拉米夫定耐药变异株在急性HBV感染者中的流行调查

目的:调查YMDD变异株在急性HBV感染(AHB)中的流行情况,为指导AHB的防治提供依据.方法:收集HBV感染者321例(HBV DNA≥1.0×107copies/L),其中未开始治疗的AHB患者100例和拉米夫定治疗(100 mg/d)不同时期的CHB患者221例.采集外周血标本,用荧光标记杂交双探针PCR融解曲线法(FH-PCR-MC)检测血清HBV YMDD及其变异,统计分析HBVYMDD变异在两组中的分布.结果:在AHB组,只检出HBV YMDD野生型,未检出变异型.而在CHB组,YMDD变异检出率为63.4%,其中YIDD占52.1%,YVDD占37.9%,YIDD+YVDD混合变异占10.0%:1年内、1-2年、2-3年、3-4年和4年以上疗程YMDD变异率分别为45%,66%,77%,75%和40%,YMDD变异检出率在两组中差异显著(X2=112.3,P=0.00).结论:目前在用拉米夫定治疗的CHB患者中仍有较高比率的YMDD变异株存在,但尚未发现该变异株在AHB患者中流行.     

拉米夫定治疗中乙型肝炎病毒YMDD野毒株和变异株的变化

目的 观察慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者应用拉米夫定治疗前后,YMDD野毒株及变异株的动态变化,并分析其临床意义。方法 取5例CHB患者治疗前与治疗48周的10份血清标本,先用PCR法扩增包括YMDD基序的乙型肝炎病毒(HBV)部分核苷酸序列,然后进行DNA序列测定,同时分别进行克隆,每份标本随机挑选20～24株单克隆,用实时荧光PCR法检测YMDD野毒株及其变异株。结果 5例CHB患者治疗前PCR产物直接测序结果未检出YMDD变异,治疗48周时有4例检出YMDD变异,但对每株克隆的分别检测显示：治疗前YMDD变异株(YIDD／YvDD)所占比率分别为0％、9．5％、0％、4．5％、5．6％;治疗48周时所占比率分别为100％、100％、65％、100％、0％。其中1例患者治疗前检出YIDD变异株,而治疗48周时YVDD变异株则变成优势株。治疗52周时,4例YMDD变异患者中2例HBVDNA和血清丙氨酸转氨酶(ALT)突破,1例患者ALT突破,但HBVDNA为阴性。结论 YMDD变异株在拉米夫定治疗前的血清中已存在,在服用拉米夫定后,由于选择性抑制了野毒株,使YMDD变异株由弱势株变成优势株,部分患者可导致拉米夫定临床耐药。YVDD变异株可能比YIDD变异株的复制能力强。     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎出现YMDD变异患者的临床意义

目的探讨拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者YMDD变异株YVDD和/或YIDD的变异情况。方法用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析方法,检测65例慢性乙型肝炎患者血清YMDD变异情况。结果65例血清标本中,检出YMDD变异31例,其中YVDD变异22例(33.8%),YIDD变异8例(12.3%),YVDD与YIDD混合变异1例(1.5%)。31例发生变异者中服用拉米夫定满一年发生YVDD变异4例,YIDD变异2例;服用拉米夫定满二年发生YVDD变异8例,YIDD变异3例,YVDD与YIDD变异1例;服用拉米夫定满三年发生YVDD变异10例,YIDD变异3例。结论YMDD变异与病情变化无关,随着拉米夫定治疗时间延长,发生变异的机会增大。     

拉米夫定抗乙型肝炎病毒感染中YMDD变异类型及时间研究

目的 研究拉米夫定抗乙型肝炎病毒(HBV)感染中P基因发生YMDD变异的类型和出现时间。方法 取拉米夫定治疗过程中HBV DNA由阴性再次转为阳性33例患者及HBV DNA始终保持阳性达一年或一年以上2例患者的血清,经PCR扩增HBV的P基因,对扩增产物进行测序及用3个限制性内切酶分析HBVP基因的YMDD变异。 结果 14例出现YMDD变异,其中6例YVDD变异,4例YIDD变异,3例YI/VDD混合变异,1例YI/MDD变异。变异出现时间平均为(11.07±3.65)个月,最短5个月,最长7个月。其中YIDD为(10.00±1.41)个月,YVDD为(11.67±4.41)个月,YI/VDD为(13.33±3.31)个月,三种变异类型的出现时间差异无显著性(F=0.543,P>0.05)。3例YMDD变异后拉米夫定加量至200mg/d,未能消除变异病毒。 结论 拉米夫定抗HBV感染后变异有多种形式,包括YIDD、YVDD、YI/VDD、YI/MDD。变异发生时间一般在治疗后(11.07±3.65)个月。变异类型与用药时间无关。     

基因芯片技术检测乙型肝炎病毒YMDD变异

核苷类似物拉米夫定(3TC)治疗慢性乙型肝炎(CHB)过程中,乙型肝炎病毒(HBV)P基因YMDD基序中的甲硫氨酸密码子(M)易突变为缬氨酸(V)或异亮氨酸(I),形成YMDD变异的两种氨基酸序列,即YVDD和YIDD。国内外研究发现[1,2],YMDD基序变异与拉米夫定耐药、肝炎复发有密切关系。我们采用HBV基因多态性芯片检测技术,对102例长期用拉米夫定治疗CHB患者血清进行了检测,进一步探讨YMDD变异与临床的关系。材料和方法一、临床资料102例为2002年7月～2002年12月就诊于我科门诊患者,服用拉米夫定(100mg/d)时间在9～30个月者,其中男70例,女32例,…     

HBV感染者人类白细胞Ⅰ,Ⅱ类抗原等位基因多态性分析

目的:分析HBV感染者体内病毒持续和清除与HLA-A,B,DRB1各位点等位基因分布频率的关系.方法:采用序列特异性引物-聚合酶链式反应(PCR-SSP)技术,对61例慢性乙型肝炎患者(CHB)、32例HBV感染后病毒清除者(感染恢复组)和40例骨髓移植供者(正常组)的外周血白细胞,进行人类白细胞抗原等位基因(HLA-A,B,DRB1)分型检测.结果:在慢性乙型肝炎组,HLA-DRB1*12等位基因分布频率较正常组(0.230vs0.075,P=0.004,OR=3.674,95%CI:1.445-9.338)和HBV感染恢复组(0.230vs0.063,P=0.004,OR=4.468,95%CI:1.492-13.377)均显著增高,HLA-B*35,DRB1*13则显著降低(0.066vs0.163,P=0.027,OR=0.362,95%CI:0.143-0.918;0.016vs0.008,P=0.017,OR=0.174,95%CI:0.035-0.859);HLA-A*69,B*56也显著降低(均0.000vs0.037,P=0.031).HLA-A*02等位基因分布频率在慢性肝炎组与HBV感染恢复组比较显著降低(P=0.044),HLA-B*51在感染恢复组与正常组比较显著增高(P=0.019).结论:机体对HBV易感性和病毒持续或清除与HLA等位基因多态性相关.HLA-DRB1*12可能既为易感性位点,又能促进病毒的持续感染;HLA-B*51,A*02可能为易感性位点,但感染后易清除病毒;HLA-DRB1*13可能是抗HBV感染的保护性基因;HLA-B*35,B*56和A*69在中国北方汉族人可能也为抗HBV感染的保护性基因.     

YMDD自然变异毒株流行病学调查

目的 了解YMDD自然变异的发生情况及影响YMDD自然变异的因素.方法 依托国家食品药品监督管理局注册药物临床试验"阿德福韦酯片治疗成人慢性乙型肝炎的多中心、随机、双盲、对照临床研究(Ⅲ期)"开展.采用乙型肝炎病毒(HBV)拉米夫定耐药荧光PCR检测试剂盒及实时荧光PCR基因型分型试剂盒,对该临床研究筛选期183例半年内未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎(CHB)患者血清标本进行检测,并通过Logistic逐步回归对影响YMDD自然变异检出率的可能因素进行多因素分析.结果 183例CHB患者中,检出YMDD自然变异毒株者40例(21.86%),其中YVDD阳性36例,YIDD阳性3例,YVDD和YIDD同时阳性者1例;变异毒株占总病毒量50%以上者6例,占25%～50%者9例,占9%～25%者25例.B基因型CHB患者中YMDD自然变异检测阳性的比例高于C基因型(31.67%对17.65%,P=0.038 2),患者性别、年龄、HBeAg状态、血清HBV DNA载量及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平对YMDD自然变异检出率无显著影响(P＞0.05).结论 在CHB患者中存在YMDD自然变异毒株;YMDD自然变异的发生率与患者性别、年龄、HBeAg状态、HBV DNA水平、ALT水平无关.B基因型较C基因型更易出现YMDD自然变异.     

乙型肝炎患者拉米夫定耐药株变异率快速检测

HBV感染是导致肝硬化和肝癌的重要因素,拉米夫定是抑制HBV的有效药物之一.但是,长时间应用拉米夫定会导致HBV出现YMDD区段发生变异从而产生耐药[1-2].HBV反转录酶的保守序列YMDD中蛋氨酸(M)被缬氨酸(V)或异亮氨酸(Ⅰ)所取代,变异后成为YVDD(rtM204V)或YIDD(rtM204I),使患者体内病毒复制反弹[3-4].     

慢性乙型肝炎患者血清中病毒的YMDD自然变异

近年来,随着拉米夫定的广泛应用,部分患者出现YMDD变异而产生耐药性,最常见的有YVDD(M552V)和YIDD(M552I)变异.因此,服用拉米夫定后患者的YMDD变异成为近几年的研究热点[1-2];但有研究证实存在YMDD自然变异[3].国内目前尚缺乏大样本YMDD自然变异率的研究,我们对未经治疗的449例慢性乙型肝炎患者进行YMDD变异株的检测,探讨了不同慢性乙型肝炎患者血清中HBV YMDD的自然变异率及其与血清HBV DNA水平的关系.     

拉米夫定耐药患者乙型肝炎病毒的基因突变

目的了解在拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的过程中出现拉米夫定耐药患者的HBV YMDD突变模式及其特性。方法回顾性分析444例在拉米夫定治疗过程中出现耐药突变的慢性乙型肝炎病例，用基因芯片法检测YMDD突变类型，并分析不同突变类型的特点。结果444例拉米夫定耐药患者的YMDD突变类型分别为：YVDD突变185例，其中合并L180M突变94例；YIDD突变216例．其中合并L180M突变34例；YVDD突变＋YIDD突变43例，其中合并L180M突变18例。相对于YVDD突变株，YIDD突变株检出率高，较易出现于相对年长患者，发生突变时间晚，病毒复制水平高，肝炎复发程度相对较重。合并L180M突变较单纯YMDD突变发生早，病毒复制水平高。结论拉米夫定耐药的YMDD突变模式主要为点突变和联合突变两种，点突变以YIDD突变为主，联合突变以YVDD突变合并L180M突变为主，YMDD突变模式不同者的临床表现不同，YMDD突变模式可能与预后及治疗的应答相关。     

YMDD mutations and genotypes of hepatitis B virus in northern China

The objective of this research was to determine the relationship between YMDD mutations and the genotypes of hepatitis B virus (HBV) during lamivudine treatment. HBV genotypes were determined by nested PCR with 6 pairs of HBV genotype-specific primers (A to F) in serum specimens from 142 hepatitis B patients receiving lamivudine antiviral therapy. YMDD mutations were detected by fluorescent hybridization bioprobe PCR and melting curve assay (FH-PCR-MC). Among 142 serum specimens, 13 samples were genotype B (9.2%), 125 samples were genotype C (88%), 4 samples were genotype D (2.8%), and 80 YMDD mutations were found. The YMDD mutation rates were 69.2 and 54.4% in genotype B and genotype C, respectively. There was no significant difference in the YMDD mutation rate between genotypes B and C. Nine genotype B sera with YMDD mutations were found, including 2 YIDD mutations and 7 YVDD (M + V) mutations. Sixty-eight genotype C sera with YMDD mutations were found, including 34 mutations I (M + I) and 17 mutations V (M + V). There was a significant difference in the YMDD mutation types between genotypes B and C. Our results suggested that the YMDD mutation rate was 56.3% in patients treated with lamivudine for 2-4 years. YIDD was the main mutation type. The YMDD mutation rate showed no significant difference between HBV types B and C (P > 0.05), while the YMDD mutation types showed a significant difference between HBV types B and C in Northern China (chi2 test = 4.6, P < 0.05).     

慢性乙型肝炎患者拉米夫定治疗24周时YMDD变异对疗效的影响

目的 使用基因芯片方法检测乙型肝炎病毒(HBV)YMDD变异的发生情况,研究YMDD变异发生与肝功能损伤和HBV复制水平指标之间的关系。方法 120例以常规剂量(100mg/d)口服拉米夫定的慢性乙型肝炎患者,治疗前和治疗第24周抽取血清检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、HBV DNA(定量)水平,对24周HBV DNA阳性的17例患者血清样本,以基因芯片方法检测其治疗前和治疗24周时血清中YMDD变异是否存在,并分析该变异发生和ALT、HBV DNA的关系。结果 (1)120例入选患者治疗24周时有17例患者HBV DNA仍为阳性,除外治疗前已存在的1例感染变异病毒,基因芯片共检出7例变异,变异率为5.8％。其中纯变异2例,YIDD变异1例,YVDD变异1例,混合变异5例,其中YMDD/YVDD变异3例,YVDD/YMDD变异2例。(2)变异组在治疗前和治疗24周时ALT定量水平与非变异组相比,差异无显著性,P>0.05。(3)变异组在治疗前和治疗24周时HBV DNA定量水平与非变异组相比,差异无显著性,P>0.05。结论 在拉米夫定治疗过程中,YMDD基因变异发生对肝脏炎症活动度和病毒复制的抑制作用无显著影响。     

基因芯片和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法检测拉米夫定耐药的慢性乙型肝炎患者YMDD变异

目的对基因芯片和聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)两种方法检测YMDD变异进行比较。方法取40例临床考虑拉米夫定耐药的患者血清，分别用基因芯片和PCR-RFLP法检测YMDD基序变异情况。随机抽取8份血清标本进行测序验证两种方法的准确性。结果40例患者血清标本中，用基因芯片法检测出YMDD变异阳性标本27例，其中，YIDD变异4例，YVDD变异16例，YVDD／YMDD共存12例；YIDD与YVDD混合变异7例。用PCR-RFLP法检测出变异阳性标本21例。在变异株中，YIDD变异和YVDD变异各9例，YIDD／YVDD混合变异3例，明显低于基因芯片的检出率。结论1、用基因芯片能快速灵敏地检测YMDD变异情况，并能检测到患者体内变异株与野生株混合存在形式；2、基因芯片能同时检测两种YMDD变异株和YMDD野生株，优于PCR-RFLP法，适用于临床检测乙型肝炎病毒YMDD变异。     

拉米夫定耐药突变相关慢性重型乙型肝炎27例分析

目的 研究在拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的过程中出现拉米夫定耐药突变相关的慢性重型乙型肝炎的临床特点.方法 回顾性分析27例在拉米夫定治疗过程中出现耐药突变的慢性重型乙型肝炎病例,分析其临床特征,用基因芯片法或基因测序法检测YMDD突变类型,对8例施行肝移植术后的离体肝组织分析其病理特点.采用χ2检验进行统计学分析.结果 27例拉米夫定耐药患者的YMDD突变类型分别为:YVDD突变5例,YVDD突变+L180M突变2例,YIDD突变13例,YIDD+L180M突变4例,YVDD突变+YIDD突变1例,YVDD突变+Y1DD突变+L180M突变2例,单独L180M突变未检出.根据治疗前是否存在肝硬化,分为肝硬化组和非肝硬化组.与肝硬化组相比,非肝硬化组慢性重型乙型肝炎的发生率低,预后好,年龄小,HBeAg阳性率高.8例离体肝组织病理分析显示两种主要病理类型,一种主要表现为活动性肝硬化,另一种为大块或亚大块坏死,肝脏显著萎缩.结论 肝硬化为拉米夫定耐药突变相关的慢性重型乙型肝炎的高危因素.拉米夫定耐药突变相关的慢性重型乙型肝炎可能存在两种发病机制.     

拉米夫定耐药突变相关慢性重型乙型肝炎27例分析

目的 研究在拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的过程中出现拉米夫定耐药突变相关的慢性重型乙型肝炎的临床特点.方法 回顾性分析27例在拉米夫定治疗过程中出现耐药突变的慢性重型乙型肝炎病例,分析其临床特征,用基因芯片法或基因测序法检测YMDD突变类型,对8例施行肝移植术后的离体肝组织分析其病理特点.采用χ2检验进行统计学分析.结果 27例拉米夫定耐药患者的YMDD突变类型分别为:YVDD突变5例,YVDD突变+L180M突变2例,YIDD突变13例,YIDD+L180M突变4例,YVDD突变+YIDD突变1例,YVDD突变+Y1DD突变+L180M突变2例,单独L180M突变未检出.根据治疗前是否存在肝硬化,分为肝硬化组和非肝硬化组.与肝硬化组相比,非肝硬化组慢性重型乙型肝炎的发生率低,预后好,年龄小,HBeAg阳性率高.8例离体肝组织病理分析显示两种主要病理类型,一种主要表现为活动性肝硬化,另一种为大块或亚大块坏死,肝脏显著萎缩.结论 肝硬化为拉米夫定耐药突变相关的慢性重型乙型肝炎的高危因素.拉米夫定耐药突变相关的慢性重型乙型肝炎可能存在两种发病机制.     

拉米夫定耐药突变相关慢性重型乙型肝炎27例分析

目的 研究在拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的过程中出现拉米夫定耐药突变相关的慢性重型乙型肝炎的临床特点.方法 回顾性分析27例在拉米夫定治疗过程中出现耐药突变的慢性重型乙型肝炎病例,分析其临床特征,用基因芯片法或基因测序法检测YMDD突变类型,对8例施行肝移植术后的离体肝组织分析其病理特点.采用χ2检验进行统计学分析.结果 27例拉米夫定耐药患者的YMDD突变类型分别为:YVDD突变5例,YVDD突变+L180M突变2例,YIDD突变13例,YIDD+L180M突变4例,YVDD突变+YIDD突变1例,YVDD突变+Y1DD突变+L180M突变2例,单独L180M突变未检出.根据治疗前是否存在肝硬化,分为肝硬化组和非肝硬化组.与肝硬化组相比,非肝硬化组慢性重型乙型肝炎的发生率低,预后好,年龄小,HBeAg阳性率高.8例离体肝组织病理分析显示两种主要病理类型,一种主要表现为活动性肝硬化,另一种为大块或亚大块坏死,肝脏显著萎缩.结论 肝硬化为拉米夫定耐药突变相关的慢性重型乙型肝炎的高危因素.拉米夫定耐药突变相关的慢性重型乙型肝炎可能存在两种发病机制.     

拉米夫定耐药突变相关慢性重型乙型肝炎27例分析

目的 研究在拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的过程中出现拉米夫定耐药突变相关的慢性重型乙型肝炎的临床特点.方法 回顾性分析27例在拉米夫定治疗过程中出现耐药突变的慢性重型乙型肝炎病例,分析其临床特征,用基因芯片法或基因测序法检测YMDD突变类型,对8例施行肝移植术后的离体肝组织分析其病理特点.采用χ2检验进行统计学分析.结果 27例拉米夫定耐药患者的YMDD突变类型分别为:YVDD突变5例,YVDD突变+L180M突变2例,YIDD突变13例,YIDD+L180M突变4例,YVDD突变+YIDD突变1例,YVDD突变+Y1DD突变+L180M突变2例,单独L180M突变未检出.根据治疗前是否存在肝硬化,分为肝硬化组和非肝硬化组.与肝硬化组相比,非肝硬化组慢性重型乙型肝炎的发生率低,预后好,年龄小,HBeAg阳性率高.8例离体肝组织病理分析显示两种主要病理类型,一种主要表现为活动性肝硬化,另一种为大块或亚大块坏死,肝脏显著萎缩.结论 肝硬化为拉米夫定耐药突变相关的慢性重型乙型肝炎的高危因素.拉米夫定耐药突变相关的慢性重型乙型肝炎可能存在两种发病机制.     

拉米夫定耐药突变相关慢性重型乙型肝炎27例分析

目的 研究在拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的过程中出现拉米夫定耐药突变相关的慢性重型乙型肝炎的临床特点.方法 回顾性分析27例在拉米夫定治疗过程中出现耐药突变的慢性重型乙型肝炎病例,分析其临床特征,用基因芯片法或基因测序法检测YMDD突变类型,对8例施行肝移植术后的离体肝组织分析其病理特点.采用χ2检验进行统计学分析.结果 27例拉米夫定耐药患者的YMDD突变类型分别为:YVDD突变5例,YVDD突变+L180M突变2例,YIDD突变13例,YIDD+L180M突变4例,YVDD突变+YIDD突变1例,YVDD突变+Y1DD突变+L180M突变2例,单独L180M突变未检出.根据治疗前是否存在肝硬化,分为肝硬化组和非肝硬化组.与肝硬化组相比,非肝硬化组慢性重型乙型肝炎的发生率低,预后好,年龄小,HBeAg阳性率高.8例离体肝组织病理分析显示两种主要病理类型,一种主要表现为活动性肝硬化,另一种为大块或亚大块坏死,肝脏显著萎缩.结论 肝硬化为拉米夫定耐药突变相关的慢性重型乙型肝炎的高危因素.拉米夫定耐药突变相关的慢性重型乙型肝炎可能存在两种发病机制.     

拉米夫定耐药突变相关慢性重型乙型肝炎27例分析

目的 研究在拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的过程中出现拉米夫定耐药突变相关的慢性重型乙型肝炎的临床特点.方法 回顾性分析27例在拉米夫定治疗过程中出现耐药突变的慢性重型乙型肝炎病例,分析其临床特征,用基因芯片法或基因测序法检测YMDD突变类型,对8例施行肝移植术后的离体肝组织分析其病理特点.采用χ2检验进行统计学分析.结果 27例拉米夫定耐药患者的YMDD突变类型分别为:YVDD突变5例,YVDD突变+L180M突变2例,YIDD突变13例,YIDD+L180M突变4例,YVDD突变+YIDD突变1例,YVDD突变+Y1DD突变+L180M突变2例,单独L180M突变未检出.根据治疗前是否存在肝硬化,分为肝硬化组和非肝硬化组.与肝硬化组相比,非肝硬化组慢性重型乙型肝炎的发生率低,预后好,年龄小,HBeAg阳性率高.8例离体肝组织病理分析显示两种主要病理类型,一种主要表现为活动性肝硬化,另一种为大块或亚大块坏死,肝脏显著萎缩.结论 肝硬化为拉米夫定耐药突变相关的慢性重型乙型肝炎的高危因素.拉米夫定耐药突变相关的慢性重型乙型肝炎可能存在两种发病机制.