cAMP类似物对人恶性胶质瘤细胞BT325增殖与分化的影响

目的：观察ｃＡＭＰ类似物８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对人恶性胶质细胞ＢＴ３２５增殖分化的影响。方法：在人恶性胶质瘤细胞ＢＴ３２５中加终浓度为１０－５ｍｏｌ／Ｌ的８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ体外培育２４ｈ后,应用酸解ＤＮＡ及甲绿派洛宁染色技术在同一标本上鉴别增殖型细胞和分化型细胞。结果：８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ处理组增殖型细胞占６７％,分化型细胞占３３％;而对照组增殖型细胞占８５％,分化型占１５％。结论：８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对     

cAMP类似物对人恶性胶质瘤TJ899细胞EGFR基因表达的影响

目的探讨cAMP类似物8-Br-AMP对人恶性胶质瘤TJ899细胞EGFR基因表达的影响.方法体外分组培养TJ899细胞,采用斑点印迹技术对观察实验组与对照组TJ899细胞EGFR基因表达情况.结果加8-Br-cAMP处理的实验组较不加8-Br-cAMP处理的对照组TJ899细胞EGFR基因表达降低.结论8-Br-cAMP可下调TJ899细胞EGFR基因表达.     

cAMP类似物对人恶性胶质瘤TJ899细胞EGFR基因表达的影响

目的：探讨cAMP类似物8-Br-AMP对人恶性胶质瘤TJ899细胞EGFR基因表达的影响。方法：体外分组培养TJ899细胞，采用斑点印迹技术对观察实验组与对照组TJ899细胞EGFR基因表达情况。结果：加8-Br-cAMP处理的实验组较不加8-Br-cAMP处理的对照组TJ899细胞EGFR基因表达降低。结论：8-Br-cAMP可下调TJ899细胞EGFR基因表达。     

嗅鞘细胞对原代培养神经干细胞增殖、分化的影响

目的 观察嗅鞘细胞(OECs)对神经干细胞(NSCs)增殖、分化的影响.方法 新生大鼠脑OECs和NSCs原代培养,采用免疫荧光及免疫细胞化学方法鉴定相关细胞.取原代OECs分为2组,实验组去除培养孔的间隔,使OECs和NSCs共用一培养液体系;对照组不破坏培养孔的间隔,单独培养NSCs,其余同实验组.观察2组细胞增殖、分化情况.结果 原代培养的OECs表达神经生长因子受体(P75NGFR);原代培养的神经球表达巢蛋白(nestin),神经球分化的细胞表达神经丝200(NF200)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP).增殖实验中,实验组NSCs数量较对照组明显增多,差异有统计学意义(P<0.05).诱导分化实验中,实验组4d、7d时NF200阳性细胞率较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),说明2种细胞共液培养时,OECs提高了NSCs向NF200阳性细胞分化率.结论 OECs可促进NSCs增殖,并提高了NSCs向神经元分化的效率.     

8—Cl—cAMP对人恶性胶质瘤TJ899细胞c—myc基因表达的影响

目的：观察８－Ｃｌ－ｃＡＭＰ对人恶性胶质瘤ＴＪ８９９ＸＬＥＱ ｃ－ｍｙｃ基因表达的影响。方法：体外分组培养ＴＪ８９９细胞,采用原位杂交方法观察实验组和对照组ＴＪ８９９细胞ｃ－ｍｙｃ基因表达情况。结果：加８－Ｃｌ－ｃＡＭＰ的实验组校不加８－Ｃｌ－ｃＡＭＰ的对照组ＴＪ８９９细胞ｃ－ｍｙｃ基因表达降低。结论：８－Ｃｌ－ｃＡＭＰ可下调ＴＪ８９９细胞ｃ－ｍｙｃ基因表达。     

8-Cl-cAMP对人恶性胶质瘤TJ_(899)细胞c-myc基因表达的影响

目的：观察８－Ｃｌ－ｃＡＭＰ对人恶性胶质瘤ＴＪ_899ＸＬＥＱ　ｃ－ｍｙｃ基因表达的影响。方法：体外分组培养ＴＪ_899细胞,采用原位杂交方法观察实验组和对照组ＴＪ_(899)细胞ｃ－ｍｙｃ基因表达情况。结果：加８－Ｃｌ－ｃＡＭＰ的实验组较不加８－Ｃｌ－ｃＡＭＰ的对照组ＴＪ_(899)细胞ｃ－ｍｙｃ基因表达降低。结论：８－Ｃｌ－ｃＡＭＰ可下调ＴＪ_(899)细胞 ｃ－ｍｙｃ基因表达。     

嗅鞘细胞对神经干细胞增殖与分化的影响

BACKGROUND： Olfactory ensheathing cells can promote oriented differentiation and proliferation of neural stem cells by cell-secreted neural factors. OBJECTIVE： To observe the effect of olfactory ensheathing cells on the differentiation and proliferation of neural stem cells. DESIGN, TIME AND SETTING： Cytology was performed at the Department of Neurology, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, China, from September 2007 to October 2008. MATERIALS： Mouse anti-nestin polyclonal antibody （Chemicon, USA）, mouse anti-glial fibrillary acidic protein （GFAP） IgG1, mouse anti-2＇, 3＇-cyclic nucleotide 3＇-phosphodiesterase （CNPase） IgG1, mouse anti-Tubulin Class-Ill IgG1 （Neo Markers, USA）, Avidin-labeled Cy3 （KPL, USA）, and goat anti-mouse IgGl： fluorescein isothiocyanate （FITC） （Serotec, UK） were used in this study. METHODS：Tissues were isolated from the embryonic olfactory bulb and subependymal region of Wistar rats. Serum-free DMEM/F12 culture media was used for co-culture experiments. Neural stem cells were incubated in serum-free or 5% fetal bovine serum-containing DMEM/F12 as controls. MAIN OUTCOME MEASURES： After 7 days of co-culture, neural stem cells and olfactory ensheathing cells underwent immunofluorescent staining for nestin, tubulin, glial fibrillary acidic protein, and CNPase. RESULTS： Olfactory ensheathing cells promoted proliferation and differentiation of neural stem cells into neuron-like cells, astrocytes and oligodendrocytes. The proportion of neuron-like cells was 78.2%, but the proportion of neurons in 5% fetal bovine serum DMEM/F12 was 48.3%. In the serum-free DMEM/F12, neural stem cells contracted, unevenly adhered to the glassware wall, or underwent apoptosis at 7 days. CONCLUSION： Olfactory ensheathing cells promote differentiation of neural stem cells mainly into neuron-like cells, and accelerate proliferation of neural stem cells. The outcome is better compared with serum-free medium or medium containing 5% fetal bovine serum.     

异欧前胡素对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

背景：植物雌激素有防治绝经后妇女骨质疏松的作用已得到公认,其作用机制之一是促进了成骨细胞的增殖与分化。 目的：观察香豆素类植物雌激素异欧前胡素体外对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。 设计、时间及地点：对比观察实验,于2006-09/2007-12在河北医科大学药学院完成。 材料：出生24 h内SD大鼠,异欧前胡素为中国药品生物制品检定所产品。 方法：采用改良组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,将异欧前胡素以1×10-5~ 1×10-9 mol/L浓度加入细胞培养体系,以未加入药物为空白对照组。作用24,48,72 h后,以MTT法检测成骨细胞的增殖情况,以对硝基苯二钠基质动力学法测定细胞内碱性磷酸酶的活性,以改良Lowry法测总蛋白水平。 主要观察指标：成骨细胞的增殖率和碱性磷酸酶活性。 结果：大鼠成骨细胞在不同浓度异欧前胡素中培养24 h,未观察到促增殖作用。培养48 h后,开始出现促增殖作用增强,有效浓度为1×10-9~1×10-8 mol/L。培养72 h后,继续有促增殖作用,有效浓度为1×10-8~1×10-7mol/L。大鼠成骨细胞在不同浓度异欧前胡素存在下培养48 h,未观察到促分化作用,培养72 h后,开始出现促分化作用,有效浓度为1×10-6~1× 10-5 mol/L,其他浓度作用不明显。 结论：异欧前胡素体外能促进大鼠成骨细胞的增殖与分化。     

脑卒中后抑郁大鼠海马原位增殖的新生细胞存活和分化状态

目的 观察脑卒中后抑郁(post-stroke depression,PSD)大鼠海马原位增殖新生细胞的存活和分化.方法 采用左侧大脑中动脉阻塞(MCAO)联合慢性不可预见温和应激刺激(chronicmild stress,CMS)及孤养法建立PSD模型,将雄性SD大鼠分为假手术、脑卒中、CMS和PSD组.每组均为18只.采取免疫组织化学、荧光双标染色及共聚焦成像动态检测,比较各研究组大鼠左侧海马齿状回溴脱氧尿苷嘧啶(BrdU)及其与神经元特异性核蛋白(NeuN)或胶质纤维酸性蛋白(GFAP)共表达.结果 与脑卒中组(232.2±8.6、123.7±2.6、136.2±2.6)相比,PSD组大鼠左侧(伤侧)海马齿状回BrdU+细胞数在脑梗死后第21(156.2±2.5)、30(70.2±2.0)和45天(81.2±1.1)均明显减少(t=28.83、52.2、62.08,均P<0.01),但仍高于假手术组.与脑卒中组(79.3%±2.8%、87.7%±4.6%)相比,PSD组大鼠左侧(伤侧)海马齿状回BrdU+/NeuN+细胞比例在脑梗死后第30(69.0%±3.4%)和45天(78.3%±2.4%)均明显减少(t=5.871、4.403,均P<0.01).BrdU+/GFAP+细胞比例在脑梗死后30和45 d均明显增加(t=4.226、8.945,P<0.01).结论 PSD大鼠脑卒中后海马齿状回原位增殖的新生细胞存活降低,分化为神经元的比例下降,胶质细胞比例增加.     

Flt-1基因对BT325细胞VEGF蛋白表达及细胞增殖的影响

目的 探讨Flt-1基因对BT325胶质瘤细胞VEGF蛋白表达及细胞增殖的影响.方法 从人脐静脉内皮细胞中提取总RNA,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增Flt-1基因片段,基因重组技术将Flt-1基因片段插入真核表达载体pEGFP-C1中,双酶切及DNA测序鉴定pEGFP-C1-Flt-1重组质粒.pEGFP-C1-Flt-1重组质粒转染BT325胶质瘤细胞,转染后72hELISA法检测培养上清液中VEGF含量,MTT法检测细胞的增殖情况.结果 RT-PCR方法证实从人脐静脉血内皮细胞中成功获得1 384 bp Flt-1基因片段;经双酶切分析和DNA测序鉴定表明重组质粒pEGFP-C1-Flt-1构建成功;ELISA检测发现,BT325细胞被转染后72 h VEGF含量转染组为(56.3±41.2) pg/ml,空载体转染组为(95.5±35.3) pg/ml(P＜0.05);MTT法检测发现,转染组和空载体转染组的生存率分别为(42.6±3.7)％和(92.8±6.6)％(P＜0.05).结论 Flt-1基因可抑制BT325细胞VEGF的蛋白表达,抑制细胞增殖.     

NOV对人神经干细胞增殖和分化的影响

目的 探讨NOV蛋白对人神经干细胞(HNSCs)增殖和分化的影响。方法 NOV基因重组质粒转染COS—7细胞，收集COS-7细胞和NOV基因修饰COS—7细胞的条件培养液(COS—CM和NOV—CM)，作用于培养的HNSCs，^3H—TdR掺入液闪检测HNSCs的增殖，免疫细胞化学和流式细胞仪检测HNSCs的分化。结果 (1)NOV—CM能明显促进HNSCs对^3H—TdR的摄入，说明NOV—CM能明显促进HNSCs的增殖，另外NOV—CM的促细胞增殖作用具有一定的量效关系；(2)免疫细胞化学和流式细胞仪结果显示，NOV—CM促进HNSCs向神经元方向分化。结论 NOV蛋白可能具有促进HNSCs增殖和分化的作用。     

Effects of olfactory ensheathing cells on the proliferation and differentiation of neural stem cells

BACKGROUND:Olfactory ensheathing cells can promote oriented differentiation and proliferation of neural stem cells by cell-secreted neural factors. OBJECTIVE:To observe the effect of olfactory ensheathing cells on the differentiation and proliferation of neural stem cells. DESIGN,TIME AND SETTING:Cytology was performed at the Department of Neurology,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,China,from September 2007 to October 2008. MATERIALS:Mouse anti-nestin polyclonal antibo...     

人成骨细胞增殖和分化与生长激素释放肽☆

背景：有研究表明生长激素释放肽对体外培养大鼠成骨细胞增殖有促进作用,但对人成骨细胞增殖和分化是否有影响却少有报道。 目的：探讨生长激素释放肽对人成骨细胞增殖和分化的影响。 方法：取正常成人髂前上棘松质骨,分离出成骨细胞并进行体外培养,应用RT-PCR法检测生长激素促分泌素受体的表达;3H-掺入法检测成骨细胞增殖;Westernblot检测与成骨细胞分化相关的Runx2蛋白表达;α-磷酸奈酚法和放射免疫法观察生长激素释放肽对人成骨细胞分化的影响。 结果与结论：人成骨细胞可表达生长激素促分泌素受体mRNA和生长激素促分泌素受体蛋白。生长激素释放肽促进人成骨细胞增殖(P < 0.05或P < 0.01),且呈剂量依赖性,而且可增加碱性磷酸酶的活性并促进骨钙素的分泌(P < 0.05或P < 0.01),但对人成骨细胞中Runx2蛋白的表达无影响。结果提示,生长激素释放肽能促进人成骨细胞增殖和分化。 关键词：生长激素释放肽;人成骨细胞;细胞增殖;细胞分化;组织构建     

Dnmt3a regulates both proliferation and differentiation of mouse neural stem cells

DNA methylation is known to regulate cell differentiation and neuronal function in vivo. Here we examined whether deficiency of a de novo DNA methyltransferase, Dnmt3a, affects in vitro differentiation of mouse embryonic stem cells (mESCs) to neuronal and glial cell lineages. Early‐passage neural stem cells (NSCs) derived from Dnmt3a‐deficient ESCs exhibited a moderate phenotype in precocious glial differentiation compared with wild‐type counterparts. However, successive passaging to passage 6 (P6), when wild‐type NSCs become gliogenic, revealed a robust phenotype of precocious astrocyte and oligodendrocyte differentiation in Dnmt3a^?/? NSCs, consistent with our previous findings in the more severely hypomethylated Dnmt1^?/? NSCs. Mass spectrometric analysis revealed that total levels of methylcytosine in Dnmt3a^?/? NSCs at P6 were globally hypomethylated. Moreover, the Dnmt3a^?/? NSC proliferation rate was significantly increased compared with control from P6 onward. Thus, our work revealed a novel role for Dnmt3a in regulating both the timing of neural cell differentiation and the cell proliferation in the paradigm of mESC‐derived‐NSCs. © 2012 Wiley Periodicals, Inc.     

枸杞多糖对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及向内皮谱系分化的影响

背景：枸杞多糖可促进生精细胞的增殖,诱导大鼠骨髓间充质干细胞、人脐血间充质干细胞向神经元样细胞分化,枸杞多糖对骨髓间充质干细胞的生物学特性有何影响,有待深入研究。 目的：观察枸杞多糖对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及向内皮分化的影响。 方法：采用密度梯度离心法分离SD大鼠骨髓间充质干细胞,MTT法检测细胞增殖率。用HG-DMEN+EGM-2诱导大鼠骨髓间充质干细胞向内皮谱系分化,检测细胞Ⅷ因子相关抗原和荆豆凝集素表达。在培养液中加入或不加入枸杞多糖,分析枸杞多糖对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和向内皮谱系分化的影响。 结果与结论：枸杞多糖未改变大鼠骨髓间充质干细胞形态,不影响细胞表面抗原CD29、CD45、CD106的表达,细胞Ⅷ因子相关抗原检测呈阴性反应。但明显提高了大鼠骨髓间充质干细胞的增殖率,延长细胞增殖的高峰时间。大鼠骨髓间充质干细胞用含EGM-2的内皮诱导培养基或内皮诱导培养基+枸杞多糖诱导,未加枸杞多糖诱导组大鼠骨髓间充质干细胞在第10天时已转化为具有内皮特征的细胞;而含有枸杞多糖的内皮诱导液需诱导至第12天,细胞才转化为具有内皮特征的细胞,提示枸杞多糖具有延缓EGM-2诱导的大鼠骨髓间充质干细胞向内皮谱系分化的作用。     

Hedgehog信号通道与相关干细胞增殖与分化的研究进展

背景：Hedgehog蛋白为成形素蛋白,其相关信号通道参与胚胎发育和成体组织再生。目的：对Hedgehog信号通道相关干细胞的增殖及分化研究近况进行综述。方法：应用计算机检索CNKI和PubMed数据库中2000-01/2010-12关于Hedgehog信号通路的文章,在标题和摘要中以“hedgehog信号通道,细胞增殖,细胞分化,信号调控”或“Hedgehog signaling pathway,cell proliferation,cell differentiation,signal pathway controlling”为检索词进行检索,选择关于Hedgehog信号通道对各种干细胞及成体器官作用内容的文章,初检到169篇,根据纳入标准选择27篇进行综述。结果与结论：具有多种分化潜能的干细胞发育成具有特定生物学功能的组织细胞是受到干细胞自身或外在的、近程或远程的信号调控的,其中细胞之间的相互信息传递在细胞发育分化过程中扮演着重要角色。Hedgehog 信号通路起到维持细胞增殖、分化、凋亡之间的平衡,其能够调节相邻细胞之间的分子差异,对细胞分化命运起决定性作用。