阳和汤对急性乳腺炎大鼠蛋白质组的影响

目的探究阳和汤对急性乳腺炎大鼠蛋白质组的影响,从而探索阳和汤治疗急性乳腺炎可能的途径。方法采用双向凝胶电泳(2-DE)对实验对照组、模型组、青霉素组和阳和汤组大鼠血清进行蛋白分离,经过图像分析识别差异表达蛋白质,由基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)得到差异表达蛋白的肽指纹图,用蛋白质数据库(SwissProt)搜索匹配的蛋白质。结果所获2-DE图谱分离效果较好,质谱分析共鉴定了12个差异蛋白质点,分别属于炎症相关蛋白、物质代谢相关蛋白和肿瘤相关蛋白,青霉素组的差异蛋白有三个上调,九个下调,阳和汤组的差异蛋白全部下调。结论阳和汤治疗急性乳腺炎可能与下调炎症相关蛋白、物质代谢相关蛋白和肿瘤相关蛋白有关。     

联用2-DE和MALDI-TOF-MS技术筛查胃癌组织和血清中的差异蛋白质

目的 分别建立肠型、弥漫型胃癌组织和血清双向凝胶电泳图谱,鉴定差异表达蛋白,从中发现有意义的胃癌肿瘤相关标志物.方法 采用双向凝胶电泳（two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE）分离组织和血清总蛋白,经硝酸银染色,分析选取有表达差异的蛋白质点,通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）鉴定差异蛋白.结果 获得重复性和分辨率较好的胃癌组织和血清双向凝胶电泳图谱,经MALDI-TOF-MS鉴定得到20种蛋白,在7例（58.3%）肠型胃癌组织中均有硒结合蛋白1（SBP1）表达,KIAA基因家族蛋白在弥漫型胃癌组织和血清中均有表达.结论 建立了弥漫型肠型胃癌组织和血清双向凝胶电泳图谱,获得了差异蛋白质点,为寻找胃癌的特异蛋白质作为胃癌肿瘤标志物奠定了基础.     

双向凝胶电泳进行肾癌与健康人血清中差异表达蛋白的筛选和鉴定

目的 应用双向凝胶电泳(2-DE)结合基质辅助激光解析电离化/飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术对小肾癌与健康人的血清蛋白进行差异蛋白质的筛选和鉴定,以寻找潜在的肾癌肿瘤标志物.方法 选取20例小肾癌患者和20名健康人,各抽取少量静脉血,分离出血清,应用2-DE结合MALDI-TOF-MS技术测定血清蛋白质表...     

脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证蛋白质组学比较研究

目的 建立脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证血清双向凝胶电泳图谱,初步分析其差异蛋白质表达情况.方法 双向凝胶电泳(2-DE)分离脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证血清标本,考马斯亮兰染色,PD-QUEST图像分析系统分析,从凝胶中选取分离较好的蛋白质点,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析获取肽质量指纹图谱(PMF),Mascot软件搜索SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质,对差异蛋白质进行组间对比.结果 获得了分辨率较好的脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证双向凝胶电泳图谱,质谱分析了29个差异蛋白质点,获取了87张肽质量指纹图谱,通过查询数据库鉴定了29个蛋白质,其中部分蛋白质与肝阳化风证及阴虚风动证发生发展有关.结论 建立了脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证血清双向凝胶电泳图谱,并应用质谱技术鉴定了部分差异蛋白质点,为脑梗死肝阳上亢证与阴虚风动证与正常组血清双向凝胶电泳图谱血清蛋白质组数据库的建立提供了有意义的数据,并认为蛋白质组学能在脑梗死不同证型具有代表意义.     

紫杉醇耐药与敏感细胞的差异表达蛋白分析

目的 比较人肺腺癌细胞系A549与肺腺癌紫杉醇耐药细胞系A549-Taxol的差异表达蛋白.方法 提取A549和A549-Taxol总蛋白,应用双向凝胶电泳技术(2-DE)分离,ImageMaster 5.0软件分析并筛选出两者间差异表达的蛋白点,质谱分析加以鉴定.结果 获得分辨率高且重复性好的肺腺癌耐紫杉醇细胞系及亲代细胞系2-DE图谱.ImageMaster软件分析差异大于2倍的蛋白质点共有80个,其中33个在耐药细胞系中上调,47个下调.质谱分析鉴定出19种差异表达蛋白,其中A549-Taxol中上调蛋白11种,涉及细胞骨架蛋白、代谢酶类、分子伴侣和信号转导相关蛋白质.结论 应用2-DE技术整体展示了紫杉醇耐药细胞系及敏感细胞系的蛋白表达谱,质谱法鉴定的差异蛋白为进一步从多因素角度研究紫杉醇耐药机制提供了新线索.     

结直肠癌有无肝转移血清差异蛋白质表达的研究

目的:利用蛋白质组学技术分离、鉴定结直肠癌有无肝转移患者血清中差异蛋白质,筛选诊断肝转移的血清蛋白标志物。方法:根据入组条件,收集结直肠癌无肝转移病例、有肝转移病例,在两组中随机抽取12例血清样本,同组血清等量混合进行双向凝胶电泳,建立两组血清蛋白质双向电泳图谱,用Image-Master V5.0软件寻找两组差异蛋白质点,MALDI-TOF-MS对差异蛋白质进行鉴定,查询生物信息数据库对差异蛋白质进行初步分析。结果:两组比较差异在2倍以上蛋白质有8种,其中5个蛋白质表达上调,3个蛋白质表达下调;两组每个差异蛋白灰度体平均值比较差异均有统计学意义(P0.05)。通过数据库搜索鉴定出7种蛋白质,上调的5个蛋白质分别是Transferrin、Complement component C9、RNA directed DNA polymerase(RNA指导的DNA合成酶)、Conserved hypothetical-protein(假定蛋白质)、SEC14L1 7 kDa protein;下调的2个蛋白质分别是Haptoglobin和Isoform 1 of Serum albumin。结论:结直肠癌有无肝转移患者血清中的蛋白质表达谱有一定的差异性,这些差异蛋白质可能成为诊断肝转移的血清标志物。     

紫杉醇耐药与敏感细胞的差异表达蛋白分析

目的 比较人肺腺癌细胞系A549与肺腺癌紫杉醇耐药细胞系A549-Taxol的差异表达蛋白.方法 提取A549和A549-Taxol总蛋白,应用双向凝胶电泳技术(2-DE)分离,ImageMaster 5.0软件分析并筛选出两者间差异表达的蛋白点,质谱分析加以鉴定.结果 获得分辨率高且重复性好的肺腺癌耐紫杉醇细胞系及亲代细胞系2-DE图谱.ImageMaster软件分析差异大于2倍的蛋白质点共有80个,其中33个在耐药细胞系中上调,47个下调.质谱分析鉴定出19种差异表达蛋白,其中A549-Taxol中上调蛋白11种,涉及细胞骨架蛋白、代谢酶类、分子伴侣和信号转导相关蛋白质.结论 应用2-DE技术整体展示了紫杉醇耐药细胞系及敏感细胞系的蛋白表达谱,质谱法鉴定的差异蛋白为进一步从多因素角度研究紫杉醇耐药机制提供了新线索.     

肝癌小鼠血清蛋白质图谱的建立及初步分析

目的:应用双向凝胶电泳技术(2-DE)寻找正常小鼠和H22肝癌小鼠血清之间差异表达的蛋白。方法:建立H22肝癌小鼠实验模型,对正常组和肿瘤组血清进行蛋白分离并用ImageMaster 5.0软件进行比较分析正常组和肿瘤组血清蛋白质组图谱,通过比对分析筛选出差异表达蛋白。结果:正常组和肿瘤组比较发现62个差异表达的蛋白点,其中在肿瘤组有18个表达上调,25个表达下调,10个在肿瘤组特异表达,9个在肿瘤组表达缺失。结论:肝癌的发生机制与差异性蛋白的异常表达密切相关。     

高血压脑出血急性期肝阳化风证与恢复期阴虚风动证的蛋白质组学比较研究

目的 动态观察高血压脑出血患者急性期肝阳化风证(简称肝阳化风证)、恢复期阴虚风动证(简称阴虚风动证)外周血单个核细胞的蛋白质差异表达变化,分析脑出血不同发病阶段不同中医证型的蛋白质表达规律,探讨脑出血肝阳化风证、阴虚风动证的本质内涵.方法 双向凝胶电泳(2-DE)分离脑出血急性期肝阳化风证(发病3d)、恢复期阴虚风动证(发病3月)、健康对照组(简称对照组)外周血单个核细胞蛋白质,采用考马斯亮蓝染色,PDQuest软件对三组2-DE图谱进行差异分析,选取差异蛋白质点进行MALDI-TOF-MS质谱分析,Mascot软件搜索数据库初步鉴定蛋白质.结果 获得了重复性较好的高血压脑出血肝阳化风证、阴虚风动证2-DE图谱;质谱初步鉴定出3个差异表达蛋白,分别为肌动蛋白、假想蛋白、纤维蛋白原α链前体,其中肌动蛋白在脑出血肝阳化风证组、阴虚风动证均较对照组表达下调,而阴虚风动证组又较肝阳化风证组表达下调;纤维蛋白原α链前体在脑出血肝阳化风证组表达上调,而阴虚风动组表达下调.结论 高血压脑出血急性期肝阳化风证与恢复期阴虚风动证存在差异蛋白的表达,其中肌动蛋白与纤维蛋白原α链前体可能与脑出血肝阳化风证、阴虚风证动的发展密切相关..     

早期肝癌血清蛋白质组标准模式图谱的建立及应用

目的构建早期肝癌血清蛋白质组标准模式图谱,初步探讨其在肝癌早期诊断中的临床意义。方法 (1)收集正常人、早期肝癌患者血清各12例,分别等量混匀为两组样本,去掉血清中的白蛋白和IgG。取血清各300μg与水化液充分混合,双向凝胶电泳,实验重复3次,银染,图像分析,筛选差异表达的蛋白点,构建早期肝癌血清蛋白质组标准模式图谱。(2)应用该模式图谱盲法对13例慢性肝脏疾病患者和10名健康人进行验证。结果筛选出两组间差异表达的蛋白点共38个,对表达量差异5倍以上的11个蛋白点进行分析,构建早期肝癌血清蛋白质组标准模式图谱。盲法分析示敏感性为92%,特异性90%。结论早期肝癌患者血清2-DE蛋白质图谱与健康人有一定差异,其差异表达的蛋白质及其特定组合构成有望成为早期肝癌诊断与判定预后的模式图谱。     

鼻息肉的2-DE图谱建立和蛋白质组学分析

目的:建立鼻息肉及鼻黏膜双向凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE)图谱,鉴定差异表达蛋白质。方法:收集鼻息肉及鼻黏膜样本各7例,采用固相pH梯度2-DE,凝胶银染,扫描图像,ImageMaster2-DE软件比较分析等方法,识别差异表达蛋白质,通过质谱分析得到相应肽质指纹图谱(peptide mass fingerprint,PMF),采用PeptIdent软件查询Swiss-Protand TreMBL数据库,鉴定差异表达蛋白质。结果:建立了鼻息肉和鼻黏膜蛋白质的2-DE图谱。鼻息肉和鼻黏膜3块凝胶的平均蛋白质点数分别为825±78和936±62;平均匹配点数为682±96和821±78,匹配百分率为82.7%和87.7%;同一鼻息肉的3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在等电聚焦(IEF)方向偏差为(1.06±0.14)mm,在SDS-PAGE方向偏差为(1.45±0.21)mm。比较分析两种组织各7例样本的2-DE图谱,鼻息肉和鼻黏膜蛋白质点数为1458个和1617个,平均匹配点数为1026个。质谱分析差异蛋白质点40个,获取34张PMF,查询数据库鉴定出蛋白质24个。结论:建立了分辨率高和重复性好的鼻息肉及鼻黏膜2-DE图谱,识别鉴定出一些与鼻息肉病变相关的蛋白质。     

人骨关节炎滑膜成纤维细胞差异蛋白质谱初步分析

目的应用双向凝胶电泳-质谱法分析正常人及骨关节炎(osteoarthritis, OA)患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异,探讨差异蛋白在骨关节炎发病中的作用.方法采用固相pH梯度(immobilized pH gradient, IPG)双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis, 2-DE)分离正常人及骨关节炎患者滑膜成纤维细胞总蛋白质,银染显色,PDQuest2-DE软件分析图像,比较2种细胞蛋白质组表达差异,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定.结果胶图差异分析显示36个表达水平存在明显差异的蛋白质,选取15个点进行质谱鉴定,鉴定出6个表达上调蛋白质.结论正常人及骨关节炎患者滑膜成纤维细胞表达蛋白质组存在差异.这些差异蛋白可能参与骨关节炎的发病.     

卵巢癌细胞株COC1、顺铂耐药细胞株COC1/DDP的蛋白质组学比较

目的:应用蛋白质组学技术比较人卵巢癌细胞株COC1及耐药细胞株COC1/DDP之间的蛋白质差异,寻找与顺铂耐药有关的相关蛋白质。方法:提取细胞株COC1、耐药细胞株COC1/DDP的总蛋白,用双向凝胶电泳(2-DE)的方法获得两细胞株的双向电泳图,选择差异倍数在3倍以上、边界清晰的蛋白质点胶内酶切后,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和超高效纳升液相色谱-电喷雾串联质谱(NanoUPLC-ESI-MS/MS)分析鉴定。结果:双向凝胶电泳图谱上检测到1 878个蛋白质点,匹配率为93.6%,差异倍数3倍以上的蛋白质点67个,其中COC1/DDP细胞株高表达有23个,低表达的有44个。选取差异蛋白斑点6个用两种质谱方法初步鉴定了6种蛋白质:dUTP焦磷酸酶、aarF域含蛋白激酶4(ADCK4)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、角蛋白1、角蛋白9、角蛋白10。结论:双向凝胶电泳结合质谱技术可用于肿瘤蛋白质差异的分析,有助于研究肿瘤耐药的机制。     

鼻咽癌血清比较蛋白质组学研究

目的 采用双向电泳-质谱技术优化肿瘤抗原筛选方法,筛选鼻咽癌肿瘤抗原.方法 鼻咽癌转移组、鼻咽癌未转移组和正常对照组血清先采用高丰度蛋白去除、脱盐预处理等以优化双向电泳,图像分析3组血清图谱寻找差异蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对差异蛋白质点进行鉴定.结果 通过调整、优化各个阶段的实验条件,实验结果比较稳定,重复性也比较好,分辨率得到一定的提高.图谱比较所得29个差异蛋白质点,成功鉴定了23种蛋白质.与正常组比较,转铁蛋白、锌指蛋白544、甲状腺激素结合蛋白、NM23-H1蛋白和FAD合成酶在两组鼻咽癌患者中低表达,12-脂氧合酶、血清淀粉样蛋白A1前体、细胞色素P450、sICAM-1、组织蛋白酶G和组蛋白赖氨酸特异性脱甲基酶1等在两组鼻咽癌中均高表达.其中12-脂氧合酶、sICAM-1、组织蛋白酶G和组蛋白赖氨酸特异性脱甲基酶1在鼻咽癌转移组中比未转移组中表达增高,而热休克蛋白70则只在鼻咽癌转移组表达.结论 双向电泳-质谱技术可发现鼻咽癌发生发展过程中血清蛋白表达谱质或量的变化,从而为鼻咽癌的早期诊断和治疗奠定基础.     

鼻咽癌细胞系5-8F和6-10B的差异蛋白质组学研究

目的:比较不同转移潜能的鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞系5-8F和6-10B细胞蛋白质组的差异,筛选NPC转移相关蛋白质.方法:应用二维凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)技术分离具有相同遗传背景、不同转移潜能的鼻咽癌细胞系5-8F和6-10B细胞的蛋白质,图像分析识别差异表达蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质,Western免疫印迹方法验证部分差异蛋白质在2株细胞中的表达水平.结果:建立了5-8F和6-10B细胞蛋白质的2-DE图谱,识别了65个差异表达的蛋白质点,鉴定了15个非冗余的差异表达蛋白质.Western免疫印迹分析证实了差异蛋白质膜联蛋白A1和14-3-3 protein sigma在5-8F和6-10B细胞中的差异表达水平.结论:15个非冗余的差异表达蛋白质为研究NPC转移机制提供了实验依据.     

大鼠在体肺缺血再灌注损伤热休克蛋白25和硒结合蛋白1表达的关系

目的 应用蛋白质组学方法比较大鼠肺缺血再灌注(I/R)肺组织与正常对照组肺组织的差异蛋白质表达,探讨移植肺缺血再灌注损伤机制.方法 建立模拟在体左肺原位移植的大鼠改良模型,在缺血再灌注后4 h获取肺组织标本作为实验组(I/R组).蛋白质组技术比较I/R组和正常对照组大鼠肺组织的蛋白质变化,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析获得肽质量指纹图谱,经Matrix Science查询软件搜索获得匹配的蛋白质.结果 获得分辨率较高、重复性较好的I/R组与对照组的双向凝胶电泳图谱,两组各自3块凝胶的平均蛋白质点数分别为489±52和511±83(P＞0.05),匹配率达89.28%和91.22%(P＞0.05).发现43个差异蛋白质点(P＜0.05),质谱分析鉴定出14个与肺缺血再灌注损伤相关的蛋白质.Western印迹分析证实HspSP25和硒结合蛋白l(SBP-I)的蛋白表达在I/R组早期显著升高(均P＜0.05).结论 肺缺血再灌注损伤后早期,具有应激保护功能的Hsp25和SBP-1等表达上调;而其他鉴定出的差异表达蛋白质口可能在能量代谢、组织抗应激、细胞凋亡及信号转导等方面发挥重要作用.     

肝纤维化组织相关功能蛋白质组的差异分析

目的建立肝纤维化组织双向凝胶电泳图谱,初步分析蛋白质组的变化与差异表达。方法利用2-DE分离肝纤维化组织和正常肝组织总蛋白质后,经图像分析识别差异表达的蛋白点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定差异蛋白质,并用Western印迹方法对其中3个蛋白质的表达水平变化进行验证。结果比较分析肝纤维化组织和正常肝组织的2-DE图谱,找到差异蛋白点59个,其中在肝纤维化组织表达上调30个,下调29个。并对其中15个表达差异3倍以上的蛋白点进行了肽质量指纹图分析,鉴定出10个与细胞信号转导、细胞增殖、氧化应激有关的蛋白质,14-3-3β、DJ-1及PEBP蛋白的Western印迹验证结果与2-DE的检测结果相一致。结论肝纤维化组织和正常肝组织之间存在一些差异表达的蛋白质,为进一步阐明肝纤维化的发生机制奠定基础。     

蛋白酶体抑制剂PS-341诱导骨髓瘤细胞凋亡的 蛋白质组学研究

目的：比较蛋白酶体抑制剂PS-341处理多发性骨髓瘤细胞U266前后蛋白质组的差异,探究PS-341潜在的药物靶点,为多发性骨髓瘤的临床治疗提供理论依据。方法：用蛋白酶体抑制剂PS-341处理骨髓瘤细胞U266,应用双向凝胶电泳技术分离PS-341处理前后的U266细胞的蛋白质,ImageMaster 2D Platinum图像分析软件识别药物处理前后U266细胞的差异表达蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质。Western印迹法检测差异蛋白质BAG-2在药物处理前后U266细胞中的表达水平。结果：建立了PS-341处理前后U266细胞蛋白质的双向凝胶电泳图谱,找到55个差异表达的蛋白质点,鉴定了31个差异表达的蛋白质,有27个蛋白质在PS-341处理后下调。Western 印迹分析证实BAG-2在药物处理前后U266细胞中的表达水平存在差异。结论：处理后下调的一些蛋白可能是蛋白酶体抑制剂PS-341潜在的药物靶标。     

人耐药肺腺癌A549/DDP细胞株的差异蛋白质组学

目的：建立A549与A549/DDP两组细胞株的双向凝胶电泳图谱,识别并鉴定其差异表达的蛋白质,筛选肺腺癌耐药相关蛋白质。方法：收集A549与A549/DDP两组细胞株的总蛋白质,应用二维凝胶电泳（two-dimensional gel electrophoresis,2-DE）进行分离应用,图像分析识别差异表达的蛋白质点,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定差异蛋白质点。使用Western免疫印迹对其中4个蛋白质进行验证。结果：建立了A549与A549/DDP细胞蛋白质的2-DE图谱,识别了40个差异表达的蛋白质点,鉴定了23个差异表达蛋白质。Western免疫印迹证实了差异蛋白质热休克蛋白β1,膜联蛋白A4,丝切蛋白l和波形蛋白在A549与A549/DDP细胞中的差异表达水平。结论：23个差异表达蛋白质为研究肺腺癌耐药机制提供了实验依据。     

大鼠星形胶质细胞与C6胶质瘤细胞的蛋白质组学分析

目的探讨星形胶质瘤细胞与星形胶质细胞间的蛋白谱变化。方法选择星形细胞来源的C6胶质瘤细胞和体外培养纯化大鼠皮层的星形胶质细胞进行蛋白组学分析。星形细胞和C6细胞双向凝胶电泳（2-DE）的凝胶图像用PDQuest软件比较,差异蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）和生物信息分析,部分蛋白质的差异表达结果用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）验证。结果获得了24个有明显表达变化的蛋白点;17个蛋白质得到质谱结果,与星形胶质细胞相比,经生物信息学分析确认的6个蛋白质中,磷酸甘油酸变位酶1、生物转化酶、谷胱甘肽S-转移酶P、钙网织蛋白和膜联蛋白A2在C6细胞中表达量较高,而波形蛋白和肌动蛋白γ-肌动蛋白在C6细胞中表达量较低。磷酸甘油酸变位酶1、膜联蛋白A2和波形蛋白经半定量RT-PCR验证与2-DE结果相符。结论本研究发现的差异表达蛋白质与许多重要的细胞生理活动和功能有密切关系,包括无氧酵解过程、细胞骨架组装、生物转化和信号转导,可能与胶质瘤的生长迅速、浸润迁移和抗药性相关。