缺氧对COX-2在胰腺癌PC-3细胞株中表达的影响

目的检测环氧合酶-2(COX-2)在胰腺癌细胞株中的表达,并通过二氯化钴(CoCl2)诱发细胞生存的缺氧环境,探讨缺氧对胰腺癌PC-3细胞株COX-2表达的影响.方法采用免疫组织化学检测COX-2在PC-3细胞株中的表达,运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观测CoCl2与PC-3细胞COX-2表达间的量-效和时-效关系.结果胰腺癌PC-3细胞株中存在COX-2的表达,CoCl2可上调细胞中COX-2的表达,并且与COX-2表达间表现出一定剂量和时间范围内的依赖性关系.结论胰腺癌PC-3细胞株中存在着COX-2的表达,缺氧可诱导COX-2在细胞中的表达.     

Cox-2抑制剂celebrex对胰腺癌PC-3细胞系VEGF表达的影响

目的：探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂celebrcx对胰腺癌PC-3细胞系血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法：应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附测定(ELISA)方法，检测选择性COX-2抑制剂celebrex与胰腺癌PC-3细胞株VEGF表达间的时-效关系和量-效关系。结果：celebrex在一定时间和剂量范围内可抑制PC-3细胞中VEGF的表达。结论：COX-2可能参与了胰腺癌PC-3细胞株VEGF的分泌，而选择性COX-2抑制剂celebrcx则可在一定时间和剂量范围内抑制VEGF的表达。     

HCV C 蛋白调控肝门部胆管癌细胞中NF-κB活性的研究

目的探讨HCV C蛋白在肝门部胆管癌细胞中对核转录因子κB(NF-κB)调控作用.方法利用稳定表达HCV C蛋白的QBC939细胞株(QBC939 HCV C ),通过NF-κB报道基因分析法、凝胶迁移率分析(EMSA)检测HCV C蛋白增强肝门部胆管癌细胞NF-κB的DNA结合活性和反式激活活性.RT-PCR、Western blot检测HCV C蛋白对核转录因子κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA及p50、p65、IκBα蛋白表达及IκBα蛋白磷酸化的影响.结果①EMSA结果显示QBC939HCV C 细胞系中NF-κB相对信号密度明显比QBC939细胞高.②将pNF-κB-lun表达质粒转染稳定表达HCV C蛋白胆管癌细胞系中,通过单光子检测仪检测荧光素酶活性,结果显示QBC939HCV C 细胞中活化NF-κB为12.8倍,而QBC939细胞中NF-κB为2.6倍.③RT-PCR显示IκBα mRNA在QBC939 HCV C 细胞和QBC939细胞中的表达无明显差异;Western blot结果显示稳定表达HCV C蛋白的QBC939 HCV C 细胞株的胞核中的p50、p65蛋白高水平表达,而未转染HCV C蛋白的QBC939细胞仅检测出极低水平的p50、p65蛋白.在QBC939HCV C 细胞胞浆中IκBα蛋白低水平表达,QBC939细胞高水平表达,但IκBα蛋白磷酸化水平则相反.结论HCV C蛋白通过增加IκBα降解激活的NF-κB在肝门部胆管癌的发生中起重要作用.     

COX-2反义寡核苷酸对胰腺癌PC-3细胞株COX-2 mRNA和蛋白表达的影响

目的探讨环氧合酶(COX)-2反义寡核苷酸(ODNs)对胰腺癌PC-3细胞株COX-2 mRNA和蛋白表达的影响,并进一步阐明COX-2反义ODNs基因治疗胰腺癌的可行性.方法设计和合成COX-2反义ODNs,体外转染胰腺癌PC-3细胞,然后通过荧光显微镜、RT-PCR及Western blotting证实转染效果. 结果转染COX-2反义ODNs后,PC-3细胞COX-2 mRNA和蛋白表达均下降,且体现出一定的剂量和时间依赖性关系. 结论 COX-2反义ODNs转染胰腺癌PC-3细胞株后,可下调细胞中COX-2 mRNA和蛋白表达,COX-2反义ODNs有可能达到胰腺癌基因治疗的效果.     

HIF-1α对胶质瘤U251细胞增殖及侵袭的影响

目的 探讨氯化钴(CoCl2)模拟化学缺氧复氧中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白的表达及其对人胶质瘤U251细胞增殖及侵袭的影响.方法 在培养基中加入和去除CoCl2模拟化学缺氧和缺氧复氧,采用免疫印迹法(Western blot)检测CoCl2与HIF-1α蛋白表达关系;通过MTT、过河实验、黏附试验分别检测细胞侵袭、迁移运动能力和黏附能力.结果 人胶质瘤U251细胞中存在HIF-1α蛋白表达;在CoCl2模拟缺氧的时-效关系实验中,100μmol/L CoCl2刺激细胞6h、12h、24h时HIF- 1α蛋白呈递增(分别 为1.024±0.03、2.35±0.04、2.82±0.12)(P<0.05),24h达高峰,48h明显下降(1.82±0.05).同时,在量-效关系实验中,CoCl2 50μmol/L、100μmol/L和150μmol/L刺激细胞24h时HIF-1α蛋白呈递增(分别为1.78±0.03、1.81±0.03、2.12±0.12)(P<0.05);MTT发现CoCl2诱导的缺氧对细胞增殖起抑制作用;过河实验发现缺氧24h复氧24h后细胞的迁移运动能力增加;细胞黏附实验发现缺氧24h复氧24h后细胞的黏附力增加.结论 CoCl2能诱导人胶质瘤U251细胞HIF-1α蛋白过度表达,而且存在一定的时-效关系;经CoCl2诱导的缺氧后复氧,肿瘤细胞增殖能力下降,细胞的迁移运动能力和黏附能力增加.     

POKemon和NF-κB p65在肝癌细胞中的信号调控

目的:旨在探讨原癌基因POKemon和核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB) p65在肝癌细胞中的信号调控作用.方法:采用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)和蛋白质印迹法分别检测POKemon、NF-κB p65 mRNA和蛋白在肝癌细胞株HepG2和SMMC7721及人胚胎肝细胞LO2中的表达情况;随后应用小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)法依次分别抑制POKemon和NF-κB p65在肝癌细胞中的表达,观察二者在肝癌细胞中的变化,并应用FCM法检测对肝癌细胞凋亡的影响.结果:POKemon和NF-κB p65在肝癌细胞HepG2和SMMC7721中的表达量明显高于人胚胎肝细胞LO2;特异性针对POKemon基因的siRNA抑制POKemon的表达后,NF-κB p65在HepG2和SMMC7721细胞中的表达量也明显下降,转染前后分别为2.12±0.14vs 1.37±0.11和2.08±0.16vs 1.35±0.13,差异有统计学意义(P＜0.05),且肝癌细胞凋亡明显增加分别为(5.07±0.46)％vs (39.65±3.75)％和(5.71±0.83)％vs (33.21±3.66)％,差异有统计学意义(P＜0.05);特异性针对NF-κB基因的siRNA抑制NF-κB p65的表达后,POKemon在HepG2和SMMC7721细胞中的表达则无明显变化,其表达量转染前后分别为1.86±0.12vs 1.90±0.13和1.91±0.11 vs 1.85±0.11,差异无统计学意义(P＞0.05),但明显提高HepG2和SMMC7721细胞的凋亡率,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:原癌基因POKemon可通过调控NF-κB p65的表达而阻遏肿瘤细胞凋亡,促进肝癌的发生、发展.     

EGF介导的NF-κB促进体外胰腺癌细胞的uPA表达与侵袭力

目的探讨表皮生长因子(EGF)促进胰腺癌细胞侵袭和转移的分子机制。方法用WST-1细胞增殖实验、细胞黏附实验和Transwell体外侵袭实验检测EGF对胰腺癌细胞系NOR-P1的增殖、黏附及侵袭能力的影响。采用Western blot和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测uPA的表达。用凝胶电泳迁移实验检测核因子-κB(NF-κB)活性。结果EGF能够明显促进胰腺癌细胞的侵袭能力,但对胰腺癌细胞的黏附力及增殖并无明显影响。EGF明显上调胰腺癌细胞的NF-κB活性和尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)表达。NF-κB抑制物四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯(PDTC)能够明显抑制EGF所诱导的NF-κB活性,同时也抑制EGF所诱导的uPA表达及胰腺癌细胞的侵袭力。结论EGF通过活化NF-κB促进胰腺癌细胞的uPA表达和侵袭力,采用NF-κB抑制剂阻断NF-κB通路有利于胰腺癌的综合治疗。     

核转录因子-κ B在胰腺癌中的表达及其与上皮细胞间质转化的关系

目的 研究核转录因子-κ B(NF-κ B)在人类胰腺癌组织中的表达及与上皮细胞间质转化(EMT)标志物上皮性钙黏附蛋白(E-cad)和波形蛋白(Vimentin)的关系,探讨其与胰腺癌恶性生物学行为的关系.方法 应用免疫组织化学法检测62例人类胰腺癌组织中NF-κ B、上皮源性标志物E-cad蛋白、间质源性标志物Vimentin蛋白的表达,并分析它们相互间及其与临床病理因素间的关系.结果 胰腺癌组织中NF-κ B和Vimentin蛋白阳性表达率分别为81%(50/62)和61%(38/62),E-cad蛋白的表达缺失率为55%(34/62).在胰腺癌组织中NF-κ B的表达和Vimentin蛋白的阳性表达、E-cad蛋白的缺失表达均呈正相关(r值分别为0.343、0.352,均P＜0.05),并且NF-κ B的阳性表达与胰腺癌的淋巴结转移(x2=11.761,P＜0.05)、远处转移(x2=9.225,P＜0.05)相关,而与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤类型及分化程度无关(P＞0.05).E-cad蛋白的表达缺失、Vimentin蛋白的阳性表达与胰腺癌的淋巴结转移、远处转移均有相关性(x2值分别为6.914、4.984;7.753、5.144,均P＜0.05).结论 NF-κ B在胰腺癌中表达增高,同时可能通过诱导胰腺癌组织的EMT而促进胰腺癌的浸润和转移.

Abstract：

Objective To investigate the expression of NF-κB and epithelial-mesenchymal transition (EMT) related markers E-cadherin and Vimentin proteins in human pancreatic cancer tissues and its relation with the malignant features. Methods The expression of NF-κB、E-cadherin and Vimentin proteins in 62 cases of pancreatic cancer tissues were detected by using immunohistochemistry and compared with the clinicopathological data of pancreatic cancer. Results The positive expression rate of NF-κB was 81% (50/62), Vimentin protein increased of expression was 61% (38/62), and E-cadherin protein loss of expression was 55 % (34/62) in pancreatic cancer. The positive expression rate of NF-κB was significantly related with the lymph node metastasis (x2=11.761, P＜0.05), distant metastasis (x2=9.225, P＜0.05), the absent expression of epithelial marker E-cadherin protein (r =0.352, P ＜0.05) and the positive expression of mesenchymal marker Vimentin protein (r=0.343, P ＜0.05), but there was no relation with the patients gender,age, tumor location, tumor type and tumor differentiation (P ＞0.05). In addition, the significant correlation of E-cadherin expression loss and Vimentin expression with tumor lymph node metastasis and distant metastasis was found (x 2= 6.914, 4.984, 7.753, 5.144, P ＜0.05). Conclusion The overexpression of NF-κB in pancreatic cancer may accelerate invasion and metastasis of pancreatic cancer through inducing EMT.     

P2X7R激动剂BzATP对非小细胞肺癌A549细胞生长和凋亡的影响

目的 研究配体门控离子通道P2X7受体(P2X7R)在非小细胞肺癌A549细胞中的表达,观察P2X7R激动剂2'-3'-O-(4-苯甲酰-苯甲酰)腺苷三磷酸三乙烷胺盐(BzATP)对A549细胞生长及凋亡的影响,并探究相关作用机制.方法 采用免疫荧光法检测P2X7R在A549细胞中的表达.用不同浓度的BzATP(150、300、600 μmol/L)处理,未用BzATP干预的细胞作为对照组.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)和Hoest33342染色法分别检测细胞存活率与凋亡情况,酶联免疫吸附试验检测上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度,Western blotting检测核转录因子-κB(NF-κB) p65、NF-κB抑制因子α(IκBα)及磷酸化NF-κB抑制因子α(phospho-IκBα)蛋白的表达.结果 P2X7R在A549细胞膜上表达.在300、600 μmol/L BzATP作用下A549细胞存活率分别为(67.87±8.98)％、(44.73±6.92)％,较对照组(98.60±1.44)％明显下降,差异均具有统计学意义(=4.481,P=0.027;t =3.920,P=0.038).BzATP可促进细胞凋亡,并且300、600 μmol/L BzATP可上调细胞培养上清中TNF-α浓度,分别为(57.35±6.41)pg/ml、(78.63±11.33) pg/ml,与对照组(42.56±0.37) pg/ml比较差异具有统计学意义(t=6.410,P=0.035;t=11.330,P=0.005).此外,BzATP可下调NF-κB p65的表达,上调IκBα的表达,对phospho-IκBα的表达无明显作用.结论 P2X7R表达于A549细胞膜,BzATP能够抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与促进细胞中TNF-α的释放,抑制NF-κB通路有关.     

微环境乏氧对胰腺癌PC-2细胞生长及形态的影响

目的:观察体外培养的胰腺癌PC-2细胞在化学乏氧剂CoCl2作用后形态学及生长曲线的变化,为进一步探讨乏氧对肿瘤细胞的影响寻求直观依据.方法:用CoCl2处理PC-2细胞模拟肿瘤体内乏氧模型,应用倒置显微镜、透射电镜观察细胞形态学变化,MTT法检测不同浓度、不同时间CoCl2处理后的PC-2细胞生长情况.结果:化学乏氧剂CoCl2作用后的胰腺癌PC-2细胞形态发生改变,与正常细胞相比,乏氧后的细胞体积变小、伪足少而短,易分辩个体,但并不可见脱落细胞增多或减少;电镜下可见线粒体肿胀,染色质边集,少见凋亡小体.不同浓度CoCl2对胰腺癌PC-2细胞生长曲线有不同程度的改变,对数生长期和平台期提前,对数期缩短.随着CoCl2浓度增加,曲线越趋于低平.结论:化学乏氧剂CoCl2对胰腺癌PC-2细胞具有一定的凋亡诱导作用,同时也缩短了细胞正常的生长期,细胞形态发生相应改变.     

缺氧条件下YC-1对人胰腺癌细胞VEGF和GPI基因的抑制效应

目的探讨缺氧条件下3-(5’-hydroxymethyl-2’-furyl)-1-benzylindazole(YC-1)对人胰腺癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)和磷酸葡萄糖异构酶(GPI)基因的调控作用及其机制。方法缺氧条件下体外培养胰腺癌PC-3细胞株,免疫细胞化学染色法检测常氧和缺氧条件下缺氧诱导因子- 1α(HIF-1α)的表达。半定量RT-PCR检测YC-1对PC-3细胞VEGF、GPI、HIF-1αmRNA表达的调节作用。Western blot检测YC-1对PC-3细胞HIF-1α蛋白表达的调节作用。MTT法检测YC-1对缺氧PC-3细胞恶性增殖的影响。结果缺氧条件下,HIF-1α主要表达于PC-3细胞胞核内。随着YC-1浓度升高,VEGF和GPI mRNA表达、HIF-1α蛋白表达逐渐受抑,并呈明显的剂量依赖性;实验组HIF- 1αmRNA均呈强表达,其表达水平不随YC-1作用浓度的升高而降低。缺氧条件下,实验组细胞增殖抑制率均增高,100μmol／L YC-1组细胞增殖抑制率达73．28%±2．01％。结论缺氧状态下,YC-1抑制人胰腺癌PC-3细胞VEGF和GPI基因转录与其抑制HIF-1α蛋白的表达有关,YC-1能够抑制PC-3细胞生长和增殖。     

核因子κB在胰腺癌中的表达及与VEGF和p53表达的相关性

目的探讨核因子κB(NF-κB,p65)在胰腺癌组织中的表达及其与VEGF、p53蛋白表达的相互关系。方法电泳迁移率变动分析(EMSA)测定45例胰腺癌及癌旁组织、8例慢性胰腺炎和9例正常胰腺组织中NF-κB的活性,Western印迹法检测NF-κB、IκB-a蛋白表达;免疫组织化学法检测胰腺癌中VEGF、p53、p65蛋白表达。结果NF-κB在肿瘤组织中被激活;NF-κB在胰腺癌、旁组织、慢性胰腺炎、正常胰腺组织中阳性表达率分别为71.0%、20.0%、12.5%、0(P<0.05);NF-κB基因表达与胰腺癌的分化程度、临床分期、肿瘤大小无关(P>0.05),与淋巴结转移和周围浸润有相关性(P<0.05);转移癌中NF-κB蛋白表达与VEGF、p53蛋白表达显著相关。结论核因子κB基因在胰腺癌中过度表达并与VEGF、p53一起参与胰腺癌的浸润、转移过程。     

微环境乏氧对胰腺癌PC-2细胞生长及形态的影响

目的：观察体外培养的胰腺癌PC-2细胞在化学乏氧剂CoCl2作用后形态学及生长曲线的变化,为进一步探讨乏氧对肿瘤细胞的影响寻求直观依据。方法：用CoCl2处理PC-2细胞模拟肿瘤体内乏氧模型,应用倒置显微镜、透射电镜观察细胞形态学变化,MTT法检测不同浓度、不同时间CoCl2处理后的PC-2细胞生长情况。结果：化学乏氧剂CoCl2作用后的胰腺癌PC-2细胞形态发生改变,与正常细胞相比,乏氧后的细胞体积变小、伪足少而短,易分辩个体,但并不可见脱落细胞增多或减少;电镜下可见线粒体肿胀,染色质边集,少见凋亡小体。不同浓度CoCl2对胰腺癌PC-2细胞生长曲线有不同程度的改变,对数生长期和平台期提前,对数期缩短。随着CoCl2浓度增加,曲线越趋于低平。结论：化学乏氧剂CoCl2对胰腺癌PC-2细胞具有一定的凋亡诱导作用,同时也缩短了细胞正常的生长期,细胞形态发生相应改变。     

5-氟尿嘧啶诱导结肠癌细胞凋亡与NF-κB活化及uPA表达的关系

目的 研究5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导人结肠癌细胞(HCT116)凋亡与核转录因子-κ B(NF-κ B)活化以及尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)表达的关系,并观察吡咯烷二硫氨基甲酸盐(PDTC)抑制NF-κ B活化对5-Fu诱导结肠癌细胞凋亡及uPA表达的影响.方法 采用流式细胞仪Annexin V-FITC法检测结肠癌细胞HCT116凋亡;采用免疫组织化学方法半定量分析HCT116细胞NF-κB及uPA表达的动态变化.结果 5-Fu在诱导HCT116细胞凋亡的同时有NF-кB活化,1μmol/L PDTC能显著增加5-Fu诱导HCT116细胞凋亡及抑制5-Fu诱导的HCT116细胞NF-κB活化作用(P＜0.05),uPA变化与NF-κB一致.结论 5-Fu在诱导HCT116细胞凋亡的同时活化了NF-κ B,uPA表达亦随之增强;PDTC在抑制5-Fu诱导的HCT16细胞NF-κB活化的同时增强了5-Fu诱导细胞凋亡的作用,uPA表达也相应下降.     

三氧化二砷诱导K562细胞凋亡过程中IκB-α,NF-κB蛋白表达的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导慢性粒细胞性白血病K562细胞凋亡过程中IκB-α以及NF-κB的表达变化.方法应用不同剂量As2O3诱导K562细胞凋亡,以Western-Blot免疫印迹电泳检测NF-κB,IκB-α的表达,流式细胞术检测K562细胞凋亡及分析IκB-α的阳性表达率变化.结果 As2O3可诱导K562细胞凋亡,随着As2O3浓度从1 μmol/L到4 μmol/L的增高细胞凋亡率由16.0%增加到60.6%,胞浆中IκB-α阳性表达率则由88.1%减少到49.2%,胞核中p65量逐渐增加.结论 As2O3可诱导K562细胞凋亡,在此过程中伴有NF-κB的激活,在一定剂量范围内激活的程度随着砷剂浓度的增加而增强.砷剂激活NF-κB通过其抑制蛋白IκB-α的降解.     

细胞间黏附分子-1和核因子-Κb在胃癌组织中的表达及其关系

目的:研究细胞间黏附分子-1(inter-cellular adhesion molecules-1,ICAM-1)和核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)在胃癌组织中的表达及其关系。方法:采用免疫组化SP法检测142例胃癌组织中ICAM-1和NF-κB的表达情况,与相应癌旁正常组织(30例)作对照。结果:胃癌组织中NF-κB的阳性表达率62.0%(88/142),显著高于对照组,P=0.000;NF-κB表达与淋巴结转移、组织学类型和远处转移的临床病理指标明显相关,P值分别为0.043、0.014和0.049。胃癌组织中,ICAM-1的阳性表达率为72.5%(103/142),对照组无表达,两者比较,差异有统计学意义,P=0.000;且与淋巴结转移差异有统计学意义,P=0.000。NF-κB和ICAM-1的表达呈显著正相关,r=0.477,P=0.000。结论:NF-κB通过对ICAM-1的转录调控在胃癌发生、转移过程中发挥重要作用,可能将成为胃癌治疗的一个新靶点。     

大肠癌组织中核因子-κB、C-myc和ICAM-1的表达及意义

目的探讨核因子-κB(NF-κB)、癌基因C-myc和细胞间黏附分子(ICAM-1)的活性表达在大肠癌发生、转移中的作用及其临床意义.方法采用免疫组化S-P法测定50例大肠癌、16例大肠腺瘤、9例大肠腺瘤癌变和8例正常大肠组织中NF-κB p65、C-myc和ICAM-1的表达.结果大肠癌、大肠腺瘤癌变组织中NF-κB p65、C-myc的表达明显高于大肠腺瘤(P＜0.01),C-myc在正常大肠组织中无表达;NF-κB p65、C-myc在大肠癌中的表达呈显著正相关(r=0.35,P＜0.01);NF-κB p65和ICAM-1在有转移的大肠癌组织中的表达比无转移的大肠癌显著增加(P＜0.01),且两者与大肠癌的转移呈显著正相关(r=0.29,P＜0.01).结论NF-κB通过对C-myc和ICAM-1的转录调控在大肠癌的发生、转移过程中发挥重要作用,可能将成为大肠癌治疗的一个新靶点.     

手霉素对人卵巢癌3AO细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨手霉素对人卵巢癌3AO细胞体外增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制.方法:MTT法检测手霉素对3AO细胞的增殖抑制作用;Giemsa染色、透射电子显微镜下观察及FCM分析手霉素对3AO细胞的凋亡诱导作用;FCM检测手霉素对3AO细胞 ras、survivin和核因子-κB(nuclear factor-kappa B, NF-κB)(p65)蛋白表达的影响.结果:手霉素能显著抑制3AO细胞的增殖(P<0.05),并且这种抑制作用随着手霉素浓度的增加和作用时间的延长而增强.Giemsa染色和透射电子显微镜下观察发现,手霉素可诱导3AO细胞出现典型的凋亡形态学变化及超微结构改变.FCM分析结果显示,与对照组相比,手霉素诱导3AO细胞凋亡率明显增加(P<0.05),细胞周期中的G2/M期细胞也明显增加(P<0.05);3AO细胞的ras、NF-κB(p65)和survivin蛋白的表达水平明显下降(P<0.05).结论:手霉素可明显抑制人卵巢癌3AO细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调细胞ras、NF-κB(p65)和survivin蛋白的表达有关.     

NF-κBp65、Bcl-2、Bcl-xL蛋白在胰腺癌中的表达及其与P53和凋亡指数的关系

背景与目的:核因子κB通过调控下游bcl-2家族基因表达参入细胞凋亡调节过程,而p53除了参入细胞周期调节外也参入依赖bcl-2基因的细胞凋亡调控。在胰腺癌中NF-κBp65、Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达与p53和凋亡的关系还不清楚。本研究系统地分析了核因子κBp65及其下游的bcl-2和bcl-xL抑凋亡基因在胰腺癌(PC)中的表达以及与P53蛋白表达和凋亡指数(AI)的关系。方法:免疫组化法检测25例胰腺导管腺癌(PC)和9例正常胰腺组织(NP)中P53蛋白表达;Western印迹法分析NF-κBp65蛋白表达;RT-PCR分析Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达,TdT酶介导的原位缺口标记(TUNNEL)法了解胰腺癌细胞凋亡情况(AI)。结果:P53在PC组织阳性率(56%,14/25),高于NP组织阳性率(P<0.00);NF-κBp65、Bcl-2和Bcl-xL在PC组织表达相对值分别为:1.06±0.16、0.79±0.13、0.76±0.24,分别高于NP组织:0.23±0.016、0.23±0.074、0.18±0.026(分别P<0.05);14例p53阳性PC中,NF-κBp65、Bcl-2和Bcl-Xl表达相对值分别为:1.32±0.23、0.92±0.33、0.82±0.21;11例p53阴性PC中,NF-κBp65、Bcl-2和Bcl-xL表达相对值分别为:0.78±0.15、0.54±0.19、0.71±0.28(分别P<0.05,P<0.05,P>0.05);NF-κBp65和Bcl-2分别与P53表达有明显的正相关性(分别P<0.01,P<0.05),Bcl-xL与P53无相关性(P>0.05),NF-κBp65与Bcl-XL表达正相关(P<0.01),而NF-κBp65与Bcl-2表达无相关性(P>0.05);胰腺癌平均AI为(15.4±6.48)%,NF-κBp65表达与AI负相关(r=-0.297,P<0.05),而Bcl-2、Bcl-xL与AI无相关性(r=-0.203,P>0.05;r=-0.156,P>0.05)。结论:胰腺癌中抗凋亡因子表达上调,凋亡指数主要决定于NF-κBp65蛋白水平;NF-κBp65通过对下游bcl-xL基因表达的调控参与胰腺癌凋亡过程;p53在凋亡调节过程中起重要作用。