三七总皂苷对缺氧复氧致皮质神经元损伤细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响*

【目的】研究三七总皂苷（PNS）对缺氧复氧致皮质神经元损伤细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响,探讨PNS抗神经元缺氧,复氧诱导的细胞凋亡的作用。【方法】体外原代培养大鼠胎鼠大脑皮质神经元细胞（CNC）,采用缺氧／复氧（H／R）诱导皮质神经元细胞氧化应激损伤模型,采用PNS50、10、2mg／L进行干预。采用实时荧光定量逆转录酶-聚合酶链式反应（RT—PCR）技术检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤-2相关蛋白（Bax）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）mRNA表达的变化,采用福林-酚法（Lowrry）法检测caspase-3蛋白含量的变化。探讨PNS抑制神经元细胞凋亡的分子机制。【结果】PNS50、10mg／L剂量组可以显著降低Bax表达;PNS50mg／L组可以显著增加Bcl—2表达;PNS有降低caspase-3表达的趋势。PNS各剂量组均能够抑制cas—pase-3的活性,有剂量依赖性趋势。【结论】PNS可能是通过增加抑制凋亡基因Bcl-2的表达,抑制促凋亡基因Bax的表达,抑制caspase-3的活性等作用抑制神经元缺氧／复氧诱导的细胞凋亡。     

三七总皂苷对肺纤维化小鼠细胞凋亡及Bax/Bcl-2表达的影响

目的研究三七总皂苷(PNS)对小鼠肺纤维化肺组织细胞凋亡及凋亡调控因子Bax/Bcl-2的影响。方法将90只C57BL/6雄性小鼠分为假手术组、模型组和PNS组,每组30只。除假手术组外其余各组小鼠气管内一次性滴入盐酸博莱霉素(BLM),假手术组小鼠气管内一次性滴入等体积的生理盐水。各组动物于7、14、28d随机处死10只,取肺组织,检测肺组织细胞凋亡及Bax/Bcl-2的蛋白及基因表达水平。结果与相同时间点模型组相比,肺组织气道上皮细胞的凋亡明显减轻(P<0.01),Bax蛋白、Bcl-2蛋白、Bax mRNA及Bcl-2mRNA的表达明显降低(P<0.01或P<0.05)。结论肺纤维化时肺实质细胞凋亡增多,PNS通过调节Bax/Bcl-2的表达来抑制肺组织气道上皮的凋亡可能是其防治肺纤维化的作用机制之一。     

三七皂苷对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的：研究三七皂苷（PNS）对脑缺血再灌注后大鼠脑海马和皮质形态学变化、Bcl-2、Bax蛋白表达及神经细胞凋亡的影响。方法：采用线栓改良法复制大鼠左侧大脑中动脉闭塞（MCAO）建立局灶性脑缺血再灌注损伤模型,缺血2小时,再灌注24小时。将50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、三七皂苷组、尼莫地平组和三七皂苷加尼莫地平组（联合用药组）,每组10只。分别采用HE染色检测大鼠脑组织皮质和海马区病理改变,TUNEL法检测各组脑内皮质和海马区细胞凋亡变化,免疫组化染色观察各组大鼠脑内皮质和海马区Bcl-2、Bax蛋白表达。结果：与模型组相比,三七皂苷组、尼莫地平组、联合用药组大鼠光镜下细胞损伤变性程度轻;细胞凋亡率下降（P均〈0．01）,三七皂苷组与尼莫地平组相比,细胞凋亡率无显著性差异（P〉0．05）,与联合用药组相比,有显著性差异（P〈0．01）;与模型组相比,三七皂苷组、尼莫地平组、联合用药组大鼠缺血区皮质和海马Bcl-2阳性细胞数均明显上升（P均〈0．01）,Bax阳性细胞数的表达在相同时间点减少（P均〈0.01）。结论：三七皂苷可抑制大鼠神经细胞凋亡,对大鼠脑缺血再灌注损伤有一定保护作用,其机制可能与Bcl-2表达增高,Bax表达降低有关。     

三七总皂苷诱导U937细胞凋亡及对Caspase-3表达的影响

目的观察三七总皂苷（PNS）对人急性单核细胞白血病细胞系U937细胞的增殖、凋亡及Caspase-3表达的影响。方法用不同浓度PNS作用于U937细胞,采用MTT法检测细胞增殖活性,用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western-blot法检测Caspase-3蛋白表达。结果 PNS抑制U943细胞生长并呈时间和剂量依赖性;分别予100、200、400、800mg/L处理U937细胞48h,细胞凋亡率分别为（5.93±0.15）%、（7.43±0.70）%、（12.3±0.38）%和（20.4±0.91）%,对照组细胞凋亡率为（1.73±1.50）%（P〈0.01）,并诱导细胞G1期阻滞;Western-blot结果显示,PNS使Caspase-3蛋白表达上调。结论 PNS能抑制U937细胞增殖,并可能通过上调Caspase-3蛋白表达诱导细胞凋亡。     

三七总皂苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的 探究三七总皂苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响.方法 三七总皂苷作用于人乳腺癌MDA-MB-231细胞作为处理组,同时设置空白对照组;MTT法检测细胞活性变化,光镜观察检测细胞形态学变化,凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况,casepase 3试剂盒检测casepase 3的酶活性情况.结果 与空白对照组相比...     

铜诱导神经元凋亡及凋亡相关蛋白的表达

目的 观察铜对原代培养神经元的凋亡以及Bax、Bcl-2、caspase-3表达的影响,探讨铜沉积对肝豆状核变性神经系统的损伤机制.方法 以不同浓度醋酸铜(0、2、20、40、80、160、240、320 μmol/L)诱导体外培养大鼠神经元48 h.MTT比色法检测细胞活力,Hoechst 33342/PI和Annexin-V/PI法检测神经元凋亡;Western blotting测定细胞Bcl-2、Bax、caspase-3表达.结果 神经元细胞活力随醋酸铜浓度的升高而显著降低.醋酸铜低浓度诱导组(0～80 μmol/L),神经元凋亡数随铜浓度的增加而增多(P＜0.01);caspase-3表达上调,Bcl-2表达下调,Bcl-2/Bax比值下降(P＜0.01).醋酸铜高浓度诱导组(≥160μmol/L),神经元坏死较凋亡更为明显.结论 Bax、Bcl-2、caspase-3在低浓度铜诱导神经元凋亡过程中发挥重要的调控作用.神经元凋亡或死亡导致神经元减少可能与肝豆状核变性神经系统症状有关.     

铜诱导神经元凋亡及凋亡相关蛋白的表达

目的观察铜对原代培养神经元的凋亡以及Bax、Bcl-2、caspase-3表达的影响,探讨铜沉积对肝豆状核变性神经系统的损伤机制。方法以不同浓度醋酸铜(0、2、20、40、80、160、240、320μmol/L)诱导体外培养大鼠神经元48 h。MTT比色法检测细胞活力,Hoechst 33342/PI和Annexin-V/PI法检测神经元凋亡;Western blotting测定细胞Bcl-2、Bax、caspase-3表达。结果神经元细胞活力随醋酸铜浓度的升高而显著降低。醋酸铜低浓度诱导组(0~80μmol/L),神经元凋亡数随铜浓度的增加而增多(P<0.01);caspase-3表达上调,Bcl-2表达下调,Bcl-2/Bax比值下降(P<0.01)。醋酸铜高浓度诱导组(≥160μmol/L),神经元坏死较凋亡更为明显。结论Bax、Bcl-2、caspase-3在低浓度铜诱导神经元凋亡过程中发挥重要的调控作用。神经元凋亡或死亡导致神经元减少可能与肝豆状核变性神经系统症状有关。     

苦瓜核糖体失活蛋白诱导HL-60细胞发生凋亡及其分子机制的研究

目的　探讨苦瓜核糖体失活蛋白 (Ribosomalinactivatingprotein ,RIP)诱导HL 60细胞凋亡的活性 ,以及对HL 60细胞Bcl 2、Bax、caspase 3表达变化的影响及其分子机制。方法　以一定浓度苦瓜RIP处理HL 60细胞 2 4～ 72h ,用TUNEL法检测细胞凋亡。运用RT PCR和Westernblot免疫印记法检测Bcl 2、Bax、caspase 3mRNA和蛋白表达的变化。结果　苦瓜RIP在一定作用浓度下可使HL 60细胞发生凋亡 ,且随着作用时间的延长凋亡细胞比例逐渐升高。在此过程中 ,HL 60细胞的caspase 3mRNA的表达及其胞内活性亚单位水平显著升高 (P <0 .0 5 ) ,Bcl 2mRNA表达变化虽不显著 ,但其蛋白水平明显降低 (P <0 .0 5 ) ,与此同时 ,BaxmRNA和蛋白表达均有所上调。结论　在苦瓜RIP诱导的HL 60细胞凋亡中 ,caspase 3发挥了极为重要的作用 ,而Bcl 2和Bax可能通过其表达量的变化、转录后调节等方式对细胞凋亡发挥重要的调控功能     

三七总皂苷对氧糖剥夺的皮质神经元损伤的保护作用

目的：研究三七总皂苷（PNS）对氧糖剥夺的皮质神经元损伤的保护作用。方法：采用原代培养的大鼠大脑皮层神经细胞,经不同浓度的PNS预处理后,建立氧糖剥夺（OGD）模型,2小时后复氧复糖,模拟再灌注模型。通过MTT比较神经元的存活情况,并测定超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的活性变化,以及Bcl-2蛋白表达的变化。结果：OGD作用120分钟后细胞活性明显下降,细胞内SOD活性下降,MDA含量升高。PNS 25、50mg/L能明显提高细胞的存活率,SOD活性回升,MDA含量趋向正常,Bcl-2蛋白含量增加。结论：PNS对缺氧缺糖条件下的大鼠皮层神经细胞有保护作用,其保护作用可能与其抑制神经细胞脂质过氧化反应、提高Bcl-2蛋白表达有关。     

硫氧还蛋白对缺氧／复氧海马神经元生长与凋亡的影响

目的 :探讨硫氧还蛋白 (Thioredoxin ,Trx)在大鼠海马神经元缺氧 /复氧损伤中对神经元生长与凋亡的作用。方法 :①海马神经元培养和缺氧实验。取当天出生的SD大鼠 ,在无菌条件下断头取脑 ,分离双侧海马 ,参照文献进行鼠海马神经元的培养 ;取培养 10d的海马神经元 ,参照文献进行缺氧实验 ,在缺氧条件下继续培养 3h ,部分细胞在缺氧 3h后迅速更换新鲜培养液 ,在正常供氧环境下分别继续培养 12h、2 4h或 48h ,同时设置未缺氧的正常海马神经细胞作为对照。②Trx干预。取培养 10天的海马神经元 ,加入 2 0 μg/ml的Trx ,作用 1h后如上操作开始诱导缺氧 /复氧 ,如上设定时点终止培养。③细胞活力测定和caspase -3活性测定。采用MTT法测定细胞活力 ,caspase-3活性按照说明书进行操作。实验数据以 x±s表示 ,用ANOVA进行分析处理。 结果 :与正常对照组相比 ,缺氧 /复氧组2 4/4 8h时点细胞存活率显著降低 (P <0 .0 0 1) ,Trx处理组的细胞活力也进行性下降 ,但与缺氧 /复氧组相比 ,2 4/4 8h时点细胞存活率明显提高 (P <0 .0 5 ) ;但与正常对照组相比 ,Trx处理组的细胞活力仍降低 (P <0 .0 5 ) ;在缺氧 /复氧组在复氧 12～ 48h ,caspase -3样蛋白酶活性明显增高 ,以复氧 2 4h为最高 (P <0 .0 0 1) ,在Trx处理组 ,神     

葛根素对兔肺缺血再灌注损伤时Bcl-2、Bax及caspase-3的影响

目的:探讨葛根素对兔肺缺血再灌注后肺组织Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表达的影响及意义.方法:健康日本大耳白兔30只,随机分为对照组(C组)、肺缺血再灌注组(IR组)及葛根素组(Pur组),复制单侧肺缺血再灌注损伤模型.对比观察各组血清超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量、肺湿干重比(W/D)、肺泡损伤数(IQA)及肺组织细胞凋亡指数(AI),免疫组化技术检测肺组织Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白的表达.结果:与C组比,IR组的SOD活力降低(P＜0.01),而MDA、W/D、IQA、AI值及Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表达均上调(均P＜0.01).Pur组与IR组相比,MDA、W/D、IQA、AI值及Bax、caspase-3蛋白表达明显下降(P＜0.05或P＜0.01);SOD、Bcl-2蛋白及Bcl-2/Bax则显著升高(均P＜0.01).结论:葛根素可上调肺组织Bcl-2蛋白,下调Bax和caspase-3蛋白表达,从而抑制肺再灌注后肺组织细胞的异常凋亡,减轻肺缺血再灌注损伤.     

益气养阴方对Graves病合并白细胞减少小鼠骨髓Bax、Bcl-2 mRNA影响的实验研究

目的观察Graves病(GD)小鼠外周血白细胞计数和小鼠骨髓Bax、Bcl-2 mRNA的表达及益气养阴方对其的影响。方法基因枪造模建立GD小鼠模型,应用中药益气养阴方治疗30天后,检测各组小鼠外周血白细胞计数、甲状腺激素水平和小鼠骨髓Bax、Bcl-2 mRNA的表达的变化。结果模型组小鼠外周血白细胞计数、甲状腺激素水平和小鼠骨髓Bax、Bcl-2 mRNA的表达与正常组均有显著性差异(P0.01)。中药益气养阴方可明显增加外周血白细胞数量(均P0.05),其中中药大剂量组明显优于中药小、中剂量组(均P0.01);在降低小鼠骨髓Bax mRNA的表达和升高小鼠骨髓Bcl-2 mRNA的表达方面,与模型组比较均有显著差异(P0.05,P0.01),其中中药大、中剂量组明显优于小剂量组(P0.01,P0.05)。结论益气养阴方对Graves病合并白细胞减少有较好的治疗作用。     

常山酮对人急性单核细胞白血病细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响

目的：研究常山酮对人急性单核细胞白血病（THP-1）细胞增殖、凋亡及Bax、Bcl-2 mRNA表达的影响.方法：取对数生长期的THP-1细胞,分别加入不同浓度的常山酮,CCK-8法检测THP-1增殖率;流式细胞术检测THP-1凋亡情况;实时定量PCR检测Bax及Bcl-2 mRNA的表达情况.结果：常山酮能抑制THP-1细胞增殖、诱导其凋亡,呈剂量依赖关系.常山酮作用后,THP-1细胞内Bax mRNA表达显著升高,而Bcl-2 mRNA表达显著下降.结论：常山酮能抑制THP-1细胞增殖、诱导其凋亡,其作用机制可能与上调Bax mRNA表达、下调Bcl-2 mRNA表达相关.     

缺氧刺激对人骨髓间充质干细胞凋亡基因Bcl-2和Bax的影响

目的探讨缺氧刺激对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)凋亡基因Bcl-2和Bax的影响。方法本研究将hBMSCs按不同氧浓度分为对照组(20%O_2)和低氧组(2%O_2),检测不同作用时间缺氧对hBMSCs抑凋亡基因(Bcl-2)和促凋亡基因(Bax)蛋白表达的影响。结果与对照组比较,低氧组各时间点hBMSCsBcl-2蛋白表达有明显的下调,hBMSCs Bax蛋白表达有明显的上调,差异有统计学意义(P<0.05)。且12 h时变化最明显,总体上呈现出时间依赖性特点。结论缺氧培养对hBMSCs的Bcl-2有明显的抑制作用,对hBMSCs的Bax有明显的促进作用,促使骨改建平衡向破骨方向倾斜。     

乌司他丁对出血坏死性胰腺炎兔心肌细胞凋亡和Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的探讨乌司他丁对出血坏死性胰腺炎兔心肌细胞凋亡和Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法 24只新西兰大白兔分为对照组、1万U.kg-1乌司他丁组、2万U.kg-1乌司他丁组,每组8只。逆行胰管注射质量分数为5%牛磺胆酸钠溶液制作急性出血坏死性胰腺炎(ANP)模型。所有兔于模型制备成功结束后稳定30 min,阻断左冠状动脉前降支60 min,再灌注180 min。在阻断左冠状动脉前降支近端前对照组经静脉注射生理盐水2 mL.kg-1,1万U.kg-1乌司他丁组经静脉注射乌司他丁1万U.kg-1;2万U.kg-1乌司他丁组经静脉注射乌司他丁2万U.kg-1。于灌注结束后立即将兔处死,末端脱核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记技术观察兔缺血再灌注心肌细胞凋亡的变化,免疫组织化学法检测凋亡相关调控基因Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 1万U.kg-1乌司他丁组、2万U.kg-1乌司他丁组心肌细胞凋亡率均低于对照组(P<0.05),2万U.kg-1乌司他丁组心肌细胞凋亡率低于1万U.kg-1乌司他丁组(P<0.05)。1万U.kg-1乌司他丁组、2万U.kg-1乌司他丁组Bcl-2表达均显著高于对照组(P<0.05),2万U.kg-1乌司他丁组Bcl-2蛋白表达高于1万U.kg-1乌司他丁组(P<0.05);1万U.kg-1乌司他丁组、2万U.kg-1乌司他丁组Bax蛋白表达均低于对照组(P<0.05),2万U.kg-1乌司他丁组Bax蛋白表达低于1万U.kg-1乌司他丁组,但差别无统计学意义(P>0.05)。结论乌司他丁能明显减轻ANP兔心肌细胞凋亡,其抑制心肌细胞凋亡的机制可能是通过调节凋亡相关调控基因Bcl-2及Bax的不同表达来发挥作用。     

促红细胞生成素对新生HIBD大鼠Bcl-2及Bax蛋白表达的影响

目的:观察促红细胞生成素(EP0)对新生缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠脑组织Bcl-2及Bax蛋白表达的影响,探讨EPO神经保护作用的分子机制。方法:42只7d龄新生Wistar大鼠随机分为假手术组、HIBD组、生理盐水对照组、EPO干预组,其中EPO干预组又分大、中、小剂量3组。建立HIBD模型后,立即一次性腹腔注射不同剂量(10000U/kg、5000U/kg、1000U/kg)的人基因重组促红细胞生成素(rhEPO),用免疫组织化学方法观察给药24h后脑组织Bcl-2及Bax蛋白表达的变化。结果:大鼠缺氧缺血后,脑组织Bcl-2及Bax蛋白表达均显著增高,Bcl-2/Bax显著降低,EPO干预后Bcl-2蛋白表达增加,Bcl-2/Bax显著增高,Bax蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义。结论:EPO可以通过上调Bcl-2蛋白表达及下调Bax蛋白表达,改变Bcl-2/Bax比值,抑制细胞凋亡而起到神经保护作用,为临床治疗新生儿HIBD提供了更有意义的理论依据。     

异氟醚延迟预处理对兔心肌缺血再灌注时Bcl-2和caspase-3蛋白表达的影响

目的：观察异氟醚延迟预处理对兔心肌缺血再灌注时Bcl-2和caspase-3蛋白表达的影响,并探讨其心肌延迟保护效应的机制。 方法：40只成年雄性新西兰大白兔随机分成4组:假手术组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、异氟醚预处理组(S组)、异氟醚预处理+阿片类受体阻断剂组(N组)。除C组外,各组均接受左冠状动脉前降支阻断40 min,再灌注120 min。S组在缺血前24 h时吸入2.0%异氟醚2 h,N组在吸入2.0%异氟醚前10 min,静脉注入阿片类受体阻断剂纳络酮6 mg/kg。再灌注结束后,测心肌梗死面积,免疫印迹法测Bcl-2和caspase-3蛋白的表达,透视电镜下观察心肌超微结构变化。 结果：与I/R组比,S组心梗面积(19.7%±2.8% vs 37.8%±1.7%)显著降低(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达增高,caspase-3蛋白活性降低(P＜0.05),心肌病理损伤减轻。结论：异氟醚预处理对心肌延迟保护效应可能与其上调Bcl-2蛋白表达和下调caspase-3蛋白活性,抑制心肌细胞凋亡有关。     

轻中度亚低温对大鼠心肺复苏后脑细胞caspase-3、Bcl-2 和Bax蛋白表达的影响

目的研究不同程度亚低温对大鼠心肺复苏（CPR）后脑组织凋亡的影响。方法利用窒息法制作心肺复苏模型,SD大鼠
15只,随机分为对照组（正常体温）、34 ℃低温组、32 ℃低温组,每组各5只。对照组在CPR后置于室温25 ℃下常规治疗;34 ℃低
温组（34+/-0.2 ℃）和32 ℃低温组（32+/-0.2 ℃）在CPR 0.5 h后分别给予亚低温治疗。各组大鼠均于CPR后12 h取脑组织,免疫
组化法测定大脑皮层caspase-3蛋白表达,Western blotting测定Bcl-2、Bax表达,同时观察各组脑组织病理变化。结果与常温
组相比,低温组神经元caspase-3 表达均明显减弱（P<0.05）,其中32 ℃低温组caspase-3 表达减弱更加明显（P<0.05）;低温组
Bcl-2表达明显增强（P<0.05）,32 ℃低温组的Bcl-2蛋白表达比34 ℃低温组表达更强;3组大鼠神经元凋亡蛋白bax的表达无明
显差异。结论亚低温可能通过降低caspase-3蛋白的表达、增强Bcl-2的表达,从而抑制脑细胞凋亡减轻脑损伤,32 ℃亚低温治
疗比34 ℃更能起到脑保护的作用。