黄芪抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的 探讨黄芪对乙型肝炎病毒抗原表达的抑制作用.方法 黄芪作用于体外培养的HepG 2.2.15细胞,观察黄芪对HepG 2.2.15细胞分泌HBsAg,HBeAg的影响及药物的细胞毒性.结果 黄芪作用于HepG 2.2.15细胞12 d后,对细胞的半数毒性浓度(CD50)1 500 ng/ml,对HBsAg和HBeAg抑制的半数有效浓度(ID50)分别为115.4 μg/ml和317.2 μg/ml,黄芪对HBsAg和HBeAg的治疗指数(TI)分别13.00,4.73.结论黄芪在体外细胞培养中对HBsAg及HBeAg的分泌有较好的抑制作用.     

Bay41-4109抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的 观察Bay41-4109对2.2.15细胞分泌乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)和乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)DNA的影响,探讨Bay41-4109的体外抗HBV作用.方法 将一定浓度的Bay41-4109加入培养的2.2.15细胞,通过四甲基偶氮唑...     

MAP30 抗乙型肝炎病毒的体外实验

目的 :探讨MAP30 (momordicaanti HIV proteinof30ku)体外抗乙型肝炎病毒 (HBV)的作用 .方法 :以HBVDNA转染的人肝癌细胞株 (HepG2 .2 .15 )为靶细胞 ,与MAP30共同温育 10d ,观察对细胞的毒性 ;用ELISA、荧光定量PCR和Southern印迹法分别检测培养上清中HBsAg ,HBVDNA和细胞内HBVDNA .结果 :MAP30能显著减少HepG2 .2 .15细胞培养上清液中HBsAg ,HBVDNA的分泌 ,在第 8日时 ,对HBsAg抑制率为 5 0 .4 9% ,HBVDNA定量 <1× 10 7拷贝·mL-1;Southern印迹法显示MAP30能抑制HBV复制中间体及共价环状闭合DNA .MAP30未发现对细胞有毒性作用 .结论 :MAP30具有较强的体外抗HBV作用 ,作为新的抗病毒植物蛋白 ,具有其临床应用价值     

TLR7配体Loxoribine抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的 探讨TLR7配体Loxoribine对乙型肝炎病毒的抑制作用。方法 采用MTT法观察Loxoribine药物对体外培养HepG2.2.15细胞的毒性作用,ELISA及荧光定量PCR法分析药物对细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg及HBV DNA含量的影响。结果 低浓度Loxoribine对体外培养的HepG2.2.15细胞生长有一定抑制作用,但随着药物浓度增高,对细胞生长并无明显毒性作用。Loxoribine可有效地抑制HepG2.2.15细胞HBV DNA的复制及HBsAg的分泌,并随着药物浓度的增加和作用时间的延长,对HBsAg抑制率增大,而对HBeAg的分泌无抑制作用。结论 Loxoribine在体外具有抗乙型肝炎病毒的作用。     

黄芪蛰虫合剂体外抗乙型肝炎病毒的作用观察

目的: 观察黄芪蛰虫合剂体外抗乙型肝炎病毒 (HBV) 的作用. 方法: 以HepG2.2.15细胞为靶细胞,分别加入不同浓度的黄芪蛰虫合剂和α干扰素. 采用ELISA法及荧光定量PCR法,测定药物对细胞培养上清HBsAg, HBeAg及细胞外HBV DNA的抑制作用. 结果: 黄芪蛰虫合剂具有一定程度的抗HBV的作用,其抑制HBsAg, HBeAg及细胞外HBV DNA的50 %抑制浓度(IC50)分别为1.35, 1.92, 2.19 g/L. 治疗指数(TI)＞3.56～5.79. α-IFN也有抑制HBV的作用,但抑制作用较弱. 结论: 黄芪蛰虫合剂具有一定的体外抗HBV作用.     

荔枝核总皂苷体外抗乙型肝炎病毒的作用

0 引言 我国属乙型病毒性肝炎高流行区,2004年中国疾病预防控制中心调查显示我国HBsAg感染率高达9．09％．目前,尚没有理想的治疗慢性乙型肝炎的药物．我国有数千年应用中草药治疗疾病的传统和经验,从中已发现了不少抗乙型肝炎病毒（HBV）的药物．荔枝核是无患子科植物荔枝（Litchi chinensis Sonn）的成熟种子,又名荔仁或荔核,味甘、微苦,归肝、肾经,具有行气散结、祛寒止痛的功效．其化学成分包括皂苷、蒜质和脂肪酸等多种物质．研究发现,荔枝核黄酮类提取物对乙肝病毒HBsAg,HBeAg以及HBVDNA有明显的抑制作用．但荔枝核皂苷是否具有抑制HBV的作用,目前尚未见文献报道．我们采用HepG2．2．15细胞为靶细胞,观察不同浓度荔枝核总皂苷体外对HBV的抑制作用．     

仙草抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的：观察仙草体外抗乙型肝炎病毒（HBⅥ的活性。方法：以HepG2．2．15细胞株为模型,用微粒酶免疫测定技术（MEIA）检测细胞培养上清液中FIBsAg、HBeAg含量,用PCR荧光定量技术检测细胞上培养上清液中HBVDNA的变化,以MTT比色法观察药物的细胞毒性。结果：仙草对HepG2．2．15细胞的Tc50为37．45mg／mL,对抑制HepG2．2．15细胞分泌HBsAg和HBeAg的治疗指数分别为14．71和39．42。对HBV—DNA仅有微弱抑制作用。结论：仙草在体外细胞培养中具有直接抗HBV活性。     

徐长卿水提物抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的初步探讨徐长卿水提物的抗乙型肝炎病毒(HBV)作用.方法通过徐长卿水提物作用于体外培养的2.2.15细胞株,观察其对2.2.15细胞株分泌HBsAg和HBeAg的影响,以初步评价其抗HBV作用. 结果徐长卿水提物作用于2.2.15细胞株12d后,对2.2.15细胞株的半数毒性浓度为62.65g/L,对HBsAg的半数抑制浓度小于0.78 g/L、对HBeAg的半数抑制浓度为10.13 g/L;对HBsAg治疗指数大于80.32,对HBeAg治疗指数为6.18.结论徐长卿水提物在体外细胞培养中对两抗原的分泌有较好的抑制作用.     

黄芪甲甙体外抗乙型肝炎病毒的作用

目的：探讨黄芪甲甙对乙型肝炎病毒（HBV）的体外抑制作用．方法：以HepG2．2．15细胞株为细胞模型,分别加入不同浓度的黄芪甲甙和拉米夫定,于培养第3,6和9日收集培养上清液．通过MqT法观察药物对HepG2．2．15细胞株的影响,采用ELISA法及荧光定量PCR法,分析药物对细胞培养上清液中HBsAg,HBeAg及HBVDNA含量的影响．结果：黄芪甲甙具有一定程度的抗HBV的作用．黄芪甲甙给药9d,其HBsAg的50％抑制浓度（Ic50）为22．1mg／L,治疗指数（TI）为4．4;HBeAg的IC50为26．2mg／L,TI为3．72;细胞外HBVDNA的IC50为13．2mg／L,TI为7．4．拉米夫定也有抑制HBV的作用,但抑制作用较弱．结论：黄芪甲甙体外对HBV有抑制作用．     

乙型肝炎病毒对肾小管上皮细胞直接作用的实验研究

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）在体外对人肾小管上皮细胞（HKC）的直接致病作用。方法：①HBV体外感染HKC：培养的HKC传至6孔板中，接种密度为1×10^6个／ml，孵育24h后分受感染和阴性对照两组。受感染组加入0．5ml HepG2．2．15细胞上清液（含有HBV）；阴性对照组加入0．5ml 10％FCS—DMEM／F—12培养液。两组HKC继续孵育72h，消化，离心沉淀，PBS清洗，实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）检测两组HKC中的HBV DNA含量。②HBV对体外培养的HKC细胞直接作用：HKC细胞传至24孔板中，接种密度为1×10^5个／ml，受感染组分三个亚组，分别加入100μl、200μl和300μl的感染用HepG2．2．15细胞上清液；阴性对照组为接种HKC后加入培养液常规培养；阳性对照组为HepG2．2．15细胞上清液。各组的每孔终体积均为2ml，每组设3复孔。孵育72h后收集各孔上清液，ELISA法检测转化生长因子β1（TGF-β1）的表达。结果：①受感染组HKC的基因组中检测到HBV DNA。②受感染组的三个亚组细胞培养上清的TGF-β1与阴性对照组比较差异均有显著性。结论：HBV可感染HKC并促进其分泌TGF-β1。     

恩替卡韦与阿德福韦酯抗乙型肝炎病毒作用的比较

目的比较恩替卡韦与阿德福韦酯抗乙型肝炎病毒（HBV）的疗效。方法选择慢性乙型肝炎病人HBeAg阳性,HBV DNA〉10^5拷贝／mL,血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）为正常值或正常上限的2-5倍,血清总胆红素小于正常值50％的41例病人,随机分为恩替卡韦组（20例）和阿德福韦组（21例）。治疗的wk2、wk4、wk8、wk12、wk16、wk24、wk48分别检测血清ALT、HBV DNA水平及乙型肝炎病毒血清学标志物（HBVM）,并观察药物的安全性。结果恩替卡韦组在治疗wk2时HBV DNA水平下降幅度较阿德福韦组大,分别为-3．1 log10 copies／mL与-2.2 log10 copies／mL,ALT复常率分别为85％与76％,均高于阿德福韦组;恩替卡韦与阿德福韦酯治疗后,血清HBeAg阴转率、HBeAg血清转换率及不良事件发生率两组相比差异无统计学意义。结论恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎HBV DNA下降幅度较阿德福韦显著,ALT复常率高,且不受ALT水平的影响。     

山豆根中皂苷等不同组分的体外抗HBV实验研究

目的揭示山豆根中抗HBV的物质基础,并探索建立肝炎灵新的质控标准。方法采用正丁醇萃取方法提取山豆根药材中的总皂苷成分。并以HepG2.2.15细胞株为模型,实验分为空白组（不接种细胞只加培养液）、细胞对照组（接种细胞但不加药物）、药物干预组（分为不同浓度组）、阳性药物（拉米夫丁）对照组,药物作用9天后,采用ELISA法检测药物作用后细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg,采用荧光定量PCR法测定上清中病毒DNA含量,采用MTT法检测细胞毒性。结果山豆根中皂苷类组分和其他各组分在体外只有高浓度时对HepH2.2.15细胞具有毒性抑制作用,其他稀释倍数的浓度均无显著毒性;山豆根中皂苷类组分和其他各组在体外都具有一定的抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg作用,并呈一定的剂量依赖性,各组分之间无显著差异性,其中山豆根中正丁醇水溶液组分的抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg、HBeAg的作用较优,而山豆根中皂苷和其他组分并未显示出更好的抑制作用。结论山豆根中皂苷和其他组分并未显示出更好的抑制病毒作用,提示山豆根中尚有其他成分或各种不同成分组合的抗HBV作用更佳。     

拉米夫定等六种药物的体外抗乙型肝炎病毒作用

目的：观察拉米夫定（3TC）等6种药物对抗乙型肝炎病毒（HBV）体外药效评价及不同指标之间的关系。方法：利用乙型肝炎病毒基因转染的人肝癌细胞系2．2．15细胞,检测细胞培养上清液中的乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝病毒e抗原（HBeAg)及乙肝病毒DNA（HBV－DNA）的含量作为药物抗HBV效果的观察指标。结果：（1）6种药物在一定浓度范围内对2．2．15细胞分泌的HBsAg和HBeAg抑制作用很弱或无抑制;（2）HBV－DNA定量检测拉米夫定和2′3′－二脱氧－3－氟鸟苷（FLG）对HBV DN水平有明显抑制作用,其半数有效剂量（IC50）分别为0．31μmol/L,0．53μmol/L,阿昔洛韦（ACV）和α－干扰素（α-IFN）之IC50分别为0．33mmo/L、96．18U／ml,膦甲酸钠（PFA）和利巴韦林（RBV）最大无毒浓度无任何抑制作用。结论：抑制HBsAg与HBeAg的病毒蛋白表达活性与抑制HBV DNA活性无一致相关性,以HBV DNA指标更能反映化合物的抑制作用。     

新型稀土杂多化合物对乙型肝炎病毒复制的抑制作用

目的：研究稀土杂多化合物(PTW-6)体外抗乙型肝炎病毒（HBV）的活性。方法：MTT法检测PTW-6对Hep G2 2.2.15细胞的毒性,乙型肝炎病毒e（s）抗原诊断试剂盒检测上清液中HBeAg、HBsAg的含量,Southern blotting 法检测PTW-6对细胞内HBV DNA复制的抑制作用。荧光定量PCR分析PTW-6对细胞内HBV mRNA和上清液中HBV DNA含量的影响。结果：PTW-6对2.2.15细胞的半数中毒浓度为1590.46 mg•L^-1, PTW-6各浓度实验组对HBeAg和HBsAg的抑制率均高于对照组（P<0.05）;随着PTW-6浓度的增高,PTW-6对2.2.15细胞内外HBV DNA的抑制率增加,PTW-6对2.2.15细胞外HBV DNA和细胞内HBV mRNA半数抑制浓度分别为51.1和63.6 mg•L^-1。结论：PTW-6体外毒性较低, 且对HBV复制有较好的抑制作用。     

阿德福韦酯与拉米夫定治疗慢性乙型肝炎对比分析

目的比较阿德福韦酯（贺维力）与拉米夫定（贺普丁）治疗慢性活动性乙型肝炎的临床疗效,以提高有效率,减少耐药性。方法收集我院2008年12月～2011年1月经消化内科应用上述两种药物系统治疗慢性活动性乙型肝炎患者150例,根据用药分为三组各50例：分别为使用贺维力、贺普丁及两种药物合用。分别于治疗的12、24、36、52周观察HBV—DNA病毒复制情况及ALT阴转率,比较各组间患者的临床疗效。结果贺维力组连续治疗52周,各时期HBV—DNA转阴率分别为32．0％、54．0％、62．0％、74．0％;贺普丁组分别为48．0％、52．0％、52．0％、66．0％;联合用药组分别为48．0％、54．0％、68．0％、78．0％。经过贺维力组连续治疗52周,各时期ALT转阴率分别为30．0％、44．0％、76．0％、70．0％;贺普丁组分别为60．0％、68．0％、80．0％、72．0％;联合用药组分别为62．0％、66．0％、74．0％、74．0％。结论治疗52周时,贺维力组HBV—DNA及ALT转阴率略好于贺普丁组,与联合用药组无明显差异。     

阿德福韦联合特异性树突细胞疫苗治疗慢性乙型肝炎的效果分析

目的:观察阿德福韦联合特异性树突细胞疫苗治疗慢性乙型肝炎的疗效,为临床用药提供参考。方法:选择我院2009年2月～2011年1月收治的慢性乙型肝炎患者74例,随机分为对照组和观察组各37例。对照组患者给予阿德福韦治疗,观察组患者在此基础上给予特异性树突细胞疫苗治疗。连续治疗12个月后,观察并比较两组患者肝功能指标、HBV-DNA、IFN-γ、IL-4的差异。结果:与治疗前比较,全部患者治疗后ALT、AST、IFN-γ、IL-4均有不同程度的改善,其中观察组的改善程度明显优于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。观察组患者HBV-DNA阴转率明显高于对照组,两组差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:采用阿德福韦联合特异性树突细胞疫苗治疗慢性乙型肝炎疗效显著,值得临床推广应用。     

阿的福韦在鸭乙型肝炎模型及2.2.15细胞中抗乙型肝炎病毒的药效研究

目的:观察阿的福韦体内抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的作用及体外抗乙型肝炎病毒(HBV)效果.方法:采用鸭乙型肝炎动物模型,用阿的福韦口服治疗10天,检测用药前后血清中的DHBV DNA、DHBsAg,并取肝脏样本提取总DNA,作Southern Blot分析.此外,以2.2.15细胞为靶细胞,给药后通过检测细胞培养液中HBsAg、HBeAg和HBV DNA观察阿的福韦抗HBV效果.结果:阿的福韦各剂量组用药后均能使血清中的DHBVDNA显著降低或极显著降低(P＜0.05或P＜0.01),但停药后有DHBV DNA回升现象;用药前后DHBsAg无明显改变.肝组织Southern Blot分析亦显示用药后肝脏中DHBV DNA有明显降低,停药后DHBV DNA反跳明显.大剂量阿的福韦加入细胞培养12天,对HBsAg抑制率为17.01%,对HBeAg抑制率为26.80%,对HBV DNA抑制率为26.92%.结论:阿的福韦在鸭体内有抗鸭乙型肝炎病毒的作用,但停药后DHBVDNA有"反跳"现象;体外实验无明显抗HBV病毒作用.     

HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者应用阿德福韦治疗过程中HBV P区变异情况分析

目的 研究HBeAg阳性的慢性乙型肝炎(CHB)患者应用阿德福韦治疗过程中P区变异情况.方法 选取4例服用阿德福韦患者的系列血清,包括用药前的基线血清(Baseline,简称BL)、用药后半年(28周)、一年(52周)、二年(92周)的血清,将4份系列血清用一片段PCR法进行HBV全基因组克隆、测序,并将测序结果进行基因型及血清型分型、P区变异分析.结果 4例系列血清的基因型及血清型分型:1号为C基因型/adrq 血清型;2号为B、C混合基因型/adw2、adrq 混合血清型;3号、4号为B基因型/adw2血清型.在P基因的反转录酶区,有几处非常有意义的有义突变,其中有2例病人在P-ORF与S-ORF重叠区,即反转录酶区存在1处完全相同的热点变异,很可能会影响反转录酶的活性,而使HBV对ADV产生耐药逃逸.结论 HBeAg阳性的CHB患者应用阿德福韦治疗过程中,P区有几处非常有意义的氨基酸变异,很可能与HBV对阿德福韦的耐药逃逸有关.