多重耐药淋病奈瑟球菌耐药基因的研究

目的探讨淋病奈瑟球菌多重耐药与耐药基因的关系. 方法 应用K-B法与琼脂稀释法测定35株淋菌对抗生素的敏感性,煮沸法提取菌株DNA,PCR扩增TEM、tetM、erm和mefA基因. 结果 35株淋菌的敏感性测定显示:多重耐药现象明显,TEM耐药基因的检出率为88.6%,tetM基因的携带率为11.4%,首次在国内从35株淋菌中检出mef、erm耐药基因,其中mefA基因2株阳性,erm基因1株阳性. 结论淋菌的多重耐药与各耐药基因型之间密切相关.     

多重PCR同时检测淋病奈瑟球菌及其青霉素、四环素耐药基因的研究

目的建立一种多重PCR方法,在同一扩增体系内同时检测淋病奈瑟球菌及其青霉素、四环素耐药基因,探讨采用多重PCR同时检测淋菌及其耐药基因的可行性. 方法根据淋菌CPPB、TeM-1、Tet-M基因序列,分别设计了3对引物,并在同一扩增体系内行PCR扩增,扩增的靶序列分别为150 bp、224 bp、316 bp. 结果淋菌及其青霉素、四环素耐药的标准菌株,上述3个基因位点的检测均为阳性,对125例临床标本同时进行传统培养、药敏和多重PCR检测,结果显示淋菌的检出率:培养法为20.0%,PCR法为24.8%;PPNG检出率:药敏法为16.0%,PCR法为20.8;TRNG检出率:药敏法为14.4%,PCR法为19.2%. 结论该法与传统的培养及药敏试验相比具敏感、特异、迅速、标本不受淋菌存活以及药敏试验诸多因素的影响,是一种简便、快速、可靠的方法.     

广西桂林地区淋病奈瑟菌耐药检测结果分析

目的 分析广西桂林地区淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae, NG)对七种抗生素的耐药性,为临床合理用药提供实验室依据。 方法 采用纸片酸度法检测产青霉素酶淋病奈瑟菌(penicillinase-producing Neisseria gonorrhoeae,PPNG),运用琼脂稀释法测抗生素的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)。 结果 从淋病患者标本中分离菌株361株,其中高度耐四环素淋球菌(tetracycline-resistant Neisseria gonorrhoeae, TRNG)和青霉素耐药并PPNG分别为112株(60.22%)和146株(54.89%)。青霉素敏感0株(0.00%),环丙沙星敏感1株(0.28%),四环素敏感28株(7.76%),阿奇霉素敏感236株(65.37%),未发现大观霉素耐药菌株;头孢曲松和头孢克肟敏感分别为341株(94.46%)和354株(98.06%),其非敏感分别为20株(5.54%)和7株(1.94%)。 结论 大观霉素、头孢曲松和头孢克肟可作为桂林地区治疗淋病的首选药物;持续监测NG耐药性对于指导临床合理用药和发现耐药变化具有十分重要的意义。     

医院内淋病奈瑟球菌感染的监控

女性感染淋病奈瑟球菌后多无症状或仅有少量分泌物 ,患者常忽视诊治 ,而在入院检查其他妇科疾病时查出淋病。加强这一部分患者的管理 ,做好预防措施 ,有助于防止医院内淋病奈瑟球菌感染的发生。我们对入院妇、产科手术患者进行了淋病奈瑟球菌感染的调查和分析 ,现总结如下。1　材料与方法2 0 0 0年 9～ 11月 ,本院妇、产科住院手术患者 2 70例 ,年龄 2 0～ 6 0岁 ,患者一般情况好。入院后取宫颈分泌物作细菌培养 ,检出淋病奈瑟球菌为诊断依据。2　结　果妇、产科手术患者入院时淋病奈瑟球菌感染率为 4.1%。淋球菌感染见于各种妇科疾病患者 ,…     

广州市和大连市淋病奈瑟球菌的耐药性及耐药质粒分型比较

目的 了解广州和大连市两地临床分离的淋病奈瑟球菌(淋球菌)对抗生素的耐药性,以及产β-内酰胺酶淋球菌(PPNG)和四环素高水平耐药淋球菌(TRNG)耐药质粒TEM-1和tetM基因分型差异.方法 临床菌株来自2012年广东省皮肤性病防治中心和大连市皮肤病医院性病门诊患者的泌尿生殖道分泌物.采用琼脂稀释法测定淋球菌菌株对环丙沙星、头孢曲松和大观霉素的耐药性.多重PCR方法鉴定PPNG TEM-1和TRNG tetM基因分型.结果 2012年广州市皮肤性病防治中心和大连市皮肤病医院性病门诊分别分离获得淋球菌127株和102株.大连市淋球菌头孢曲松中介率达到88.2％(90/102),高于广州市的46.5％ (59/127,x2=43.44,P＜0.01),且出现5株大观霉素耐药株(4.9％),而广州市淋球菌对大观霉素100％敏感.广州市PPNG和TRNG流行率分别为46.5％(59/127)和50.4％ (64/127),均明显高于大连市的33.3％(34/102)和24.5％ (25/102),差异均有统计学意义(x2=5.24、15.95,P均＜0.05).广州和大连市TEM-1基因分型以亚洲型为主,分别为84.7％ (50/59)和79.4％(27/34);tetM基因分型以荷兰型占优势,分别为100.0％ (64/64)和92.0％(23/25).结论 广州和大连两地流行淋球菌耐药性存在差异,大连市出现了大观霉素耐药株,且头孢曲松的中介率显著高于广州市.广州市PPNG和TRNG流行率明显高于大连市.两地TEM-1基因质粒分型以亚洲型占优势,tetM基因以荷兰型为主.     

淋病奈瑟球菌毒力岛基因与耐药性的相关性分析

目的探讨淋病奈瑟球菌毒力岛基因与耐药性的相关性。方法应用琼脂稀释法检测淋病奈瑟球菌的耐药性,碘量法检测产β-内酰胺酶淋病奈瑟球菌(PPNG);分别提取其染色体DNA和质粒DNA,采用PCR方法 ,检测淋病奈瑟球菌毒力岛中的atl A、traG和traH基因。结果淋病奈瑟球菌的耐药现状非常严重;毒力岛基因广泛存在,染色体DNA上atl A、traG和traH阳性检出率分别为74.60%、34.92%和68.25%;质粒DNA上atl A、traG和traH阳性检出率分别为74.60%、63.49%和63.49%。结论淋病奈瑟球菌的毒力岛基因与耐药性之间存在一定相关性;染色体traH和质粒atl A多见于β-内酰胺酶阴性菌株,而染色体traG则更多见于高水平耐四环素菌株(TRNG)。     

淋病奈瑟球菌黏附因子与受体间的作用机制

淋病奈瑟球菌(简称淋球菌)是人类淋病的病原菌,淋病引起的公共卫生问题目前仍然非常严重,其治疗也因多重耐药菌株的增加而日益棘手。发展有效的疫苗与治疗方法是控制淋球菌感染的关键。深入研究淋球菌的黏附机制将为淋病动物模型和疫苗研制及新型治疗药物设计奠定理论基础。此文综述了淋球菌主要黏附因子与宿主细胞上受体间相互作用方面的进展。     

质粒DNA的转化、提取及酶切分析

目的:构建人Bcl-2基因原核表达载体,并对其酶切鉴定.方法:将Bcl-2重组质粒转化进入经CaCl2法制备的大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选培养充分克隆,然后用碱裂解法分离提取重组质粒DNA,最后用限制性内切酶酶切重组质粒DNA,并跑电泳鉴定.     

内蒙一起F2a志贺菌痢爆发的质粒分析

目的　探讨内蒙一起菌痢爆发的特异传染源。方法　对４３ 株Ｆ２ａ志贺菌进行质粒图谱和质粒ＤＮＡ 酶切图谱分析。结果　①质粒图谱和质粒ＤＮＡ酶切图谱特征相同的菌株为引起本次菌痢爆发的优势克隆;②本次爆发偶合有部分散发病例;③经污染的食物传播是本次爆发的主要传播途径。结论　质粒分析能较为特异、敏感地揭示不同来源志贺菌间的遗传联系和差别,从而准确说明爆发或流行事件的真相     

医院感染中金黄色葡萄球菌耐药质粒的同源性分析

目的了解不同医院不同科室金黄色葡萄球菌（SAU）耐药质粒流行状况,分析菌株间的同源性,为控制医院感染流行提供依据。方法采用药敏分析、质粒消除实验、质粒图谱及限制性内切酶图谱等技术对医院感染SAU耐药质粒进行同源性分析。结果从两所省级医院不同科室196份标本中分离到SAU15株,分离率为7.7%;检出菌对所用抗菌药物的耐药率为86.7%,有13.3%的菌株仅耐1种药,对≥3种抗菌药物耐药的有46.7%;在15株分离菌中12株检出质粒,检出率为80.0%;所有菌株均有38kb的大质粒,提示该质粒是医院SAU的流行质粒;对11株携带质粒的耐药SAU进行质粒消除,除2株菌的耐药性始终未变化外,其余9株的耐药性有不同程度地改变,其中3株耐药性全部消失,其余菌株的耐药性仅有部分改变;大小相同的耐药质粒经EcoRⅠ酶切后发现同一科室菌株的耐药质粒有相同的DNA片段,不同科室菌株间也有相似的酶切图谱。结论医院病房存在流行耐药质粒,不同科室有不同的质粒流行,各科室菌株间有一定的同源性。     

成都地区淋病奈瑟菌质粒谱分析研究

应用碱裂解加溶菌酶法对本地区１９９６ 年分离鉴定的１５５ 株标本进行了质粒抽提及质粒谱分型研究。结果表明：５种不同分子量的质粒分别被检出,其中分子量为５３４６ 和３９５ｋｂ 两种质粒检出率较高,分别为９６１３ ％ 和９０３２ ％ 。质粒谱型共１０ 种,主要以２１ｋｂ ＋ ５３ｋｂ ＋ ３９５ｋｂ 和２１ｋｂ ＋４２ｋｂ＋ ５３ｋｂ ＋ ７４ｋｂ ＋ ３９５ｋｂ 为主,占６３５８ ％ （９６／１５１） 。并将耐药谱型与质粒谱型进行了比较,具有相同质粒谱型的菌株,其耐药谱型可相同亦可不同。并地淋病奈瑟菌质粒抽提方法进行了探讨,摸索出了一种快速质粒检测的简便方法。     

奈瑟淋球菌质粒及其传播的研究

对奈瑟淋球菌质粒的３种类型：隐蔽质粒（２．６ＭＤ）、耐药质粒（３．７ＭＤ和４．５ＭＤ）、接合质粒（２４．５ＭＤ）进行了检测．并通过耐药质粒在同种和不同种细菌间的转化试验和接合试验，证明了耐药质粒在细菌间的可传播性，认为遗传物质在细菌间的传递，不仅是细菌生物学性状改变的物质基础，也是影响微生物正常菌丛变化的物质基础，耐药质粒ＤＮＡ流向的发生，会导致某些细菌形成耐药质粒库，引起耐药性的广泛扩散，影响微生物生态．     

淋球菌耐药现状与耐药质粒的研究

为了解湛江地区淋球菌耐药现状及耐药质粒的分布,并初步探讨其相互关系.对1998～1999年广东省湛江地区分离鉴定出的98株淋球菌流行株,应用纸片扩散法测定细菌对10种抗生素的敏感性,并采用碱裂解法进行质粒抽提,分析耐药质粒的分布情况.结果6.12%菌株对全部抗生素敏感,48.96%的菌株对3种及3种以上的抗生素耐药;共检出4种不同分子量的质粒,7.4kb和4.2kb质粒检出率较高,分别为59.16%和67.32%,质粒谱型12种,以7.4kb+4.2kb和39.5kb+7.4kb+4.2kb为主,占38.76%.结果提示湛江地区淋球菌耐药情况严重,多重耐药现象普遍,耐药质粒为7.4kb“亚洲型”质粒,检出率为59.16%,其与耐药性的关系尚有待进一步探讨.     

80株淋球菌分离株青霉素耐药性与penA及ponA基因的关系

目的探讨淋球菌青霉素耐药性与青霉素结合蛋白1基因和2基因（ponA、penA）突变的关系。方法采用琼脂稀释法对淋球菌临床分离株进行青霉素敏感性测定，分别运用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）和PCR-限制性片段长度多态性（RFLP）对淋球菌penA及ponA基因进行分析。结果在检测出的80株淋球菌临床分离株中，所有菌株的penA基因均发生了（Asp345A）的插入突变，而菌株表现出对青霉素不同程度的耐药性；通过RFLP分析检测出有近93．7％的菌株发生了ponA基因第421位氨基酸由亮氨酸变成脯氨酸（Leu421→Pro）的突变。同时研究还表明所有的PPNG菌株也可同时发生penA基因的突变，除2例ponA基因未突变外，94．4％（34／36）的PPNG可发生ponA基因的突变。结论在淋球菌流行株中染色体介导和质粒介导两种方式协同作用造成了淋球菌对抗生素的高度耐药性。     

Optimizing treatment of antimicrobial-resistant Neisseria gonorrhoeae

The increasing prevalence of ciprofloxacin-resistant Neisseria gonorrhoeae has required replacing inexpensive oral ciprofloxacin treatment with more expensive injectable ceftriaxone. Further, monitoring antimicrobial resistance requires culture testing, but nonculture gonorrhea tests are rapidly replacing culture. Since the strategies were similar in effectiveness (> 99%), we evaluated, from the healthcare system perspective, cost-minimizing strategies for both diagnosis (culture followed by antimicrobial susceptibility tests versus nonculture-based tests) and treatment (ciprofloxacin versus ceftriaxone) of gonorrhea in women. Our results indicate that switching from ciprofloxacin to ceftriaxone is cost-minimizing (i.e., optimal) when the prevalence of gonorrhea is > 3% and prevalence of ciprofloxacin resistance is > 5%. Similarly, culture-based testing and susceptibility surveillance are optimal when the prevalence of gonorrhea is < 13%; nonculture-based testing is optimal (cost-minimizing) when gonorrhea prevalence is > or = 13%.     

淋球菌隐蔽性质粒CppB基因的克隆研究

利用ｐＧＥＭ－Ｔ载体对ＣｐｐＢ基因ＰＣＲ扩增产物进行直接克隆，除常规方法中的限制性内切酶可以节省外，发现该方法不仅过程简便，操作易行，而且可以用ＰＣＲ方法筛选重组子，克隆的阳性率较常规方法高。ＤＮＡ序列测定结果证明在ＰＣＲ产物３′末端的确出现了一个不与模板互补的“Ａ”末端，它可以与ＰＧＥＭ－Ｔ载体Ｔ结合。ＰＣＲ方法筛选重组，克隆的阳性率较常规方法高。ＤＮＡ序列测定结果证明在ＰＣＲ产物克隆片段的基因序列与文献报道相一致，这为获得淋球菌隐蔽性质粒ＣｐｐＢ基因ＰＣＲ诊断标准阳性模板，了解ＣｐｐＢ基因功能奠定了基础。     

珠海地区淋球菌耐药性监测及耐药质粒分型

目的 监测珠海地区2015-2016年淋球菌临床分离株对常用抗菌药物的敏感性,了解质粒介导的TEM-1和tetM基因分子流行情况.方法 用琼脂稀释法测定淋球菌对7种抗菌药物(青霉素、四环素、环丙沙星、头孢克肟、大观霉素和阿奇霉素)的最低抑菌浓度(MIC).采用纸片酸度法测定产青霉素酶淋球菌(PPNG),PCR方法分别扩增TIEM-1和tetM耐药质粒基因片段,电泳分析其耐药质粒型别.结果 93株淋球菌中检出PPNG共26株(27.96％)、耐四环素淋球菌(TRNG)24株(25.81％).93株淋球菌对青霉素、四环素、环丙沙星、阿奇霉素的耐药率分别40.86％、75.27％、100.00％、7.53％,青霉素低敏率为51.61％;未发现对大观霉素、头孢曲松、头孢克肟耐药菌株,但对头孢克肟的低敏率达到30.11％.耐药质粒分型结果PPNG亚洲型15株(57.69％),非洲型11株(42.31％),未检出多伦多/里约型;TRNG荷兰型23株(95.83％),美国型1株(4.17％).结论 珠海地区淋球菌对四环素、环丙沙星、青霉素耐药率较高,但对头孢曲松和大观霉素敏感率高,可作为治疗淋病的首选药物;PPNG以亚洲型和非洲型为主,TRNG以荷兰型为主,偶见美国型.