针刺对大鼠全脑缺血后神经元凋亡的影响

目的 :探讨针刺对大鼠脑缺血后神经元凋亡的影响 ,揭示针刺脑保护机理。方法 :采用“4 -动脉阻断”方法来建立大鼠全脑缺血模型 ;用神经元尼氏体亚甲兰特殊染色法观察大鼠脑缺血后海马CA1区神经元损害情况 ;原位细胞凋亡检测法 (TUNEL染色 )及电镜观察脑缺血后大脑皮层、海马CA1区神经元凋亡情况。结果 :与假手术组、针刺组相比 ,脑缺血组大脑皮层、海马CA1区神经元缺失明显 (P <0 .0 1)。脑缺血组、针刺组大脑皮层、海马CA1区均存在神经元凋亡 ,但针刺组大脑皮层、海马CA1区凋亡神经元数明显少于脑缺血组 (P <0 .0 1)。结论 :经“4 -动脉阻断”方法建立的大鼠全脑缺血模型证实了针刺的脑保护作用。全脑缺血后的迟发性神经元死亡很可能经由凋亡途径 ,而针刺可通过抑制缺血性神经元凋亡而发挥一定的神经保护作用。     

针刺预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察针刺预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:采用4-血管阻断法对实验鼠分组进行全脑缺血及缺血后再灌注模型制作。神经元尼氏体亚甲兰特殊染色法观察大鼠脑缺血后海马CA1区神经元尼氏体变化;原位细胞凋亡检测法(TUNEL染色)及电镜观察脑缺血后大脑皮质、海马CA1区神经元凋亡情况。结果:针刺预处理组大脑皮质、海马CA1区可见棕色TUNEL染色阳性细胞核,较脑缺血组明显减少,尼氏体染色阳性细胞数针刺预处理组较脑缺血组明显增多。结论:针刺预处理可以减轻缺血后神经元损伤,抑制神经元凋亡。     

针刺预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察针刺预处理对脑缺血-再灌注损伤的保护作用。方法:采用四血管阻断法对实验鼠分组进行全脑缺血及缺血后再灌注模型。神经元尼氏体亚甲蓝特殊染色法观察大鼠脑缺血后海马CA1区神经元尼氏体变化;原位细胞凋亡检测法(TUNEL染色)及电镜观察脑缺血后大脑皮质、海马CA1区神经元凋亡情况。结果:针刺预处理组大脑皮质、海马CA1区可见棕色TUNEL染色阳性细胞核,较脑缺血组明显减少,尼氏体染色阳性细胞数针刺预处理组较脑缺血组明显增多。结论:针刺预处理可以减轻缺血后神经元损伤,抑制神经元凋亡。     

针刺预处理对全脑缺血大鼠脑组织Bcl-2蛋白表达影响的实验研究

为了探索防治缺血性脑血管病的新途径,揭示针刺预防缺血性脑卒中的机理,以W istar大鼠为受试对象,脑缺血前给予针刺,采用“4-动脉阻断”方法建立大鼠全脑缺血模型,脑缺血后在大脑皮层、海马CA1区采用免疫组化法检测大脑皮层、海马CA1区Bc l-2蛋白表达。实验结果显示:针刺预处理可以增加全脑缺血大鼠大脑皮层、海马CA1区Bc l-2蛋白表达。     

针刺预处理对全脑缺血大鼠脑组织Bcl-2蛋白表达影响的实验研究

为了探索防治缺血性脑血管病的新途径，揭示针刺预防缺血性脑卒中的机理，以Wistar大鼠为受试对象，脑缺血前给予针刺，采用“4-动脉阻断”方法建立大鼠全脑缺血模型，脑缺血后在大脑皮层、海马CA1区采用免疫组化法检测大脑皮层、海马CA1区Bcl-2蛋白表达。实验结果显示：针刺预处理可以增加全脑缺血大鼠大脑皮层、海马CA1区Bcl-2蛋白表达。     

益智胶囊对大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经元迟发性死亡及学习记忆功能的影响

目的:观察益智胶囊对全脑缺血后大鼠海马CA1区神经元迟发性死亡及学习功能的影响.方法:使用四血管闭塞(4-VO)法制成大鼠急性全脑缺血再灌注模型.采用免疫组织化学方法计数脑缺血再灌注脑损伤后1、2、4、8及40d时,大鼠海马CA1区正常神经元数量;并用Morriss水迷宫观察脑缺血再灌注脑损伤后40d时各组大鼠的学习记忆功能.结果:从缺血再灌注后第2d起,益智胶囊(100mg/kg)组大鼠海马CA1区正常神经元数量明显多于缺血对照组(P《0.01).同时,MORRIS水迷宫法检测大鼠全脑缺血再灌注脑损伤后40d时的学习记忆功能,益智胶囊(100mg/kg)组大鼠明显好于缺血对照组大鼠(P《0.01).结论:益智胶囊对全脑缺血后大鼠海马CA1区神经元具有保护作用,并可改善大鼠的记忆功能障碍.     

脑络欣通对脑缺血再灌注模型大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的动态影响

目的:观察脑络欣通对脑缺血再灌注损伤模型大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的动态影响。方法:在多因素所致的气虚血瘀证模型的基础上,采用阻断大脑中动脉2小时,再灌注1天,3天,7天的方法,复制出局灶性脑缺血再灌注模型,用透射电镜观察脑缺血再灌注海马CA1区神经细胞凋亡情况。结果:脑缺血再灌注模型大鼠海马CA1区神经细胞的凋亡是呈动态过程,脑络欣通组海马CA1区神经细胞凋亡和脑组织损伤明显轻于模型组。结论:脑络欣通具有明显减轻脑缺血再灌注后CA1区神经细胞凋亡作用,对神经细胞有保护功能。     

地黄寡糖对血管性痴呆大鼠海马区神经细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:探讨中药提取物地黄寡糖(rehmannia glutinosa oligosaccharides,ROS)对血管性痴呆大鼠海马CA1区神经细胞凋亡及相关蛋白表达的影响.方法:选用SD成年大鼠,随机分为伪手术组、模型组和地黄寡糖高、低剂量组(9.0,45 g·kg-1·d-1).采用双侧颈总动脉缺血再灌注法制作血管性痴呆大鼠模型,采用行为学评分法评价大鼠的行为学障碍程度,HE染色法观察大鼠海马CA1区病理组织形态学变化,TUNEL法检测大鼠海马CA1区的神经元细胞凋亡情况,免疫组化法检测大鼠海马区凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-相关x蛋白(Bax)的表达含量的变化,并检测大鼠海马组织匀浆中神经毒性氨基酸谷氨酸及海马组织和血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量.结果:ROS能够显著改善缺血再灌注型血管性痴呆的大鼠的行为学障碍,降低其行为学评分(P＜0.01),减轻海马CA1区神经组织的病理性改变,降低神经元凋亡细胞比例(P＜0.01),并显著升高血管性痴呆大鼠海马CA1区神经元细胞中Bcl-2蛋白表达(P＜0.01)、降低Bax蛋白表达(P＜0.01),Bcl-2/Bax显著升高,从而抑制了该区域神经元细胞的凋亡.此外,ROS给药能够显著减少血管性痴呆大鼠血清及海马组织中MDA的积累(P＜0.01),提高SOD的活性(P＜0.01),降低海马组织中谷氨酸的水平(P＜0.01).结论:ROS能够显著减少脑缺血再灌注损伤所致的大鼠海马CA1区神经元凋亡,其作用机制可能是通过调控Bcl-2/Bax相关蛋白的表达来实现的.此外与ROS减少组织中谷氨酸的水平和MDA的含量,提高SOD活性等,也提示ROS对血管性痴呆有一定的治疗作用.     

白芍总苷对局灶性脑缺血大鼠海马CA1区病理改变的影响

目的探讨白芍总苷对局灶性脑缺血中枢海马CA1区病理改变的影响。方法通过阻断大脑中动脉制备局灶性脑缺血大鼠模型。白芍总苷低、中、高剂量组分别每日1次灌胃给予白芍总苷50、100、200 mg/kg,疗程28 d。红四氮唑(TTC)染色法计算脑梗死体积,干湿比重法计算脑组织含水量,苏木精-伊红(HE)法进行中枢海马CA1区病理学检查,原位末端转移酶标记染色法(TUNEL)观察CA1区神经元凋亡状况并计算凋亡指数(AI),透射电子显微镜(TEM)观察CA1区神经元超微结构变化。结果白芍总苷中、高剂量组能够明显降低局灶性脑缺血大鼠脑梗死体积(P 0.05或P 0.01),降低脑组织含水量(P 0.05),明显改善中枢海马CA1区组织细胞病理性改变,抑制CA1区神经元凋亡、AI显著降低(P 0.01),明显改善CA1区神经元细胞器等超微结构病理性改变。结论白芍总苷对局灶性脑缺血中枢海马CA1区病理改变及CA1区神经元超微结构病理改变具有保护作用。     

白芍总苷对全脑缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的观察白芍总苷对全脑缺血再灌注损伤的保护作用并初探其机制。方法采用四血管夹闭20 min的方法制备大鼠全脑缺血再灌注模型,白芍总苷(50、100、200 mg/kg)术前30 min灌胃给药。再灌注6 h后,记录各组大鼠翻正反射恢复时间和脑电恢复时间,检测脑组织含水量,HE染色法观察大脑海马CA1区神经元形态结构变化,TUNEL法观察海马CA1区神经元凋亡状况;测定海马组织中炎症细胞因子含量,抗氧化酶活性和丙二醛(MDA)含量。结果中、高剂量白芍总苷能够显著降低全脑缺血再灌注大鼠翻正反射和脑电恢复时间并降低脑组织含水量(P0.05或P0.01),明显改善海马CA1区神经元病理性改变和凋亡状况,显著降低凋亡指数(P0.01),显著降低炎症细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)含量(P0.05或P0.01),显著改善抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活性并降低MDA含量(P0.05或P0.01)。结论白芍总苷对全脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,可能与其保护海马CA1区神经元、抑制氧化应激和炎症反应有关。     

天智颗粒对慢性脑缺血大鼠海马外小胶质细胞表达的影响

目的:观察天智颗粒对慢性脑缺血大鼠海马CA1区小胶质细胞(microglia,MG)表达的影响,探讨天智颗粒的脑保护作用机制。方法:45只雄性SD大鼠,随机分为对照组、对照组、天智颗粒组。采用大鼠双侧颈总动脉永久阻断的方法制作慢性脑缺血模型。天智颗粒组在造模成功后给予天智颗粒(5 g·kg-1)ig 12周,采用Y迷宫、免疫组化染色和特异性尼氏染色方法观察比较各组大鼠学习记忆能力、OX42(小胶质细胞的标志)表达及海马CA1区神经元计数的差异。结果:与对照组相比,天智颗粒组学习记忆能力明显增加(P<0.01);对照组大鼠海马CA1区OX42少量表达,神经元数正常,对照组海马CA1区OX42表达明显增多,神经元数明显减少,天智颗粒组与对照组相比OX42表达明显减少,神经元数明显增加(P<0.01)。结论:天智颗粒能明显减少慢性脑缺血大鼠脑内OX42表达,抑制MG的过度激活,使海马区神经元死亡减少,具有脑保护作用。     

白芍总苷对脑缺血大鼠学习记忆能力及海马CA1区神经元的保护作用

目的:研究白芍总苷对脑缺血大鼠学习记忆能力的影响以及对海马CA1区神经元的保护作用并初探其机制。方法:通过结扎双侧颈总动脉制备大鼠脑缺血模型,术后第二天开始连续28 d灌胃给药白芍总苷(50、100、200 mg·kg~(-1)),每天1次。28 d后,通过Morris水迷宫实验和跳台实验评价大鼠学习记忆能力;HE染色观察海马CA1区神经元形态,TUNEL染色观察海马CA1区神经元凋亡状况,免疫组织化学(IHC)法检测海马Bcl-2、Bax表达,检测抗氧化酶活性和MDA含量。结果:100、200 mg·kg~(-1)白芍总苷能够显著缩短脑缺血大鼠逃避潜伏期,显著缩短跳台潜伏期、增加跳台次数(P0.05或P0.01);明显改善海马CA1区神经元病理性形态结构变化和细胞凋亡状况,显著降低凋亡指数(Apoptosis Index,AI)(P0.01),显著上调海马Bcl-2表达、下调Bax表达,提高Bcl-2/Bax值(P0.05或P0.01),显著改善抗氧化酶(SOD、CAT、GSH-Px)活性并降低MDA含量(P0.05或P0.01)。结论:白芍总苷具有改善脑缺血大鼠学习记忆能力的作用;可能与其抑制海马CA1区神经元病变、调节Bcl-2和Bax表达、抑制海马CA1区细胞凋亡有关。     

紫檀芪对脑缺血/再灌注大鼠海马 CA1区ATP酶、COX活性影响

目的:观察紫檀芪对脑缺血/再灌注损伤大鼠海马CA1区ATP酶、细胞色素氧化酶活性的影响.方法:采用大鼠大脑中动脉线栓法制备脑缺血再灌注模型,将27只SD雄性大鼠随机分为3组:假手术组、缺血/再灌注组、紫檀芪组,检测各组大鼠海马CA1区ATP酶、C0X活性的变化.结果:缺血/再灌注组海马CA1区ATP酶、COX活性均明显下降(P＜0.01);紫檀芪组海马CA1区ATP酶、C0X活性高于脑缺血/再灌注组(P＜0.05).结论:紫檀芪对脑缺血/再灌注大鼠海马CA1区能量代谢具有一定干预作用.     

蜂胶总黄酮对全脑缺血-再灌注损伤大鼠脑组织病理学及细胞凋亡的影响

目的:研究蜂胶总黄酮(total flavonoids of propolis,TFP)对全脑缺血-再灌注大鼠神经元损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法:采用四血管阻断法制备大鼠全脑缺血-再灌注模型。HE染色法观察神经胶质细胞病理学变化;TUNEL法检测海马CA1区神经细胞凋亡情况;免疫组织化学法检测BCL-2、BAX蛋白的表达,并计算BCL-2/BAX比值。结果:与假手术组比较,模型组大鼠大脑皮层内神经细胞凋亡数目和BAX、BCL-2蛋白表达均显著增高,BCL-2/BAX显著降低(P0.01);与模型组比较,TFP能显著改善缺血-再灌注大鼠脑组织病理改变,减少神经细胞凋亡数目,上调BCL-2蛋白,下调BAX蛋白,提高BCL-2/BAX比值(P0.01),其作用具有浓度依赖性。结论:TFP对全脑缺血-再灌注大鼠脑组织损伤具有良好的保护作用,其作用机制可能与减少大脑皮层神经细胞凋亡,调节与凋亡有关的调控因子的蛋白表达有关。     

艾灸预处理对全脑缺血大鼠Bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨艾灸预处理的预防性脑保护作用机制.方法:60只Wistar大鼠,随机分为正常对照组、假手术组、脑缺血组、艾灸预处理组,各组分别于手术后24h、48h、72h取脑.采用免疫组化法观察海马CA1区及大脑皮层Bcl-2蛋白表达.结果:艾灸预处理组Bcl-2蛋白染色阳性细胞数各时间点同脑缺血组比较明显增高,具有显著性差异(P＜0.05).结论:艾灸预处理对缺血神经元的保护作用可能是通过调动机体内源性保护机制,促进Bcl-2蛋白的表达而实现的.     

脑康Ⅱ号对糖尿病大鼠认知功能及海马区凋亡相关蛋白表达的影响

目的:探讨脑康Ⅱ号对2型糖尿病大鼠认知功能,海马CA1区Caspase-3,Bcl-2和Bax蛋白表达的影响及其治疗糖尿病认知障碍的可能作用机制.方法:高糖高脂饮食结合腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病大鼠模型,并用3种不同剂量的脑康Ⅱ号治疗4周.采用Morris水迷宫法进行行为学检测,用免疫组化法检测海马CA1区凋亡相关蛋白Caspase-3,Bcl-2和Bax的表达水平.结果:与正常对照组相比,糖尿病模型组Morris水迷宫平均逃避潜伏期和游泳距离均明显延长(P＜0.01),空间探索实验中在原平台所在象限游泳时间明显缩短(P＜0.01),表明学习记忆能力显著下降;模型组海马CA1区凋亡相关蛋白Caspase-3和Bax表达增多(P＜0.01),Bcl-2表达减少(P＜0.01).经过脑康Ⅱ号各剂量组(分别含生药0.5,1.0,2.0 g·mL-1)灌胃治疗4周,糖尿病大鼠学习记忆能力显著改善(P＜0.01或P＜0.05),海马CA1区Bcl-2表达显著上调(P＜0.01或P＜0.05),Caspase-3和Bax表达明显减少(P＜0.01或P＜0.05).结论:脑康Ⅱ号对2型糖尿病大鼠脑神经细胞的保护作用可能是通过上调Bcl-2蛋白、下调Caspase-3和Bax蛋白的表达,抑制细胞凋亡而实现,进而改善2型糖尿病大鼠的学习记忆能力.     

山茱萸环烯醚帖苷对全脑缺血沙土鼠海马神经元凋亡相关因子的影响

目的:观察山茱萸环烯醚萜苷(CIG)对全脑缺血沙土鼠海马CA1区凋亡细胞及Bcl-2、Cas-pase-3表达的影响,探讨CIG脑保护的可能机制。方法:采用双侧颈总动脉阻断5 min的全脑缺血/再灌注沙土鼠模型。缺血1周后,采用TUNEL法检测海马CA1区的凋亡细胞,免疫组织化学法检测Bcl-2、Caspase-3的表达情况。结果:CIG灌胃给药可以明显减少缺血沙土鼠海马CA1区的凋亡细胞,抑制Caspase-3表达,增强Bcl-2表达。结论:CIG具有拮抗神经元凋亡的作用,其机制可能与增强抗凋亡基因、抑制促凋亡基因的表达有关。     

针刺对糖尿病合并脑缺血大鼠海马细胞色素氧化酶的影响

目的 :探讨细胞色素氧化酶 (COX)在糖尿病合并脑缺血发病机制中的作用及针刺对其的影响。方法 :采用腹腔注射链脲佐菌素 (Streptozotocin ,STZ)建立糖尿病动物模型 ,注射后 3d用颈总动脉阻断法建立脑缺血模型。注射STZ 7d后测定空腹血糖 ,高于 1 5.5mmol/L定为糖尿病模型 ,术后 1个月经行为学测定确定糖尿病脑病模型。动物分为正常对照组 (n =5)、糖尿病 +假手术组 (n =5)、糖尿病 +脑缺血组 (n =6)、糖尿病 +脑缺血 +针刺组 (n =6) ,采用组织化学方法观察大鼠海马CA1区和CA3区COX活性反应物的分布 ,用图像分析仪对其光密度进行测定。结果 :糖尿病脑缺血组的大鼠海马CA1和CA3区的COX光密度明显低于正常 (P <0 .0 0 1 ) ,而针刺组高于糖尿病脑缺血组 (P <0 .0 0 1 )。结论 :糖尿病脑缺血可导致大鼠脑内海马CA1和CA3区的COX活性降低 ,针刺可以提高这两个区域的COX活性 ,从而提高细胞代谢的水平。     

合欢花总黄酮的抗抑郁作用及其机制研究

目的:研究合欢花总黄酮的抗抑郁作用,并初步探讨其抗抑郁作用机制.方法:将90只SD大鼠随机分为正常组、模型组、盐酸文拉法辛组(0.012 5 g·kg-1)、合欢花总黄酮(0.10,0.05,0.025 g·kg-1)剂量组.应用孤养加慢性不可预见性应激建立抑郁症模型,造模同时ig给药,每天1次,连续给药21 d,正常组、模型组ig等体积蒸馏水.用旷场实验法测定各组大鼠行为变化,TUNEL原位杂交检测海马CA3区神经元细胞凋亡.结果:与正常组比较:模型组大鼠旷场实验3 min内水平运动、垂直运动得分均明显降低(P ＜0.05或P＜0.01),海马CA3区神经元凋亡细胞数、阳性细胞率均显著增加(P＜0.01);与模型组比较:盐酸文拉法辛组、合欢花总黄酮(0.10,0.05,0.025 g·kg-1)剂量组旷场实验3 min内水平运动、垂直运动得分均明显增高(P ＜0.05或P＜0.01),海马CA3区神经元凋亡细胞数及阳性细胞率均明显减少(P＜0.05).结论:合欢花总黄酮具有抗抑郁作用,其机制可能与拮抗CA3区海马神经元细胞凋亡有关.     

经皮穴位电刺激复合全麻/控制性降压对术后海马神经保护的炎性反应调控机制

目的:观察经皮穴位电刺激(TEAS)复合全麻/控压对术后中枢内外炎性反应及海马神经元损伤的影响,探讨其对脑保护作用机制.方法:18只6～8月龄雄性健康比格犬,随机分为全麻组、控压组和干预组,每组6只.全麻组采用异氟醚麻醉后行剖腹探查术;控压组在麻醉基础上联合硝普钠行控制性降压,达到目的血压后施行手术;干预组在控压基础上行TEAS,穴取“曲池”“合谷”“足三里”“三阴交”,干预至术毕血压回升,术后72 h取脑.采用ELISA法检测不同时间点血清细胞因子白介素(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量;免疫组化法检测海马CA1和CA3区细胞因子IL-1β、TNF-α和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及活化型胱冬酶(Caspase-3)蛋白表达;原位末端转移酶标记法检测海马细胞凋亡情况.结果:①从麻醉诱导开始至术后72 h,控压组与干预组TNF-α浓度表现出先升后降的趋势,而IL-1β浓度则呈现先降后升的趋势,细胞因子组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).②控压组和干预组CA1区和CA3区IL-1β、TNF-α和Caspase-3阳性细胞率较全麻组显著升高(P＜0.01),干预组相关细胞因子较控压组降低显著(P＜0.01),干预组CA1区Caspase-3较控压组显著减少(P＜0.01);控压组和干预组CA1和CA3区Bcl-2/Bax阳性细胞比值均低于全麻组(P＜0.01),干预组比值高于控压组(CA1区:P＜0.01,CA3区:P＜0.05).③控压组和干预组CA1区、CA3区神经细胞凋亡指数均较全麻组显著增多(P＜0.01),其中干预组CA1区较控压组显著减少(P＜0.01).结论:TEAS可调控全麻/控压手术动物海马炎性因子的表达,进而提高Bcl-2/Bax比值、抑制活化型Caspase-3的表达,减少海马神经元凋亡,发挥保护神经作用.