急性高眼压对视网膜神经节细胞凋亡的影响及药物保护作用

<正> 青光眼是眼科常见致盲眼病,其病理改变特征是视网膜神经节细胞的损害,但损害机制了解甚少。本文通过制备高眼压动物模型,探索高眼压对视网膜神经节细胞凋亡的影响及药物对视网膜神经节细胞的保护作用。 选用新西兰白兔45只,雌雄兼用,体重2.0～2.5kg,随机分为药物实验组(简称实验组)和实验对照组,每组21只,     

藏红花提取液对兔慢性高眼压视网膜神经节细胞损伤的保护作用研究

目的:探讨藏红花提取液对兔慢性高眼压视网膜神经节细胞损伤的保护作用。方法:将新西兰白兔随机分为对照组、高眼压组、治疗Ⅰ组和Ⅱ组,每组5只。高眼压组和治疗Ⅰ、Ⅱ组的兔眼前房注入3 g/L复方卡波姆溶液制作慢性高眼压模型,对照组仅作前房穿刺。治疗Ⅰ、Ⅱ组动物每日耳缘分别静注藏红花提取液20、80 mg/kg;高眼压组和对照组各注射2 ml 0.9%氯化钠溶液,连续28 d。然后所有动物经心脏灌流固定,取球后视神经和视网膜,视神经包埋后作超薄切片,电镜下观察节细胞轴突;视网膜视神经作冰冻切片,进行HE染色、TUNEL染色及免疫组化检测。结果:高眼压组视网膜各层细胞排列紊乱,节细胞数目减少,神经纤维层明显变薄,轴突数目显著减少;治疗组明显改善,而治疗Ⅱ组视网膜形态结构接近对照组,各层结构层次清楚,细胞排列整齐,细胞数量基本正常。高眼压组视网膜中的凋亡节细胞及Caspase 3阳性细胞数量最多,注射藏红花提取液后凋亡的节细胞及Caspase 3阳性细胞数目明显减少,在治疗Ⅱ组仅见个别凋亡的节细胞及偶见Caspase 3阳性细胞。结论:慢性高眼压可导致兔眼视网膜神经节细胞及轴突结构损害、视网膜节细...     

雷公藤甲素对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的 观察雷公藤甲素对急性高眼压大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)的保护作用.方法 选取60只Wister大鼠,雌雄各半,采用随机数字表法将其分为对照组、模型组、雷公藤甲素组,每组20只.模型组、雷公藤甲素组通过前房灌注加压法建模,建模成功后,雷公藤甲素组每日腹腔注射雷公藤甲素10μg/kg,对照组、模型组每日腹腔注射等...     

bFGF对高眼压下兔视网膜神经节细胞的保护作用

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)对高眼压下兔视网膜神经节细胞的保护作用。方法：每周1次前房注入甲基纤维素制成慢性高眼压动物模型，随机将动物分为高眼压对照组、外科对照组和bFGF治疗组，另加1组正常对照组。治疗组每周1次玻璃体内注射bFGF，高眼压对照组不作任何处理，外科对照组仅于玻璃体内注入与治疗组等量的磷酸缓冲生理盐水(plosphate buffered saline，PBS)，实验持续4wk。每周测定各组动物的图像视网膜电图(pattern electroretinogram，PERG)，观察各组动物b波变化趋势，最后光镜、电镜观察动物视网膜神经节细胞的超微结构变化。结果：治疗组PERGb波振幅仅见轻微下降趋势，与正常组接近，两对照组则下降趋势显著，结果经方差分析有统计学意义；形态学上可见治疗组节细胞超微结构变化轻微，对照组则变化明显。结论：bFGF作为一种神经营养因子，对高眼压下兔视网膜神经节细胞具有保护作用。     

bFGF在持续高眼压下对兔视网膜神经节细胞的保护作用

目的  研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在持续高眼压下对兔视网膜神经节细胞的保护作用。方法  健康新西兰大白兔27只,其中24只（48眼）卡波姆注入前房法制成持续高眼压动物模型,随机分为2组,每只兔一眼为高眼压组(各24眼),另一眼为bFGF实验组（各24眼）;另3只（6眼）为正常组。bFGF实验组在建模过程中及成功后1、2、3周玻璃体腔内注射bFGF各1次,正常组在相应的时间仅玻璃体腔内注入与bFGF实验组等体积的磷酸缓冲生理盐水(PBS)。术后每日固定时间测量眼压,将眼压维持在30mmHg以上。分别于建模后1、2、3、4周随机处死6只兔子。完整摘除眼球行常规HE染色观察视网膜神经节细胞形态变化并计数存活细胞数目,免疫组织化学染色检测视网膜神经节细胞Bcl-2凋亡基因的表达。建模后4周行电镜观察视网膜神经节细胞超微结构的变化。结果  光镜：建模后两组神经节细胞数目均较正常组减少,自2周后高眼压组与bFGF实验组比较差异有统计学意义（P<0.05）。免疫组织化学：比较视网膜神经节细胞抗凋亡蛋白（RGCsBcl-2）基因蛋白表达的阳性目标面积构成比,第3周时bFGF实验组Bcl-2基因蛋白仍保持较高水平的表达,两组比较差异有统计学意义（P<0.01）。电镜：术后4周bFGF实验组改变明显轻于高眼压组,细胞器较对照组丰富,部分线粒体仍可见完整嵴。结论  bFGF作为一种神经营养因子,对高眼压下兔视网膜神经节细胞具有保护作用。     

黄芪对高眼压大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的探讨黄芪对高眼压大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的保护作用及眼压对其保护作用的影响。方法采用烙闭大鼠双眼上巩膜静法制备高眼压大鼠模型,将SD大鼠造模后随机分为假手术组、模型组、黄芪组、点药组、联合组。造模后4周开始干预,假手术组、模型组给予生理盐水灌胃,其他组分别给予黄芪(20 g/kg)灌服、降眼压药(贝美前列素)点眼及2种措施同时干预;干预4周后,采用激光共聚焦显微镜定量分析不同组大鼠的RGC数目及凋亡率的差异。结果假手术组RGC数目明显高于其他各组(P0.01),RGC凋亡率明显低于其他各组(P0.01);模型组恰好与假手术组相反;点药组较黄芪组RGC数目多而凋亡率低,但均无显著性差异(P0.05);联合组RGC数目明显高于点药组和黄芪组(P0.05)而凋亡率明显低于此2组(P0.05)。结论黄芪可通过抑制高眼压大鼠RGC凋亡发挥神经保护作用,与降眼压药物联合应用可提高其保护作用。     

灯盏细辛对兔高眼压视网膜神经节细胞及视神经损伤的保护作用

目的观察灯盏细辛对慢性高眼压兔视网膜神经节细胞(RGCs)及视神经损伤的保护作用。方法20只兔制成慢性高眼压模型后随机分成灯盏细辛治疗组(高眼压加灯盏细辛治疗亚组和正常眼压加灯盏细辛治疗亚组)和未治疗组(单纯高眼压亚组和单纯正常眼压亚组),治疗组于高眼压持续7 d后行灯盏细辛灌胃。60 d后取眼球和视神经标本做光镜及电镜检查,观察RGCs密度、视网膜神经纤维层(RNFL)厚度和视神经轴突,并采用计算机图像分析系统定量分析。电镜观察RGCs和视神经轴突超微结构改变。结果①高眼压两亚组与正常眼压两亚组比较,RNFL厚度、RGCs密度减小,轴突数量减少(P<0.05);高眼压加灯盏细辛治疗亚组与单纯高眼压亚组比较,RNFL厚度和RGCs密度大,轴突数量多。②高眼压两亚组胞浆内细胞器数量减少,线粒体空泡变性,轴突排列紊乱,髓鞘变性;但高眼压加灯盏细辛治疗亚组仍有散在细胞器,髓鞘相对不规则,轴突内微管和微丝肿胀,但不消失。结论灯盏细辛对高眼压后RGCs和视神经变性有一定的保护作用。     

灯盏细辛对兔高眼压视网膜神经节细胞及视神经损伤的保护作用

目的 观察灯盏细辛对慢性高眼压兔视网膜神经节细胞(RGCs)及视神经损伤的保护作用.方法 20只兔制成慢性高眼压模型后随机分成灯盏细辛治疗组(高眼压加灯盏细辛治疗亚组和正常眼压加灯盏细辛治疗亚组)和未治疗组(单纯高眼压亚组和单纯正常眼压亚组),治疗组于高眼压持续7 d后行灯盏细辛灌胃.60 d后取眼球和视神经标本做光镜及电镜检查,观察RGCs密度、视网膜神经纤维层(RNFL)厚度和视神经轴突,并采用计算机图像分析系统定量分析.电镜观察RGCs和视神经轴突超微结构改变.结果 ①高眼压两亚组与正常眼压两亚组比较,RNFL厚度、RGCs密度减小,轴突数量减少(P＜0.05);高眼压加灯盏细辛治疗亚组与单纯高眼压亚组比较,RNFL厚度和RGCs密度大,轴突数量多.②高眼压两亚组胞浆内细胞器数量减少,线粒体空泡变性,轴突排列紊乱,髓鞘变性;但高眼压加灯盏细辛治疗亚组仍有散在细胞器,髓鞘相对不规则,轴突内微管和微丝肿胀,但不消失.结论 灯盏细辛对高眼压后RGCs和视神经变性有一定的保护作用.     

尼莫地平眼膏对兔慢性高眼压致视网膜内核层及神经节细胞凋亡干预作用

目的探讨自行研制的质量分数0.03尼莫地平(NMD)眼膏对兔慢性高眼压下视网膜内核层及神经节细胞(RGCs)凋亡的干预作用。方法健康新西兰大白兔48只,随机分为正常对照组(n=16)和慢性高眼压模型组(n=32)。将质量分数0.03的NMD眼膏局部应用于慢性高眼压模型组兔右眼(A1组),左眼涂眼膏基质作为模型对照眼(A2组),4周后免疫组化法检测各组内核层及RGCs中Caspase-3的表达。结果 A1组视网膜内核层及RGCs中Caspase-3蛋白表达为(29.45±14.64)/mm2,低于A2组的(42.61±23.97)/mm2,差异有统计学意义(t′=2.095,P0.05)。结论质量分数0.03的NMD眼膏局部应用可下调慢性高眼压时视网膜内核层及RGCs中Caspase-3蛋白的表达。     

球周注射尼莫地平对兔慢性高眼压致 视网膜神经节细胞凋亡的干预作用

目的 观察眼球周注射尼莫地平对慢性高眼压兔网膜视神经节细胞凋亡的干预作用。方法 选用健 康新西兰白兔30 只,随机分为A、B、C、D、E 5 组,每组6 只。A 组为正常组,其余各组均行复方卡波姆复 制慢性高眼压模型,B 组注射生理盐水,C、D、E 组分别球周注射低（0.125 mg）、中（0.250 mg）、高（0.500 mg） 剂量尼莫地平（NMD）注射液。第2 周处死动物取视网膜组织行免疫组化、TUNEL 法检测及HE 形态学观察, 比较各组间的差异。结果 B 淋巴细胞瘤2 基因（Bcl-2）在B、C 组呈低表达,在D、E 两组呈高表达,D、E 两组 均高于B、C 两组,差异有统计学意义（P <0.05）。B 淋巴细胞瘤2 基因相关蛋白X（Bax）在B、C 组呈高表达, 随NMD 剂量增高阳性细胞表达量降低,D、E 组呈低表达,差异有统计学意义（P <0.05）。TUNEL 检测,在 B、C 组呈高表达,在D、E 组呈低表达,差异有统计学意义（P <0.05）。结论 尼莫地平注射液球周注射对兔慢性 高眼压视网膜神经节细胞凋亡有积极的保护作用。     

Rho激酶抑制剂Y-27632对急性高眼压大鼠视网膜损伤的保护作用

 目的探讨Rho 激酶抑制剂Y-27632 对急性高眼压大鼠视网膜损伤的保护作用。方法50 只SD大鼠随机分为正常对
照组（ n=10）、生理盐水对照组（ n=20,玻璃体腔内注射生理盐水）和Y-27632 治疗组（ n=20,玻璃体腔内注射100 nmol
Y-27632）,选取右眼做为实验眼。正常对照组直接处死取材。生理盐水对照组及Y-27632 治疗组分别用前房加压灌注法建立大
鼠急性高眼压损伤模型,并于损伤后24 和168 h取标本。HE 染色观察视网膜组织病理学的改变,测量视网膜厚度;TUNEL 染
色检测细胞凋亡情况,计算凋亡指数;Western blot 检测Caspase-3 蛋白表达的变化。结果急性高眼压损伤24 h后,Y-27632
治疗组视网膜凋亡细胞数量和Caspase-3 蛋白表达水平均低于生理盐水对照组（ P< 0.01）。损伤168 h后Y-27632 治疗组视网
膜厚度大于生理盐水对照组（ P< 0.01）。结论Y-27632 可以减轻大鼠急性高眼压引起的视网膜损伤,具有神经保护作用。     

青光眼视网膜神经节细胞保护性治疗进展

视网膜神经节细胞(RGCs)的过度凋亡是青光眼病理改变的基础,探讨RGCs的保护性治疗,减慢或防止其凋亡,保持其生理功能,已被公认为是防治青光眼视神经损害的研究方向。该文目前青光眼RGCs保护性治疗在补充神经营养因子及平衡营养因子前体、基因治疗、免疫相关治疗、兴奋性氨基酸拮抗剂治疗等方面的最新研究进展予以综述。     

嘌呤受体P2X7激活谷氨酸受体NMDA引起视网膜神经节细胞凋亡

【目的】研究嘌呤受体P2X7和谷氨酸受体NMDA激活诱导大鼠视网膜神经节细胞（RGC）凋亡的相互作用机制。【方法】①对新生Long-Evan大鼠进行上丘注射荧光标记物Aminostilbamidine标记RGC,NMDA受体通道拮抗剂MK-801、APV和Memantine分别与P2X7受体激动剂BzATP共培养,检测它们对体外培养RGC存活率的影响;②未经Aminostilbamidine标记的新生大鼠RGC,以10μmol/L钙离子（Ca^2＋）荧光染料Fura-2标记后,利用Ca^2＋影像测定仪分别测定BzATP及三种NMDA拮抗剂对RGC胞内Ca^2＋浓度的影响。【结果】（1）三种NMDA拮抗剂均分别不同程度阻断BzATP引起的RGC凋亡。BzATP在50μmol/L浓度下,约杀死（36%±2%）的RGC,而MK-801（10μmol/L）、APV（100μmol/L）和Memantine（100μmol/L）则均可明显减轻BzATP对RGC的毒性作用,使RGC存活率分别提高至（96%±4%,P〈0.001）、（80%±5%,P=0.010）和（76%±9%,P=0.144）。（2）BzATP可引起RGC胞内Ca^2＋持续升高,在50μmol/L浓度下可使胞内Ca^2＋升高至（1183±109）nmol/L。而MK-801（10μmol/L）、APV（300μmol/L）和Memantine（30μmol/L）则均可显著降低BzATP介导的Ca^2＋升高幅度,分别为（76%±7%,P=0.003）、（51%±17%,P=0.033）和（55%±16%,P=0.025）。【结论】NMDA受体拮抗剂可阻断嘌呤受体P2X7激活诱导的RGC凋亡。P2X7受体和NMDA受体通道激活可能共同介导着兴奋性神经毒作用且P2X7在NMDA受体的上一环节先起作用。     

BDNF对实验性急性高眼压兔眼视网膜神经节细胞的保护作用

目的探讨脑源性神经营养因子(Brain-Derived Neurotrophic Factor,BDNF)对实验性急性高眼压(Hyper-intraocular Pressure,HIOP)兔眼视网膜神经节细胞(RGCs)的保护作用。方法将16只健康中华大耳白兔随机等分为实验组(BDNF)和空白对照(PBS)组,用前房灌注法建立右眼实验性急性HIOP模型,左眼作为正常对照。于灌注前,在BDNF组和PBS组右眼玻璃体腔内分别注射BDNF 3.75μg或等量0.1 mol/L磷酸缓冲液(PBS),第14d让实验兔安乐致死。实验兔致死前48 h以辣根过氧化物酶(HRP)逆向标记双眼RGCs,视网膜铺片后以3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)法呈色,计数下半视网膜距视盘边缘2 mm、4 mm、6 mm处的RGCs密度。结果距视盘边缘2 mm4、mm、6 mm处,正常对照组的RGCs密度分别为1619±377个/mm2、771±232个/mm2、358±122个/mm2;BDNF组的RGCs密度为1304±246、669±283、283±93个/mm2,距视盘边缘2 mm6、mm处,BDNF组与正常对照组RGCs密度的差异有非常显著性意义(均P<0.01);PBS组的RGCs密度分别为1002±410个/mm2、627±211个/mm2、264±107个/mm2,与正常对照组RGCs密度的差异均有显著性意义(均P<0.05);距视盘边缘2 mm处,BDNF组与PBS组的RGCs密度的差异有显著性意义(P<0.05)。结论BDNF可提高实验性急性高眼压兔眼RGCs的存活率,对RGCs具有保护作用。     

嘌呤受体P2X7激活介导大鼠视网膜神经节细胞死亡的实验研究

 【目的】研究嘌呤受体P2X7激动剂、拮抗剂对大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）的影响。【方法】（1）对新生Long-Evan大鼠进行上丘注射荧光标记物Aminostilbamidine以标记RGCs。检测P2b激动剂BzATP（0、50、100、500μmol／L）和特异性拮抗剂OxATP（100μmol／L）对体外培养RGCs存活率的影响；（2）体外培养未经Aminostilbamidine标记的新生大鼠RGCs，以10μmol／L钙离子（Ca^2＋）荧光染料Fura-2标记后。利用Ca^2＋影像测定仪分别测定P2X7激动剂BzATP（50μmol／L）和拮抗剂OxATP（100μmol／L）对RGCs胞内Ca^2＋浓度的影响。【结果】P2X7受体激动剂BzATP可引起体外培养的RGCs死亡，反应呈剂量依赖性，EC50=35μmol／L。在50μmol／L浓度下，BzATP约杀死30％的RGCs；而100μmol／L OxATP则可明显减轻BzATP对RGCs的毒性作用，使RGCs存活率从77％±4％提高至96％±3％（P〈0．001）。BzATP可引起RGCs胞内Ca^2＋持续升高，在50μmol／L浓度下可使胞内Ca^2＋升高（1022±113）nmol／L。在OxATP作用下，BzATP介导的Ca^2＋升高幅度显著降低，仅升高（63±13）nmol／L（P〈0．001）。【结论】嘌呤能P2X7受体激活可导致大鼠视网膜神经节细胞死亡和胞内钙离子浓度升高。     

大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型中大黄素对神经节细胞的影响

 目的探讨大黄素对视网膜缺血再灌注损伤后视网膜神经节细胞（RGC）密度的影响。方法通过前房灌注法使眼内压升高,建立大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型。将36只SD大鼠随机分为正常对照组、损伤后未注射药物组（IR组）、注射对照液干预组（IR+DMSO组）和注射大黄素干预组（IR+Emodin组）,其中IR组根据损伤后时间不同分为损伤1、2、3周组（IR1w组、IR2w组、IR3w组）,每组6只。IR+DMSO组与IR+Emodin组在缺血再灌注损伤后第3、9、15天玻璃体腔分别注射DMSO和蛋白激酶2（CK2）抑制剂大黄素。3周后采用逆行荧光金染色和免疫组织化学染色方法标记RGC,计数各组RGC密度,行统计学分析。结果IR2w、IR3w组与正常对照组比较,RGC密度明显减少（分别为P<0.01和P<0.001）。IR+DMSO组与IR3w组比较,RGC密度的差异无统计学意义（P>0.05）。IR+Emodin组与IR3w组比较,RGC存活密度明显增多（P<0.001）。结论缺血再灌注损伤后RGC密度随缺血再灌注时间延长而逐渐减少,CK2抑制剂大黄素在视网膜缺血再灌注损伤过程中对RGC有保护作用,提示CK2参与了RGC损伤的过程。     

孔源性视网膜脱离模型视网膜色素上皮细胞CD44的表达变化

目的 研究兔孔源性视网膜脱离模型视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞CD44的表达,及其与孔源性视网膜脱离病理变化的关系.方法 90只健康有色兔随机分为5组建立不同模型:Ⅰ组:孔源性视网膜脱离组,28只眼;Ⅱ组:孔源性视网膜脱离伴玻璃体积血组,27只眼;Ⅲ组:单纯视网膜裂孔组,18只眼;Ⅳ组:玻璃体切除组,17只眼;Ⅴ组:空白对照组,90只眼.分别于手术后不同时间点(1、3,7、14,21、28 d)摘取各组兔眼眼球,用酶消化和机械分离法分离RPE细胞,制成细胞悬液,荧光免疫法标记CD44,用流式细胞仪检测各组RPE细胞膜上CD44的表达水平.结果 Ⅰ组和Ⅱ组模型眼均发生视网膜脱离,Ⅲ组和iv组模型眼未发生视网膜脱离.Ⅰ、Ⅱ组中RPE细胞CD44的表达明显高于Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组,Ⅰ、Ⅱ组RPE细胞CD44表达水平在术后1 d即增高,7 d左右达到高峰,继而下降,Ⅰ、Ⅱ组与V组RPE细胞CD44的表达差异有极显著性意义(均P0.05).结论 孔源性视网膜脱离中RPE细胞CD44表达增强,RPE细胞CD44的表达变化与孔源性视网膜脱离的病理发展关系密切.     

外周神经和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤对成年金黄地鼠视网膜节细胞再生的影响

[目的]探讨玻璃体内插入外周神经和玻璃体内注射3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)对轴突损伤的视网膜节细胞再生的影响.[方法]20只成年金黄地鼠随机分4组,每组5只动物.切断视神经(ON)并缝接坐骨神经(attached graft,AG)为再生对照组;ON切断并缝接坐骨神经后再于玻璃体内注射IBMX和/或插入一小段自体坐骨神经(SN)为实验组.采用逆行示踪标记术,观察视网膜平铺片节细胞数.[结果]①对照组(AG)每个视网膜再生的节细胞数为(1 428±284)个/reti-na;②外周神经组(AG+SN)为(2 220±415)个/retina;③IBMX组(AG+IBMX)为(2 424±1 026)个/retina;④外周神经和IB-MX联合组(AG+IBMX+SN)为(3 065±654)个/retina;其中,AG+SN组同AG组相比存在显著性差异(P<0.01);AG+IBMX+SN组同AG、AG+IBMX和AG+SN组相比均有显著性差异(P<0.01).[结论]研究结果提示联合应用外周神经和IBMX可大幅提高受损视网膜节细胞的再生.     

IBMX对成年金黄地鼠视网膜节细胞存活的影响

【目的】探讨玻璃体内注射 3 异丁基 1 甲基黄嘌呤 (IBMX)对切断视神经后视网膜节细胞存活的影响。【方法】用荧光素逆行示踪标记法和定量解剖学技术观察各组成年金黄地鼠于视神经切断 5、7、14d后视网膜节细胞的密度。【结果】①正常视网膜节细胞平均密度为 (2 0 0 7± 115 ) /mm2 ;②视神经切断 5、7、14d后 ,视网膜节细胞平均密度分别下降至 :(10 10± 131) /mm2 ,(782± 5 5 ) /mm2 和 (2 14± 30 ) /mm2 ;③给予DMSO/生理盐水的对照组在上述各时间段视网膜节细胞平均密度与单纯视神经切断组结果相似 ;④给予IBMX的实验组在 5、7、14d视网膜节细胞的平均密度分别为 (140 2± 6 9) /mm2 、(1182± 194) /mm2 和 (483± 17) /mm2 ,与视神经切断组和DMSO/生理盐水对照组相比在各时间段上均存在显著性差异 (P<0 0 5 )。【结论】IBMX可提高视神经切断后成年金黄地鼠视网膜节细胞的存活 ,IBMX可能通过提高胞内的cAMP水平而促进视神经切断后视网膜节细胞的存活。