脂质体介导的IGF-1R反义寡核苷酸抗胰腺癌的实验研究

目的研究辐射促进脂质体（hpofectin）介导的胰岛素样生长因子-1受体（IGF-1R）反义寡核苷酸（ASON）抑制人胰腺癌细胞系PC-3的生长及接种裸鼠后的成瘤性。方法PC-3细胞经不同剂量^60Co照射后，绘制剂量存活曲线，选择照射剂量。用噻唑蓝（MTT）比色法比较脂质体介导的ASON（lipo—ASON）直接转染与联合照射转染对PC-3细胞的抑制效果，用流式细胞术和逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测两种转染方法对PC-3细胞凋亡率及IGF-1R mRNA表达的影响。裸鼠种植PC-3细胞，肿瘤直径为5mm时，比较不同条件下（肿瘤局部照射与不照射）瘤内注射IGF-1R lipo—ASON对肿瘤的抑制情况。结果Lipo—ASON联合照射对胰腺癌细胞的抑制率（86．3％）、凋亡率（53．06％）及IGF—1R mRNA水平降低程度（降低79．2％）均明显高于未照射组（51．1％、20．25％和45.6％），差异有显著性。照射后瘤内注射lipo—ASON组的肿瘤体积明显小于其他各组，空白对照组与联合照射的lipo—ASON组、Lipo—ASON组肿瘤体积差异有显著性（P〈0．01）。结论针对IGF-1R的ASON能有效抑制肿瘤生长，当与辐射联合时，可显著提高抗瘤效果。     

WT1反义寡核苷酸对白血病细胞的抑制作用

造血细胞的增殖受多种因子的调控 ,白血病的发生与基因的异常表达有关。Ｗｉｌｍｓ肿瘤基因(ＷＴ1)位于染色体 11ｐ13,编码一个具有激活和抑制双重功能的转录调控蛋白。ＷＴ1可以作用于许多与造血细胞增殖有关的基因 ,在不同的肿瘤发生和发展过程中起重要作用〔1、2〕。ＷＴ1在成熟细胞中未见表达或表达很低 ,而在大多数白血病细胞中则高度表达 ,且与白血病患者的预后有关 ,表达增高并持续阳性者 ,预后较差 〔3、4〕。本研究应用ＷＴ1反义寡核苷酸 (ＷＴ1ＡＳＯ)封闭白血病细胞ＷＴ1基因的表达 ,然后观察其对白血病细胞增殖的抑制作用 ,以探…     

脂质体介导C-myc基因反义寡核苷酸对人膀胱癌细胞系Biu-87的生物学影响

目的 :探讨应用脂质体 (LR )介导C -myc基因反义寡核苷酸 (ASODN)对人膀胱癌细胞系Biu - 87的生物学影响。方法 :采用细胞计数、MTT比色法评价反义C -myc寡核苷酸对Biu - 87细胞体外增殖的影响 ,应用免疫组化 (SABC)、DAB显色检测C -myc反义寡核苷酸作用癌细胞后C -myc蛋白的表达情况。结果 :脂质体介导C -myc反义寡核苷酸组与对照组相比 ,Biu - 87细胞增殖活性受到明显抑制 (P <0 .0 5 ) ,12h后可抑制C -myc基因蛋白表达。结论 :脂质体介导C -myc反义寡核苷酸可抑制人膀胱癌细胞体外增殖活性。应用反义技术封闭C -myc癌基因表达 ,为膀胱癌的基因治疗提供了新的思路     

脂质体介导^99Tc^m-EGFR mRNA反义肽核酸在荷SKOV3卵巢癌裸鼠体内的分布及显像

目的 评价脂质体介导对^99Tc^m-表皮生长因子受体（EGFR） mRNA反义PNA体外靶细胞摄取、荷瘤裸鼠体内特异显像及生物学分布的影响.方法 利用碱基互补配对原则将带有短肽螯合功能的EGFRmRNA反义PNA与部分互补寡核苷酸杂交,再以配体交换法对反义探针进行^99Tc^m标记,然后以脂质体包裹反义探针,用HPLC法鉴定标记物的标记率.分析脂质体介导及非脂质体介导^99Tc^m-EGFR mRNA反义PNA在体外人卵巢癌SKOV3细胞中的摄取率及滞留率的差别,同时分析两者在荷SKOV3卵巢癌裸鼠模型体内生物学分布及显像情况的差异.数据分析采用两样本t检验（或t＇检验）及Wilcoxon秩和检验.结果 脂质体介导及非脂质体介导^99Tc^m-EGFR mRNA反义PNA6h内标记率均在95％以上.两者在注射后1、2、4、6、12及24 h后的细胞摄取率分别为（28.90±1.12）％、（32.76±1.20）％、（38.20±3.11）％、（41.23±1.60）％、（46.63±1.55）％和（46.78±2.14）％,（3.51±0.39）％、（3.90±0.40）％、（4.69±0.18）％、（5.91±0.26）％、（5.30±0.22）％和（5.39±0.17）％,差异有统计学意义（t＇=47.11～58.67,Z=2.80,均P＜0.05）,两者滞留率差异亦有统计学意义（t＇=7.25～11.55,Z=2.80,均P＜0.05）.注射两探针后1h荷瘤裸鼠肿瘤部位均可显像,但脂质体介导使肿瘤显像更为清楚,肿瘤摄取高峰T/NT由3.95上升至5.02,并明显增加注药后各时间点T/NT（t=3.96,t＇=12.65～ 14.69,Z=2.83～5.29,均P＜0.05）.分子探针主要分布在肿瘤、肾脏及肝脏组织中.肿瘤摄取量随时间逐渐增加,1h时非介导组为（1.49±0.09） ％ID/g,介导后为（2.15±0.21） ％ID/g;6 h时分别为（3.90±0.65） ％ID/g和（5.00±0.10） ％ID/g;脂质体介导后可增加注药后各个时间点的肿瘤/肌肉（t=11.24,t＇=3.96～ 11.94,均P＜0.05）.结论 脂质体介导可以明显促进^99Tc^m-EGFR mRNA反义PNA进入细胞,并提高对EGFR高表达肿瘤的显像效?     

易瑞沙对晚期肺腺癌疗效及血清中IGF-1、IGF-2和EGFR的影响

目的探讨易瑞沙治疗晚期肺腺癌的临床效果及对血清中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、胰岛素样生长因子-2(IGF-2)和表皮生长因子受体(EGFR)的影响。方法选择在我院确诊的150例晚期肺腺癌患者作为研究对象,随机分为两组,观察组75例,应用易瑞沙治疗,对照组75例,应用常规化疗。应用ELISA法检测治疗后两组血清中IGF-1、IGF-2和EGFR的表达。结果观察组治疗8周后的有效率明显高于对照组。观察组治疗8周后血清中IGF-1、IGF-2和EGFR的表达均明显低于对照组。结论易瑞沙对晚期肺腺癌的治疗作用明显,且能有效下调血清中IGF-1、IGF-2和EGFR的表达,优化内环境。     

应用寡核苷酸芯片技术检测IGF-Ⅱ基因SNP方法的建立及其在运动能力相关基因研究中的应用

目的 :杰出运动能力受控于基因与环境的相互作用 ,由多基因控制。寡核苷酸芯片技术是近年出现的一类基因结构分析技术 ,此项技术出现使基因突变检测更加程序化和规模化。本研究选取与运动能力有关的胰岛素生长因子Ⅱ (IGF -Ⅱ )基因为该方法学及其应用研究的突破点 ,尝试把DNA芯片技术引入体育科研。方法 :寡核苷酸芯片技术。结果 :(1)IGF -Ⅱ基因SNP的分析中 ,基因组DNA采用 1∶2 0的套式扩增 ,杂交液中加氯化四甲氨 ,杂交温度 4 2℃ ,杂交时间 6 0min效果最好 ;(2 )国家自行车队的 6名队员基因型相同。结果表明 :(1)PCR产物可以直接用于检测突变 ,不对称PCR产物杂交阳性点信号更强 ;(2 )由碱基组成计算的Tm值与其实际的Tm值有一定的差距 ,会影响杂交温度 ;(3)有效的DNA载波片的处理效果直接影响杂交结果 ,是芯片制备中关键环节之一 ;(4)IGF -Ⅱ是研究运动能力相关基因的一个很好的候选基因。     

结肠癌细胞对吉非替尼的敏感性与MET和IGFR-1β及其配体IGF-Ⅱ的关系

胞中IGFR-1β和p-1GFR-1β的表达无明显变化(P>0.05);HT29细胞中IGFR-1β表达无明显改变,但p-IGFR-1β明显升高(P<0.05);HCT116细胞中IGFR-1β的表达较Lovo和HT29细胞更高(P<0.05).在吉非替尼作用下,HT29细胞中IGF-ⅡmRNA的表达水平明显增加(P<0.05).结论 MET的表达及活化状态与结肠癌细胞对吉非替尼的敏感性无关,而IGFR-1β的活性及其配体IGF-Ⅱ的自分泌增加与细胞对吉非替尼的耐受相关.     

EMT和IGF-1R表达与吉非替尼二线治疗晚期非小细胞肺癌疗效的关系

目的探讨晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者中上皮-间质转化(EMT)和胰岛素样生长因子1型受体(IGF-1R)表达与吉非替尼二线治疗效果的相关性。方法收集76例接受吉非替尼二线治疗的Ⅳ期NSCLC患者的临床资料和病理标本。采用免疫组化染色法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和IGF-1R表达情况,将E-cadherin(-)、Vimentin(+)定义为EMT(+),E-cadherin(+)、Vimentin(-)定义为EMT(-)。采用液相芯片技术对其中43例标本进行EGFR基因突变检测;根据患者的CT资料进行疗效评价,计算客观有效率(ORR)和疾病控制率(DCR)。分析EMTI、GF-1R表达与患者临床病理特征的关系,EMT与IGF-1R表达的相关性,IGF-1R、EMT表达与EGFR突变的关系,以及在NSCLC患者中EMTI、GF-1R表达对吉非替尼疗效的影响。结果 76例患者中,IGF-1R、E-cadherin和Vimentin的阳性表达率分别为64.5%4、6.1%和53.9%。EMT表达与临床病理特征未显示出相关性,但IGF-1R表达与NSCLC的病理类型相关,非腺癌患者阳性率[22/28(78.5%)]显著高于腺癌患者[27/48(56.2%)]。EMT与IGF-1R表达呈弱相关(r=0.252,P=0.028)。EMT(-)多见于EGFR突变型患者,而IGF-1R表达与EGFR突变状态无关。DCR和ORR在EMT(-)者(65.7%3、7.1%)较EMT(+)者(24.3%9、.8%)显著提高(P<0.05),在IGF-1R(-)者(66.7%3、7.0%)较IGF-1R(+)者(30.6%、14.3%)显著提高(P<0.05)。在EGFR突变型患者中,EMT(-)者的ORR较EMT(+)者有升高的趋势。在EGFR野生型患者中,EMT与IGF-1R双阴性者的ORR最高。结论 EMT和IGF-1R表达可能与吉非替尼的疗效相关,可作为吉非替尼二线治疗NSCLC的疗效预测因子之一。     

注射携人IGF-1基因的成肌细胞对小鼠损伤骨骼肌内源性mIGF-1表达的影响

目的:研究携人胰岛素样生长因子-1(human insulin-like growth factor-1,hIGF-1)基因的成肌细胞移植损伤小鼠体内后,内源性mIGF-1 mRNA及mIGF-1因子的表达情况。方法:雄性C3H小鼠(20~30g,7~11周)共76只随机分为3组:A组(转基因成肌细胞移植组)、B组(空白成肌细胞移植组)、C组(生理盐水对照组),每组24只。另4只鼠作正常对照。A、B、C各组小鼠于右下肢腓肠肌内侧面中段实施钝性打击,打击伤后第3天分别于致伤部位注入1×106个转基因成肌细胞、等量的空白成肌细胞或100μl生理盐水;打击伤后第2、5、10、15、20、30天,于各组中随机抽取4只小鼠处死,取右侧腓肠肌中段进行检测,以real time RT-PCR和免疫组化染色检测mIGF-1的表达。结果:(1)各组小鼠体内均有mIGF-1 mRNA的表达、mIGF-1免疫组化染色阳性;(2)A组小鼠mIGF-1 mRNA的表达和mIGF-1因子的分泌明显高于B、C组。结论:携hIGF-1基因的成肌细胞移植入钝挫伤的小鼠体内后,可促进mIGF-1 mRNA的表达和mIGF-1因子的分泌。     

高压氧疗法对老年原发性肾病综合征患者疗效及FIB、IGF-1的影响

目的:探究高压氧疗法(hyperbaric oxygen therapy,HBOT)对老年原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome,PNS)的疗效及对患者凝血功能和骨代谢的影响。方法:选择2017年2月至2019年2月入住重庆市江津区中心医院的老年PNS患者90例,按照随机数字表法分为对照...     

辐射促进多药耐药反义寡核苷酸逆转耐药的实验研究

目的探讨辐射促转染的多药耐药基因（mdr1）反义寡核苷酸（ASON）逆转肿瘤细胞KBv200的耐药效果。方法应用MTT法比较脂质体介导的ASON直接转染与联合辐射转染的情况下KBv200细胞对长春新碱（VCR）的半数抑制量（IC50），再利用RT-PCR方法和流式细胞仪检测两种不同的转染方法对KBv200细胞的mdr1-mRNA及其表达产物P-糖蛋白（P-gp）的调控情况。采用耐药细胞株KBv200移植于裸鼠皮下，肿瘤局部2Gy^60Coγ射线照射后1h，瘤内注射脂质体介导的mdr1ASON，经VCR联合化疗。结果联合照射的ASON组明显优于未照射组（P〈0．05）。KBv200细胞的IC50、mdr1-mRNA的表达水平及P-gp的阳性率，均明显低于未照射组（P〈0．05）。联合照射组与未照射组肿瘤体积和肿瘤重量差异有统计学意义（P〈0．01）。结论辐射促转染的mdr1 ASON对肿瘤细胞具有较强的耐药逆转作用。     

电离辐射联合自噬和凋亡抑制剂或诱导剂对MCF7细胞的影响

目的 探讨电离辐射联合自噬抑制剂、诱导剂和凋亡抑制剂对MCF7细胞自噬和凋亡的影响。方法 MCF7细胞经0 Gy、4 Gy、4 Gy+rapamycin、4 Gy+3-MA、4 Gy+z-VAD-fmk不同方法处理后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞的生长倍增时间;采用Western blot检测MCF7细胞经不同方法处理后自噬特异蛋白LC3和beclin1的表达,并比较蛋白表达量的差异;流式细胞仪(FCM)检测不同处理方法MCF7细胞凋亡百分率。结果 经4 Gy照射后,MCF7细胞生长倍增时间明显长于未经照射的细胞生长倍增时间(t= 4.41,P<0.05);而4 Gy+rapamycin处理后,明显长于单纯4 Gy照射组(t= 4.35, P<0.05);经4 Gy + 3-MA和4 Gy+z-VAD-fmk处理后,均明显短于4 Gy+rapamycin组 (t= 4.32, P<0.05)。Western blot检测结果表明,Beclin1和LC3-Ⅱ蛋白表达4 Gy+rapamycin组为最高,4 Gy+3-MA组为最低,除4 Gy+3-MA组与4 Gy+z-VAD-fmk组比较差异无统计学意义外,其余各处理组间比较差异有统计学意义(t= 3.91~4.78, P<0.05)。结论 电离辐射联合自噬诱导剂可促进MCF7细胞凋亡;联合自噬抑制剂抑制自噬发生,进而延缓肿瘤细胞凋亡。     

C57小鼠受照后胸腺细胞基因表达谱的变化

目的 研究受1Gyγ射线照射后一个月,C57小鼠胸腺细胞细胞基因表达谱的变化。方法 使用Agilent小鼠oligo基因芯片技术,观察受照射小鼠和非受照射小鼠两组间的基因差异表达。结果 在所观察小鼠21319个基因中,107个基因在受照射小鼠胸腺组织中表达上调2倍以上(其中13个上调4倍以上),9个基因表达下调超过200%(其中2个下调超过400%),这些变化基因涉及细胞的一些基本代谢活动。结论 变化明显的基因功能涉及胚胎发育,组织形成与维持,免疫与应激、蛋白合成、凋亡、信号转导等,上调基因的数量远多于下调基因数量,其中编码角蛋白在胚胎发育中的作用值得注意。在变化明显的上调和下调基因功能中都涉及到PI3-K,也是一个值得继续关注的现象。     

电离辐射诱导EL-4细胞Caspase-3、P53蛋白表达及其生物学作用

目的研究电离辐射对EL-4细胞中Caspase-3和P53蛋白表达的影响，及其对辐射诱导细胞凋亡及多倍体细胞的作用。方法采用单克隆抗体免疫荧光标记及流式细胞术检测蛋白表达的变化，采用PI荧光标记及流式细胞术检测细胞凋亡及多倍体细胞的变化。结果实验表明，4．0GyX射线照射后8及12h，EL-4细胞中Caspase-3蛋白表达与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；照射后2、4、8、12及24h，P53蛋白表达与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。实验还表明，4．0Gy照射后2、4、8、12、24、48及72h，EL-4细胞凋亡与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05～P〈0．001）；而照射后2～48h，多倍体细胞数与对照组比较则未见明显变化。结论电离辐射可诱导EL-4细胞Caspase-3及P53蛋白表达增高，可能在辐射诱导细胞凋亡中起重要作用，而辐射诱导多倍体细胞的分子通路则可能是P53非依赖性的。     

信号因子对辐射诱导胸腺淋巴细胞凋亡的影响

目的　观察信号因子皮质酮 (CS)、cAMP、cGMP、Ca2 和蛋白激酶C(PKC)对体外 4GyX射线照射诱导小鼠胸腺淋巴细胞凋亡的影响。方法　应用荧光发光分光光度仪检测胸腺淋巴细胞DNA裂解率。结果　 2～ 8Gy照射后 4～ 8h ,胸腺淋巴细胞DNA裂解率均明显高于对照组 (P <0 0 1)。与对照组比较 ,加入 0 0 1μmol LCS、5 0ng mlcAMP、0 0 5～ 0 4 μg mlCa2 结合载体离子霉素(Iono)和 0 0 5～ 0 4ng mlPKC激活剂豆蔻酰佛波醇乙酯 (PMA)均明显增加淋巴细胞DNA裂解率 ,P <0 0 5或 <0 0 1,而加入 5 0ng mlcGMP与对照组比较 ,无明显作用。对 0 0 1μmol LCS、5 0ng mlcAMP、0 2和 0 4 μg mlIono及 0 2和 0 4ng mlPMA分别加 4Gy照射 ,其DNA裂解率均明显高于单纯 4Gy照射组 ,P <0 0 5或 <0 0 1,而 5 0ng mlcGMP加 4Gy照射与单纯 4Gy照射组比较无明显差异。结论　在一定剂量范围内 ,信号因子CS、cAMP、Ca2 和PKC对大剂量X射线照射诱导小鼠胸腺淋巴细胞凋亡具有促进作用     

辐射对小鼠精子发生过程中印记基因表达的影响

目的筛选在小鼠精子发生过程中受电离辐射影响表达发生改变的印记基因。方法选择雄性BALB／c小鼠8只，分为实验组和对照组X射线全身照射0．1Gy／d，连续13d，建立辐射干扰小鼠精子发生模型。提取实验组和对照组睾丸RNA，采用上海生物芯片中心小鼠寡核苷酸基因表达谱芯片筛选表达发生改变的印记基因，对感兴趣的基因经半定量RT—PCR验证。结果12个表达发生改变的印记基因，6个上调，6个下调，其中Igf2、Peg3基因Ratio值分别为3．859和0．397，经半定量RT—PCR验证与芯片结果相符。结论X射线全身照射可导致小鼠睾丸部分印记基因表达发生改变。     

电离辐射及顺铂对人肺癌细胞中TOB1基因表达的影响

目的 探讨电离辐射及其联合顺铂对人肺腺癌细胞株SPCA-1、LTEP-α-2中TOB1基因表达的影响.方法 体外培养人肺腺癌SPCA-1、LTEP-α-2细胞,用X射线一次性照射,细胞吸收剂量为2、4、6、8和10 Gy,源靶距为100 cm,吸收剂量率为200 cGy/min,在6GyX射线照射后6、12、18和24 h取样;X射线和顺铂联合对TOB1表达的研究设立单纯照射组(6 Gy)、顺铂处理组(20 mol/L顺铂)和联合处理组(6 Gy +20 mol/L顺铂);上述实验同时设立未处理的对照组.采用RT-PCR和Western blot法检测TOB1 mRNA及蛋白表达水平的变化.结果 SPCA-1、LTEP-α-2细胞在不同剂量的X射线照射后24 h,其TOB1蛋白及mRNA表达量均明显增加(t=8.25 ～24.48,P ＜0.05);不同时间检测提示,细胞在X射线照射后6h,TOB1蛋白及mRNA的表达量即开始上升,并持续到照射后24 h(t=14.23 ～15.82,P＜0.05);联合处理组TOB1的表达量均明显高于单纯照射组、顺铂处理组和对照组(t=4.67 ～ 13.67,P＜0.05).结论 TOB1基因有可能作为临床肺癌放化疗靶基因,对临床放化疗疗效的判断具有一定的应用潜力.     

p21在电离辐射诱导EL-4细胞G_1期阻滞中的作用

目的　探讨 p2 1在电离辐射诱导EL 4细胞G1期阻滞中的作用。方法　采用North ernblot检测 p2 1WAF1mRNA水平的变化 ;采用流式细胞术检测 p2 1蛋白表达及细胞周期的变化。结果　 4 0GyX射线照射后 12h、2 4h、48hG1期EL 4细胞百分数明显高于假照射组 ;p2 1WAF1mRNA水平从照射后 1h开始升高 ,4h达峰值 ,持续至照后 12h ;p2 1蛋白表达在照射后 2～ 48h明显增高。结论　 4 0GyX射线照射可诱导EL 4细胞G1期阻滞 ,p2 1在电离辐射诱导EL 4细胞G1期阻滞中起重要作用。     

吩噻嗪衍生物协同放射对HeLa细胞增殖的抑制效应比较研究

目的 探讨吩噻嗪衍生物对人宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用及与放射联合应用抑制肿瘤的协同效应。方法 采用MTT法和细胞克隆形成法检测细胞的增殖活性和细胞辐射敏感性。结果 比较了6种吩噻嗪衍生物对HeLa细胞增殖的抑制效应，发现化合物α-氯-N-二甲胺基乙基吩噻嗪（PTZD2）、α-三氟甲基-N-二甲胺基乙基吩噻嗪（PTZD3）和α-氯-N-二乙胺基乙基吩噻嗪（PTZD5）的作用比较明显，在10μmol／L浓度能产生出显著抑制效应，40-50μmol／L浓度作用3和4d，细胞增殖完全被抑制而死亡。PTZD2或PTZD3与放射联合应用，显示出明显抗HeLa细胞增殖的协同效应，10μmol／L PTZD3对2和4Gy照射细胞的增殖抑制的增强比分别为3．5和1．8。实验结果还表明，在照射前18h用药的协同作用更加显著。结论 吩噻嗪衍生物具有程度不同的抑制HeLa细胞增殖的作用，与放射联合应用具有抗肿瘤的协同效应，而且照射前18h用药的效应最佳。