北京地区幽门螺杆菌对克拉霉素的耐药情况及其耐药机制

目的：（1）确定北京地区幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp)菌株对克拉霉素的耐药情况。（2）研究幽门螺杆菌对克拉霉素耐药与23SrRNA基因点突变的关系。方法：从北京地区89例有上胃肠症状的患者取得胃活检组织,微需氧培养得到Hp,E-检验方法测定克拉霉素的最低抑菌浓度（MIC）,CTAB／NaCl方法提取敏感菌和耐药菌的DNA,用限制性片段长度多态性（PCR－RFLP）检测克拉霉素耐药菌株的点突变。结果：（1）北京地区Hp菌株对克拉霉素的耐药率是13．5％。（2）12个克拉霉素耐药的Hp菌株均存在23S rRNA基因的A2143G点突变,进行PCR－RFLP的24个敏感菌株均无23S rRNA的点突变。结论：北京地区克拉霉素耐药的Hp菌株较为常见,Hp对克拉霉素的耐药与23SrRNA基因的点突变有关。     

粪便23SrRNA基因检测判断幽门螺杆菌感染及克拉霉素耐药性的临床价值

目的探讨粪便23SrRNA基因检测判断幽门螺杆菌（Hp）感染以及克拉霉素耐药性的临床价值。方法选取2018年1至12月因上消化道疾病于杭州市萧山区第一人民医院就诊、13C呼气试验阳性的患者86例，同时行胃黏膜组织培养联合药敏试验以及粪便23SrRNA基因检测，对比两种方法的Hp阳性率以及对克拉霉素的耐药情况。粪便23SrRNA基因检测的假阴性样本予以16SrRNA高通量测序进行验证。结果粪便23SrRNA基因检测阳性率为79.07%（68/86），显著高于胃黏膜组织培养阳性率65.12%（56/86）（P＜0.05）。药敏试验克拉霉素耐药率为23.21%（13/56），低于粪便23SrRNA基因检测克拉霉素耐药率32.35%（22/68）。与胃黏膜组织培养相比，粪便23SrRNA基因检测检出Hp阳性的灵敏度为96.43%（54/56），特异度为53.33%（16/30），对克拉霉素耐药的灵敏度为92.31%（12/13），特异度为78.05%（32/41），与药敏结果一致率为81.48%（44/54），Kappa值为0.581，提示一致性强度中等。结论粪便23SrRNA基因检测具有较高的Hp阳性率和克拉霉素耐药灵敏度，可用于胃镜检查不耐受或13C呼气试验阳性胃黏膜组织培养阴性患者的Hp检测。     

幽门螺杆菌对克拉霉素的耐药性和基因型的同一性

目的 明确克拉霉素耐药的幽门螺杆菌(Hp)菌株耐药性和基因型的混合感染情况.方法 从16株对克拉霉素耐药的Hp混合菌落菌株中各随机挑选10个单菌落,转代扩菌后,用琼脂稀释法测定单菌落对克拉霉素的最低抑菌浓度(MIC),CTAB/NaCl方法提取单菌落的DNA,用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)检测其点突变,随机扩增的多态性DNA(RAPD)方法比较各菌落的基因型.结果 来自16个耐药Hp菌株的共160个单菌落均对克拉霉素耐药,且都存在23 S rRNA基因的点突变.来自同一患者的克拉霉素耐药菌株的10个单菌落具有相同的RAPD指纹图谱,与亲代混合菌落菌株也有相同的RAPD指纹图谱.结论 克拉霉素耐药的Hp菌株中未发现耐药性或基因型的混合感染存在.     

幽门螺杆菌耐药菌株流行情况及其耐药机制

随着抗菌药物广泛用于幽门螺杆菌 (HelicobacterpyloriHp)感染 ,其耐药性问题日益突出。就全球而言 ,克拉霉素的耐药水平在 0 %～ 1 3 % ,且有逐年上升的趋势。Hp对克拉霉素的耐药性是由于 2 3SrRNA上点突变引起克拉霉素与核糖体结合力下降所致。甲硝唑的耐药水平在发展中国家和发达国家间存在显著差异 ;在女性中的耐药水平明显高于男性。Hp对甲硝唑的耐药性是由于rdxA基因上点突变引起Hp还原能力下降所致。Hp对其他抗生素耐药性的研究较少 ,其耐药水平也较低。目前 ,Hp耐药性是Hp治疗失败的主要原因 ,因此当前之急是探讨耐药机制、开发新药和研制疫苗     

幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A在特发性血小板减少性紫癜发病机制中的作用

目的目前,认为幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)感染是引起特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombo-cytopenic purpura,ITP)的病因之一。研究幽门螺杆菌细胞毒素相关基因蛋白A(cytotoxin-associated gene protein,cagA)与特发性血小板减少性紫癜的血小板相关IgG抗体(platelet associated IgG,PA-IgG)及血小板数量变化的关系有助于探索Hp感染引起ITP的机制。文中通过检测ITP患者血清中cagA、PA-IgG和PLT数量,分析Hp感染与ITP发生的关系。方法快速尿素酶试验(rapid urease test,RUT)及14C尿素呼气试验(UBT)检测Hp。60例ITP患者分为Hp-、Hp+cagA-及Hp+cagA+3组,酶联免疫法测定外周血cagA、PA-IgG,用血细胞仪测定血小板计数,并比较抗Hp治疗前后的变化。结果 Hp+cagA+组的PA-IgG水平与Hp-和Hp+cagA-组比较明显升高(P<0.05),血小板计数与Hp-和Hp+cagA-组比较明显降低(P<0.05)。Hp+cagA-组的PA-IgG水平及血小板计数与Hp-组相比无统计学意义显著性差异(P>0.05)。Hp+cagA-组抗Hp治疗后PA-IgG水平下降及血小板计数上升不明显(P>0.05)。Hp+cagA+组抗Hp治疗后PA-IgG水平下降及血小板计数上升明显(P<0.01)。结论 Hp感染者可能由于其cagA导致PA-IgG升高而使血小板计数降低,参与ITP的发病机制。     

幽门螺杆菌的耐药性分析

目的:分析幽门螺杆菌(Hp)菌株对阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑、呋喃唑酮的耐药情况,并探讨Hp对克拉霉素耐药与23S rRNA基因点突变的关系.方法:分离培养Hp,药敏纸片法进行药敏实验,按酚-氯仿法提取Hp的DNA,PCR方法扩增23S rRNA基因中的片段,用限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测克拉霉素耐药菌株的点突变.结果:Hp菌株对阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑、呋喃唑酮的耐药率分别为9.3%、18.6%、53.5%、0%;8个克拉霉素耐药的Hp菌株有7个存在23S rRNA基因的A2143G点突变,进行PCR-RFLP的29个敏感菌株均无23S rRNA的点突变.结论:Hp菌株对甲硝唑耐药率高,对克拉霉素、阿莫西林和呋喃唑酮敏感;23S rRNA基因A2143G点突变与Hp对克拉霉素的耐药相关.     

社区与农村获得性幽门螺杆菌感染及耐药性分析

目的探讨社区与农村获得性幽门螺杆菌感染情况,并分析幽门螺杆菌对临床常用药物的耐药性。方法根据患者登记信息,将其分为社区组和农村组,其中社区组206例,农村组263例,分别进行13C-尿素呼气试验检测有无Hp感染;对感染者行胃镜检查,胃黏膜活检培养Hp菌株;用E试验法和琼脂稀释法检测其对甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林的耐药性。结果社区组206例患者中有116例感染幽门螺杆菌,感染率为56.31%;农村组263例患者中有211例感染幽门螺杆菌,感染率为80.23%,两组感染率比较,差异具有显著性意义（P〈0.01）。社区组Hp菌株对甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林的耐药率分别为76.3%、35.9%、11.2%,农村组对甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林的耐药率分别为42.5%、22.3%、3.6%,两组对三种常见药物的耐药率比较,差异均具有显著性意义（P〈0.01）。结论幽门螺杆菌感染率农村高于城市社区,但是农村患者Hp对甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林的耐药率明显低于城市社区患者。     

重庆地区分离幽门螺杆菌对克拉霉素耐药性研究

目的:了解重庆地区幽门螺杆菌(Heliobacter pylori,Hp)对克拉霉素的耐药情况,探讨Hp对克拉霉素耐药的分子机制.方法:分离培养获得96株Hp.采用琼脂稀释法进行体外抗生素敏感试验,检测Hp对克拉霉素的最低抑菌浓度(Minimalinhibitory concentration,MIC),拟定克拉霉素MIC>2μg/ml为耐药菌株.比较城市和农村的差异.挑选克拉霉素耐药Hp1O株,提取细菌DNA,用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)分析探讨克拉霉素耐药机制.结果:重庆地区Hp对克拉霉素的耐药率为29.17%.城市和农村耐药率无统计学差异(P>0.05).10株克拉霉索耐药菌株23S rRNA基因功能区V PCR扩增片段,均被Bsa I酶切,未被Bbs I酶切,提示1O株在2143位点有A→G突变.结论:重庆地区Hp对克拉霉素的耐药率较高,且城市和农村无显著差异.大多数克拉霉素耐药Hp存在23SrRNA基因功能区V 2143位点A→G突变.     

幽门螺杆菌毒力基因与克拉霉素耐药基因突变相关性

目的 分析浙江省台州地区幽门螺杆菌（helicobacter pylori,Hp）cagA和VacA为主的毒力基因型分布,探讨其与克拉霉素耐药基因突变类型的关系。方法 招募存在上消化道症状患者,并行胃镜检查活检患者胃黏膜组织。通过Hp分离培养方法,培养出216株Hp。采用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测并分析cagA和VacA的分型情况。采用PCR扩增和Sanger测序技术检测克拉霉素耐药基因（23S rRNA）2142和2143位碱基点突变情况。结果 CagA基因的阳性检出率为99.54%（215/216）,其中CagA-D为95.83%（207/216）、CagA-C为3.70%（8/216）。VacA基因阳性检出率为97.22%（210/216）,s1、s2、m1、m2亚型分别为97.22%（210/216）、0、35.19%（76/216）、60.65%（131/216）。本研究发现,浙江省台州地区毒力基因以CagA-D和VacAs1 m2型为优势基因型。此外,23S rRNA基因2142和2143位点均未突变的有93株。突变的有123株,其中A2142G位点突变4株、A2143G位点突变119株。毒力基因型与23S rRNA基因2142和2143位点突变类型无相关性（P>0.05）。结论 台州地区为HP高毒力地区,且以CagA-D和VacAs1 m2型为主,其分布与克拉霉素耐药基因突变无密切相关性。     

宁波地区幽门螺杆菌优势基因型及其与耐药性的关系

目的探讨宁波地区幽门螺杆菌（Hp）优势基因型及其与Hp耐药性的关系。方法选取宁波地区慢性胃炎和消化性溃疡患者的胃镜活检标本,对40株临床分离菌株,采用PCR法检测tip的cagA、vacAm1、vacAm2、vacAsla和babA2基因型;采用纸片扩散法作药敏试验。结果40株Up中cagA、vacAml、vacAm2、vacAsla和babA2基因型的阳性率分别为100％、52．5％、85．5％、92、5％和57．5％;慢性胃炎和消化性溃疡患者中分离的Hp基因型的检出率差异均无显著性（P〉0．05）：Hp对甲硝唑的耐药率高于阿奇霉素（P〈0．05）,并显著高于阿莫西林和克拉霉素（P〈0．01）;Hp的甲硝唑耐药株与敏感株之间cagA、vacA和babA2基因型分布差异无显著性（P〉0．05）。结论宁波地区慢性胃炎和消化性溃疡患者中分离的Hp以cagA、vacAm2、vacAsla、babA2、vacAsla／m2基因型为主。Hp基因亚型的确定尚不能对Hp根治疗法中抗生素的选择提供帮助。     

Preparation and identification of the oligonucleotide chip for detecting the virulence-associated genotypes and drug resistance of Helicobacter pylori

OBJECTIVE: To develop an oligonucleotide microarray-based method for the simultaneous detection of Helicobacter pylori (Hp) infection, virulence-associated genotypes, and drug resistance. METHODS: Hp was classified into cagA + and cagA- genotypes based on its virulence. Clarithromycin-resistance of Hp was identified by existence of point mutations in 23S rRNA. We constructed an oligonucleotide microarray chip to simultaneously diagnose Hp infection and detect its virulence-associated genotypes and mutations associated with clarithromycin-resistance. The diagnostic accuracy of the constructed microarry was tested with templates of wild type and mutated type. RESULTS: The oligonucleotide chip accurately detected cagA + and cagA- genotypes of Hp, as well as four common point mutations in 23S rRNA related to clarithromycin-resistance. CONCLUSION: Oligonucleotide microarry chip can be used to diagnose Hp infection and test its virulence-associated genotypes and drug resistance simultaneously.     

多重PCR检测唾液标本中的幽门螺杆菌16S rRNA及cagA基因

目的 检测唾液标本幽门螺杆菌（Hp）的16S rRNA基因及cagA基因,了解消化道疾病患者口腔中Hp存在情况及致病情况。方法 利用生物学信息技术,设计Hp 16S rRNA、cagA基因特异性引物,建立检测Hp 16S rRNA、cagA基因的多重PCR方法;重组克隆质粒构建标准阳性对照品;收集156例消化道疾病患者的唾液标本,提取唾液标本中细菌DNA,应用建立的多重PCR方法,检测Hp 16S rRNA基因及cagA基因,并对结果进行分析。结果 建立的检测Hp 16S rRNA基因及cagA基因的多重PCR方法特异性强,灵敏性较高,最低检测线为103 copies· μL-1;重组质粒pGMT-16s和pGMT-cagA,可作为鉴定Hp的标准阳性对照品;检测Hp感染的消化道疾病患者的唾液标本,口腔携带Hp 16S rRNA基因的阳性率为87.2%,cagA基因阳性率为23.1%。结论 Hp感染的消化道疾病患者口腔唾液标本中存在Hp,口腔中存在Hp可能是诱发消化道Hp感染及治疗后复发的一个重要原因。     

RTQ-PCR检测肺炎支原体2063位点及其突变基因的应用

目的建立一种快速诊断肺炎支原体(MP)感染及其耐药表型的新方法。方法采用实时荧光定量PCR(RTQ-PCR)技术,以23S rRNA为靶序列,设计药物敏感2063A质粒和耐药2063G质粒的基因型探针及引物,构建药物敏感2063A质粒和耐药2063G质粒的RTQ-PCR定量标准曲线,并对他们进行相关性分析;对100份临床咽拭子标本进行2063A质粒和耐药2063G质粒RTQ-PCR检测,分析其检测结果。结果 RTQ-PCR检测药物敏感2063A质粒和耐药2063G质粒与23S rRNA巢式PCR检测序列结果比较,RTQ-PCR鉴定100株MP临床分离株2063位点等位基因的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值均为100%。100份临床咽拭子标本MP阳性检测率为83%(83例),耐药2063G质粒33%(33例),8%(8例)同时发现药物敏感2063A质粒和耐药2063G质粒。结论本研究初步建立了一种快速诊断MP感染和其耐药基因型的RTQ-PCR方法,具有较高的灵敏度与特异性,可以在临床上推广。     

抗体分型检测对幽门螺杆菌感染的诊断价值

目的 探讨幽门螺杆菌（Hp）抗体分型检测在诊断Hp 感染中的价值。方法 选取2010 年 7 ～ 12 月在山东大学附属济南市中心医院进行抗体分型受试者462 例,根据抗体分型分为Ⅰ型202 例（Ⅰ型组） 和Ⅱ型（Ⅱ型组）104 例和对照组156 例。记录各组是否患有Hp 感染相关性疾病,抗体检测前后1 周行尿素 呼气试验（UBT）。结果 共462 例受试者进行抗体分型检测,Hp 总感染率为66.2%。Ⅰ型、Ⅱ型感染率分 别为43.7% 和22.5%,最常见抗体分型为CagA、VacA、UreA 及UreB 均为阳性;年龄、Hp 相关性疾病、阑 尾炎及饮酒为Hp 感染的独立危险因素（P <0.05）。I 型感染患者中UBT 阳性率高于Ⅱ型（P <0.05）;Hp 抗 体分型与UBT 总一致率为84.53%,阳性、阴性符合率分别为80.55% 和86.88%。结论 该地区Hp 感染率偏高, 高龄、Hp 相关性疾病、阑尾炎及饮酒为Hp 感染高危因素。UBT 与抗体分型联合有助于诊断Hp 感染并分型, 进一步提高临床诊断Hp 的水平。     

慢性胃炎和消化性溃疡中幽门螺杆菌babA2和cagA及vacA基因型分析

目的 :研究慢性胃炎和消化性溃疡中幽门螺杆菌 (Hp) bab A2、cag A、vac A基因型的分布 ,探讨 Hpbab A2、cag A、vac A基因型与慢性胃炎和消化性溃疡的关系。方法 :用聚合酶链反应测定 5 8株从浙江省慢性胃炎和消化性溃疡患者中分离的 Hp bab A2基因、cag A基因和 vac A基因亚型。结果 :5 8株 Hp中 bab A2、cag A、vac A s1a、vac A m1、vac A m2基因的阳性率分别为 87.9%、10 0 %、93.1%、1.7%、65 .5 %。慢性胃炎和消化性溃疡患者感染的Hp bab A2、vac A s1a、vac A m2基因阳性率差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 :从浙江地区慢性胃炎和消化性溃疡患者中分离的 Hp bab A2、cag A、vac A基因型均以 bab A2阳性、cag A阳性和 vac A s1a/ m2型为主 ,未发现 Hp bab A2、cag A和 vac A基因型与慢性胃炎和消化性溃疡的关系。     

肺炎支原体耐药性及分子流行病学研究进展

肺炎支原体是临床上非典型性肺炎常见的致病菌,主要采用大环内酯类抗菌药物治疗。近年来,肺炎支原体对大环内酯类耐药性日趋严重,且全世界各地耐药率存在差异,目前认为其耐药机制主要与23S rRNA V区基因位点突变（2 063位和2 064位）相关。根据肺炎支原体菌株P1基因序列的不同,应用聚合酶链式反应-限制片段长度多态性分析（PCR-RFLP）可分为Ⅰ型和Ⅱ型,其流行基因型随地区和时间的不同而不同。另外,为了解肺炎支原体耐药菌株之间是否存在克隆传播,可采用多位点可变数量串联重复序列分析（MLVA）方法分析肺炎支原体克隆型。加强肺炎支原体的耐药性及流行基因型的监测,有助于了解肺炎支原体的流行病学特点,为新型抗菌药物及疫苗的研发提供依据。     

幽门螺杆菌致病岛与临床胃肠疾患的相关性研究

目的探讨幽门螺杆菌致病岛中cagA、cagM、cagT、ORF13、ORF10各基因的分布情况以及与临床胃肠疾患的相关性。方法取306例患者的胃黏膜病变组织,确定幽门螺杆菌（Hp）感染后用PCR方法对各基因进行检测。结果Hp感染的胃部疾病中,各基因的存在差异无显著性（P〉0.05）。72.97%的菌株有完整的cagPAI,27.0%菌株部分缺失cagPAI。cagPAI完整性在各胃及十二指肠疾病中的分布差异无显著性（P〉0.05）。部分缺失cagPAI在各胃及十二指肠疾病中的分布差异无显著性（P〉0.05）。结论cagPAI的存在与Hp感染有关,但是与临床感染疾病类型无关;cagA可以作为cagPAI存在的指标,但不能预测Hp感染的胃及十二指肠疾病类型。     

慢性胃炎、消化性溃疡患者携带株幽门螺杆菌基因分型

目的:探讨慢性胃炎、消化性溃疡患者携带株幽门螺杆菌(Hp)的基因分型方法.方法:对Hp标准株和慢性胃炎、消化性溃疡、非胃炎非溃疡患者携带株基因组DNA进行随机扩增多态性分析(RAPD),PCR扩增空泡毒素基因(vacA)和致病岛基因(cag-PAI)的cagA、cagE、cagT片段,并测定全部菌株的VacA活性.采用聚类分析进行基因分型.结果:单纯RAPD分型结果显示不同基因型别Hp与不同疾病结局无关(P=0.068 5).依据vacA cag-PAI分型结果显示不同基因型别Hp与不同疾病结局无关(P=0.268 5).将RAPD分析结果与vacA cagPAI检测结果进行综合聚类,全部菌株可分为3个型别,慢性胃炎、消化性溃疡和非胃炎非溃疡分别有自己的优势基因型,且各型间的总体分布差异有统计学意义(P=0.006 7).VacA的活性表达情况在各基因型之间的分布差异无统计学意义(P=0.265 5).结论:Hp基因型与疾病类型有关,空泡毒素基因和致病岛基因可作为Hp基因分型的靶基因,RAPD是有效的基因分型手段.