松萝提取物对胶原诱导性关节炎大鼠高迁移率族蛋白B1介导的细胞自噬及炎症因子的影响

目的：研究松萝提取物对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜细胞中凋亡相关因子的影响,进一步探讨松萝提取物对CIA大鼠关节炎症及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)介导的细胞自噬的影响。方法：将54只Wistar雌性大鼠随机分为空白对照组,模型对照组,羟氯喹组,松萝提取物低、中、高剂量组,每组9只。松萝提取物低、中、高剂量组给药剂量分别为2 mg·kg^-1、6 mg·kg^-1、54 mg·kg^-1,羟氯喹组给药剂量为36 mg·kg^-1。建立CIA大鼠模型后,连续灌胃给药28 d。ELISA法检测血清中HMGB1、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度,RT-PCR检测HMGB1、Beclin1、PI3K C3 m RNA的表达,Western Blot法检测HMGB1、Beclin1、PI3K C3蛋白表达。结果：与空白对照组比较,各模型组HMGB1、TNF-α、IL-1β含量均增高,HMGB1、PI3K C3蛋白表达上升,Beclin1蛋白表达下降,差异有统计学意义(P &...     

利多卡因对脂多糖诱导的巨噬细胞高迁移率族蛋白B1 mRNA表达的影响

目的 观察利多卡因对脂多糖(LPS)诱导的大鼠腹腔巨噬细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1) mRNA表达的影响.方法 取雄性Wistar大鼠腹腔巨噬细胞,置6孔细胞培养板中培养3～5 d后,分为四组:脂多糖组(LPS组),LPS刺激浓度为100 ng/ml;LI组,于LPS刺激前30 min给予利多卡因(终浓度为20 μg/m1)预处理;L2组,于LPS刺激后30 min给予同等剂量的利多卡因处理;L3组分别于LPS刺激后30 min、6、12、18 h给予同等剂量的利多卡因处理.LPS刺激24 h后收取细胞,采用RT-PCR检测细胞HMGB1 mRNA的表达.结果 与LPS组比较,L1、L2、L3组HMGB1 mRNA表达均有不同程度下降(P<0.01).L3组HMGB1 mRNA表达下降程度最大,明显低于L1、L2组(P<0.01).结论 利多卡因能够抑制LPS诱导的体外培养大鼠腹腔巨噬细胞HMGB1 mRNA的表达.     

高迁移率族蛋白1在中枢神经系统疾病中的作用

高迁移率族(high mobiliby group box,HMGB)蛋白是一类核蛋白,释放至细胞外的HMGBI参与了外周诸多疾病的发生.近年来研究表明,HMGBI也参与了中枢神经系统疾病的发生.现简要阐述HMGB1的外周作用,着重介绍其在中枢神经系统疾病,特别脑缺血中的作用.     

白细胞介素1对Ⅱ型胶原诱导类风湿性关节炎模型的影响

以Ⅱ型 （ｔｙｐｃⅡｃｏｌｌａｇｅｎ，ＣⅡ）免疫接种ＤＢＡ／１小鼠，诱发其多发性关节炎发生，并以白细胞介素１（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１，ＩＬ－１）皮内注射，观察ＩＬ－１对关节炎发生的影响。方法采用ＣⅡ加弗氏完全佐剂（ｃｏｍｐｌｅｔｅｆｒｅｕｎｄ’ｓａｄｊｕｖａｎｔ，ＣＦＡ）给小鼠行皮内注射，并于ＣⅡ免疫接种后第１８天开始，给部分小鼠皮内注射ＩＬ－１，观察其发病情况，采用ＥＬＩＳＡ方法检测血清抗Ｃ     

抗TNFα单克隆抗体在II型胶原诱导的关节炎模型中的应用

目的制备胶原诱导的关节炎(collagen induced arthritis,CIA)模型,对AT132进行药效评价。方法制备Ⅱ型胶原诱导的CIA模型,且对新药AT132进行药效评价。HE染色观察膝关节和踝关节的病理变化。ELISA法检测血清中CⅡ、TNFα的表达。流式细胞仪检测小鼠关节滑膜中TNFα、IL-1、IL-6、IL-10的表达。结果 (1)模型组小鼠关节表现为小指关节、足爪、足趾肿胀以及变形,AT132组小鼠关节则表现为轻微的红肿。(2)模型组小鼠膝关节和踝关节病理结果表现为炎性细胞的浸润、滑膜增生、血管翳和破骨细胞的出现,软骨和骨的破坏。AT132组病理结果表现为轻微炎性细胞的浸润和滑膜增生。(3)ELISA法检测结果发现:模型组中CⅡ的表达明显上升,AT132给药组中CⅡ的表达明显下降(P0.01)。(4)流式细胞仪检测结果发现:模型组小鼠关节滑膜中TNFα、IL-1、IL-6、IL-10的表达明显增加,AT132组小鼠关节滑膜中TNFα、IL-1、IL-6、IL-10的表达明显降低(P0.01)。结论 CIA模型造模成功率为100%,AT132能够有效地治疗关节炎小鼠。     

血必净注射液对脂多糖诱导大鼠腹膜间皮细胞肿瘤坏死因子α和高迁移率族蛋白1表达的影响

目的 观察血必净注射液对脂多糖（LPS）作用下大鼠腹膜间皮细胞（PMC）肿瘤坏死因子α（TNF-α）和高迁移率族蛋白1（HMGB-1）表达的影响。 方法 胰蛋白酶消化法用于PMC的原代培养和传代,经鉴定,第3代细胞用于实验。细胞随机分组：（1）正常对照组;（2）不同浓度LPS（1、10、100 mg/L）组;（3）不同时间LPS组：10 mg/L LPS 作用PMC 2、6、12、18、21、24、36 h;（4）血必净组：10 mg/L LPS预孵育2 h后,加入不同浓度血必净（2、10、20 g/L）再作用4及22 h。RT-PCR法检测HMGB-1 mRNA的表达。ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α和HMGB-1的蛋白量。 结果 （1）LPS呈剂量依赖和时间依赖性显著上调PMC HMGB-1 mRNA和蛋白表达,与对照组相比,差异有统计学意义（均P < 0.05）。（2） LPS刺激后,PMC TNF-α蛋白表达显著高于正常对照组,差异有统计学意义（P < 0.05）,高浓度组更为明显,且36 h内表达出现双峰。（3）血必净可抑制TNF-α和HMGB-1的表达,与10 mg/L LPS组相比,差异有统计学意义（P < 0.05）,随血必净浓度增加,抑制作用增强。 结论 HMGB-1作为晚期炎性因子参与了腹膜透析相关性腹膜炎的病理过程。血必净可明显下调TNF-α及HMGB-1的表达,减轻腹膜炎性反应损伤。     

豨莶草对胶原诱导性大鼠关节炎的治疗作用

目的 基于白细胞介素（IL）-23/辅助性T细胞17（Th17）炎症轴探讨豨莶草对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠模型的治疗作用。方法 建立CIA大鼠模型,将建模成功大鼠随机分为模型组、豨莶草组、豨莶草+IL-23组,每组10只;另外10只作为阴性对照组。观察大鼠形态并称量体质量,运用水容积法测定大鼠足趾肿胀度、5级评分法测关节炎指数;苏木精-伊红染色（HE）检测滑膜组织形态学情况;酶联免疫吸附（ELISA）、实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测大鼠腹主动脉血和滑膜组织中IL-23、IL-17、IL-6、IL-22、IL-21含量及mRNA水平;流式细胞术检测腹主动脉血和滑膜组织中Th17细胞百分比。结果 与阴性对照组相比,模型组大鼠体质量降低,足趾肿胀度、关节炎指数、腹主动脉血和滑膜组织中IL-23、IL-17、IL-6、IL-22、IL-21含量及mRNA水平、Th17细胞百分比均升高（P＜0.05）;与模型组相比,豨莶草组大鼠体质量升高,足趾肿胀度、关节炎指数、腹主动脉血和滑膜组织中IL-23、IL-17、IL-6、IL-22、IL-21含量及mRNA水平、Th17细胞百分比均降低（P＜0.05）;与豨莶草组相比,豨莶草+IL-23组大鼠体质量降低,足趾肿胀度、关节炎指数、腹主动脉血和滑膜组织中IL-23、IL-17、IL-6、IL-22、IL-21含量及mRNA水平、Th17细胞百分比均升高（P＜0.05）。结论 豨莶草可通过抑制IL-23/Th17炎症轴从而降低炎症水平,实现对CIA大鼠的治疗。     

丙酮酸乙酯对烫伤延迟复苏大鼠肾组织高迁移率族蛋白B1表达和急性肾损伤的影响

目的观察丙酮酸乙酯（EP）对烫伤延迟复苏大鼠肾组织高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达及急性肾损伤的影响。方法采用30％体表面积Ⅲ度烫伤延迟复苏大鼠模型,78只大鼠随机分为假伤组（n=18）、烫伤组（n=30）和EP治疗组（n=30）;采用逆转录聚合酶链反应检测各组大鼠肾组织HMGB1 mRNA表达,蛋白印迹法及免疫组化法检测。肾组织HMGB1蛋白表达;同时测定血尿素氮（BUN）含量并观察。肾组织病理变化。结果与假伤组比较,严重烫伤后。肾组织HMGBl基因／蛋白表达于伤后8～72h显著增强（P〈0．05）,BUN含量在伤后8h及24h显著升高（P〈0．05）。与烫伤组比较,EP治疗组肾组织8、24、72h时HMGBl表达均显著下调,BUN含量在8、24h时亦明显下降（P〈0．05）;光镜下观察烫伤组肾组织炎性细胞浸润,肾小管结构破坏出现浊肿、变性,而EP处理后。肾脏病理改变不同程度地减轻。结论HMGB1作为晚期炎性因子参与了烫伤后。肾组织炎症反应的病理过程,应用EP治疗可有效下凋。肾组织HMGB1表达,并显著减轻烫伤延迟复苏所致的急性肾损伤。     

高迁移率族蛋白B1与肝损伤研究进展

1973年,Goodwin等[1]首先从细胞核中发现了高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1).HMGB1作为一种与DNA结合的非组蛋白,长期以来,人们一直关注其在维持核稳定方面的功能,包括稳定核小体结构、调节基因转录、参与DNA复制与修复.     

HMGB1 mRNA表达对急性坏死性胰腺炎大鼠肠黏膜ZO-1 mRNA及其蛋白表达的影响

目的研究高迁移率族蛋白B1（high mobility group box-1 protein,HMGB1）mRNA表达对急性坏死性胰腺炎（acute necrotizing pancreatitis,ANP）大鼠肠黏膜紧密连接蛋白-1（zonula occludens protein-1,ZO-1）表达的影响,初步探讨ANP时肠黏膜屏障损伤的可能机理。方法将96只Wistar大鼠随机（随机数字表法）均分为ANP组、丙酮酸乙酯（EP）组及假手术组,3组均分别于术后6、12、24及48 h时各抽取8只大鼠,取腹主动脉血和回肠组织。采用全自动生化分析仪检测血淀粉酶（AMY）水平,采用改良酶学分光光度法检测血浆D-乳酸水平,采用硫代巴比妥酸（TAB）比色法检测回肠组织丙二醛（MDA）含量,采用HE染色法观察大鼠回肠组织的病理学改变,采用免疫组织化学法（SP法）观察回肠组织ZO-1蛋白的表达,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测回肠组织HMGB1和ZO-1 mRNA的表达。结果各时相EP组大鼠的血AMY、D-乳酸和回肠组织MDA含量均低于ANP组（P〈0.05）。6 h时,ANP组大鼠回肠组织HMGB1 mRNA的表达即上调,但ZO-1 mRNA的表达下调;各时相EP组大鼠回肠组织HMGB1 mRNA的表达水平均低于ANP组,但ZO-1 mRNA的表达水平均高于ANP组（P〈0.05）。各时相EP组大鼠回肠组织的病理学损伤均较ANP组明显减轻。结论 ANP大鼠回肠黏膜组织中ZO-1表达下调是ANP大鼠肠黏膜屏障损伤的重要原因之一,可能与炎症介质HMGB1的过度表达有关。     

重症急性胰腺炎大鼠血清高迁移率族蛋白-1对胰腺腺泡细胞死亡方式的影响

目的探讨重症急性胰腺炎（SAP）大鼠血清高迁移率族蛋白-1（HMGB1）水平对胰腺腺泡细胞胀亡的影响。方法将32只SD大鼠随机分为假手术组（SO组,n=8）和SAP组n=24）。SO组大鼠开腹后仅翻动肠管,SAP组大鼠采用胆胰管内逆行注射3％牛磺胆酸钠的方法建立SAP模型。建模成功后,将SAP组大鼠随机均分为6、12及24h组,每组8只,分别于上述时点处死大鼠,取静脉血及胰腺组织,行HE染色以观察胰腺组织的病理学改变,行ELISA法检测血清中的HMGB1浓度,以流式细胞仪检测胰腺腺泡细胞的胀亡百分比。结果SO组大鼠的胰腺腺泡结构完整,偶见单个炎症细胞浸润。SAP．6h组可见胰腺腺泡肿胀、间质水肿,炎症细胞浸润;SAP-12h组及SAP．24h组见胰腺病理学损伤加重,部分腺泡细胞坏死,间质血管瘀血,局灶坏死,且随时间延长病理学损伤加重。3个SAP亚组大鼠的血清HMGB1浓度和胰腺腺泡细胞胀亡百分比均高于SO组（P〈0．01）,且随时间延长,SAP大鼠的血清HMGB1浓度和胰腺腺泡细胞胀亡百分比均增高（P〈0．05）。24h内SAP大鼠的血清HMGB1浓度与胰腺腺泡细胞胀亡百分比呈正相关r=0．846,P〈0．01）。结论SAP时,HMGB1在介导炎症反应的同时,可能诱导胰腺腺泡细胞胀亡,从而参与SAP的病理生理过程。     

高迁移率族蛋白A在雄性小鼠生殖细胞株中的表达

目的:检测高迁移率族蛋白A(HMGA)在雄性小鼠生殖细胞株TM4、GC-1spg、GC-2spd(ts)中的表达,为深入探讨HMGA基因在小鼠精子发生过程中的作用机制奠定理论基础。方法:应用RT-PCR、Western印迹检测雄性小鼠生殖细胞株TM4、GC-1spg、GC-2spd(ts)中HMGA1、HMGA2基因的表达。结果:HMGA1mRNA、HMGA2mRNA在雄性小鼠生殖细胞株TM4、GC-1spg、GC-2spd(ts)中均有不同程度表达,Western印迹结果表明HMGA1与HMGA2蛋白在雄性小鼠生殖细胞株TM4、GC-1spg、GC-2spd(ts)中呈阳性表达,与RT-PCR的结果一致。结论:HMGA的表达可能参与了细胞株TM4、GC-1spg、GC-2spd(ts)的分裂、增殖,在雄性小鼠精子发生过程中可能发挥着重要作用。     

HMGB1分子A-BOX的表达纯化及其促分化功能鉴定的研究

目的克隆人HMGB1 A-box的cDNA,构建高效稳定的大肠杆菌(E.coli)表达菌株并对其诱导表达纯化,同时探讨其对间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSC)的促分化作用。方法根据优选合成的HMGB1基因序列设计引物,PCR扩增目的基因片段,插入克隆载体pGEM-T并进行序列测定。重组克隆载体经BamHⅠ和XhoⅠ酶切,琼脂糖凝胶电泳分离目的基因,插入含His标签的表达载体pET24a。将构建的质粒转染BL21大肠杆菌,经IPTG诱导后,SDS-PAGE观察表达量。HIS-link层析柱纯化重组人HMGB1 A-box,蛋白印迹鉴定重组蛋白。将重组蛋白加入hBMSC培养体系中培养一周后,碱性磷酸酶染色检测其促MSC成骨分化作用。结果经RT-PCR扩增得到了261 bp的DNA片段,经测序分析,与GenBank中报道的已知序列完全一致,构建了含融合蛋白的重组表达质粒。经诱导后细菌高表达A-box,表达量为总蛋白的45%。经层析柱纯化后,蛋白印迹证实目的蛋白为高纯度的A-box。将A-box加入MSC培养体系中培养后,细胞活性无明显改变,但细胞碱性磷酸酶表达明显增高。结论成功构建了重组人HMGB1 A Box的表达载体,纯化的重组蛋白能有效促进MSC向成骨细胞分化。     

Ethyl Pyruvate Alleviates Pulmonary Hypertension through the Suppression of Pulmonary Artery Smooth Muscle Cell Proliferation via the High Mobility Group Protein B1/Receptor for Advanced Glycation End-Products Axis

Purpose: Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a formidable disease with no effective treatment at present. With the goal of developing potential therapies, we attempted to determine whether ethyl pyruvate (EP) could alleviate PAH and its mechanism.Methods: Pulmonary smooth muscle cells were cultured in conventional low-oxygen environments, and cellular proliferation was monitored after treatment with either EP or phosphate-balanced solution (PBS). Expression of high mobility group protein B1 (HMGB1) and receptor for advanced glycation end-products (RAGE) protein were detected by western blot. After hyperkinetic PAH rat models were treated with EP, hemodynamic data were collected. Right ventricular hypertrophy and pulmonary vascular remodeling were evaluated. Expression of HMGB1 and RAGE protein was also detected.Results: In vitro, proliferative activity increased in low-oxygen environments, but was inhibited by EP treatment. Furthermore, Western blotting showed the decreased expression of HMGB1 and RAGE protein after EP treatment. In vivo, pulmonary artery pressures were attenuated with EP. Right ventricular hypertrophy and pulmonary vascular remodeling were also reversed. Additionally, the expression levels of HMGB1 and RAGE were reduced in lung tissues.Conclusions: EP can alleviate PAH by suppressing the proliferation of pulmonary artery smooth muscle cells via inhibition of HMGB1/RAGE expression.     

HMGB1 Regulates RANKL‐Induced Osteoclastogenesis in a Manner Dependent on RAGE

High‐mobility group box 1 (HMGB1), a nonhistone nuclear protein, is released by macrophages into the extracellular milieu consequent to cellular activation. Extracellular HMGB1 has properties of a pro‐inflammatory cytokine through its interaction with receptor for advanced glycation endproducts (RAGE) and/or toll‐like receptors (TLR2 and TLR4). Although HMGB1 is highly expressed in macrophages and differentiating osteoclasts, its role in osteoclastogenesis remains largely unknown. In this report, we present evidence for a function of HMGB1 in this event. HMGB1 is released from macrophages in response to RANKL stimulation and is required for RANKL‐induced osteoclastogenesis in vitro and in vivo. In addition, HMGB1, like other osteoclastogenic cytokines (e.g., TNFα), enhances RANKL‐induced osteoclastogenesis in vivo and in vitro at subthreshold concentrations of RANKL, which alone would be insufficient. The role of HMGB1 in osteoclastogenesis is mediated, in large part, by its interaction with RAGE, an immunoglobin domain containing family receptor that plays an important role in osteoclast terminal differentiation and activation. HMGB1‐RAGE signaling seems to be important in regulating actin cytoskeleton reorganization, thereby participating in RANKL‐induced and integrin‐dependent osteoclastogenesis. Taken together, these observations show a novel function of HMGB1 in osteoclastogenesis and provide a new link between inflammatory mechanisms and bone resorption.     

PTEN编码蛋白对TGF-β1刺激大鼠肾成纤维细胞增殖和ColⅣ与FN分泌的抑制作用

目的：观察张力蛋白同源物基因（PTEN）编码蛋白对转化生长因子-β1（TGF-β1）刺激所致大鼠肾成纤维细胞增殖和Ⅳ型胶原（ColⅣ）、纤连蛋白（FN）分泌的影响。方法：用重组PTEN腺病毒转染体外培养大鼠肾成纤维细胞,倒置荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达,RT-PCR检测PTEN mRNA表达。转染36h后TGF-β1体外刺激,TGF-β1刺激24h后MTT法检测细胞增殖活力,免疫细胞化学法检测PCNA表达,ELISA法检测细胞上清中ColⅣ、FN水平。结果：PTEN腺病毒转染36h后可见明显绿色荧光蛋白表达,PTEN mRNA表达明显增多（P〈0.01）。PTEN腺病毒转染后给予TGF-β1刺激组较单纯TGF-β1刺激组平均光密度值（OD）显著降低（P〈0.01）,PCNA表达显著减少（P〈0.01）,且ColⅣ、FN的分泌水平明显下降（P〈0.05）。结论：PTEN基因编码蛋白能抑制TGF-β1刺激所致大鼠肾成纤维细胞增殖、PCNA表达及ColⅣ、FN分泌,可能具有抑制残肾纤维化、延缓残肾毁损速度的作用。     

Effects of Adiponectin on Mortality and Its Mechanism in a Sepsis Mouse Model

ABSTRACT

The mortality of sepsis is increasing and conventional therapies for it have no better therapeutic effects. We investigated the effects of adiponectin (APN) on mortality and high mobility group box 1 (HMGB1) in polymicrobial sepsis mouse models. Sepsis models were established by cecal ligation and puncture (CLP) in BALB/c mice. Animals were randomly divided into four groups including control group (C group), model group (CLP group), early APN treatment group (APN + CLP group), and late APN treatment group (CLP + APN group). Mice in each group were killed at 6, 12, 24, and 48 hr after CLP, respectively, to collect samples for determining the levels of serum interleukin-6 (IL-6), tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), high mobility group protein-1 (HMGB1), and the expression of lung tissue HMGB1 mRNA. The survival curves in the four groups were drawn. The mortality rates were significantly lower in APN + CLP (30%) and CLP + APN (40%) groups than in CLP group (80%) seven days after CLP. Serum levels of cytokines (IL-6 and TNF-α) and HMGB1 were significantly reduced (p < .05) in APN + CLP and CLP + APN groups compared with those of CLP group. There was a significant correlation between serum HMGB1 and lung HMGB1 mRNA (r = 0.891). The levels of HMGB1 and HMGB1 mRNA were higher in CLP, APN + CLP, and CLP + APN groups than in C group (p < .01), but were lower in APN + CLP and CLP + APN groups than in CLP group (p < .01). APN can reduce the mortality rate and plays an anti-inflammatory role in polymicrobial sepsis mouse models through inhibiting HMGB1.     

糖肾宝含药血清对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响及机制研究

目的:探讨中药复方糖肾宝(主要由黄芪、大火草、葛根、莪术、三七组成)对高糖培养的大鼠系膜细胞(MCs)增殖的影响及可能作用机制。方法:体外培养大鼠MCs,随机分为正常组、高糖对照组、糖肾宝低、中、高剂量组、厄贝沙坦组。除正常组外,其余各组分别予以30mmol/L葡萄糖+正常大鼠血清、糖肾宝低、中、高剂量血清、厄贝沙坦血清进行干预48h。MTT法检测细胞增殖,RT-PCR法检测单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)mRNA表达,ELISA检测MCP-1蛋白,western印迹检测TGF-β1蛋白表达。结果:高糖作用下的各组MCs增殖、MCP-1和TGF-β1表达均显著高于正常组(P<0.05,P<0.01);药物干预的各组MCs增殖、MCP-1和TGF-β1表达均显著低于高糖对照组(P<0.05,P<0.01);糖肾宝高剂量组MCs增殖、MCP-1和TGF-β1表达与厄贝沙坦组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:中药复方糖肾宝能抑制高糖培养的MCs细胞增殖,其机制可能与抑制炎症反应有关。