RNA干扰-转录后水平的基因沉默

随着人类基因组计划的初步完成,生命科学也随之进入后基因组计划的时代.在各种研究基因功能的方法中,RNA水平使目的基因沉默无疑是目前研究的新点和热点,特别是双链RNA(dsRNA)介导的转录后水平的基因沉默(PTGS),更是快速关闭基因的途径,目前在植物、线虫、果蝇和小鼠早期胚胎中均有发现和证实.这一现象的发现和应用将有助于基因功能及其在信号传导、病毒抵御机制等方面的研究,并有可能开创基因治疗的新模式.     

基因沉默与RNA干扰

生物体经过漫长的进化和自然选择后逐渐形成了对异常基因活动进行监控和防御的能力,这种天然免疫机制在最近几年的研究中得到了进一步认识。所谓异常基因活动是指病毒基因侵入和复制,转座子和转基因表达。正常基因活动几乎不产生双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA),而异常基     

RNA干扰技术

在基因治疗领域里，继反义RNA、核酶和三链DNA技术之后，现在又掀起了RNA干扰技术，这项技术在2002年度里荣登美国著名“科学”杂志评选出的世界十大科技进展之榜首，现将有关RNA干扰技术作一介绍。     

基因沉默的维持——长效RNA干扰

自揭示了哺乳动物细胞中的RNA干扰（RNAi）现象以来，对其进行了大量的研究与资金投入，期望将其发展成一种切实可行的治疗手段。毫无疑问，RNAi是最具发展潜力的基因治疗策略。由于许多采用RNAi治疗的疾病需要长期用药，因此，有关RNAi类药物长期应用的安全性问题成为关注重点。     

RNA干扰与基因功能研究

去除或降低某个或某些基因在细胞或机体中的表达 ,是研究正常基因的结构、功能、疾病的发病机制的重要手段。进行这类研究 ,需要在遗传学和分子生物学上有易于控制的实验体系。比如基因敲除 (ｋｎｏｃｋｏｕｔ)或基因表达降低(ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ)等方法就成功地对许多特殊基因在生理或病理状态下的功能进行了研究。但这些基础方法操作比较复杂 ,费时费力 ,对靶基因的选择有很大的局限性。显性阴性(ｄｏｍｉｎａｎｔｎｅｇａｔｉｖｅ)和反义法 (ａｎｔｉｓｅｎｓｅ)是对以上方法的补充 ,但仍然具有结果不稳定 ,无法预知实验效果等缺点。因此…     

RNA干扰-dsRNA介导的基因沉默

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年来首先在线虫体内发现的一种生物现象,即双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)能抑制序列特异性基因的表达[1].目前,RNAi现象在包括植物、真菌、果蝇以及某些哺乳动物等多种生物体内也已得到证实[2～4],被认为是进化过程中普遍存在的一种保守机制,是生物体防御病毒感染和转座子,保护自身基因组的重要手段[5、6],并因此引起生命科学界极大的关注.     

基因沉默的工具-RNA干扰技术的研究进展

<正>RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指与靶基因序列同源的双链RNA(dsRNA)所诱导的转录后基因沉默现象,是真核生物抵御病毒入侵、抑制转座子活动、调控基因表达的监控机制,也可替代基因敲除、核酶、反义核酸等进行基因沉默相关研究。众所周知,基因的表达具有选择性,我们发现生物体内存在一套RNA监视系统,能通过多种途径产生异常dsRNA,诱发RNAi,激活抑制基因,控制活跃基因,从而参与基因选择性表     

RNA干扰技术的原理与应用

RNA干扰作用(RNA i)是通过双链RNA(dsRNA)引发的转录后基因沉默机制。RNA i主要是指dsRNA分子进入细胞内,特异性降解与之同源的mRNA,从而特异高效地抑制相应基因表达活性的现象。近年来,RNA i以其高特异性、高效性等显著优势已成为研究基因功能的新手段,在功能基因组学、基因表达调控机制研究等领域得到了广泛的应用。在此对RNA干扰技术的发展历程、作用机制、作用特点及应用前景予以综述。     

RNA干扰-转录后水平的基因沉默

随着人类基因组计划的初步完成，生命科学也随之进入后基因组计划的时代。在各种研究基因功能的方法中，RNA水平使目的基因沉默无疑是目前研究的新点和热点，特别是双链RNA(dsRNA)介导的转录后水平的基因沉默(PTGS)，更是快速关闭基因的途径，目前在植物、线虫、果蝇和小鼠早期胚胎中均有发现和证实。这一现象的发现和应用将有助于基因功能及其在信号传导．病毒抵御机制等方面的研究，并有可能开创基因治疗的新模式。     

RNA介导染色质水平的基因沉默

近年来,一种 RNA 水平的基因沉默引起了研究者的高度关注,这便是由双链 RNA 表达引起的 RNA 干扰。双链RNA 在体内经过扩增和切割变成单链小分子 RNA,结合到相应序列的 mRNA 转录本并引起 mRNA 被核酸内切酶识别并切割,从而导致这些 mRNA 降解而无法翻译出产物,从 mRNA 水平关闭基因表达。这个过程大致可以分为双链 RNA 的形成、小 RNA的形成和信号放大以及异染色质的形成三个步骤。     

siRNAs介导的基因沉默技术和相关应用的研究进展

RNA干扰（RNAi）是由双链RNA（double-slranded RNA,dsRNA）介导的、序列特异的转录后基因沉默机制,是一古老的细胞反应通路,其在抵抗病毒感染、抑制转座子活动、调控内源性基因表达等方面发挥重要作用。近年来,短链RNA干扰（siRNAs）已成功地应用于哺乳动物中,该文就其介导的基因沉默技术和相关应用的研究进展进行综述。     

siRNAs介导的基因沉默技术和相关应用的研究进展

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)介导的、序列特异的转录后基因沉默机制,是一古老的细胞反应通路,其在抵抗病毒感染、抑制转座子活动、调控内源性基因表达等方面发挥重要作用.近年来,短链RNA干扰(siRNAs)已成功地应用于哺乳动物中,该文就其介导的基因沉默技术和相关应用的研究进展进行综述.     

RNA介导染色质水平的基因沉默

近年来，一种RNA水平的基因沉默引起了研究者的高度关注，这便是由双链RNA表达引起的RNA干扰。双链RNA在体内经过扩增和切割变成单链小分子RNA，结合到相应序列的mRNA转录本并引起mRNA被核酸内切酶识别并切割，从而导致这些mRNA降解而无法翻译出产物，从mRNA水平关闭基因表达。这个过程大致可以分为双链RNA的形成、小RNA的形成和信号放大以及异染色质的形成三个步骤。     

RNA干扰--一种生物自保护现象

RNA干扰是一种具有同源性的双链RNA诱发转录后基因沉默现象。RNA干扰主要通过双链RNA被核酸酶切成21～25个核苷酸的小干扰性。RNA：这种小干扰性RNA与细胞源性的某些酶和蛋白质形成RNA诊导的沉默复合体，由此复合体介导使与双链RNA有源序列的信使RNA被降解，抑制     

RNA干扰靶向沉默FLIP基因对卵巢癌细胞A2780生物学特性的影响及生长抑制作用

目的探讨靶向FLIP基因的小干扰RNA（siRNA）对人卵巢癌细胞A2780生物学特性的影响及生长抑制作用。方法设计并体外化学合成FLIP序列特异性双链RNA,在脂质体（LipofectamineTM2000）介导下转染人卵巢癌细胞株A2780。采用半定量RT-PCR和Western blot法检测FLIP siRNAs转染前后A2780细胞FLIP基因mRNA和蛋白表达的变化,并筛选出抑制作用最强的FLIP-siRNA。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法、Annexin-V-PI双染法流式细胞术（FCM）分别检测FLIP-siRNA转染对A2780细胞的生长抑制作用和对凋亡的影响。结果特异性FLIP-siRNAs片段能有效降低A2780细胞中FLIP的 mRNA和蛋白水平（P＜0.01）,最大抑制率分别为77.4％和66.1％;转染FLIP-siRNA后,A2780细胞的生长活力明显下降（P＜0.05）,RNA干扰组的细胞凋亡也显著增加（P＜0.05）。结论靶向FLIP基因的siRNAs可在转录和翻译水平抑制FLIP基因表达;并可抑制卵巢癌A2780细胞生长,促进其凋亡。     

反义，RNA干扰，基因沉默策略用于疾病治疗是否可行

反义寡核苷酸能调节基因表达,调控细胞功能和分化及细胞对于内外刺激的反应。虽然其作为治疗手段在临床前和临床研究中均已取得了令人鼓舞的结果,但实际运用中,仍有几大难点有待解决,包括效价、脱靶效应、转运及不良反应等。从反义寡核苷酸研究中获得的经验有助于其他基于寡核苷酸药物的研发,如CpG寡核苷酸、RNA干扰和微小RNA等。     

让致病基因“沉默”——2006年诺贝尔医学奖授予RNA干扰机制发现者

糖核酸干扰（RNAi）现象是一种能够有效中止缺陷基因运转的机制。通过RNA干扰，使特定基因受到抑制或进入休眠状态而沉默，遏制有害病毒和基因变异的影响。这为病毒性肝炎、艾滋病和肿瘤等顽疾的治愈提供了可能性。[编者按]     

Ku70 基因RNA 干扰载体的构建及干扰效果鉴定

目的构建靶向Ku70基因的RNA干扰(RNAi)表达载体并进行RNAi效果鉴定。方法设计3个针对Ku70基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染Hela细胞系。在转染24、48、72 h后,通过免疫印迹分析检测Ku70蛋白的表达量。把RNAi效果最显著的siRNA设计成短发夹RNA(short-hairpin RNA,shRNA),克隆入pSi-lencerTM 4.1-CMV hygro载体,转染Hela细胞系并筛选稳转细胞株,在mRNA和蛋白水平,评估Ku70 siRNA的干扰效果。结果 siRNA转染Hela细胞24、48 h后,Ku70蛋白的表达没有显著变化,但在72 h后,蛋白的表达量显著下降。在具有稳定表达siRNA的稳转细胞株中,Ku70基因的表达在mRNA水平和蛋白水平都受到了非常明显的抑制。结论成功构建靶向Ku70基因RNAi载体,并筛选出效能最优序列,为进一步研究Ku70基因的表达与宫颈癌放射治疗敏感性的关系奠定了基础。