KAI1基因转染ATRA诱导对小细胞肺癌细胞株恶性特征的抑制作用

背景与目的:探讨新抑癌基因KAI1与全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)对小细胞肺癌NCI-H446细胞株抑制增殖和诱导分化的作用.材料与方法:用脂质体介导的基因转染方法,借助质粒表达载体(PCMV-NEO-XhoI),将抑癌基因KAI1转入小细胞肺癌NCI-H446细胞中,经G418筛选,获得稳定表达的细胞克隆.用10-6mol/L ATRA作用于转染及未转染KAI1基因的小细胞肺癌NCI-H446细胞株,集落形成率检测细胞体外增殖能力,流式细胞仪进行细胞周期和凋亡分析,间接免疫荧光染色结合流式细胞仪检测转染前后细胞CD82蛋白的表达.免疫组化测定MYC的表达,放射免疫测定LN(层连蛋白)表达.结果:ATRA处理脂质体-KAI1基因转染的小细胞肺癌细胞CD82表达降低,细胞增殖能力下降,凋亡增加,更多的细胞被阻止于G1/G0期,MYC及LN表达下降.结论:抑癌基因KAI1与ATRA对抑制小细胞肺癌NCI-H446细胞株的增殖和促分化有协同作用.     

KAI1基因转染协同ATRA诱导对肺腺癌细胞株抑制作用的研究

目的 :探讨新抑癌基因KAI1与全反式维甲酸 (all trans retinoicacid ,ATRA)对肺腺癌A5 49细胞株抑制增殖和诱导分化的作用。方法 :用脂质体介导的基因转染方法 ,借助质粒表达载体 (PCMV NEO XhoI) ,将抑癌基因KAI1转入肺腺癌A5 49细胞中 ,经G418筛选 ,获得稳定表达的细胞克隆。用 10 6mol/LATRA作用于转染及未转染KAI1基因的肺腺癌A5 49细胞株 ,MTT法检测细胞体外增殖能力 ,流式细胞仪进行细胞周期和凋亡分析 ,间接免疫荧光染色结合流式细胞仪检测转染前后细胞CD82 蛋白的表达。免疫组化测定myc、基质金属蛋白酶 (MMP 1)的表达 ,放射免疫测定层连蛋白(LN)表达。结果 :ATRA处理KAI1基因转染的肺腺癌细胞CD82 表达降低 ,细胞增殖能力下降 ,凋亡增加 ,更多的细胞被阻止于G1/G0 期 ,myc、MMP 1及LN表达下降 ,比对照组及单纯转染组细胞差异有统计学意义 ,P <0 0 5。结论 :抑癌基因KAI1与ATRA对抑制肺腺癌A5 49细胞株的增殖浸润转移有协同作用。     

抑癌基因p16INK4a与p53抑制白血病细胞株生长作用的比较

目的比较野生型p16INK4a、p53抑癌基因的表达对白血病细胞株K562和HL60的生长抑制。方法采用脂质体介导野生型p16INK4a、p53抑癌基因转染K562、HL60细胞并进行G418筛选,免疫印渍检测p16INK4a、p53基因的表达,通过细胞生长曲线检测细胞活力,流式细胞仪进行细胞DNA周期分析及细胞凋亡分析,采用联苯胺氧化试验检测K562细胞的分化。结果转染后p53、p16INK4a在K562及HL60细胞中表达;与对照细胞相比,实验组细胞生长受到明显的抑制,G1期细胞数增加,S期细胞减少。与p16INK4a相比,抑癌基因p53使细胞表达Annexin V增加,显示出更强的致凋亡现象,尤其在HL60细胞株。结论抑癌基因p16INK4a、p53能有效抑制白血病细胞株的生长,可能更适合复发、难治性白血病的基因治疗。     

KAI1/CD82通过Wnt/β-catenin通路对肾癌调控机制的研究

目的:检测KAI1/CD82和p-catenin在肾癌组织及细胞中的表达情况,探讨KAI1/CD82通过Wnt/β-catenin通路对肾癌的调控机制.方法:通过Western blotting检测我院近2年收集的30例肾癌及癌旁组织中CD82及β-catenin的表达;构建KAI1/CD82低表达质粒,转染肾透明细胞癌细胞系786-0和OSRC,划痕实验检测细胞迁移能力;CCK-8法检测细胞增殖能力;Transwell检测细胞侵袭能力;Western blotting检测β-catenin、Axin2、GSK-3β的表达.结果:肾癌组织中CD82表达低于癌旁组织,β-catenin的表达高于癌旁组织.PLTHR-SHKAI1质粒转染786-0和OSRC后,肾癌细胞的迁移、增殖、侵袭能力增强,β-catenin表达增高,Axin2、GSK-3β表达降低.结论:KAI1/CD82和β-catenin在肾癌组织中表达负相关,KAI1抑制肾癌细胞的迁移、增殖、侵袭能力;KAI1/CD82通过Wnt/β-catenin通路相关上游蛋白调控肾癌的发生、发展和转移.     

抑癌基因p16INK4a与p53抑制白血病细胞株生长作用的比较

 目的 比较野生型p16INK4a、p53抑癌基因的表达对白血病细胞株K562和HL60的生长抑制。方法 采用脂质体介导野生型p16INK4a、p53抑癌基因转染K562、HL60细胞并进行G418筛选，免疫印渍检测p16INK4a、p53基因的表达，通过细胞生长曲线检测细胞活力，流式细胞仪进行细胞DNA周期分析及细胞凋亡分析，采用联苯胺氧化试验检测K562细胞的分化。结果 转染后p53、p16INK4a在K562及HL60细胞中表达；与对照细胞相比，实验组细胞生长受到明显的抑制，G1期细胞数增加，S期细胞减少。与p16INK4a相比，抑癌基因p53使细胞表达Annexin V增加，显示出更强的致凋亡现象，尤其在HL60细胞株。结论 抑癌基因p16INK4a、p53能有效抑制白血病细胞株的生长，可能更适合复发、难治性白血病的基因治疗。     

KAI1基因在非小细胞肺癌中的表达及意义

 目的 探讨肿瘤转移抑制基因KAI1基因在非小细胞肺癌组织中的表达及其与患者临床病理指标的关系。 方法 采用RT-PCR和Western blot法,检测48例肺癌患者手术切除的新鲜肺癌组织标本和20例同期手术切除的肺部良性病变周围正常组织中KAI1 mRNA、KAI1/CD82,并结合患者的临床病理资料对其结果进行统计分析。 结果 肺癌组织和肺部良性病变组织中KAI1 mRNA的阳性率分别为52%和90%,KAI1/CD82蛋白的阳性率分别为48%和85%,肺癌组KAI1mRNA及KAI1/CD82蛋白表达均低于肺部良性病变组（P<0.01）;KAI1mRNA、KAI1/CD82表达水平与肺癌患者的临床分期、组织分化程度、淋巴结转移有关（P<0.05）,其中KAI1/CD82表达与淋巴结转移状况密切相关(P<0.01),肺癌组织中KAI1 mRNA与KAI1/CD82表达有相关性（P<0.01）。 结论 KAI1基因的低表达可能与非小细胞肺癌的发生、发展和转移有关;其下调的机制可能主要发生在转录水平;KAI1基因的表达可作为一项评估肺癌患者转移潜能的指标。     

非小细胞肺癌中KAI1基因表达及其与P53的相关性研究

背景与目的近年研究表明,KAI1表达下调与多种肿瘤的转移有关,但其与非小细胞肺癌的关系研究较少,且导致其下调的机制尚未明确。本研究从mRNA和蛋白水平探讨KAI1基因在非小细胞肺癌组织中的表达与患者临床病理特征的关系及其与突变型P53蛋白表达的关系。方法采用RTPCR和Westernblot法,检测48例肺癌患者手术切除的新鲜癌组织标本中KAI1mRNA、KAI1/CD82及突变型P53蛋白的表达,20例肺部良性疾病组织和正常肺组织作为对照。结果肺癌组和对照组中KAI1mRNA的阳性率分别为52%和90%(P<0.01),KAI1/CD82蛋白的阳性率分别为48%和85%(P<0.01),突变型P53蛋白阳性率分别为65%和5%(P<0.01)。KAI1mRNA、KAI1/CD82和突变型P53蛋白阳性率与肺癌患者临床分期、细胞分化程度和淋巴结转移有密切关系(P<0.05或P<0.01)。肺癌组织中KAI1mRNA与KAI1/CD82表达呈密切相关性(P<0.01),KAI1/CD82与突变型P53蛋白的表达亦呈显著相关性(P<0.05),KAI1mRNA与突变型P53表达无明显相关性(P>0.05)。结论KAI1基因的低表达可能与非小细胞肺癌的发生、发展和转移有关;其下调的机制可能主要发生在转录水平并与p53基因有关,二者可能作为评估肺癌患者转移潜能的指标。     

WT1在非小细胞肺癌中的表达及其与肺癌细胞增殖的关系

目的:探讨人非小细胞肺癌及其相应癌旁组织中WT1基因(Wilms' tumor gene 1,WT1)的表达,体外研究其与肺癌细胞增殖的关系.方法:应用实时荧光定量PCR法检测79例非小细胞肺癌组织及其相应癌旁组织中WT1 mRNA的表达情况.构建重组质粒pLV-GFP-WT1,并通过脂质体LipofectAMINE 2000将其瞬时转染至非小细胞肺癌H1299细胞中,应用蛋白质印迹法检测转染后H1299细胞中WT1蛋白的表达,CCK-8 (cell counting kit-8)法检测细胞的增殖情况.结果:非小细胞肺癌组织中WT1 mRNA的表达水平高于相应的癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.01).重组质粒pLV-GFP-WT1成功构建,并将其成功转染至H1299细胞中;转染后的H1299细胞中,WT1蛋白的表达水平上调;在pLV-GFP-WT1转染后24、36和48 h时,过表达WT1的H1299细胞增殖率高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:WT1 mRNA在非小细胞肺癌组织中的表达水平明显高于相应癌旁组织,高表达WT1基因能促进非小细胞肺癌H1299细胞的增殖,提示WT1在非小细胞肺癌中扮演癌基因的角色.     

KAI1基因对乳腺癌细胞体外增殖的抑制作用

目的研究KAI1基因对乳腺癌细胞体外增殖的抑制作用。方法应用脂质体法将pCMV-KAI1质粒转染人高转移性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中,免疫印迹方法检测蛋白表达;利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、平板克隆形成实验、体外黏附及侵袭力实验判断细胞增殖能力及黏附、侵袭力的变化。流式细胞术检测细胞生长周期的变化。结果获得了稳定表达KAI1基因的MDA- MB-231乳腺癌细胞克隆。MTT法显示,转染KAI1基因组的集落形成率(25.33%±2.36%)较转染前(43.17%±2.75%)明显降低(P<0.05)。体外黏附及侵袭力实验表明,转染组的细胞黏附侵袭能力低于未转染组和转染空载体组(P<0.05)。流式细胞术显示,转染KAI1后,G_0/G_1期细胞数量增高,从36.78%±0.61%升高至64.00%±7.56%;G_2/M期数量降低,由17.88%±0.76%降至7.63%±0.60%,差异有统计学意义。结论KAI1基因可以抑制乳腺癌细胞的增殖黏附和侵袭能力,并可能通过调节细胞周期来影响细胞的增殖。     

脂质体转染UCH-L1 siRNA对肺腺癌细胞系 H157细胞增殖和凋亡的影响

背景与目的泛素羧基末端水解酶-1(ubiquitin C terminal hydrolase-L1,UCH-L1)是近期研究较多的一类癌基因,在多种恶性肿瘤如食管癌、肺癌、乳腺癌等中均有异常表达和活性增强。本研究旨在探讨脂质体转染UCH-L1siRNA对人肺腺癌H157细胞增殖、凋亡的影响。方法人工合成抑制UCH-L1基因的siRNA片段,通过脂质体转染到H157细胞内,显微镜下观察其形态学变化;流式细胞术检测各组细胞周期变化和凋亡指数;RT-PCR检测UCH-L1mRNA的表达;Western blot检测UCH-L1蛋白表达。结果转染siRNA后的H157细胞,细胞增殖受到显著抑制,细胞出现明显凋亡,UCH-L1mRNA表达显著下降,UCH-L1蛋白水平显著下降。结论应用RNA干扰靶向抑制UCH-L1基因可以显著抑制H157细胞增殖,促进调亡。UCH-L1可能成为肺癌基因治疗的一个新靶点。     

BCSC-1基因异位表达对人小细胞肺癌细胞增殖的抑制效应

背景与目的:人乳腺癌候选抑制蛋白1(breast cancer suppressor candidate 1,BCSC-1)基因已被证实是一种新型抑癌基因,在多种肿瘤细胞均存在表达缺失的现象。该研究通过将BCSC-1基因转染至人小细胞肺癌细胞株NCI-H446,探讨BCSC-1基因异位表达对NCI-H446细胞增殖的抑制效应。方法:用PCR扩增BCSC-1 cDNA,构建真核重组表达载体pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1。通过脂质体把pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1和空质粒pcDNA3.1/v5-HisB转染入野生型NCI-H446细胞。以转染空质粒pcDNA3.1/v5-HisB的NCI-H446细胞为对照组,野生型NCI-H446细胞为空白对照组。采用流式细胞仪检测细胞周期;MTT法检测细胞增殖;免疫组化确认BCSC-1基因和CD44分子在NCI-H446细胞中的表达。结果:成功构建了真核重组表达载体pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1,制备了BCSC-1基因异位高表达的NCI-H446稳定细胞株。细胞周期分析显示,异位表达BCSC-1的NCI-H446细胞大部分阻滞在G0/G1期,明显高于对照组和空白组(P<0.01)。MTT法检测显示,异位表达BCSC-1的NCI-H446细胞与对照组、空白组相比,生长速度明显减慢(P<0.05)。免疫组化显示异位表达BCSC-1的NCI-H446细胞CD44表达增高。结论:BCSC-1基因的异位表达对NCI-H446细胞的恶性增殖行为有明显的抑制作用,这种抑制作用可能与细胞周期阻滞和黏附分子CD44表达增高有关。     

Slp2反义真核表达载体的构建及功能研究

背景与目的 肺癌相关基因的研究一直是研究的热门课题，S1p2基因是通过cDNA微阵列技术筛选出的肺癌差异表达基因之一，本研究旨在对S1p2基因在肺癌细胞系中的表达及其功能进行初步研究。方法 提取肺癌细胞系A549、GLC-82、NCI-H446、NCI-H460的细胞总RNA，用RT-PCR方法检测肺癌细胞系中S1p2基因mRNA水平的表达；构建S1p2反义基因，通过离子脂质体将克隆的S1p2反义基因导入肺癌细胞系GLC-82、NCI-H446、NCI-H460，用半定量RT-PCR检测转染目的基因对肺癌细胞系S1p2表达的影响；通过四唑盐比色法绘制细胞生长曲线以及流式细胞分析、软琼脂细胞克隆形成试验，观测转染S1p2反义基因对肺癌细胞系GLC-82、NCI-H446、NCI-H460生长速度、细胞周期以及细胞增殖能力的影响。结果 在4个肺癌细胞系中，S1p2基因均为阳性表达；转染S1p2反义基因后的肺癌细胞系GLC-82、NCI-H446、NCI-H460的细胞生长速度明显减慢；在流式细胞分析直方图上表现为G2期的细胞增多，并曾在转染目的基因的NCI-H446细胞流式直方图中观察到了位于G0／G1期左侧的“亚Gt峰”的出现；转染S1p2反义基因后肺癌细胞系的软琼脂培养细胞克隆形成率明显低于未转染细胞。结论 S1p2基因与肺癌细胞的生长、增殖力密切相关，有必要进行深入研究和探讨。     

Nuclear factor-kappaB-dependent expression of metastasis suppressor KAI1/CD82 gene in lung cancer cell lines expressing mutant p53

KAI1/CD82 has been shown to be a metastasis suppressor for several human cancers, and a recent study revealed that wild-type tumor suppressor p53 can directly activate KAI1/CD82 gene expression. However, the response of KAI1/CD82 expression in cancer cells to exogenous stimulants has not been investigated. The present study examined whether tumor necrosis factor (TNF), which mediates many of the cellular responses associated with inflammatory reactions or cancer progression, can affect the KAI1/CD82 expression in lung cancer cells and, if so, whether nuclear factor (NF)-kappaB, a key molecule in TNF-mediated gene expression, is involved in the mechanism of KAI1/CD82 induction. Our results demonstrated that expression of KAI1/CD82 in PC-14 cells expressing mutant p53 could be augmented by TNF-alpha, and that transfer of the gene for a specific inhibitor of NF-kappaB, IkappaB alphaSR (mutant IkappaB alpha; NF-kappaB super-repressor), into PC-14 cells could inhibit this augmentation. The amount of NF-kappaB in the nucleus of PC-14/IkappaB alphaSR cells correlated well with KAI1/CD82 mRNA and protein expression. In addition, IkappaB alphaSR gene transfer inhibited the spontaneous expression of KAI1/CD82 protein in KAI1/CD82-high-expressing RERF-LC-OK cells, which contain a mutant-type p53. These observations indicate that NF-kappaB activation may play a role in the regulation of KAI1/CD82 expression in lung cancer cells independently of wild-type p53, and suggest that KAI1/CD82 expression may be regulated by interaction with the host microenvironment.     

Mutation and expression of the metastasis suppressor gene KAI1 in esophageal squamous cell carcinoma

BACKGROUND: KAI1/CD82, a tumor metastasis suppressor gene, is correlated inversely with the progression and invasion of several tumors. It also has been reported that the KAI1 gene is related to the tumor suppressor gene p53. This study was performed to clarify the correlation between KAI1/CD82 expression and clinicopathologic characteristics and p53 expression in patients with esophageal squamous cell carcinoma (ESCC). The authors also investigated mutation of the KAI1 gene coding region to determine whether this may reduce KAI1 expression in ESCC. METHODS: Using immunohistochemistry with anti-KAI1 polyclonal antibody and monoclonal antibody against p53, KAI1/CD82 and p53 expression were detected in 55 patients with ESCC who had undergone surgery. The authors examined the KAI1 gene mutation in 22 patients with ESCC by polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) analysis and DNA sequencing. RESULTS: KAI1/CD82 expression was positive in 36 of 55 patients (65.5%). There was a significant inverse correlation between KAI1/CD82 expression and regional lymph node metastasis (P = 0.0045), distant metastasis (P = 0.0092), the number of lymph node metastases (P = 0.0019), and pathologic stage (P = 0.0046). The survival rates of KAI1/CD82 negative patients were poorer than those of positive patients (P = 0. 024). The correlation between KAI1 positive and p53 positive tumors was not statistically significant. None of the 22 patients with ESCC showed mutation of the KAI1 gene by PCR-SSCP. In one patient, there was polymorphism in the SSCP assay and DNA sequencing. CONCLUSIONS: The authors demonstrated immunohistochemically that the expression of KAI1 protein appeared to be correlated with lymph node metastasis. Mutation does not seem to be a mechanism for dysregulation of the KAI1 protein in ESCC.     

KAI1/CD82 expression as a prognosic factor in sporadic colorectal cancer

BACKGROUND: Since its identification as a suppressor gene for prostate cancer metastasis, down-regulation of KAI1/CD82 in a variety of malignancies has been reported. MATERIALS AND METHODS: Using immunohistochemistry, we examined KAI1/CD82 expression in surgical specimens obtained from 70 patients with advanced colorectal cancer and its correlation with clinicopathological factors, to clarify their prognostic significance. RESULTS: KAI1/CD82 expression was positive in 55% of the 70 colorectal cancers. There were statistically significant correlations between KAI1/CD82 expression and Dukes' stage, venous invasion, lymph node metastasis, tumor differentiation and liver metastasis. The significant correlation between KAI1/CD82 expression and outcome among patients with Dukes' C cancer (p=0.024) is particularly noteworthy. On multivariate analysis, KAI1/CD82 expression and Dukes' stage were identified as significant and independent prognostic factors (p=0.006 and 0.045, respectively). CONCLUSION: KAI1/CD82 expression closely correlates with clinicopathological factors for colorectal cancers. KAI1/CD82 expression appears to be a useful prognostic marker.