阿霉素诱导胰腺癌BxPC-3细胞凋亡过程中p38MAPK的表达

目的研究阿霉素诱导胰腺癌细胞凋亡过程中p38MAPK表达的变化,探讨p38MAPK在其中的作用。方法用膜联蛋白V-PI(annexinV-PI)染色及流式细胞技术分析阿霉素及应用p38MAPK抑制剂SB203580对胰腺癌细胞凋亡的影响,同时利用免疫细胞化学法观察经阿霉素及SB203580处理人胰腺癌BxPC-3细胞后,p38MAPK的表达水平。结果SB203580(20μmol/L)干预组胰腺癌BxPC-3细胞凋亡率为(20.1±1.4)%,阿霉素作用24 h后诱导胰腺癌BxPC-3细胞凋亡,凋亡率为(31.1±2.7)%,加用SB203580抑制p38MAPK通路后可增强阿霉素诱导的凋亡作用,凋亡率达(40.4±2.6)%。采用单因素方差分析F=136.79,组间比较组与组之间差异有统计学意义。以20μmol/L阿霉素作用BxPC-3胰腺癌细胞24 h后可见p38MAPK在细胞染色后呈现深褐色颗粒散在分布于部分或整个细胞核及细胞质内,联合应用SB203580后可见p38MAPK表达颗粒密度减低,数量减少。结论阿霉素可以活化p38MAPK通路,p38MAPK可能起到保护胰腺癌BxPC-3细胞逃避阿霉素诱导的凋亡,阻断该通路可增强阿霉素诱导胰腺癌细胞凋亡的作用。     

p38 MAPK激酶抑制剂增强二烯丙基二硫化物诱导CNE2细胞凋亡

目的　研究二烯丙基二硫化物 (DADS)诱导CNE2细胞凋亡及 p38MAPK信号转导通路对此过程的作用。 方法　DADS处理CNE2细胞 2 4h后 ,荧光显微镜下观察形态学变化及凋亡细胞计数 ,MTT法测定细胞活性 ,流式细胞仪检测凋亡细胞 ,蛋白质印迹法检测磷酸化p38MAPK表达。结果　在培养的CNE2细胞中 ,DADS(50～ 1 50 μmol·L- 1 )作用 2 4h后 ,DADS诱导CNE2细胞产生典型的凋亡细胞形态学变化 (核浓染 ,核碎裂 ) ,流式细胞仪结果显示 ,随着DADS给药剂量增加 ,细胞周期中各期细胞所占百分率的变化无规律 ,细胞凋亡呈剂量依赖性 ,DADS(50～ 1 50 μmol·L- 1 )浓度依赖性刺激磷酸化p38MAPK的表达 ,p38MAPK抑制剂SB2 0 3580明显增强DADS致凋亡作用。结论　DADS诱导CNE2细胞凋亡时激活磷酸化 p38MAPK表达 ,磷酸化p38MAPK抑制剂增强DADS诱导CNE2细胞凋亡效应     

重楼皂苷 Ⅶ通过 p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的观察重楼皂苷 Ⅶ对肝癌细胞恶性生物学行为的影响,并探讨相关机制。方法于 2021年 6月至 2022年 6月,对数期人肝癌 HepG2细胞,分为对照组(常规培养)、重楼皂苷 Ⅶ组(重楼皂苷 Ⅶ 0.8 μmol/L)、SB203580［p38丝裂原活化蛋白激取酶( p38 MAPK)信号通路抑制剂］组( SB203580 10 μmol/L)、联合组(重楼皂苷 Ⅶ 0.8 μmol/L、SB203580 10 μmol/L)。噻唑蓝法检测细胞增殖能力;膜联蛋白 Ⅴ(Annexin Ⅴ)/碘化丙啶( PI)双染法检测细胞凋亡率;划痕实验检测细胞迁移能力;小室实验检测细胞侵袭能力;蛋白质印迹法检测细胞 p38 MAPK、磷酸化 p38丝裂原活化蛋白激酶( p-p38 MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2、磷酸化细胞外信号调节激酶( p-ERK1/2)蛋白表达。结果与对照组 24、48、72 h吸光度值,迁移率( 74.33±9.37)%,凋亡率( 3.25±0.78)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2及侵袭细胞数( 364.92±47.99)个比较,重楼皂苷 Ⅶ组 24、48、 72 h吸光度值,迁移率( 11.21±3.35)%降低,凋亡率( 39.87±8.94)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2升高,侵袭细胞数( 54.84±7.41)个减少( P<0.05); SB203580组 24、48、72 h吸光度值,迁移率( 89.30±14.56)%升高,凋亡率( 1.05±0.15)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2降低,侵袭细胞数( 617.04±75.34)个增加( P<0.05)。与重楼皂苷 Ⅶ组比较,联合组 24、48、 72 h吸光度值,迁移率( 40.52±8.18)%升高,凋亡率( 11.30±2.80)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2降低,侵袭细胞数( 141.36±16.75)个增加( P<0.05);与 SB203580组比较,联合组 24、48、72 h吸光度值、迁移率降低,凋亡率、 p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2升高,侵袭细胞数减少( P<0.05)。结论重楼皂苷 Ⅶ可抑制肝癌 HepG2细胞增殖、迁移及侵袭等恶性生物学行为,并诱导其凋亡,作用机制可能与激活 p38 MAPK信号通路相关。     

唑来膦酸盐通过p38 MAPK信号通路调控高糖微环境下成骨细胞分化

目的 探讨唑来膦酸盐（ZOL）对高糖微环境下小鼠前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的影响及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）通路的调节作用。方法 体外培养MC3T3-E1细胞并分为低糖（LG）组、LG+ZOL组、高糖（HG）组、HG+ZOL组。ZOL为0.1μmol/L,LG、HG的葡萄糖浓度分别为5.5 mmol/L和16.5 mmol/L。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖水平;鬼笔环肽染色观察细胞骨架;试剂盒检测细胞碱性磷酸酶（ALP）活性;茜素红染色检测细胞矿化结节生成情况;免疫荧光法检测Wnt5a、p38 MAPK的荧光表达强度。另设HG+ZOL+p38 MAPK通路抑制剂（SB203580）组,SB203580为10μmol/L。Western blot检测5组细胞中Wnt5a、p38 MAPK、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38 MAPK）、骨形态发生蛋白2(BMP2)和Ⅰ型胶原蛋白（COLⅠ）的表达水平。结果 4组细胞增殖水平差异无统计学意义（P>0.05）。与LG组比较,LG+ZOL组细胞骨架清晰程度,ALP活性,茜素红矿化结节生成,W...     

细胞色素P450w-羟化酶抑制剂HET0016通过ERK1／2途径减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的：细胞色素P450w-羟化酶在心肌缺血再灌注（MI／R）损伤中的作用尚不十分清楚。本课题研究HET0016[N-hydroxy-N＇-（4-butyl-2 methylphenyl）formamidine]，一种新的特异性细胞色素P450w-羟化酶抑制剂对MI／R损伤的保护作用，并探讨与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的关系。方法：采用大鼠MI／R模型，缺血30min，再灌注2h。将大鼠随机分为以下各组，每组6-8只：①假手术组；②模型对照组；③HET0016高低剂量给药组：在缺血前15min分别给0．1和1mg·kg-I HET0016静脉注射；⑤MAPK抑制剂组：在缺血前10min分别给予ERKl／2抑制剂PD98059（1 mg·kg-l，iv）、p38MAPK抑制剂SB203580（1mg·kg-1，iv）或JNK抑制剂SP600125（6mg·kg-1，ip）；⑥lmg·kg-1 HET0016＋MAPK抑制剂（PD98059，SB203580或SP600125）组。再灌结束后计算心肌梗死面积，测定LDH、CK和TnT水平。Westernblot检测心肌组织磷酸化ERKl／2、p38 MAPK及JNK蛋白表达水平。结果：①模型组较正常组大鼠血清LDH、CK和TnT分别升高6．43、4．13和9．7倍。HET0016剂量依赖性降低以上血清心肌酶谱水平；②HET0016高、低剂量组心肌梗死面积分别为（6．3±0．16）％和（10．3±0．2）％，与模型对照组（19.8±0．15）％比均有显著性差别；③PD98059可完全阻断HET00l6的作用，但SB20358和SP600125对其没有明显影响。④HET0016增加心肌组织磷酸化ERKl／2蛋白表达，但不影响磷酸化p38 MAPK及JNK蛋白表达。结论：HET0016通过抑制细胞色素P450w-羟化酶对大鼠MI／R损伤有保护作用，其机制与ERK1／2途径有关。     

恩氟烷对多柔比星致大鼠心肌损伤及p38MAPK信号通路的影响

摘要：目的:探究恩氟烷（ENF）对多柔比星（DOX）致大鼠心肌损伤及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）信号通路的影响。方法:将72只大鼠随机分为对照组（Control组）、DOX组、ENF低（ENF-L,1%）、中（ENF-M,2%）、高剂量组（ENF-H,3%）、SB组(p38MAPK抑制剂SB203580 1.5 mg·kg-1),每组12只。采用尾静脉注射DOX(4 mg·kg-1)制备心肌损伤大鼠模型。药物组大鼠吸入相应剂量的药物2h。停止吸入后超声心电图检查大鼠心脏功能;生化法检测血清肌酸激酶同工酶MB（CKMB）、肌钙蛋白I（cTnI）、乳酸脱氢酶（LDH）水平和心肌匀浆中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平;HE染色观察心脏组织形态变化;流式细胞术检测心肌细胞凋亡;荧光探针测定心肌中活性氧（ROS）水平;Western blot检测心肌组织p38MAPK通路和凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase-3）的表达。结果:与Control组相比,DOX组大鼠的左心室舒张末期容积（LVEDV）、左心室收缩末期容积（LVESV）、血清CKMB、cTnI、LDH、心肌MDA水平、心肌细胞凋亡率、ROS水平、p-p38MAPK/p38MAPK、Bax、Caspase-3表达等指标均显著升高（P<0.05）,左心室射血分数（LVEF）和左心室短轴缩短率（LVFS）、心肌SOD、GSH-Px、Bcl-2表达等指标则显著下降（P<0.05）,心肌损伤严重;与DOX组相比,SB组和ENF-M、ENF-H组大鼠的LVESV、LVEDV、血清CKMB、cTnI、LDH、心肌MDA、细胞凋亡率、ROS水平、p-p38MAPK/p38MAPK、Bax、Caspase-3表达明显下降（P<0.05）,LVEF、LVFS、心肌SOD、GSH-Px、Bcl-2的表达明显升高（P<0.05）;心肌损伤明显减轻。结论:恩氟烷对多柔比星诱导的心肌损伤有保护作用,其作用可能与抑制p38MAPK通路的激活,改善心肌细胞线粒体氧化损伤,抑制细胞凋亡有关。     

钩藤碱固体脂质纳米粒抑制哮喘模型小鼠气道平滑肌细胞增殖的作用机制

目的 研究钩藤碱固体脂质纳米粒（Rhy-SLN）抑制哮喘模型小鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖的作用机制。方法 采用卵清蛋白+氢氧化铝过敏法制备哮喘模型小鼠，然后原代分离培养ASMCs并进行形态观察和鉴定[当ASMCs内α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）呈红色，结蛋白（Desmin）呈绿色，表明ASMCs培养成功]；将细胞分为空白组（正常小鼠ASMCs）、模型组（哮喘模型小鼠ASMCs）、Rhy-SLN组（哮喘模型小鼠ASMCs）、细胞因子信号转导抑制蛋白1(SOCS1)过表达组（转染SOCS1过表达载体的哮喘模型小鼠ASMCs）、SOCS1-RNAi组（转染SOCS1-RNAi载体的哮喘模型小鼠ASMCs）、SB203580组[p38丝裂原激活的蛋白激酶（p38 MAPK）抑制剂，哮喘模型小鼠ASMCs]。各组加入相应含药（均为10μmol/L）或不含药培养基培养24 h。采用MTT法检测ASMCs增殖，采用Western blot法检测ASMCs中α-SMA、白细胞介素1β(IL-1β)、SOCS1、p38 MAPK、磷酸化p38 MAPK(p-p38MAPK)蛋白表达水平。结果 ...     

钩藤碱固体脂质纳米粒对哮喘小鼠miR-155/p38 MAPK轴的影响

目的　观察钩藤碱固体脂质纳米粒（Rhy-SLN）对支气管哮喘模型小鼠微小RNA-155（miR-155）/p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）轴的影响。方法　15只BALB/c小鼠随机均分为正常对照组、模型组和Rhy-SLN组。Rhy-SLN组小鼠行鼻内氢氧化铝致敏操作前以Rhy-SLN（50 mg/kg）灌胃;正常对照组和模型组给予等量生理盐水。干预结束后,肺泡灌洗液涂片观察嗜酸粒细胞的数量;HE染色观察小鼠肺组织病理改变情况;酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测小鼠免疫球蛋白E（IgE）、白细胞介素（IL）-13水平;羟脯氨酸测试盒检测小鼠肺组织中羟脯氨酸水平;Werstern blot检测小鼠肺组织（α-SMA）、胶原蛋白Ⅰ（collagen Ⅰ）、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达水平;荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测小鼠肺组织miR-155 mRNA表达水平。结果　与模型组比较,Rhy-SLN组可以降低哮喘小鼠肺泡灌洗液中嗜酸粒细胞的数目、血清中IgE和肺泡灌洗液中IL-13的水平（P＜0.05）;减轻肺组织炎性细胞浸润;降低肺组织中α-SMA、collagenⅠ、羟脯氨酸和p-p38 MAPK的表达（P＜0.05）;上调小鼠肺组织中miR-155的表达水平（P＜0.05）。结论　Rhy-SLN可缓解小鼠哮喘,其机制可能与调节miR-155/p38 MAPK轴,降低气道的炎症反应有关。     

MCI-186对β-淀粉样肽诱导SH-SY5Y细胞凋亡及p38MAPK蛋白表达的影响

目的研究依达拉奉(MCI-186)对阿尔茨海默病(AD)细胞损伤的保护作用及其机制。方法将人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞分为五组:空白对照组、溶剂对照组、β淀粉样肽(Aβ)组、Aβ+溶剂对照组和Aβ+药物处理组。用Aβ25-35处理SH-SY5Y细胞,建立AD细胞模型。采用DAPI荧光染色法计数凋亡细胞,Western blot法检测磷酸化的p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)表达。结果 Aβ25-35引起时间和剂量依赖性的SH-SY5Y细胞凋亡,并使p-p38MAPK表达增加(P<0.05)。MCI-186与p38MAPK抑制剂SB239063均抑制Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡及p-p38MAPK表达(P<0.05)。结论 MCI-186通过抑制p38MAPK磷酸化,对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡起到保护作用。     

N-乙酰半胱氨酸影响p38有丝分裂原活化蛋白激酶对顺铂诱导急性肾损伤的保护作用

目的研究N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对顺铂(cisplatin,CDDP)诱导大鼠急性肾损伤(acute kidney in-jury,AKI)后组织细胞凋亡的影响和与p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase,p38MAPK)的关系。方法静脉注射CDDP制备大鼠AKI模型。大鼠随机分为正常对照组、AKI模型对照组、NAC低剂量组(50 mg.kg-1)、NAC中剂量组(100 mg.kg-1)、NAC高剂量组(200 mg.kg-1)、特异性p38MAPK抑制剂SB203580组(10mg.kg-1)。大鼠预先连续给药3 d,给予CDDP,再继续给药5 d。TUNEL法进行细胞凋亡检查。试剂盒测定肾脏组织caspase-3。Western blot测定caspase-3、Bax、Bcl-2、磷酸化p38MAPK(phosphorylated p38MAPK,p-p38MAPK)表达。结果与正常对照组相比,CDDP诱导AKI模型组肾组织凋亡细胞增加,caspase-3、Bax、p-p38MAPK表达升高,Bcl-2表达降低(P<0.01)。与AKI模型组相比,NAC与SB203580减少凋亡细胞、降低肾脏组织caspase-3、Bax、p-p38MAPK表达和增加Bcl-2表达(P<0.01)。结论 NAC可有效防治CD-DP诱导大鼠AKI,并与p38MAPK相关。     

高端流式分选与免疫磁珠法纯化T细胞的比较

目的 为建立一种高效、高活性的T细胞的分离纯化方法,分别采用流式细胞分选技术(FACS)及免疫磁珠分选技术(MACS)从小鼠脾脏组织分离纯化CD8+T细胞.方法 通过测定分选后细胞的纯度、回收率、细胞活力、实验耗时及细胞学形态等指标,综合全面地比较了上述两种纯化方法分离CD8+T细胞的差异.结果 流式细胞分选仪分选后CD8+T细胞纯度为(99.5±0.00)％,而免疫磁珠法的纯度为(95.6±0.25)％.流式细胞分选仪分选CD8+T细胞的回收率为(74.33±3.28)％,而免疫磁珠法的回收率为(60.00±1.53)％.流式细胞分选法耗时1.5 h,免疫磁珠法则需要2.5 h.流式细胞分选后的细胞活力要比免疫磁珠法收集的要高.经流式分选后得到的细胞在12h时就开始出现集落生长,24 h时生长最佳,而经免疫磁珠分选后的细胞总体生长趋势较流式分选后的细胞缓慢.结论 流式细胞分选法较免疫磁珠法效率更高,能得到更高活性的细胞.     

Inhibition of mutationally activated HER2

Human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) is an oncogenic driver and key therapeutic target for human cancers. Current therapies targeting HER2 are primarily based on overexpression of the wild-type form of HER2. However, kinase domain mutations have been identified that can increase the activity of HER2 even when expressed at basal levels. Using purified enzymes, we confirmed the hyperactivity of two HER2 mutants (D769Y and P780insGSP). To identify small molecule inhibitors against these cancer-associated variants, we used a combined approach consisting of biochemical testing, similarity-based searching, and in silico modeling. These approaches resulted in the identification of a candidate molecule that inhibits mutant forms of HER2 in vitro and in cell-based assays. Our structural model predicts that the compound takes advantage of water-mediated interactions in the HER2 kinase binding pocket.     

激活补体对血小板的作用

目的：研究激活补体对血小板的作用和随后对血管内皮细胞和血管平滑肌细胞的作用．方法：用酵母多糖A激活补体观察血小板变形、凝血活酶表达和膜粘度的改变,观察酵母多糖A处理的富血小板血浆对内皮细胞和血管平滑肌细胞的生长、DNA含量和膜微粘度的影响．结果：酵母多糖A能引起富血小板血浆的血小板明显变形、膜微粘度增加和凝血活酶表达增加,但不引起经洗脱的血小板变形,新鲜的贫血小板血浆能恢复酵母多糖A引起的作用,但经眼镜蛇毒因子预处理后作用消失．酵母多糖A引起的血小板变形能被依他酸5mmol/L、Mn^2 10nmol/L、河豚毒素40μmol/L或吲哚美辛100μmol/L阻断．酵母多糖A处理的富血小板血浆上清液能抑制血管内皮细胞生长,但对血管平滑肌细胞生长有促进作用,促使血管平滑肌细胞进入G2期和M期,同时内浆网变粗和游离的核糖体出现,而内皮细胞的线粒体出现空泡．结论：激活补体引起血小板显著变形,损伤血管内皮细胞并使血管平滑肌细胞增殖．     

Correlation of activated clotting time and activated partial thromboplastin time to plasma heparin concentration.

STUDY OBJECTIVE: To determine the correlation between activated clotting time (ACT) or activated partial thromboplastin time (aPTT) and plasma heparin concentration. DESIGN: Two-phase prospective study. SETTING: University-affiliated community hospital. PATIENTS: Thirty patients receiving continuous-infusion intravenous heparin. INTERVENTIONS: Measurement of ACT, aPTT and plasma heparin concentrations. MEASUREMENTS AND MAIN RESULTS: Linear and log linear correlations were determined between clotting time tests and heparin concentrations. Linear correlations yielded r values of 0.58 for ACT (p=0.008) and 0.89 for aPTT (p=0.0001). Log linear correlations yielded r values of 0.60 for ACT (p=0.005) and 0.88 for aPTT (p=0.0001). A decision analysis was performed to determine possible consequences of dosage adjustments based on either test in relationship to the decision based on plasma heparin concentration. The decision analysis based on ACT disagreed with corresponding decisions based on plasma heparin concentration in 15 of 30 patients; 13 disagreements may have increased the risk of bleeding, and the other 2 may have increased the risk of thrombosis. Decisions based on aPTT disagreed with corresponding decisions based on plasma heparin concentration in 13 of 30 patients; 2 disagreements may have increased the risk of bleeding, and the other 11 may have increased the risk of thrombosis. CONCLUSION: There are significant statistical linear and log linear correlations between both clotting time tests and plasma heparin concentrations, with aPTT showing stronger correlation than ACT. However, decisions regarding heparin therapy based on ACT may increase a patient's risk of bleeding, whereas decisions based on aPTT may increase the risk of thrombus progression or rethrombosis.     

Anti-thrombotic effect of activated protein C

Protein C (PC) is an important anticoagulant protein in blood and converted to its active form, activated protein C (APC), by thrombin bound with thrombomodulin. APC exhibits an anticoagulant effect by the inactivation of FV a and FVIII a. In addition, APC exerts a profibrinolytic effect by inactivation of PAI-1 and inhibition of TAFI activation. APC is strongly anti-thrombotic because of its anticoagulant and profibrinolytic effect. APC has gamma-carboxyglutamic acid residues that bind to acidic phospholipids expressed on activated platelet or injured endothelial cells. Thus APC works only at the site where clots are formed and has a weak effect in primary hemostasis; this means that the use of APC is expected not to have any hemorrhagic risk. In both DIC animal models and clinical studies, we confirmed safer amelioration by APC than heparin. Recently, a specific receptor for PC/APC was found on endothelial cell membrane and anti-inflammatory effects of APC were also reported. Thus APC is thought to play an important regulatory role in blood coagulation, fibrinolysis and inflammation, especially in thrombotic diseases.