高于24 h者;在干预24 h、72 h时,ASA与MET共同作用组的抑制率和凋亡率均明显高于单独使用MET组或ASA组,Q值分别为1.19和1.23。结论 ASA和MET单独作用均对结肠癌SW480细胞有一定的抑制作用,且随着时间延长,抑制作用明显加强;联合使用MET和ASA对人结肠癌SW480细胞具有协同抑制作用。     

稳定干扰Pin1基因的食管癌细胞株的筛选及其生物学特征

目的:筛选稳定干扰Pin1的食管癌细胞系,研究Pin1表达与食管癌细胞生物学特征的关系.方法:将针对Pinl1基因的shRNA(pmU6-Pin1)转染入EC1细胞,经G418加压筛选稳定表达Pin1小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹法检测细胞中Pin1的表达,确定筛选细胞系的正确性.通过MTT实验以及流式细胞仪检测Pin1抑制对食管癌细胞增殖、凋亡的影响.结果:Western blot检测结果显示,Pinl蛋白表达被成功抑制,建立了稳定表达Pin1小干扰RNA的细胞株(shPin1).与正常EC1细胞比较,MTT实验和流式细胞术实验结果表明基因沉默Pin1抑制食管癌细胞增殖(抑制率为51.8%),诱导细胞凋亡(凋亡率为46.39%):并增加了食管癌细胞EC1对顺铂的敏感性,抑制食管癌细胞增殖以及诱导细胞凋亡的能力均有所增强,抑制率从23.5%上升到61.0%,凋亡率从26.10%上升到58.95%.结论:稳定干扰Pin1食管癌细胞系的建立为进一步研究Pin1在食管癌中的作用提供了研究平台:基因沉默Pin1增加了食管癌细胞对顺铂的敏感性.     

IFN-λ对人食管癌细胞增殖的抑制作用及机制

目的探讨干扰素lambda（IFN-λ）对6种人食管癌细胞株生长增殖的影响并分析其作用机制。方法采用RT-PCR法检测6种食管癌细胞株IFN-λ受体表达。采用IFN-λ食管癌细胞株干预食管癌细胞株,MTT法检测细胞增殖抑制率;胎盘蓝染色后计数活细胞数;流式细胞术分析各细胞周期分布。结果 6种人食管癌细胞均表达IFN-λ受体;IFN-λ对各食管癌细胞生长均有不同程度的抑制作用;在TE11,YES5、T.Tn细胞株中,IFN-λ作用后72 h可见TE11、YES5、T.Tn活细胞数明显减少;TE11细胞的G1期升高;YES5、T.Tn细胞的Sub-G1期明显升高。结论 IFN-λ体外可抑制食管癌细胞增殖,其机制为诱导细胞凋亡并将细胞阻滞于G1期。     

p38MAPK抑制剂增强人宫颈癌细胞对顺铂的敏感性

目的 探讨p38 MAPK抑制剂通过蛋白激酶B(Akt)有关的信号途径对人宫颈癌细胞顺铂(CDDP)化疗敏感性的影响.方法 应用CDDP和p38MAPK特异性抑制剂SB203580及两者联合应用处理人宫颈癌Hela细胞株.采用MTT法检测化疗药物对肿瘤细胞的生存抑制率,Western印迹技术检测化疗药物处理后Akt和磷酸化Akt的表达水平.结果 MTT显示CDDP和SB203580对人宫颈癌细胞均有抑制作用(24.34％,36.58％),两者相同用量联合后癌细胞抑制率更明显(58.76％).Western印迹结果说明CDDP处理组与联合处理组Akt表达水平无明显差异,而pAkt水平较SB203580组和联合组显著升高.结论 p38 MAPK抑制剂SB203580可能通过阻断PI3K/Akt途径或其他有关Akt的通路提高人剧颈癌细胞CDDP化疗的敏感性.     

索拉菲尼联合紫杉醇对HepG2细胞的抑制作用及其对cyclinD1表达水平的影响

目的探讨索拉菲尼(SOR)单药、紫杉醇(PTX)单药以及两药联合对肝癌细胞株Hep G2增殖的抑制作用及其对周期素依赖性蛋白cyclin D1表达的影响,探讨其协同作用机制。方法以不同浓度的SOR和不同浓度的PTX,分别组成单药组和联合用药组,另设不加药的对照组,作用于Hep G2细胞。MTT法检测SOR、PTX单药及联用后Hep G2细胞的增殖抑制率,流式细胞仪分析细胞的凋亡率;RT-PCR检测各组细胞中cyclin D1表达。结果 SOR、PTX单药与联用均能抑制Hep G2细胞增殖,且呈明显时间-剂量依赖效应,两药联用有协同效应,可使Hep G2细胞增殖率明显下降,细胞数减少,联合组与对应的单药组间差异显著(P0.05);药物作用48 h后,给药组cyclin D1 mRNA的表达较对照组明显减少(P0.05),两药联用cyclin D1表达更显著,与单药组比较有显著差异(P0.05)。结论 SOR和PTX联用可协同下调Hep G2细胞中cyclin D1表达,增强了抑制Hep G2细胞增殖及诱导其凋亡效应。     

齐墩果酸对顺铂耐药胃癌SGC-7901细胞增殖及细胞凋亡的影响

目的 探讨齐墩果酸(OA)对顺铂耐药胃癌 SGC-7901(SGC-7901/CDDP)细胞增殖及细胞凋亡的影响.方法 体外诱导建立人胃癌顺铂耐药细胞株 SGC-7901 /CDDP,MTT 比色法检测OA对 SGC-7901/CDDP 细胞增殖的抑制作用;琼脂糖凝胶电泳检测基因组 DNA 的降解;蛋白质免疫印迹检测凋亡相关蛋白酶的激活.结果 MTT实验证明OA对SGC-7901/CDDP 细胞的生长有抑制作用,100 μmol/L OA作用72 h对SGC-7901/CDDP细胞的抑制率达62%,并表现为时间和剂量依赖性;琼脂糖凝胶电泳实验证明100 μmol/L的OA处理SGC-7901/CDDP细胞48 h后基因组DNA被降解,可见较典型的DNA梯形带;蛋白质免疫印迹分析表明,100 μmol/L的OA处理SGC-7901/CDDP细胞48 h后,细胞内凋亡相关的蛋白酶caspase-3被激活.结论 OA在体外能够诱导SGC-7901/CDDP细胞凋亡,诱导凋亡的途径可能是线粒体途径.     

紫杉醇与顺铂联合应用对人胃癌SGC7901细胞的作用

目的 研究紫杉醇 (PA) 联合顺铂 (CDDP) 对人胃癌SGC7901细胞株的影响.方法 采用MTT法检测两种药物单用和联合应用对细胞的作用,光镜和电镜观察细胞结构的变化,流式细胞仪检测SGC7901细胞周期分布及端粒酶的活性.结果 PA可抑制SGC7901细胞的生长,且呈剂量及时间依赖性(P＜0.05);光学显微镜下可见经 PA和CDDP培养的胃癌细胞核周存在异常物质,电镜下在细胞内可见异常致密物;PA对人胚肺成纤维细胞(HPF)生长起促进作用,且呈剂量依赖性(P＜0.05);PA与 CDDP联合应用对SGC7901细胞生长的抑制具有协同作用(P＜0.05);同时抑制端粒酶活性.结论 PA对胃癌SGC7901细胞有抑制作用,相同剂量对正常细胞无抑制作用.PA与CDDP对胃癌细胞的抑制具有协同作用,与单用CDDP相比,PA与CDDP联合应用可减少CDDP的用药剂量.     

联合应用小檗碱和二甲双胍对miR-212介导的食管癌细胞迁移的影响

目的探讨小檗碱和二甲双胍联合对miR-212介导的人食管癌KYSE-450细胞迁移的影响及机制。方法对miR-212慢病毒转染的KYSE-450细胞,用小檗碱(10μmol/L)和二甲双胍(10 mmol/L)单独或联合应用处理,利用Transwell迁移实验检测细胞迁移能力,Western印迹法检测上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达。结果与对照组相比,小檗碱和二甲双胍联合后对KYSE-450细胞迁移能力的抑制作用明显增强,并优于两药的单独用药组(P0.05)。小檗碱和二甲双胍联合后,EMT标记蛋白E-cadherin表达显著增加,Vimentin和转录因子Twist1表达显著减少(P0.05)。结论小檗碱和二甲双胍联合用药显著增强对miR-212介导的食管癌KYSE-450细胞的迁移能力的抑制作用,其机制与两种药物联合抑制EMT转化过程及转录因子Twist1的表达有关。