聚合酶链反应技术用于汉坦病毒的基因分型

应用反转录ＰＣＲ技术对国内外分离的１８株汉坦病毒基因进行了检测，结果１０株血清Ⅰ型病毒仅能用Ⅰ型引物扩增，８株血清Ⅱ型引物扩增，与既往空斑减少中和试验的分型结果完全一致。     

两种菌落聚合酶链反应在抗体库筛选中的应用比较

摘要：目的：探讨两种菌落PCR方法在抗体库筛选中的应用价值。方法：分别以5个阳性克隆细菌菌落直接悬浮于去离子水中及悬浮于含0．1％的TritonX-100后经水浴煮沸作为模板，进行PCR反应。同时提取质粒DNA，进行双酶切鉴定。结果：5个克隆的菌落PCR及酶切鉴定均检测到目的基因。结论：菌落PCR可用于筛选阳性重组克隆。菌落直接加入去离子水中作为模板进行PCR反应的方法可在大规模阳性重组DNA的筛选鉴定中推广应用。     

应用聚合酶链反应直接检测HIV基因序列

作用计算机辅助分析和比较１６种ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２序列并设计了一对用于检测ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２的通用ＰＣＲ引物ＰＧ０３和ＰＧ０４。它们在ＡＲＶ－２病毒序列上分别位于４５７～４７８和７６６～７９８位核苷酸。两引物在ＡＲＶ－２基因上指导合成一个长３４２ｂｐ的ＤＮＡ片段。用ｐＡＲＶ－２／７Ａ和含有ｇａｇ基因的亚克隆质粒ｐＪＧ４２３作模板，均可扩增出特异性靶基因序列，而用不含ｇａｇ基因的亚克隆质粒ｐ     

聚合酶链反应扩增人动脉粥样硬化抗体全套可变区基因

目的利用二次聚合酶链反应(PCR)扩增人动脉粥样硬化抗体全套可变区基因,并将其克隆到T载体进行测序验证。方法收集50例动脉粥样硬化患者外周动脉血标本,密度梯度离心法分离淋巴细胞,TR Izol法提取总RNA,用逆转录-PCR扩增轻链可变区基因(包括VK和Vλ)和重链可变区基因(VH),分别酶切后克隆到T载体上,随机挑取2个克隆进行测序验证。结果总RNA的纯度和完整性都较好,经过2次PCR成功扩增出了抗体全套轻、重链可变区基因。测序结果与已有的人抗体基因的序列高度同源。结论该方法成功扩增出了人动脉粥样硬化抗体全套可变区基因,为下一步噬菌体单链抗体库的构建和筛选奠定了基础。     

聚合酶链反应扩增人动脉粥样硬化抗体全套可变区基因

目的 利用二次聚合酶链反应(PCR)扩增人动脉粥样硬化抗体全套可变区基因,并将其克隆到T载体进行测序验证.方法 收集50例动脉粥样硬化患者外周动脉血标本,密度梯度离心法分离淋巴细胞,TRIzol法提取总RNA,用逆转录-PCR扩增轻链可变区基因(包括VK和Vλ)和重链可变区基因(VH),分别酶切后克隆到T载体上,随机挑取2个克隆进行测序验证.结果 总RNA的纯度和完整性都较好,经过2次PCR成功扩增出了抗体全套轻、重链可变区基因.测序结果与已有的人抗体基因的序列高度同源.结论 该方法成功扩增出了人动脉粥样硬化抗体全套可变区基因,为下一步噬菌体单链抗体库的构建和筛选奠定了基础.     

聚合酶链反应及其应用

聚合酶链反应(Polymerase ChainReaction)简称PCR.它由引物介导的在体外将特定DNA序列在DNA聚合酶的作用下进行扩增的方法.为要从生物材料中获得某一段特定的DNA序列(基因),往往需要经过非常繁琐的步骤并花费大量的时间,PCR技术的发明则是在该方面取得了重大突破.这种技术无需构建含目的基因的重组载     

聚合酶链反应检测细菌16SrRNA基因

根据细菌１６ＳｒＲＮＡ基因的高度保守性,设计合成所有细菌,革兰氏阳性细菌及革兰氏阴性细菌的共同引物,采用聚合酶链反应检测已知细菌１３株,三对引物分别扩增的阳性率为１００％,倍比稀释法能检出细菌浓度为４ＣＦＵ．ｍｌ＾－１,同时检测临床样本４０份,阳性率为６７．５％,同期细菌培养阳性率为４５％,二者比较差异有显著性。     

聚合酶链反应技术及临床应用

<正> 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术于1985年首先由Getus公司建立。该技术能有选择地体外扩增短DNA和RNA序列。然后这些序列可用传统的杂交和重组DNA技术进行鉴定和克隆.这项技术具有高度特异性、选择性、灵敏性,而且快速简便;只需微量的标本.一次反应只需1—5ugDAN或RNA;标本可是血清,也可是组织;实验过程快,仅需2—3天,而且一般情况下,扩增完全有效,可达10~6—10~9;扩增后的核酸可稳定地克隆和/或进行序列分析,快速而精确地进行鉴定。正是因为这项技术具有这些优点,因此该技术已广泛用于医学;生物学、遗传学和考古学等领域,在医学方面已广泛用于遗传、细菌病毒学等方面的研究与诊断。     

聚合酶链反应扩增大片段mtDNA

目的 :探讨聚合酶链反应 (PCR)扩增大片段线粒体DNA方法。方法 :快速碱裂解法提取线粒体DNA ,长时程PCR扩增出 5 430bp线粒体DNA。结果 :扩增出 5 430bp线粒体DNA产物特异性强 ,产量高。 结论 :该方法反应条件简便、稳定 ,也可用于其它大片段的扩增 ,有一定的实用价值。     

用PCR方法检测基因缺失或杂合性丢失的初步探讨

对ＰＣＲ方法用于检测基因的缺失或杂合性丢失进行了初步探讨。通过选择ＰＣＲ循环数、选择内对照及筛选标本等手段，采用ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ技术检测ＧＳＨ克隆７在鼻咽癌中的缺失状态，成功地检测到了１例标本中存在的缺失。这为ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ技术检测基因的缺失或杂合性丢失的应用提供了可借鉴的实验手段和经验。     

抗乳腺癌人单抗CM—1重链可变区基因的序列测定与分析

为存留抗乳腺癌人单抗CM－1的可变区编码基因，从CM-1杂交瘤细胞中提出总RNA，经逆转录生成cDNA，PCR后得到一400hP左右的基因扩增片段。用一条内引物直接对PCR产物进行基因序列测定，测得344个碱基序列，与已知人抗体重链可变区的读码框架相符，其对应的氨基酸序列属人抗体可变区“典范结构”的1～3类，从而进一步验证了CM-1单抗的人源性，并为人抗体编码基因的研究提供了新资料，也为制备CM－1小分子抗体作了准备。     

人核心蛋白聚糖真核表达载体的构建及鉴定

目的：构建人核心蛋白聚糖（DCN）真核表达载体,为进一步研究其生物学活性奠定基础。 方法：采用聚合酶链反应（PCR）扩增目的片段,PCR产物及真核表达载体pcDNA3分别双酶切后进行连接,并转化入大肠杆菌JM109中扩增以获得重组载体。 结果：PCR获得与预期大小一致的、约1 000 bp的特异性DNA片段,PCR产物与表达载体经双酶切后连接,构建重组载体pcDNA-dec,经双酶切鉴定及测序证实,人DCN基因cDNA片段正确插入真核表达载体中。结论：成功构建人DCN真核表达载体pcDNA-dec。     

Studies on hepatitis C virus and prevalence of its infection in China

PrinceandGoldfieldfirstreportedthenon--A,non--Bpost--transfusionhepatitis(NANBH)byexclusivediagnosisin1974.Theepidemiologicda.talaterconfirmedthatthereweretwokindsofNANBH,parenterallytransmittedNANBHandenterallytransmittedNANBH.'In1989,Chooandhiscolleagues['JidentifiedhepatitisCvirus(HCV)genomiccDNAbyimmunoscreeningtheAgtllcDNAlibraryofthevirus,themajorcausativeagentofparenterallytransmittedNANBH.TheanalysisofthegenomeshowedthatHCVisamemberofflavivirusfamilywithasinglepositiv…     

PCR方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌

目的:建立一种快速准确检验食品中单核细胞增生李斯特氏菌的方法。方法:采用聚合酶链反应（PCR）特异性扩增单核细胞增生李斯特氏菌溶血素基因(hly A),用PCR方法检测80份长春地区的食品样品。结果:在706 bp处出现hlyA基因的目的片段,食品样品中单核细胞增生李斯特氏菌阳性检出12份,阳性率为15%,与吉林省疾病预防控制中心同步进行的国标法检测结果一致,二者符合率100%。结论:PCR方法检测食品中单核细胞增生李斯特氏菌更简便、快速、敏感、特异性高,适用于基层单位开展食品中单核细胞增生李斯特氏菌污染的调查及监测。     

双抗体夹心ELISA检测肺炎支原体抗原方法的建立及临床应用

目的　建立检测肺炎支原体抗原的双抗体夹心ELISA ,探讨其临床应用的可行性。方法　采用不同株Mp单抗 ,用双抗体夹心ELISA法检测Mp抗原 ,优化该方法检测Mp抗原的最佳实验条件。对Mp标准株及 14 7份临床标本进行测定 ,观察双抗体夹心ELISA方法的敏感度和特异度 ,以及该方法与聚合酶链反应 (PCR)检测法的符合率。结果　包被单抗量为 2 0 μg·ml-1,酶标记单抗 1∶2 0 0稀释时 ,阳性对照与阴性对照吸光度之比 (P/N值 )最大 ;检测Mp抗原敏感度达 2 μg·ml-1,和其它支原体没有交叉反应。 14 7份临床标本PCR检测阳性率为 13 .6% (2 0 /14 7) ;双抗体夹心ELISA法检测阳性率为 12 .2 % (18/14 7) ,两者符合率达 95 .9%。结论　建立的双抗体夹心ELISA法检测Mp抗原具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点。     

人骨桥蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的构建人骨桥蛋白(hOPN)表达载体,体外表达及表达产物的纯化.方法培养人脐静脉内皮细胞,提取总RNA,反转录合成cDNA第一链,以此cDNA为模板经PCR合成插入片段,连接至载体pGEX-6P-1,转化到XL1-blue中进行诱导表达.表达产物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳后,切下目的蛋白进行洗脱纯化.结果构建的表达载体经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA测序,证明所构建的质粒是pGEX-6P-OPN.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳发现该重组质粒经IPTG诱导后表达一种新的蛋白(表达量为16.7%),这种蛋白不存在于诱导后的pGEX-6P-1表达产物中,纯化后蛋白纯度为99%.结论成功构建了hOPN表达载体,并进行体外表达.     

血小板生成素基因功能区段的体外扩增与序列测定

目的：获取具有功能的血小板生成素基因区段．方法：以正常肝组织ｍＲＮＡ为模板，聚合酶链反应扩增所需目的ｃＤＮＡ，克隆入ｐＵＣ１９中，双脱氧末端终止法测定其核苷酸序列．结果：ＰＣＲ扩增得约４８０ｂｐ片段，经测序证实为血小板生成素功能区段基因．结论：已得到所需血小板生成素功能区段基因．     

INTEGRATION OF TRADITIONAL AND MODERN METHODS IN THE IDENTIFICATION OF AFB CULTURES ISOLATED FROM CLINICAL SPECIMENS OF PATIE

ＩＮＴＥＧＲＡＴＩＯＮＯＦＴＲＡＤＩＴＩＯＮＡＬＡＮＤＭＯＤＥＲＮＭＥＴＨＯＤＳＩＮＴＨＥＩＤＥＮＴＩＦＩＣＡＴＩＯＮＯＦＡＦＢＣＵＬＴＵＲＥＳＩＳＯＬＡＴＥＤＦＲＯＭＣＬＩＮＩＣＡＬＳＰＥＣＩＭＥＮＳＯＦＰＡＴＩＥＮＴＳＷＩＴＨＳＫＩＮＤＩＳＥＡＳ...