Caspase-3与脑缺血再灌注后细胞凋亡相关性研究进展

缺血性脑血管病是目前神经内科最常见的一种疾病,其致残率非常高。治疗一般是以疏通堵塞的血管、改善病变部位的血液供应为主,但当缺血部位的血液供应好转以后就容易发生更加严重的再灌注损伤[1]。脑缺血再灌注损伤是脑缺血后脑组织恢复血流灌注时引起脑细胞更严重损伤的一种病理生理现象。研究表明,脑组织缺     

阿托伐他汀对兔心肌缺血再灌注诱导细胞凋亡的影响

目的探讨阿托伐他汀对兔心肌缺血再灌注诱导的细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法30只雄性大白兔,随机分为假手术组(sham组)、缺血再灌注组(I/R组)及缺血再灌注加阿托伐他汀组(I/R AT组)。采用结扎、开放兔冠状动脉的方法,制作兔心肌缺血再灌注模型(缺血40min,再灌注2h),采用原位末端标记法(TUNEL法)检测心肌细胞凋亡情况,采用免疫组织化学法检测心肌中Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果①I/R组凋亡指数明显大于sham组(P<0.01),而I/R AT组凋亡指数较I/R组显著减少(P<0.01)。②I/R组及I/R AT组Bcl-2蛋白表达百分率显著高于sham组(均P<0.01),且I/R AT组的Bcl-2蛋白表达也较I/R组明显上调(P<0.01);I/R组及I/R AT组的Bax蛋白表达明显强于sham组(均P<0.01),但I/R AT组的Bax蛋白表达弱于I/R组(P<0.01)。结论阿托伐他汀可以抑制心肌缺血再灌注诱导的细胞凋亡,减少心肌细胞凋亡数目,其机制可能与其上调心肌缺血再灌注时Bcl-2蛋白的表达、抑制Bax蛋白的表达有关。     

细胞凋亡与心肌缺血再灌注损伤

细胞凋亡是心肌缺血再灌注损伤的一个重要病理学特征。深入研究缺血再灌注后心肌细胞凋亡的发生过程及其机制，将为临床有效防治心肌缺血再灌注损伤提供新方案。本文介绍了与缺血再灌注有关的心肌细胞凋亡发生情况，并着重就心肌细胞发生凋亡的可能机制、信号转导通路和防治措施进行了综述。     

不同脑温对全脑缺血再灌注后相关基因及细胞凋亡的影响

目前国内外学者开始尝试低温治疗脑缺血、脑出血和重型颅脑外伤 [1 ] ,但是脑缺血后脑温控制到何种程度方可发挥最大的脑保护作用 ,同时又不产生严重的并发症 ,至今尚未见统一的标准。为此 ,本研究以大鼠全脑缺血再灌注模型 ,观察不同程度降温对脑缺血后海马 CA1 区的 c- fos和大脑皮质bcl- 2相关基因以及脑细胞凋亡表达的影响。1　材料与方法1.1　动物及分组　健康雄性 Sprague- Dawley(SD)大鼠 ,体重 2 5 0± 15 g,随机分为假手术组和脑缺血组 ,后者再分为常温 (37～ 38℃ )组、亚低温 (31～ 32℃ )组和高温 (41～ 42℃ )组 ,每组 6只…     

大鼠脑缺血再灌注后MMP-9、MMP-2表达与脑水肿的关系

目的:观察大鼠脑缺血再灌注后基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)的动态变化规律及其与脑水肿的关系。方法:将80只SD大鼠分为假手术组(n=10)和实验组(再灌注6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、7 d和10 d组,n=10)。线栓法复制大鼠左侧大脑中动脉缺血再灌注模型,缺血2 h,再灌注6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、7 d和10 d测定大鼠神经功能缺损评分;断头取脑,按Elliot公式计算脑组织含水量,免疫组织化学法测定相应时间点MMP-2、MMP-9免疫阳性细胞数。结果:实验组再灌注后6 h出现神经功能障碍,48 h最严重,10 d仍未完全恢复,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组再灌注6 h出现脑水肿,48 h最严重,7 d时脑水肿仍存在,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组再灌注6 h有少量的MMP-9免疫阳性细胞,12 h开始增多,48 h达到高峰,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组再灌注24 h见少量MMP-2免疫阳性细胞,48 h逐渐增多,72 h最多,7 d和10 d仍有较多表达,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:脑缺血再灌注后MMP-2和MMP-9均升高,两者表达方式的不同,提示MMP-9主要参与脑缺血再灌注后脑水肿形成,MMP-2可能与组织修复和神经再生有关。     

三七总皂苷对脑缺血再灌注后MMP-9和TIMP-1表达的影响

目的 研究三七总皂苷(PNS)对脑缺血再灌注后脑组织基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)与组织基质金属蛋白酶抑制物-1(tissue inhibitor of meta11oproteinase-1,TIMP-1)表达的影响.方法 将C57BL/6小鼠随机分成假手术组、模型组、PNS组及依达拉奉组,连续给药4 d后结扎双侧颈总动脉20 min,再灌注24 h,建立脑缺血再灌注模型,用HE染色检测海马区神经细胞形态,用western-blot法检测MMP-9与TIMP-1蛋白在脑组织的表达.结果 脑缺血再灌注24 h后,海马区神经元存活率减少,脑组织MMP-9表达增强,与假手术组比较,差异均具有统计学意义(P＜0.01),而TIMP-1表达无显著性变化;三七总皂苷组脑组织神经元存活率增加,TIMP-1蛋白表达升高,MMP-9蛋白表达降低,与模型组比较,差异均具有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05).结论 脑缺血再灌注后,可通过激活MMP-9,引起细胞外基质破坏,导致神经元损伤.三七总皂苷可抑制脑缺血再灌注后脑组织MMP-9表达,增强TIMP-1表达.     

丁咯地尔对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织MMP-9与TIMP-1的影响

目的:观察丁咯地尔对大鼠脑缺血再灌注后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)与基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响,探讨丁咯地尔的脑保护作用机制.方法:健康SD大鼠108只随机分成假手术组、对照组和丁咯地尔治疗组,每组36只,18只用于检测MMP-9、TIMP-1,18只测量脑组织含水量.大鼠建立脑缺血再灌注损伤模型,缺血时间为1 h,假手术组仅在颈外动脉处穿线;对照组制作脑缺血再灌注模型,不作干预;丁咯地尔治疗组于再灌注时经尾静脉给药(赛来乐3 ml/kg,每ml含丁咯地尔10 mg).分别于再灌注后1 d、2 d和3 d处死,每个时间点6只大鼠,断头取脑,以干湿重法测量缺血侧脑组织含水量;用免疫组化方法检测MMP-9与TIMP-1阳性细胞的表达情况.结果:在各时间点丁咯地尔治疗组脑组织含水量低于对照组,丁咯地尔治疗组MMP-9细胞阳性率低于对照组,而TIMP-1细胞阳性率仅在再灌注后第3 d时高于对照组(P＜0.05).结论:丁咯地尔可能通过调节MMP-9/TIMP-1表达,发挥抗脑水肿作用.     

尼莫通对大鼠脑缺血再灌注时细胞凋亡的影响

①目的 探讨尼莫通过大鼠脑缺血再灌注时细胞凋亡的影响。②方法 对实验大鼠于脑缺血前应用尼莫通进行干预,在脑缺血再灌注不同时间内,用免疫组化法检测凋亡相关基因ｃ－ｆｏｓ及ｂｃｌ－２蛋白表达的变化。③结果 尼莫通组大鼠脑缺血后的梗死体积显著减小（ｔ＝２．７９,Ｐ〈０．０５）;尼莫通组脑缺血再灌注时皮层和基底核区ｃ－ｆｏｓ的表达明显下降（ｔ＝４．８４,６．１４,Ｐ〈０．００１）,而ｂｃｌ－２蛋白的表达明     

大鼠局守脑缺血再灌注后GM1的保护作用及其对细胞凋亡的影响

为了探讨大鼠局灶脑缺血再灌注后单唾液酸神经节苷（ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅ,ＧＭ１）的保护作用及其对细胞凋亡的影响。我们采用栓线法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌腹腔注射给予ＧＭ１,利用ＴＵＮＥＬ法检测细胞凋亡情况,并对病理学改变进行观察。结果：正常对照组假手术组偶可见凋亡细胞,缺血再灌注组可见大量凋亡细胞主要位于梗塞边缘区内侧,而ＧＭ１用药组与缺血再灌注组相比,凋亡细胞明显减少。光镜及电镜观察发现,缺血再     

细胞凋亡与心肌缺血再灌注损伤

传统观点通常是将心肌的缺血再灌注损伤分为3种类型,即心肌顿抑、再灌注性心律失常和心肌坏死,并且认为坏死是心肌细胞死亡的唯一方式。随着分子心血管病学研究的不断发展,近年来证实心肌细胞还存在着另外一种死亡方式——细胞凋亡(apopto-     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后Hsp70的表达及与细胞凋亡的关系

目的：研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后热休克蛋白（ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｔｅｉｎ,Ｈｓｐ）７０的表达及与细胞凋亡的关系。方法：用线栓法制备ＭＣＡＯ模型,用免疫组化法测定Ｈｓｐ７０阳性细胞及用ＴＵＮＥＬ法测定凋亡细胞。结果：缺血２ｈ即有Ｈｓｐ７０阳性细胞,６～２４ｈ明显,４８ｈ减弱,３ｄ消失。ＴＵＮＥＬ阳性细胞于再灌注后２ｈ出现,２４～４８ｈ达高峰,７２ｈ减弱。结论：脑缺血再灌注后早期即有Ｈｓｐ７０表达及细胞凋亡发生。     

兔脑缺血再灌注磁共振弥散成像与细胞凋亡相关性

目的分析兔脑急性缺血组织磁共振弥散成像(DWI)的影像学表现及其与细胞凋亡的关系,探讨DWI成像的病理基础。方法58只新西兰大白兔随机分为永久缺血组(A组)和再灌注组(B组),线栓法制作大脑中动脉缺血和缺血再灌注模型。其中A组分为缺血1、3、6、12、24与48 h(A1~A6)组;B组缺血1 h拔线再通后分为再灌注0、2、5、11、23和47 h(B1~B6)组。每组分别于各自时间点进行DWI成像,分别测量表观弥散系数(ADC)值并计算相对ADC(rADC)值。兔脑标本行细胞凋亡检测。结果A组DWI高信号区逐渐增大,缺血24 h趋于稳定;ADC值呈先下降后上升的变化趋势。B组平均ADC值的变化呈双峰改变,缺血再灌注2 h的rADC值趋于正常化,DWI高信号区减小;5 h的rADC值最低,以后rADC值逐渐升高,DWI高信号区逐渐扩大。永久缺血组细胞凋亡逐渐增多,12 h达高峰,以后缓慢下降;再灌注组细胞凋亡数逐渐增多,幅度较永久缺血组低,高峰出现于再灌注23 h。结论细胞凋亡的发生与缺血的程度和持续时间有关,但细胞凋亡与ADC值的演变规律没有明显的相关性。     

肌苷对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和卡配因基因表达的影响

①目的　研究肌苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和卡配因基因表达的影响 ,探讨肌苷的神经保护作用机制。②方法　取成年健康雌性SD大鼠 6 8只 ,随机分为治疗组和对照组 ,每组再随机分为缺血1.5h再灌注 2h、6h、12h、1d、2d、3d、7d、14d组 (n =4 ) ,另外 4只为假手术组。应用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉阻塞 (MCAO)再灌注模型 ,腹腔注射肌苷注射液 (10 0mg/kg) ,原位末端标记 (TUNEL)和原位杂交技术分别观察大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和卡配因mRNA表达。③结果　脑缺血再灌注后 2h皮质区与纹状体区即出现凋亡细胞 ,并逐渐增加 ,皮质区 1d达高峰 ,纹状体区 2d达高峰 ,之后逐渐减少 ,至 14d接近假手术组水平 ;经肌苷治疗后 ,皮质区和纹状体区凋亡神经细胞减少 ,其中再灌注 12h～ 7d较对照组有显著差异 (t=2 .5 2 5～ 8.987,P <0 .0 5 )。脑缺血再灌注后皮质区和纹状体区卡配因mRNA的表达于 2h逐渐增加 ,皮质区 12h、纹状体区1d达高峰 ,3d后逐渐降低 ,至 14d仍明显高于假手术组 ;肌苷治疗组再灌注 12h～ 14d ,其在皮质区和纹状体区表达较对照组显著降低 (t=4 .4 4 3～ 8.876 ,P <0 .0 5 )。④结论　脑缺血再灌注后肌苷使卡配因mRNA表达降低 ,神经细胞凋亡减少 ,提示肌苷具有抑制细胞凋亡和     

肌苷对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和HSP-70基因表达的影响

①目的　了解肌苷 (Inosine)对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和热休克蛋白 70 (HSP 70 )基因表达的影响 ,探讨Inosine的神经保护作用机制。②方法　应用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉阻塞 (MCAO)再灌注模型 ,腹腔注射Inosine注射液 (1 0 0mg/kg) ,应用原位末端标记 (TUNEL)和原位杂交技术分别观察大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和HSP 70mRNA表达。③结果　脑缺血再灌注后 2h皮质区与纹状体区即出现凋亡细胞 ,并逐渐增加 ,皮质区 1d达高峰 ,纹状体区 2d达高峰 ,之后逐渐减少 ,至 1 4d接近于假手术组水平 ;经Inosine治疗后 ,皮质和纹状体区凋亡神经细胞减少 ,其中再灌注 1 2h～ 7d与对照组比较差异有显著性 (F =3.2 38～1 1 .1 6 3,q =2 .4 5 1～ 7.2 0 0 ,P <0 .0 5 )。脑缺血再灌注后皮质区和纹状体区HSP 70mRNA的表达于 2h逐渐增加 ,皮质区 1 2h、纹状体区 1d达高峰 ,3d后逐渐降低 ,至 1 4d仍明显高于假手术组 ;Inosine治疗组再灌注 1 2h～ 1 4d ,皮质区和纹状体区HSP 70mRNA表达较对照组显著升高 (F =4 .5 73～ 1 0 .2 4 1 ,q =3.1 4 4～ 6 .992 ,P <0 .0 5 )。④结论　Inosine具有抑制细胞凋亡和神经保护作用。     

大鼠脑缺血再灌注后NGF mRNA和NGFR的表达及其意义

①目的　观察脑缺血再灌注对大鼠神经生长因子信使核糖核酸 (NGFmRNA)和神经生长因子受体(NGFR)表达的影响。②方法　线栓法制作大鼠脑缺血再灌注模型 ,采用原位杂交方法检测脑组织NGFmRNA的变化 ,免疫组织化学方法检测脑组织NGFR的变化。③结果　NGFmRNA在缺血周围区的表达 ,缺血再灌注 4h、1d、3d和 7d组较对照组明显增高 (t=9.3 2～ 13 9.5 0 ,P <0 .0 0 1) ;在缺血中心区 ,再灌注 4h组NGFmRNA表达也明显增高 (t=3 3 .0 9,P <0 .0 0 1)。NGFR在缺血周围区的表达 ,缺血再灌注 4h、1d、3d和 7d组较对照组明显增高 (t =17.2 8～ 40 .83 ,P <0 .0 0 1) ;在缺血中心区 ,再灌注 4h组较对照组明显增高 (t=13 .5 6,P <0 .0 1)。④结论　NGF与NGFR表达参与缺血再灌注后脑组织的保护作用     

脑缺血再灌注后脑组织Cyclin D1和CDK4基因的表达及其意义

①目的研究脑缺血再灌注后细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和周期蛋白依赖性蛋白激酶4(CDK4)基因表达及其与神经细胞凋亡的关系。②方法成年健康雌性SD大鼠36只,随机分为假手术组4只和实验组32只,实验组再进一步分为缺血1.5h再灌注2h、6h、12h、1d、2d、3d、7d和14d亚组,每组4只。应用线栓法经左侧颈外颈内动脉插线建立SD大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,应用原位末端标记(TUNEL)技术检测脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的变化,原位杂交技术检测CyclinD1mRNA和CDK4mRNA的表达。③结果脑缺血再灌注2h脑组织即开始出现凋亡神经细胞,并于1d和2d分别在皮质区和纹状体区达高峰。神经细胞CyclinD1mRNA和CDK4mRNA的表达分别于再灌注2h和6h开始逐渐增强,并于12h和1d分别在皮质区和纹状体区达高峰,至再灌注14d降至假手术组水平。④结论脑缺血再灌注后皮质区、纹状体区对缺血更为敏感,CyclinD1mRNA和CDK4mRNA表达可能是诱导细胞凋亡的重要因素之一。     

脑缺血再灌注损伤后NSE和S-100β的表达

①目的　观察大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织神经元特异性烯醇化酶 (NSE)和S 10 0 β蛋白的变化规律及其意义。②方法　应用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉缺血 (MCAO)再灌注模型 ,用神经等级评分法观察脑缺血再灌注后行为功能的变化 ,免疫组化法检测脑组织中NSE和S 10 0 β的动态变化。 ③结果　NSE的免疫阳性反应于缺血再灌注后 12h明显增强并达高峰 ,后随时间 (1～ 7d)变化而逐渐下降 (F =4 .0 2 1、6 .10 2 ,q =4 .318～5 .987,P <0 .0 5 ) ,至 14d降至正常。S 10 0 β免疫阳性反应于缺血再灌注后 12h明显增强 ,后随时间 (1～ 3d)变化而逐渐增强 ,7d时有所下降 (F =5 .0 17、7.92 5 ,q=3.76 5～ 5 .6 89,P <0 .0 5 ) ,14d降至正常。神经功能等级评分于再灌注 3d开始降低 ,与再灌注 2h比较 ,差异有显著性 (F =3.92 5 ,q =3.4 16～ 4 .5 4 6 ,P <0 .0 5 )。 ④结论　脑缺血再灌注损伤后脑组织NSE和S 10 0 β蛋白表达增加。     

胡黄连对缺血再灌注脑组织胶质源神经营养因子的影响

目的 观察缺血再灌注大鼠脑内胶质源神经营养因子(GDNF)及GDNF mRNA的变化,探讨胡黄连对神经元的保护作用.方法 成年健康雄性Wistar大鼠36只,应用线栓法制作脑缺血再灌注模型,用胡黄连甲醇提取物灌胃治疗后,免疫组织化学染色法观察皮质、纹状体GDNF蛋白表达,原位杂交方法观察其mRNA表达.结果 模型组缺血侧皮质区于缺血再灌1 d时GDNF蛋白、GDNF mRNA表达至高峰,与假手术组比较差异有显著性(F=14.168、40.189,q=12.565～16.847,P<0.01),14 d降至基础水平;纹状体区于缺血再灌3 d时GDNF蛋白、GDNF mRNA表达至高峰,与假手术组比较有显著性差异(F=12.531、113.312,q=11.379～12.565,P<0.01),14 d降至基础水平;胡黄连组缺血再灌注14、21 d时GDNF蛋白、GDNF mRNA表达与手术组及假手术组比较升高,有显著性差异(q=16.847～30.079,P<0.01).结论 胡黄连对脑缺血再灌注损伤神经元有保护作用,其机制可能与上调脑内GDNF表达有关.     

黄芪对脑缺血后细胞凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨黄芪对脑缺血后脑细胞凋亡相关基因的表达的影响。方法：用结扎双侧颈内动脉的方法复制脑缺血模型,免疫化和流式细胞仪分别检测bcl-2,p53免疫阳性细胞和凋亡细胞。结果：结扎双侧颈内动脉后,脑局部血流量下降,脑皮质促凋亡基因表家明显增强,但未出现凋亡群体细胞。通过腹腔注射黄芪注射液后可抑制p53表达、增强bcl-2表达,结论：黄芪可抑制缺血区促凋亡基因的表达,增强抑凋亡基因的表达。     

肌苷对缺血再灌注脑组织VCAM-1表达的影响

①目的 探讨肌苷对局灶性缺血再灌注后脑组织血管细胞间黏附分子-1（VCAM-1）表达的影响。②方法 将健康成年雌性SD大鼠70只随机分为假手术组、治疗组和对照组，治疗组在缺血再灌注前腹腔注射肌苷注射液，另两组腹腔注射相同体积的生理盐水。后两组分别在脑缺血90min后再灌注2h、6h、12h、1d、2d、3d、7d和14d等不同时间，用免疫组化技术观察VCAM-1的表达。③结果 在皮质区，VCAM-1的表达在缺血再灌注不同时间点呈现不同水平，假手术组和对照组缺血再灌注2h之前有痕量表达，VCAM-1的阳性表达在缺血再灌注6h有较明显增加，1～2d时表达达高峰，之后逐渐下降，到7d时VCAM-1的表达接近假手术组水平；在纹状体区呈现与皮质区相似的表达规律，但其表达与同时间点皮质区比较水平更高。在治疗组VCAM-1的表达规律类似于对照组，在同一时间点较对照组表达显著降低，又明显高于假手术组。④结论 适量输注肌苷可能通过VCAM-1作用机制对缺血再灌注脑组织起一定的保护作用。