幽门螺杆菌与胆囊胆固醇结石形成关系的研究

目的 研究胆囊幽门螺杆菌感染与胆囊胆固醇结石形成的关系.方法 我院2002年6月至2004年1月肝胆外科腹腔镜胆囊切除术60例,采用对照研究方法,对35例单纯胆囊结石患者(实验组)及25例单纯胆囊息肉患者(对照组)的胃幽门螺杆菌进行检测,采用PCR方法检测2组患者的胆汁及结石幽门螺杆菌细胞毒素相关基因抗原(CagA).结果 实验组胃幽门螺杆菌感染率为51.43%(18/35),对照组为48.00%(12/25),2组患者胃幽门螺杆菌感染率差异无统计学意义(χ~2=0.079,P>0.05).实验组胆汁标本中CagA 7例阳性(20.00%),结石标本中1例阳性(2.86%),对照组胆汁标本无一例阳性,2组胆汁CagA检出率差异有统计学意义(χ~2=5.822,P<0.05).结论 幽门螺杆菌DNA存在于胆囊胆固醇结石患者的胆汁及结石中,与胃幽门螺杆菌感染有关,胆囊幽门螺杆菌感染与胆囊胆固醇结石形成有关.     

幽门螺杆菌感染及HIF-1α表达与胃癌的关系研究

目的探讨幽门螺杆菌感染及低氧诱导因子(HIF)-1α表达与胃癌的关系。方法采用免疫组化检测胃癌石蜡切片标本60例、慢性胃炎标本20例中HIF-1α在慢性胃炎、早期胃癌和中晚期胃癌组织中的表达;酶联免疫吸附法检测幽门螺杆菌感染阳性率,并分析检测幽门螺杆菌感染与HIF-1α表达之间的关系。结果慢性胃炎患者中,幽门螺杆菌感染阳性率为35.0%(7/20);胃癌患者幽门螺杆菌感染阳性率为78.3%(47/60),两者之间有显著性差异(P<0.05);慢性胃炎患者中,HIF-1α表达阳性率为40.0%(8/20);胃癌患者HIF-1α表达阳性率为80.0%(48/60),两者之间有显著性差异(P<0.05);而在早期胃癌患者HIF-1α表达阳性率为54.5%(6/11);中晚期胃癌患者HIF-1α表达阳性率为85.7%(42/49),两者之间有显著性差异(P<0.05);胃癌组织中,幽门螺杆菌阳性感染率与HIF-1α表达呈正相关(r=0.344,P=0.007)。结论幽门螺杆菌感染能诱导HIF-1α表达,与胃癌的发生发展有关。     

分析血清IL-34水平与幽门螺杆菌感染相关性胃疾病的关系

目的检测胃癌、慢性胃炎患者血清中白细胞介素-34(IL-34)水平,探讨IL-34在幽门螺杆菌感染相关性胃疾病中的表达情况,以确定IL-34能否作为幽门螺杆菌感染相关性胃疾病的血清学标志物。方法从270例患有胃部疾病的住院患者中筛选出39例胃癌患者和21例慢性胃炎患者,采用酶联免疫吸附试验测定患者血清中IL-34水平,比较胃癌组、慢性胃炎组与40例体检健康者IL-34水平的表达差异。应用幽门螺杆菌抗体检测试剂盒检测上述患者和健康对照者幽门螺杆菌的感染情况。分析胃癌组和慢性胃炎组中IL-34与甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)的相关性。结果胃癌组IL-34的表达水平为6.57(3.86～9.71)pg/mL,慢性胃炎组IL-34的表达水平为12.71(2.89～19.42)pg/mL,与健康对照组比较,血清IL-34水平均升高,差异具有统计学意义(U=465,P0.01;U=203,P0.01)。39例胃癌患者中,幽门螺杆菌阳性12例(30.77%),21例慢性胃炎组中,幽门螺杆菌阳性5例(20.81%)。在胃癌患者中,幽门螺杆菌阴性组IL-34的表达水平为7.29(5.07～9.71)pg/mL,与健康对照组比较,有所升高,差异具有统计学意义(U=294,P0.01)。在慢性胃炎患者中,幽门螺杆菌阴性组IL-34的表达水平为13.60(2.80～19.41)pg/mL,与健康对照组比较,有所升高,差异具有统计学意义(U=157,P0.05)。结论血清IL-34水平在胃癌、慢性胃炎中表达增高,可以作为幽门螺杆菌感染阴性的胃癌、慢性胃炎的血清学标志物。     

胃癌患者血清胃蛋白酶原变化及其幽门螺杆菌感染的相关性研究

目的探讨胃癌患者血清胃蛋白酶原变化及其幽门螺杆菌感染的相关性。方法选取该院于2015年6月至2017年6月期间收治的胃癌患者72例(胃癌组),慢性萎缩性胃炎患者60例(胃炎组),以及同期健康体检者52例(对照组)。采用时间分辨荧光免疫法测定血清PGⅠ和PGⅡ水平。结果胃癌组血清PGⅠ和PGⅡ水平低于胃炎组和对照组(P0.05);胃炎组血清PGⅠ和PGⅡ水平均低于对照组(P0.05)。胃癌组幽门螺杆菌阳性率高于胃炎组和对照组(P0.05);胃炎组幽门螺杆菌阳性率高于对照组(P0.05)。PGⅠ和PGⅡ水平与幽门螺杆菌阳性均呈负相关。结论胃癌患者血清PGⅠ和PGⅡ水平下降,幽门螺杆菌感染阳性率较高,且PGⅠ和PGⅡ与幽门螺杆菌感染阳性呈负相关。     

幽门螺杆菌感染与胃癌前疾病的关系

目的:探讨幽门螺杆菌(HP)感染与胃癌发生的关系.方法:将2004年1月至2009年12月诊治的胃部疾病患者335例分为胃癌组(n=64)、胃癌前病变组(n=143)、良性病变组(n=69)和正常对照组(n=38),比较上述四组血清中和胃粘膜组织中HP IgG抗体检出率.结果:胃癌前病变组、胃癌组、良性病变组和正常对照组血清及胃组织中HP抗体的阳性率依次降低,胃组织HP IgG抗体阳性率虽略高于血清,但无显著性差异(P>0.05),但均明显高于良性病变组和正常对照组(P<0.05),后两者无显著差异(P>0.05).结论:HP感染可能参与胃癌前病变的发生,血清HP IgG抗体检测可作为胃癌的早期筛选指标之一.     

中医辩证加减治疗脾胃虚寒型幽门螺杆菌感染慢性胃炎的临床观察

选取2010年10月~2013年10月我院收治的67例脾胃虚寒型幽门螺杆菌感染慢性胃炎患者,随机分为观察组(n=34)和对照组(n=33),对照组给予常规西药治疗,观察组加用中医辩证加减治疗,比较两组患者的临床疗效。观察组幽门螺杆菌转阴率为90.91%,临床症状缓解率为91.18%,明显高于对照组的63.63%和69.70%;复发率为5.88%,明显低于对照组的21.21%(P0.05);观察组治疗后血清胃泌素降低水平,明显优于对照组(P0.05)。中医辩证加减治疗幽门螺杆菌感染慢性胃炎具有确切的临床疗效,可以显著提高幽门螺杆菌转阴率,降低复发率,有效改善患者胃部临床症状,值得推广应用。     

冠心病合并幽门螺杆菌感染患者中TIPE2表达水平的研究

目的探讨在冠心病合并幽门螺杆菌感染患者中肿瘤坏死因子-α诱导蛋白-8样因子-2(TIPE2)的表达水平。方法应用实时荧光定量-聚合酶链式反应检测健康对照组(甲组)、无幽门螺杆菌感染的冠心病组(乙组)和伴幽门螺杆菌感染的冠心病组(丙组)的外周血中TIPE2表达水平。结果无论是否伴幽门螺杆菌感染,冠心病组的TIPE2表达水平均明显低于对照组(P=0.000);伴幽门螺杆菌感染冠心病组的TIPE2表达水平明显低于不伴幽门螺杆菌感染冠心病组的TIPE2表达水平(P=0.000)。结论 TIPE2在冠心病患者的外周血中表达明显降低,且合并幽门螺杆菌感染者明显低于不合并幽门螺杆菌感染者。     

幽门螺杆菌感染与胃癌术后复发的关系分析

目的了解幽门螺杆菌(HP)感染与胃癌进展的关系及其预后价值。方法回顾性分析134例胃癌患者进行,了解HP感染与临床病理特征和术后复发率的关系。结果 HP阳性(n=93)患者平均年龄显著低于HP阴性(n=41)的患者且中下段胃癌的发生率较高(P<0.05)。术后随访发现,HP阳性的患者术后复发率显著高于HP阴性的患者(P=0.036)。结论对于合并HP感染的胃癌患者,术后行清除HP治疗可能具有预防复发的价值。     

阿克苏地区幽门螺杆菌Cag A、Vac A基因分型与胃溃疡及胃癌的关系

目的 探讨阿克苏地区幽门螺杆菌细胞毒素相关基因A(CagA)、空泡细胞毒素A(VacA)基因分型与胃溃疡及胃癌的关系。方法 选取2020年6月至2021年8月在该院接受胃镜检查的276例患者为研究对象,其中90例胃溃疡(胃溃疡组)、86例胃癌(胃癌组)、100例胃组织正常(正常对照组),胃溃疡组与胃癌组幽门螺杆菌检测阳性。设计引物进行各组胃组织幽门螺杆菌CagA、VacA PCR扩增及基因型判定,通过计算比值比(OR)和95%置信区间(CI)评估幽门螺杆菌CagA、VacA多态性与胃溃疡、胃癌的关系,采用多因素Logistic回归分析探讨CagA、VacA多态性位点的基因型与胃癌的关系,采用χ²检验分析幽门螺杆菌CagA、VacA多态性与胃癌患者临床病理特征的关系。提取胃癌组织进行原代培养,PCR检测VacA处理后自噬相关基因SIRT1、FOXO1、P62 mRNA的表达情况,探讨VacA是否经由SIRT1、FOXO1通路促进胃癌细胞的自噬。结果 胃癌组CagAAA基因型频率高于胃溃疡组、正常对照组,GG基因型频率低于胃溃疡组和正常对照组,差异均有统计学意义(P&...     

长期饮酒伴幽门螺杆菌感染对胃黏膜组织及血液和胃液PGE2和EGF的影响

目的探讨长期饮酒伴幽门螺杆菌感染对胃黏膜组织是否存在"二次打击现象"及胃黏膜病理学改变与血液和胃液中的PGE_2和EGF的关系。方法对2007年1月～2010年12月符合条件的120例幽门螺杆菌感染和/或长期饮酒患者进行内镜下胃黏膜活检组织病理学研究,并采用ELISA法检测血清及胃液EGF和PCE_2的水平。结果 (1)两组患者的年龄和饮酒年限比较无统计学差异(P>0.05);(2)长期饮酒伴幽门螺杆菌阳性组患者炎症活动分级明显较单纯长期饮酒组患者更严重,经统计学处理有显著差异(P=0.01);(3)长期饮酒伴幽门螺杆菌阳性组患者萎缩程度分级、肠化分级和不典型增生分级较单纯长期饮酒组患者明显,经统计学处理有差异(P=0.04);(4)长期饮酒伴幽门螺杆菌阳性组患者血清及胃液EGF浓度均明显较单纯饮酒组升高,经统计学处理有显著差异(血清及胃液P=0.00);(5)长期饮酒伴幽门螺杆菌阳性组患者血清PGE_2明显较单纯饮酒组患者升高,经统计学处理有非常明显统计学意义(P=0.00),但两组患者胃液中PGE_2对比却无明显统计学差异(P=0.61)。结论幽门螺杆菌感染同时长期饮酒对胃黏膜组织损害更明显,存在"二次打击现象",EGF和PGE_2共同参与二次打击,造成胃黏膜过度增生,存在矫枉过正现象,这种矫枉过正也可能是长期饮酒合并幽门螺杆菌感染患者容易发生消化道肿瘤的重要机制之一。     

CXCL12/CXCR4轴通过诱导miR-125b促进肝癌细胞肿瘤干性和5-氟尿嘧啶抵抗的机制

目的探究趋化因子CXCL12/趋化因子受体CXCR4轴通过诱导miR-125b促进肝癌细胞肿瘤干性和5-氟尿嘧啶(5-FU)抵抗的机制。方法选择人肝细胞癌细胞系Huh7,分为7组:对照组(正常培养的肝细胞癌系),CXCR4转染组(CXCR4模拟转染超表达),CXCR4沉默组(CXCR4低表达或者不表达),miR-125b转染组(miR-125b超表达),CXCL12+125b抑制剂组(CXCL12超表达的+抑制miR-125b的表达),5-FU处理组(10μg/L的5-FU处理细胞),5-FU+miR-125b转染组(10μg/L的5-FU处理+miR-125b超表达的细胞)。聚合酶链式反应分析miR-125b mRNA表达;蛋白质印迹法检测E-钙粘蛋白、波形蛋白、CXCR4蛋白、Caspase-3、Bcl-2和Bax的蛋白表达;Transwell分析各组细胞中的细胞迁移、侵袭测定;MTT检测细胞存活力;细胞计数试剂盒8(CCK-8)评估细胞增殖。结果与对照组相比,CXCR4转染组miR-125b mRNA、波形蛋白、CXCR4的蛋白表达显著升高,E黏着蛋白表达显著降低(P<0.05);与CXCR4转染组相比,CXCR4沉默组miR-125b mRNA、波形蛋白、CXCR4的蛋白表达显著降低,E黏着蛋白表达显著升高(P<0.05)。与对照组相比,miR-125b转染组细胞迁移、侵袭数量、细胞活力均显著增加,细胞凋亡率显著降低(P<0.05);与miR-125b转染组相比,CXCL12+125b抑制剂组,细胞迁移、侵袭数量、细胞活均显著减少,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与对照组相比,5-FU处理组细胞增殖率、Bcl-2表达显著降低,caspase-3、Bax的蛋白表达显著升高(P<0.05),与5-FU处理组相比,5-FU+miR-125b转染组细胞增殖率、Bcl-2表达显著升高,caspase-3、Bax的蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论MiR-125b通过激活CXCL12/CXCR4轴而被上调,miR-125b增强CXCR4的表达,这在触发肿瘤侵袭和进展中形成了正反馈回路。这些结果为miR-125b在肝癌进程和化学抗性的发展中的作用提供了新的线索,为肝癌的治疗提供了潜在的治疗靶点。     

miR-1290对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探究miR-1290对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法回顾性收集2018年3月至2019年6月海南省人民医院收治的45例患者,取肺腺癌组织及癌旁组织,采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测组织中miR-1290的表达。将肺腺癌细胞随机分为对照组、miR-1290 mimic组和miR-1290 inhibitor组,通过脂质体2000试剂盒,分别以无意义序列、miR-1290 mimic、miR-1290 inhibitor转染细胞。分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell小室、划痕实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。蛋白质印迹法检测Cyclin D1、p27、基质金属蛋白酶(MMP-2和MMP-9)蛋白的表达。经在线生物信息学和双荧光素酶报告基因检测miR-1290的靶基因,荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测miR-1290靶基因的表达。结果与癌旁组织比较,肺腺癌组织中miR-1290表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,miR-1290 mimic组miR-1290表达明显增加,miR-1290 inhibitor组miR-1290表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。培养48 h时,与对照组比较,miR-1290 mimic组细胞吸光度值、侵袭细胞数及划痕“愈合”率明显增加,miR-1290 inhibitor组细胞吸光度值、侵袭细胞数及划痕“愈合”率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,miR-1290 mimic组细胞周期蛋白Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量明显增加、p27蛋白表达明显降低,miR-1290 inhibitor组Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量明显降低、p27蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测显示,与对照组比较,共转染INPP4B-WT、miR-1290 mimic细胞中荧光表达量明显降低(P<0.05);与对照组比较,miR-1290 mimic组二型磷脂酰肌醇4磷酸酶(INPP4B)mRNA和蛋白表达量明显降低,miR-1290 inhibitor组INPP4B mRNA和蛋白表达量明显增加(P<0.05)。结论miR-1290在肺腺癌组织中表达上调,miR-1290可能靶向抑制INPP4B水平,促进肺腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

miR-9对SGC-7901胃癌细胞株侵袭能力的影响

目的探讨miR-9表达对SGC-7901胃癌细胞株侵袭力的影响及其可能的作用机制。 方法培养SGC-7901胃癌细胞株,分组转染miR-9阴性对照（miR-9 NC）、miR-9模拟物（miR-9 mimics）和miR-9抑制剂（miR-9 inhibitor）,上调或下调细胞中miR-9表达水平。采用Transwell实验评价胃癌细胞侵袭能力,应用SYBR Green荧光实时定量聚合酶链反应和Western blot实验检测SGC-7901细胞中MMP-2 mRNA和蛋白表达水平。对miR-9空白对照组、miR-9 mimics组和miR-9 inhibtor组miR-9的相对表达量、MMP-2 mRNA及蛋白相对表达量,Transwell侵袭实验SGC-7901细胞中侵袭细胞数量,多组间均数比较采用单因素方差分析。 结果与空白对照组SGC-7901细胞miR-9的相对表达量比较：转染miR-9 mimics组SGC-7901细胞miR-9的相对表达量明显上升,差异具有统计学意义［（1.002±0.083）vs（15.375±3.097）,P=0.012］;转染miR-9 inhibitor组SGC-7901细胞miR-9的相对表达量明显下降,差异具有统计学意义［（1.002±0.083）vs（0.279±0.039）,P=0.022］。与空白对照组SGC-7901细胞中侵袭细胞数量比较：转染miR-9 mimics组SGC-7901细胞中侵袭细胞数量明显减少,差异具有统计学意义［（72.0±2.2）vs（23.6±4.2）,P=0.026］;转染miR-9 inhibitor组SGC-7901细胞中侵袭细胞数量明显增加,差异具有统计学意义［（72.0±2.2）vs（102.4±7.6）,P=0.037］。与空白对照组SGC-7901细胞中MMP-2的mRNA及蛋白的相对表达量比较：miR-9 mimics组SGC-7901细胞中MMP-2的mRNA及蛋白相对表达量明显下降,差异具有统计学意义［（1.006±0.133）vs（0.371±0.132）,P=0.011;（0.573±0.063）vs（0.261±0.159）,P=0.024］;miR-9 inhibitor组SGC-7901细胞中MMP-2的mRNA及蛋白相对表达量明显上升,差异具有统计学意义［（1.006±0.133）vs（2.995±0.701）,P=0.015;（0.573±0.063）vs （0.708±0.079）,P=0.016］。 结论在SGC-7901胃癌细胞株中,miR-9可下调MMP-2的表达,抑制细胞的侵袭能力。     

miR-21在脂多糖诱导的人鼻黏膜上皮细胞中表达变化及作用机制

目的探讨微RNA-21(miR-21)在脂多糖诱导的人鼻黏膜上皮细胞(HNEpC)中表达变化及可能的作用机制。方法应用脂多糖诱导建立HNEpC炎症反应细胞模型,分别应用荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法检测炎症细胞模型建立前后miR-21和磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)蛋白的表达水平变化。取脂多糖诱导的HNEpC细胞,分为miR-21抑制物组和阴性对照组,应用脂质体转染法分别将miR-21抑制物和阴性对照物转染入2组HNEpC细胞,比较转染后2组细胞中miR-21和PTEN蛋白的表达、细胞增殖活性和凋亡率以及细胞上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10的水平。结果脂多糖诱导的HNEpC细胞中miR-21表达水平增高(P <0.05),PTEN蛋白的表达水平降低(P <0.05)。miR-21抑制物组细胞中miR-21表达水平低于阴性对照组(P <0.05),转染后24、48、72 h后的吸光度值均低于阴性对照组(P均<0.05),凋亡率高于阴性对照组(P <0.05),并且细胞上清液中TNF-α、IL-1β及IL-6水平均低于...     

miR-26抑制帕金森患者泛素-蛋白酶体系统对含α突触核蛋白降解作用研究

目的 探讨miR-26抑制帕金森患者泛素-蛋白酶体系统(UPS)对含α突触核蛋白(α-Syn)降解作用.方法 将120只成年雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组与模型组,每组各60只.通过1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)法建立帕金森病小鼠模型,采用反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)检测模型...     

CagA+幽门螺杆菌与胃黏膜上皮细胞凋亡的分子研究

目的：观察CagA^ Hp对胃黏膜上皮细胞凋亡的影响，进而探讨CagA^ Hp增加胃癌发生危险性的机制。方法：以TUNEL染色法研究30例CagA^ Hp阳性患者Hp根除前后胃黏膜上皮细胞凋亡的情况；通过免疫组织化学法和RT－PCR检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果：CagA^ Hp阳性患者胃黏膜上皮细胞凋亡指数为13．42％，Hp根除后，胃黏膜上皮细胞凋亡指数降为4．8％，较治疗前明显减少（P＜0．01），而CagA^ Hp仍为阳性患者胃黏膜上皮细胞凋亡指数无明显减少（P＞0．05）；bcl-2蛋白表达阳性的CagA^ Hp阳性患者Hp根除后，胃黏膜上皮细胞bcl-2蛋白表达阳性明显增多（P＜0．01），且胃黏膜上皮细胞bcl-2的mRNA表达明显增强（P＜0．01），而CagA^ Hp仍为阳性患者胃黏膜上皮细胞bcl-2蛋白表达和mRNA表达无明显增强（P＞0．05）；bax蛋白表达阳性的CagA^ Hp阳性患者Hp根除后，胃黏膜上皮细胞bax蛋白表达阳性明显减少（P＜0．01），且胃黏膜上皮细胞bax的mRNA表达明显减少（P＜0．01）；而CagA^ Hp仍为阳性患者胃黏膜上皮细胞bax蛋白表达和mRNA表达无明显减少（P＞0．05）。结论：诱导胃黏膜上皮细胞凋亡是CagA^ Hp参与胃癌发生的机制之一，CagA^ Hp通过下调bcl-2的表达、促进bax的表达诱导胃黏膜上皮细胞凋亡。     

miR-146a靶向调控MIF基因对胶质瘤细胞增殖的影响

目的研究微小RNA-146a(miR-146a)靶向调控巨噬细胞移动抑制因子(MIF)基因对胶质瘤细胞增殖的影响。方法回顾性收集2017年6月至2019年7月济南市人民医院收治的经手术病理证实的胶质瘤患者36例,取胶质瘤组织和癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测miR-146和MIF表达水平。体外培养U87胶质瘤细胞系,检测U87中miR-146a水平,并将U87细胞株分为转染miR-146a模拟物组(miR-146a mimic组)和miR-146阴性对照组(NC组)。采用双荧光素酶检测系统和集落形成实验分析miR-146a与MIF 3’UTR基因靶向关系。采用RT-PCR检测U87细胞转染miR-146a mimic和NC后,MIF mRNA和蛋白表达水平。结果脑胶质瘤组织miR-146a水平为0.30±0.13,显著低于癌旁组织(0.63±0.19),MIF水平为0.54±0.08,显著高于癌旁组织(0.41±0.15),差异均有统计学意义(P <0.05)。miR-146a mimics+pGL3-MIF 3’UTR-Wt共转染组荧光信号为0.43...     

miR-422a通过ATG12调控骨肉瘤细胞自噬及凋亡的研究

目的探讨miR-422a调控骨肉瘤细胞自噬及凋亡的作用和机制及其与靶基因ATG12的关系。方法采用瞬时转染miR-422a模拟物和抑制物分别上调或下调骨肉瘤细胞的miR-422a表达水平,采用MTT法检测各时间点骨肉瘤细胞的增殖能力,瞬时转染miR-422a后采用流式细胞术检测骨肉瘤细胞凋亡情况,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测转染miR-422a对靶基因mRNA的影响。结果RT-qPCR结果显示,miR-422a在肿瘤组织及细胞中均高表达,ATG12在肿瘤组织及细胞中均低表达。MTT法结果显示,miR-422a-mimic组吸光度值明显升高,miR-422a-inhibitor组吸光度值明显降低(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,miR-422a-inhibitor组细胞凋亡率高于空白组与NC组(P<0.0001)。Western blot检测结果显示,miR-422a-mimic组细胞中ATG12、LC3-Ⅱ和LC3-Ⅰ蛋白量明显低于空白组与NC组(P<0.05);miR-422a-inhibitor组细胞中ATG12、LC3-Ⅱ蛋白量明显高于空白组与NC组,LC3-Ⅰ蛋白量明显低于空白组与NC组(P<0.05);miR-422a-inhibitor组细胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ明显高于空白组与NC组(P<0.05)。结论miR-422a/ATG12信号轴可能调控骨肉瘤细胞的自噬及凋亡。     

miR-152通过调控FOXR2表达抑制人前列腺癌细胞增殖的研究

目的探讨人前列腺癌PC-3细胞中miR-152调控叉头框蛋白R2(FOXR2)对细胞增殖的影响。方法采用实时荧光定量PCR检测人正常前列腺上皮细胞RWPE-1和前列腺癌PC-3细胞中miR-152、FOXR2 mRNA的相对表达水平,Western blot检测FOXR2蛋白水平。miR-152 mimics、miR-152 inhibitor或FOXR2-siRNA转染PC-3细胞后,观察细胞增殖能力的变化。miR-152 mimics、miR-152 inhibitor分别与FOXR23′UTR双荧光素报告基因质粒共转染PC-3细胞,检测荧光素酶活性。miR-152 mimics和miR-152 inhibitor转染PC-3细胞后,检测miR-152、FOXR2 mRNA的相对表达水平及FOXR2蛋白水平。结果与RWPE-1细胞比较,PC-3细胞中miR-152的相对表达水平显著降低(P=0.001),而FOXR2 mRNA的相对表达水平及蛋白水平显著升高(P=0.003、0.003)。miR-152 mimics、miR-152 inhibitor或FOXR2-siRNA转染PC-3细胞后,细胞增殖能力分别显著降低、升高、降低(P=0.022、0.029、0.006)。miR-152 mimics和FOXR23′UTR野生型质粒共转染后荧光素酶活性被显著抑制(P=0.001),而共转染miR-152 inhibitor可显著增加荧光素酶活性(P=0.001)。与对照组比较,miR-152 mimics转染PC-3细胞后,miR-152的相对表达水平显著升高(P<0.001),而FOXR2 mRNA的相对表达水平及蛋白水平显著降低(P<0.001、0.001),细胞活性显著降低(P=0.013);miR-152 inhibitor转染PC-3细胞后,miR-152的相对表达水平显著降低(P<0.001),而FOXR2 mRNA的相对表达水平及蛋白水平显著升高(P<0.001、P=0.007),细胞活性显著升高(P=0.018)。结论miR-152可通过负调控FOXR2表达发挥抑制人前列腺癌PC-3细胞增殖的作用。     

miR-27a通过调控Sprouty2促进胰腺癌细胞PANC-1的生长

目的探讨miR-27a在胰腺癌细胞生长过程中的作用及相关机制。方法应用RT-PCR检测胰腺癌组织中miR-27a的表达水平;应用CCK-8生长曲线和软琼脂克隆形成实验检测miR-27a对胰腺癌细胞PANC-1生长能力的影响;应用双荧光素酶报告基因实验和Westernblot筛选miR-27a的靶基因。结果 (1)相比较于癌旁正常胰腺组织,胰腺癌组织中miR-27a表达显著上调;(2)抑制胰腺癌细胞PANC-1内源性miR-27a能够显著下调癌细胞的生长活性;(3)miR-27a能够直接调控Sprouty2基因3'UTR中的MRE序列;(4)抑制PANC-1细胞内源性miR-27a能够显著上调Sprouty2蛋白35%。结论 miR-27通过调控胰腺癌细胞PANC-1中Sprouty2蛋白表达发挥癌基因功能。