小鼠2—细胞胚电融合技术影响因素的研究

以小鼠２－细胞胚为材料，研究电融合诸参数。以Ｍ２液为融合液时，除在０．３１ｋＶ／ｃｍ，１２８０μｓ，１次脉冲条件下获１００％融合率外，其他条件均造成较多的胚肥溶解。而持续时间在１０－１２８０μｓ范围内，以０．３ｍｏｌ／Ｌ甘露醇液为融合液，电场强度为０．３１－２．０４ｋＶ／ｃｍ条件下；及以０．２６ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液为融合液，电场强度为０．３１－１．４１ｋＶ／ｃｍ范围内时可获较高的融合率。实验表明：在０     

小鼠2－细胞胚电融合技术影响因素的研究

以小鼠２－细胞胚为材料，研究电融合请参数。以Ｍ２液为融合液时，除在０．３１ｋＶ／ｃｍ，１２８０ｓ，１次脉冲条件下获１００％融合率外，其他条件均造成较多的胚胎溶解。而持续时间在１０～１２８０ｓ范围内，以０．３ｍｏｌ／Ｌ甘露醇液为融合液，电场强度为０．３１～２．０４ｋＶ／ｃｍ条件下；及以０．２６ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液为融合液，电场强度为０．３１～１．４１ｋＶ／ｃｍ范围内时可获较高的融合率。实验表明：在０．４７ｋＶ／ｃｍ电场条件下，蔗糖液与甘露醇液的渗透压对融合率无显著的影响；电场强度为２．０４ｋＶ／ｃｍ，以高渗甘露醇液（０．３０ｍｏｌ／Ｌ）为融合液时，胚的融合率比等渗甘露醇液（０．２５ｍｏｌ／Ｌ）和低渗甘露醇液（０．２０ｍｏｌ／Ｌ）做融合液时的融合结果高，而胚的死亡率低。融合后的胚与对照２－细胞胚都可继续发育．４８ｈ后发生致密化，此时融合胚发育到４－细胞，对照组为８－细胞。根据０．２６ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液做融合液时的结果，绘制一条获高融合率时电场强度与脉冲持续时间的关系曲线。     

骨髓瘤细胞裂解物致敏的DC-CIK细胞抗骨髓瘤细胞作用

目的:研究负载骨髓瘤细胞裂解物的健康供者树突状细胞(Dendritic cells,DCs)联合细胞因子诱导杀伤细胞(Cytokine induced kil1er cells,CIK)体外对骨髓瘤U266细胞杀伤作用的影响。方法:通过血细胞分离机采集健康供者单个核细胞100 ml用于体外培养,选取贴壁细胞进行DC细胞培养,悬浮细胞用于CIK细胞培养,DC细胞培养7日后用骨髓瘤U266细胞裂解物致敏,然后与CIK细胞共培养7日,用倒置显微镜、扫描电镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表型,乳酸脱氢酶释放法检测共培养细胞对U266细胞杀伤作用。结果:CIK细胞大部分形态为圆形,少数梭形,DC细胞有典型细胞突起,流式细胞仪分析培养的CIK细胞高表达CD3,培养后CD3和CD56共表达细胞明显升高,在致敏后DC细胞表达CD86、CD80,共培养细胞对U266细胞杀伤作用强于单独CIK细胞作用。结论:瘤细胞裂解物致敏的健康供者DC-CIK细胞能显著提高对瘤细胞的杀伤性,在患者干细胞移植后是否可应用以清除残留病变,值得进一步研究应用。     

B淋巴细胞对兔免疫球蛋白和兔抗鼠IgM抗体的提呈作用

本文采用兔免疫蛋白特异的鼠T细胞株为靶细胞,以T细胞的增殖和IL-2的产生活性为反应指标,探讨了小鼠B淋巴细胞兔免疫球蛋白和兔抗鼠IgM等抗原的提呈作用。实验结果显示,B细胞对兔抗鼠IgM抗体有很强的提呈作用,提呈兔抗鼠IgM抗体所需的抗原浓度较低,比兔免疫球蛋白低1000倍以上,当用巨噬细胞作为抗原提呈细胞时,则无上述差异。故提示可用兔抗鼠IgM抗体模拟抗原特异性B细胞的高效抗原提呈作用。此研究结果为进一步探讨抗原特异性B细胞抗原提呈作用的特点,以及T—B细胞间相互作用的途径和机制,提供了有用的实验模型。     

T和B记忆细胞

Ｔ和Ｂ记忆细胞是初次免疫应答后克隆消除保留下来的高亲和力细胞，它们有独特的表型，具有淋巴因子分泌、分布和迁移性以及活化的特点。短期免疫记忆要求残存抗原持续性存在，长期免疫记忆与ｂｃｌ－２表达有关。     

微重力条件下细胞电融合研究进展

生物分离、细胞培养和细胞电融合是目前在空间条件下研究的主要生物过程.空间微重力环境是细胞电融合技术的理想场所,由于不存在重力和对流的影响,使电融合技术得到了改善.在提高杂交瘤得率、培植新品种和研究微重力细胞生物学效应方面具有广阔的应用前景.本文综述了微重力条件下细胞电融合的研究进展,细胞电融合过程中细胞骨架发生的变化,以及微重力条件下提高融合效率潜在的原因.     

人外周血初始B细胞和记忆性B细胞亚群的特征和功能

B淋巴细胞是免疫系统的重要免疫成份,主要功能是介导体液免疫应答。在人外周血中,按照B淋巴细胞的发育阶段及功能的不同,可将B淋巴细胞分为初始成熟B细胞、记忆B细胞和浆细胞。记忆B细胞又可分为IgM记忆B细胞和类型转换的记忆B细胞。近年来的研究表明,B淋巴细胞的亚群远比人想象中的复杂,因此对人B细胞各亚群的起源、发育和功能进行更深入的研究,将有助于治疗自身免疫性疾病,在慢性感染性疾病的治疗过程中找到新的策略,并指导研发安全有效的疫苗。     

人外周血初始B细胞和记忆性B细胞亚群的特征和功能

B淋巴细胞是免疫系统的重要免疫成份,主要功能是介导体液免疫应答.在人外周血中,按照B淋巴细胞的发育阶段及功能的不同,可将B淋巴细胞分为初始成熟B细胞、记忆B细胞和浆细胞.记忆B细胞又可分为IgM记忆B细胞和类型转换的记忆B细胞.近年来的研究表明,B淋巴细胞的亚群远比人想象中的复杂,因此对人B细胞各亚群的起源、发育和功能进行更深入的研究,将有助于治疗自身免疫性疾病,在慢性感染性疾病的治疗过程中找到新的策略,并指导研发安全有效的疫苗.     

B淋巴细胞刺激因子及其受体与多发性骨髓瘤关联性的临床实验诊断研究

目的:探讨B细胞激活因子(BLyS) 及其受体在多发性骨髓瘤(MM)发病中的作用机制.方法:用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和实时荧光定量聚合酶链反应 (RFQ-PCR),对19例MM患者和30名健康人血清BLyS含量、外周血单个核细胞(PBMCs) 中BLyS及其受体mRNA 含量进行检测;并比较MM患者血清BLyS含量与外周血BLyS及其受体基因表达水平和免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)浓度、乳酸脱氢酶(LDH)、轻链(kap、lam)的相关性.结果:MM患者血清 BLyS含量[(7.95±4.93) g/L 明显高于健康对照组[(2.70±1.09) g/L,P<0.01 ,并与LDH浓度呈正相关性(r=0.734,P<0.001);97.4% (18/19),84.2% (16/19)的MM患者PBMCs中BLyS、BCMA mRNA表达水平较正常人明显增高,并且也与LDH的含量呈正相关;而47.32% (9/19)患者TACI mRNA表达水平降低.结论:MM患者的血清BLyS蛋白浓度和PBMCs中BLyS及其受体基因表达水平有异常改变,说明BLyS及其受体可能参与MM的发病;BLyS及其受体表达水平也许可作为预后的一个指标.     

人外周血初始B细胞和记忆性B细胞亚群的特征和功能

B淋巴细胞是免疫系统的重要免疫成份,主要功能是介导体液免疫应答.在人外周血中,按照B淋巴细胞的发育阶段及功能的不同,可将B淋巴细胞分为初始成熟B细胞、记忆B细胞和浆细胞.记忆B细胞又可分为IgM记忆B细胞和类型转换的记忆B细胞.近年来的研究表明,B淋巴细胞的亚群远比人想象中的复杂,因此对人B细胞各亚群的起源、发育和功能进行更深入的研究,将有助于治疗自身免疫性疾病,在慢性感染性疾病的治疗过程中找到新的策略,并指导研发安全有效的疫苗.     

EBV转化的人B淋巴母细胞和人B淋巴细胞杂交瘤细胞表面标记表达的研究

本文用碱性磷酸酶－抗碱性磷酸酶（ＡＰＡＡＰ）免疫组化染色技术，对ＥＢ病毒（ＥＢＶ）转化的人Ｂ淋巴母细胞（ＬＣＬ）、人Ｂ淋巴细胞杂交瘤以及它们的亲本骨髓瘤细胞系的部分表面标记进行了检测。结果显示，人Ｂ淋巴细胞在ＥＢＶ转化或杂交过程中表面标记发生了较大的变化；对ＬＣＬ和杂交瘤细胞表面标记的检测可能为探寻人Ｂ细胞在这些过程中染色体保留或丢失的规律提供一种手段。此外，ＬＣＬ及人Ｂ细胞杂交瘤细胞系有可能被用     

靶向BCMA的CAR-T细胞疗法在多发性骨髓瘤中的应用现状

多发性骨髓瘤(MM)是一种血液系统浆细胞恶性肿瘤,虽然自体干细胞移植、使用免疫调节药物及蛋白酶体抑制剂等疗法可以延长患者的生存时间,但是随着疾病的进展,免疫细胞功能损伤,容易导致疾病复发,因此,目前MM仍被认为是无法治愈的疾病。嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)免疫疗法,因其特异性的靶向治疗,在MM中的应用也逐渐得到关注。B细胞成熟抗原(BCMA)的表达主要限于恶性MM浆细胞表面,是使用CAR-T免疫疗法抗MM的理想靶点。本文对靶向BCMA的CAR-T疗法在MM中的最新研究进展进行了综述。     

IFN-γ和IL-6对多发性骨髓瘤B淋巴细胞刺激因子表达变化的调控研究

目的 探讨IFN-γ和IL-6对多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)B淋巴细胞刺激因子(BLyS)表达变化的影响及相关机制.方法 采用流式细胞术、实时荧光定量PCR、E1.ISA及Western blot方法 分析人MM肿瘤细胞KM3在IFN-γ和IL-6以及相关信号通路特异性抑制剂作用前后BLJys表达水平的变化.结果 lFN-γ和IL-6促进KM3细胞BLyS的表达水平;NF-KB抑制剂能够抑制BLyS的表达水平;NF-KB抑制剂BAY11-7082能够完全下调IFN-γ引起的BLyS表达的上调作用;抑制促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)的活性能够下调BLyS的表达水平.结论 MAPK与NF-KB信号通路参与了Blys的表达调节.     

50例多发性骨髓瘤患者外周血T细胞改变

多发性骨髓瘤伴有Ｔ细胞异常的５０例患者中，治疗前患者２３例，停药后复发者１２例，其末梢血ＯＫＴ＿３，ＯＫＴ＿４，ＯｋＴ＿４／ＯＫＴ＿８均低于正常对照（Ｐ＜０．００１），ＯＫＴ＿８相对增高，ＯＫＴ＿４下降与ＯＫＴ＿４／ＯＫＴ＿８比值降低在病情危重者尤甚。化疗可加深对Ｔ细胞亚群的抑制。中西医结合治疗的１６例息者ＯＫＴ＿４、ＯＫＴ＿８及ＯＫＴ＿４／ＯＫＴ＿８恢复正常水平。     

多发性骨髓瘤的免疫学研究

多发性骨髓瘤 (ｍｕｌｔｉｐｌｅｍｙｅｌｏｍａ ,ＭＭ )是发生在Ｂ细胞系统的恶性肿瘤。其特征是骨髓中浆细胞克隆性增殖并积聚 ,分泌单克隆的免疫球蛋白或其片段 (Ｍ蛋白 ) ,同时伴有广泛的溶骨病变或骨质疏松。作为一种代表性的免疫增殖性疾病 ,ＭＭ的免疫学研究一直受到血液学和免疫学工作者的关注 ,近年来该领域更是成果斐然 ,引人瞩目。1　骨髓瘤细胞的起源[1 ]Ｂ细胞发育、分化过程中的哪一个阶段发生恶变 ,继而进一步分化为恶性细胞 ,是ＭＭ临床和科研人员一直关注的焦点之一 ,概括起来有以下几种假设。1 1　造血干细胞　依据主要有…     

NF-κB抑制剂PDTC对人骨髓瘤U266细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨NF-κB特异性抑制剂PDTC对多发性骨髓瘤U266细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法:采用不同浓度PDTC(25、50、100和200μmol/L)处理U266细胞,CCK-8法和活细胞计数检测U266细胞的增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期;RT-qPCR及Western blot检测PDTC处理前后DNA甲基转移酶1(DNMT1)mRNA和蛋白的表达;Western blot检测NF-κB(P65)、DNMT1、Bcl-2、cyclin D1、cleaved caspase-3和cleaved caspase-8的蛋白水平。结果:PDTC处理U266细胞48 h后,NF-κB(P65)的蛋白水平被抑制;PDTC抑制U266细胞增殖,作用呈浓度及时间依赖性;PDTC作用48 h后,与对照组比较,细胞凋亡率呈浓度依赖性增高(P0.05),细胞被阻滞在G2期;DNMT1的mRNA及蛋白水平均降低;Western blot结果显示PDTC可通过抑制NF-κB下调Bcl-2的表达,使cyclin D1、cleaved caspase-3和cleaved caspase-8蛋白水平增加。结论:PDTC抑制NF-κB信号通路,通过诱导U266细胞凋亡从而抑制细胞增殖,其机制可能与抑制DNMT1的表达、阻滞细胞周期和启动凋亡途径有关。     

糖基化修饰的树突状细胞疫苗激发的骨髓瘤特异性T细胞免疫反应

探讨经糖基化修饰的肿瘤相关糖抗原冲击树突状细胞(DC)后,所得DC疫苗对骨髓瘤患者自身T细胞的刺激作用。采用化学方法及细胞生物工程法,使骨髓瘤细胞表达新肿瘤相关抗原N-丙酰多聚唾液酸(NPrPSA);在无血清培养条件下用GM-CSF/IFN-α及TNF-α诱导培养多发性骨髓瘤(MM)患者外周血单核细胞DC,继用表达新抗原的肿瘤细胞冲击制备DC疫苗,并与MM患者自身T细胞共同温育,流式细胞仪分析CD4+CD29+、CD8+CD28+及CD69+T细胞。结果显示糖基化修饰的骨髓瘤DC疫苗与正常细胞相比,可明显诱导CD4+及CD8+T细胞的活化。糖基化修饰的DC疫苗可激发骨髓瘤特异性T细胞免疫反应,将为靶向性杀伤骨髓瘤细胞奠定基础。