miR-216a-5p靶向作用于PAK2对膀胱癌细胞增殖和凋亡影响的体外研究

目的 探讨miR-216a-5p在多种膀胱癌细胞系中表达及调控p21活化蛋白激酶2（PAK2）基因对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 通过实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-216a-5p在正常膀胱细胞系SV-HUC-1及膀胱癌细胞系5637、J82、T24和EJ中的表达,选取其中两种表达miR-216a-5p最少的5637和J82为对象,实验分两组：对照组（转染miR-NC）、实验组（转染miR-216a-5p）。利用qRT-PCR法检测PAK2 mRNA的表达。Western blot法检测PAK2、p-Akt和p-ERK蛋白的表达。Cell Counting Kit-8（CCK-8）实验和克隆形成实验检测膀胱癌细胞活力和增殖能力。流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 miR-216a-5p在膀胱癌细胞系中的表达量均低。实验组PAK2基因mRNA及其蛋自的表达明显降低,PAK2 mRNA在5637细胞中对照组和实验组表达量分别为1.01±0.15和0.40±0.11（P<0.01）,在J82细胞中对照组和实验组表达量分别为1.00±0.09和0.56±0.14（P<0.01）。p-Akt和p-ERK蛋白表达显著降低。实验组细胞活力明显被抑制,增殖能力明显降低。实验组细胞凋亡显著增加（P<0.01）。结论 miR-216a-5p在多种膀胱癌细胞系中呈低表达,可在体外靶向抑制PAK2基因,抑制膀胱癌细胞系5637和J82的增殖能力,促进细胞凋亡,可能成为具有膀胱癌生物治疗意义的靶标分子。     

肿瘤相关成纤维细胞通过IL-6/STAT3通路介导胰腺癌中髓源性抑制细胞的分化

目的 探讨胰腺导管腺癌（PDAC）中肿瘤相关成纤维细胞（CAF）介导髓源性抑制细胞（MDSC）分化相关作用机制及生物学意义,为揭示CAF和MDSC通过重塑胰腺癌微环境促进胰腺癌进展提供理论基础和实验依据。方法 分离纯化PDAC肿瘤组织中原代CAF,以人包皮成纤维细胞（HFF）作为对照,通过实时荧光定量PCR、酶联免疫吸附试验检测筛选CAF中表达上调的细胞因子。分别使用CAF和HFF培养上清培养人外周血单个核细胞（PBMC）,观察PBMC的分化情况,研究上述细胞因子参与调节MDSC分化、发挥募集作用的具体机制。结果 分离的原代CAF表达活化标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和成纤维细胞激活蛋白a（FAPa）,对照细胞HFF不表达α-SMA和FAPa。CAF培养上清中白细胞介素6（IL-6）、基质细胞衍生因子1（SDF-1）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的表达量均高于HFF培养上清（P均<0.01）,而且IL-6、SDF-1、MCP-1的表达量随培养时间的延长而增加（P均<0.01）。与HFF培养上清相比,CAF培养上清能够促进更多的PBMC分化成CD13高表达的中性粒细胞样MDSC（CD13^hi-nMDSC;P<0.01）。在培养体系中单独加入人重组IL-6蛋白可以诱导PBMC向CD13^hi-nMDSC分化（P<0.01）,单独加入人重组SDF-1或MCP-1蛋白不能诱导CD13^hi-nMDSC亚群的增加;加入IL-6中和抗体或信号转导与转录激活因子3（STAT3）抑制剂FLLL32后能够明显减少由CAF培养上清诱导的分化（P<0.05）。结论 CAF可通过IL-6/STAT3通路促进PBMC分化为CD13^hi-nMDSC。     

选择性环氧合酶-2抑制剂NS398对人肺癌裸鼠移植瘤生长抑制作用研究

目的 探讨选择性环氧合酶-2抑制剂NS398对人肺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其机制。方法 建立人肺癌A549细胞的裸鼠皮下移植瘤模型,成瘤后20只裸鼠随机分为4组：对照组、NS398低剂量（1.5mg/kg）组、NS398中剂量（3.0mg/kg）组和NS398高剂量（4.5mg/kg）组。各组均采用腹腔注射给药,每周3次,共4周。给药期间每隔7日测量肿瘤体积。最后一次给药次日,处死裸鼠完整剥取肿瘤,测量肿瘤重量并计算抑瘤率。TUNEL法检测各组移植瘤标本细胞凋亡情况,免疫印迹法检测survivin、XIAP和cleaved caspase-3蛋白表达情况。结果 NS398各剂量组肺癌移植瘤生长速度均慢于对照组,各剂量组肿瘤重量显著低于对照组（P<0.01,P=0.000）,呈剂量依赖性。各剂量组的抑瘤率分别为30.18%、46.50%和53.87%。TUNEL法结果显示,与对照组比较,NS398各剂量组凋亡指数均显著增加（P<0.01,P=0.000）,并呈剂量依赖性。免疫印迹法结果显示,与对照组比较,NS398各剂量组survivin和XIAP蛋白表达量均显著减少,cleaved caspase-3蛋白表达量均显著增加（P=0.000）,也呈明显剂量依赖性。结论 NS398能明显抑制人肺癌裸鼠移植瘤的生长,并诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能与下调survivin和XIAP蛋白表达,上调cleaved caspase-3蛋白表达有关。     

Beclin 1、LC3在前列腺癌中表达及其与淋巴转移的关系

目的 检测自噬相关蛋白Beclin1及LC3在良性前列腺增生、前列腺癌标本及盆腔淋巴结中的表达并探讨其意义。方法 应用免疫组织化学方法,检测自噬相关蛋白Beclin1及LC3蛋白在41例前列腺癌组织、60例良性前列腺增生组织,17例转移淋巴结组织及24例正常盆腔淋巴结组织的表达。结果 免疫组织化学方法检测Beclin 1、LC3在正常前列腺增生组织中阳性表达率明显高于前列腺癌组织（P<0.05）,不同Gleason分级间前列腺癌的Beclin l、LC3表达差异无统计学意义（P >0.05）。晚期前列腺癌（C+D期） Beclin1、LC3表达水平高于早期（A+B期）。Beclin 1、LC3在转移淋巴结组织中阳性表达率高于正常盆腔淋巴结组织（P<0.05）。结论 自噬相关蛋白Beclin1、LC3参与前列腺癌的发生及发展,在不同临床分期发挥不同作用,细胞自噬抑制剂与化疗药物结合有望成为一个新的治疗靶点。     

高糖活化小鼠小胶质细胞BV-2模型的建立

目的 观察高糖（Glu）对小鼠神经小胶质细胞BV-2活化的影响。方法 将BV-2细胞分成：正常对照组（25mmol/L Glu）,脂多糖组（1μg/ml LPS）,高糖组（75mmol/L Glu）,培养24h,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT检测细胞活力,激光扫描共聚焦显微技术、Western blot法及实时荧光定量PCR技术检测BV-2活化的标志物CD11b的表达。结果 高糖组、LPS组细胞活力与正常对照组相比差异均无统计学意义（P >0.05）;高糖组BV-2 CD11b蛋白含量较正常对照组显著升高（P<0.01）,与LPS组类似（P >0.05）;高糖组BV-2 CD11b-mRNA值较正常对照组显著升高（P<0.01）,且显著高于LPS组（P<0.01）。结论 75mmol/L高糖培养BV-2 24h,在不影响细胞活力的条件下,可显著上调BV-2活化标志物CD11b蛋白及mRNA表达,作用与LPS相当。     

尼古丁对血管内皮细胞自噬的影响

目的 初步探讨尼古丁对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endotheliel cell,HUVEC）自噬的影响。方法 采用蛋白免疫印迹（Western blot）技术分别检测尼古丁不同浓度（0、6×10^-8、6×10^-7、6×10^-6和6×10^-5mol/L）和不同时间（浓度为6×10^-6mol/L时,分别干预0、1.5、3、6和12h）作用后,人脐静脉内皮细胞中自噬标志性蛋白微管相关蛋白轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）蛋白表达水平的变化,以确定尼古丁的最佳刺激浓度和最佳刺激时间。依据尼古丁最佳条件将体外培养的HUVE细胞随机分组：对照组、尼古丁处理组,Western blot法检测LC3Ⅱ、多聚泛素结合蛋白p62/SQSTM1（p62）和溶酶体相关膜蛋白-2（LAMP-2）的蛋白表达,Annexin Ⅴ-FITC/PI双染流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测细胞凋亡率。结果 体外实验显示,LC3Ⅱ蛋白表达呈浓度和时间依赖性,且尼古丁浓度为6×10^-6mol/L、时间为6h时,LC3Ⅱ蛋白表达最多（P<0.01）。与对照组相比,尼古丁处理组LC3Ⅱ、p62蛋白表达显著增加（P<0.05）,LAMP2蛋白表达减少（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.01）。结论 尼古丁可以引起自噬体与溶酶体融合障碍,使自噬降解异常,导致内皮细胞自噬功能紊乱,促进细胞凋亡。     

微小RNA-382-5p靶向作用核因子蛋白90对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察微小RNA-382-5p （miR-382-5p）对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 采用荧光实时定量聚合酶链反应（qPCR）的方法检测miR-382-5p在9例乳腺癌患者癌组织和乳腺癌细胞株中的表达,细胞计数试剂盒（CCK-8）法和平板克隆实验分别检测过表达miR-382-5p后乳腺癌细胞活力和增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。qPCR和Western blot法检测过表达miR-382-5p的乳腺癌细胞中核因子蛋白90（NF90）的表达。采用荧光素酶活性实验验证miR-382-5p对靶基因的靶向作用。结果 miR-382-5p在乳腺癌组织和细胞中低表达（P<0.05）,过表达miR-382-5p可抑制乳腺癌细胞的增殖能力,促进细胞的凋亡（P<0.01）。转染miR-382-5p模拟物组NF90基因的相对表达量较miR-NC组明显降低（P<0.01）。荧光素酶活性实验显示miR-382-5p与NF90基因3''非翻译区存在靶向关系（P<0.01）。结论 miR-382-5p对乳腺癌细胞的增殖具有抑制作用,对细胞的凋亡具有促进作用,其机制与靶向抑制NF90基因表达有关。     

丙泊酚对未成年肥胖模型大鼠认知功能损害的机制

目的 研究丙泊酚对未成年肥胖大鼠认知功能的影响,并探讨其与海马组织中血红素加氧酶1（HO-1）、超氧化物歧化酶1（SOD1）蛋白及血浆中S100钙结合蛋白β（S100β）表达的关系。方法 取3周龄雄性SD大鼠140只,随机分为基础饲料组（n=40）和高脂饲料组（n=100）。基础饲料组予基础饲料喂养,高脂饲料组予高脂饲料喂养。喂养4周后,取高脂饲料组体质量≥基础饲料组平均体质量+1.4倍标准差的40只大鼠判定为肥胖建模成功。将基础饲料组大鼠随机分为正常脂肪乳组（NL组）、正常丙泊酚组（NP组）,将建模成功的肥胖大鼠随机分为肥胖脂肪乳组（OL组）、肥胖丙泊酚组（OP组）,每组均为20只。丙泊酚组腹腔注射丙泊酚100 mg/kg,脂肪乳组（对照）腹腔注射脂肪乳100 mg/kg,每天注射1次,连续7 d。停药后第1天,各组大鼠行Morris水迷宫实验评估大鼠空间学习记忆能力,ELISA检测大鼠血浆S100β含量,蛋白质印迹法检测海马组织中HO-1、SOD1蛋白表达,H-E染色观察海马CA1区神经元的变化。结果 与OL组比较,OP组第1～5天逃逸潜伏期均延长（P均<0.05）,第三象限停留时间缩短（P<0.05）,穿越平台次数减少（P<0.05）,血浆中S100β蛋白表达升高（P<0.05）,海马组织中HO-1和SOD1蛋白相对表达量均降低（P均<0.05）,海马CA1区神经元数量减少（P<0.01）。与NL组比较,NP组第1、2天逃逸潜伏期均延长（P均<0.05）,上述其余指标差异均无统计学意义（P均>0.05）。结论 丙泊酚通过下调未成年肥胖大鼠海马组织中抗氧化因子HO-1和SOD1的表达使大鼠S100β表达和氧化应激增加,从而导致其认知功能损害。     

Piwi互作RNA的筛选及其在儿童肾母细胞瘤组织中的表达

目的 探讨Piwi互作RNA（piRNA）在儿童肾母细胞瘤中的表达及临床意义。方法 对Piwi样蛋白2（Piwil2）基因重编程人成纤维细胞所形成的肿瘤样干细胞进行高通量测序,筛选出差异表达piRNA,并利用miRanda软件预测其靶基因,对靶基因进行基因本体（GO）功能分析。采用qRT-PCR检测差异表达piRNA及其靶基因在34例肾母细胞瘤患儿肿瘤组织及癌旁正常肾组织标本中的表达,并分析差异表达piRNA及其靶基因与肾母细胞瘤临床病理特征的关系。结果 通过高通量测序筛选出230个差异表达piRNA,利用miRanda软件预测出43个靶基因,经GO分析发现其参与的生物学过程主要为调节细胞钙离子浓度,分子功能主要为参与ATP酶的活动及多聚A尾RNA结合。选取5个未知的差异表达piRNA及其靶基因检测其在肾母细胞瘤肿瘤组织及癌旁正常组织中的表达情况,结果显示第13位未知上调piRNA（NU13）表达量在肿瘤组织中下调（P<0.01）,其靶基因NOP56核糖核蛋白（NOP56）表达在肿瘤组织和癌旁正常组织中差异表达无统计学意义（P=0.58）;第9位未知上调piRNA（NU9）表达量在肿瘤组织中下调（P<0.01）,其靶基因40S核糖体蛋白S8（RPS8）基因在肿瘤组织和癌旁正常组织中差异表达无统计学意义（P=0.29）;第5、7、9位未知下调piRNA（ND5、ND7、ND9）及其共同靶基因MT-RNR2样蛋白1（MTRNR2L1）基因的表达量在肿瘤组织中均下调（P均<0.01）。以上在儿童肾母细胞瘤组织中出现差异表达的piRNA及其靶基因与患儿年龄、性别、肿瘤临床分期、病理分型无明显相关性（P均>0.05）。结论 piRNA NU9、NU13、ND5、ND7、ND9及靶基因MTRNR2L1在儿童肾母细胞瘤组织中出现差异表达,有望成为鉴别肾母细胞瘤与正常肾组织的标志物。     

新疆老年维吾尔族2型糖尿病患者四肢动脉硬化与轻度认知功能障碍的相关性分析

目的 探讨新疆老年维吾尔族2型糖尿病患者四肢动脉硬化与轻度认知功能障的相关性。方法 选择性别和年龄配比的80例维吾尔族2型糖尿病老年患者及40例健康维吾尔族老年受试者,评估两组被试血压、血脂、血糖和动脉硬化指数及与蒙特利尔认知量表（MoCA）的相关性。结果 （1）糖尿病非轻度认知损害组或糖尿病MCI患者的收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）、空腹血糖（FBG）、餐后2h血糖（2hPBG）和糖化血红蛋白（HbA1c）均较正常对照组显著升高（P<0.01）,HDL较正常对照组显著降低（P<0.01）,糖尿病MCI组患者的SBP和DBP较糖尿病非MCI患者显著升高（P<0.01）;（2）糖尿病非MCI组患者MoCA评分较正常对照组显著降低（P<0.01）,而臂踝脉搏波传导速度（BaPWV）较对照组显著升高（P<0.01）,糖尿病MCI组患者MoCA评分较糖尿病非MCI组显著降低（P<0.01）,而BaPWV较糖尿病非MCI组显著升高（P<0.01）;（3）多因素Logistic回归分析显示SBP、DBP和BaPWV与MoCA评分密切相关（P<0.05或P<0.01）;（4）糖尿病患者MoCA评分与BaPWV呈负相关（r=-0.347,P=0.002）。结论 老年维吾尔族2型糖尿病患者四肢动脉硬化程度与认知功能障碍明显相关,随四肢动脉硬化程度加深而认知功能损害加重。     

Breast cancer associated fibroblasts promote MCF-7 invasion in vitro by secretion of HGF

This study was aimed to explore the influence of breast cancer associated fibroblasts (CAFs) in migration and invasion of breast cancer cell line MCF-7,and investigate whether hepatocyte growth factor (HGF) is involved in this process.Primary breast CAFs and their corresponding normal breast fi-broblasts (NFs) were obtained by collagenase digestion.On the basis of the co-culture,the migration and invasion capacity of MCF-7 cells was compared between CAFs and NFs by Transwell.The differ-ence in the HGF expression between them was detected by ELISA.The secretion of HGF was knocked down by using RNA interference technology in CAFs.Then the changes of migration and invasion ca-pacity of MCF-7 cells were investigated by Transwell.Eventually,we isolated high-purity CAFs and NFs,and the CAFs had a stronger ability in promoting MCF-7 migration and invasion than the NFs.ELISA results demonstrated that CAFs secreted higher HGF,and the capacity of MCF-7 migration and invasion was declined after knocking down the secretion of HGF in CAFs by RNA interference.It is suggested that CAFs can promote MCF-7 migration and invasion through HGF in vitro.     

膀胱癌中GDF15基因启动子区甲基化检测及逆转其甲基化状态对5637膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 检测生长分化因子15(GDF15)在膀胱癌中的甲基化状态,探讨其启动子区异常甲基化对于膀胱癌发生发展的作用.方法 应用重亚硫酸盐测序PCR(BSP)联合T-载体PCR产物(TA)克隆检测人膀胱移行细胞癌细胞系5637、HT1376、KU19-19、膀胱癌组织、癌旁组织、正常组织样品中GDF15启动子区甲基化状态,并用甲基化酶抑制剂5-Aza-2-deoxycitydine(5-Aza-dc)处理5637,观察处理前后平均甲基化率的变化情况,Western blot法检测5637处理前后蛋白表达情况,MTT法检测细胞增殖情况,划痕实验检测迁移情况,Transwell法检测侵袭能力.结果 5637、HT1376、KU19-19细胞中GDF15启动子区平均甲基化率为89.29%、10.71%、8.33%,肿瘤组织、癌旁组织及正常组织分别为86.91%、9.52%、5.95%,膀胱癌组织中 GDF15启动子区甲基化率较癌旁组织和正常组织中高,差异有统计学意义(P<0.05);5-Aza-dc可以逆转5637中GDF15的甲基化状态:与处理前相比,处理组5637细胞系GDF15蛋白表达增加,增殖、迁移、侵袭能力下降,差异有统计学意义(P<0.05).结论 膀胱癌中GDF15基因表达与甲基化状态有关,启动子区高甲基化导致基因沉默,逆转甲基化状态可以使基因蛋白表达增加,细胞增殖、迁移、侵袭能力均降低.GDF15基因甲基化异常状态有可能成为膀胱癌诊断的潜在靶点.     

长链非编码RNA PTENP1在膀胱癌发生发展中的分子机制

目的 探讨长链非编码RNA PTENP1在膀胱癌发生发展中的分子机制.方法 通过逆转录实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测PTENP1,PTEN,miR-17在膀胱癌中的基础表达并关联分析.利用Western blot检测膀胱癌细胞系T24与5637中超表达PTENP1后PTEN的表达变化.通过荧光素酶报告试验验证miR-17对PTENP1及PTEN的靶向作用.最后通过在膀胱癌细胞系T24和5637中共表达miR-17和PTENP1,建立稳定共表达细胞系进行增殖和迁移实验,探索长链非编码RNA PTENP1在膀胱癌发生发展中的分子机制.结果 miR-17在膀胱癌中普遍呈现高表达趋势,PTENP1在膀胱癌中呈现普遍低表达趋势(P<0.05).与此同时miR-17和PTENP1的基础表达为负相关,PTENP1与PTEN的基础表达为正相关.WB实验发现于膀胱癌细胞系T24和5637中过表达PTENP1后可以在翻译水平增加PTEN的表达,荧光素酶报道实验验证了miR-17可同时靶向PTENP1及PTEN,在膀胱癌中miR-17具有促癌功能,同时在膀胱癌细胞中我们发现miR-17可以部分回复PTENP1的抑癌功能.结论 长链非编码RNA PTENP1在膀胱癌中发挥抑癌功能的分子机制可能是PTENP1结合miR-17作为竞争性内源RNA竞争,从而降低miR-17对抑癌基因PTEN的表达抑制.     

MicroRNA-192、ZEB1 对膀胱癌 上皮- 间质转化的影响

目的 探讨microRNA-192（miR-192）和锌指结构转录因子1（ZEB1）在膀胱癌组织中的表 达及其意义。方法 选取96 例择期行手术治疗的膀胱癌患者作为膀胱癌组，同期留取外伤性膀胱破裂患者正 常膀胱黏膜组织41 例作为对照组，采用荧光定量聚合酶链反应检测不同组织中miR-192 和ZEB 1 基因的表达， Western blot 检测不同组织中ZEB1、E-cadherin 及Vimentin 蛋白的表达，分析其相关性。结果 膀胱癌组织 中miR-192表达水平低于对照组（P <0.05），而ZEB1 mRNA 表达水平高于对照组（P <0.05）。膀胱癌组织 中miR-192 和ZEB1 mRNA 表达水平与病理学分级、TNM 分期、淋巴结转移与否有关（P <0.05）。Western blot 检测结果显示，膀胱癌组织中ZEB1 和Vimentin 蛋白表达水平高于对照组（P <0.05），而E-cadherin 蛋 白表达水平低于对照组（P <0.05）。Pearson 相关性分析显示，膀胱癌组织中miR-192 与ZEB1、Vimentin 蛋 白表达水平呈负相关（r =-0.279 和-0.318，均P =0.000），与E-cadherin 蛋白表达水平呈正相关（r =0.376， P =0.000）。结论 miR-192 在膀胱癌组织中呈低表达，miR-192 可能通过负性调控ZEB1 促进上皮- 间质 转化过程，从而加速膀胱癌的浸润和转移。     

OCT4在膀胱癌中的表达及其临床意义

目的检测干细胞标记物OCT4在膀胱癌中的表达,并探讨其与临床病理因素及肿瘤转移的相关性。方法采用Westernblotting、qRT-PCR检测OCT4在5种膀胱癌细胞株及人膀胱上皮永生化细胞株SV-HUC-1中的表达情况;同时收集46例患者膀胱癌根治手术切除的膀胱癌组织标本,应用免疫组织化学方法检测OCT4蛋白的表达。结果 OCT4在人类膀胱癌细胞株RT-4、Tcc-Sup、KK47、T24、5637中均有表达,而在人膀胱永生化细胞株中无表达。OCT4在膀胱癌组织中的表达率为76.1%,在正常膀胱组织中无表达。其异性染色定位于肿瘤细胞核内;膀胱癌组织OCT4蛋白阳性表达率显著高于正常组织(P<0.05);膀胱癌组织中的OCT4蛋白的表达与肿瘤病理分级呈正相关(P<0.05),与膀胱癌的浸润深度无相关性(P>0.05);与肿瘤转移呈正相关(P<0.05);与年龄、性别、TNM分期无明显相关性。OCT4阳性膀胱癌患者及阴性患者的3年总生存率分别为42.2%和76.7%,无转移生存率分别为35.4%和59.2%,结果均有统计学意义。结论膀胱癌组织中OCT4蛋白的表达与肿瘤分化程度及转移相关,对膀胱癌的早期诊断和预后分析有显著意义。     

长链非编码RNA-FENDRR在膀胱癌组织中的表达及临床意义

目的:探究长链非编码RNA-FENDRR在膀胱癌组织中的表达情况及其与膀胱癌患者临床预后的关系。方法:收集50例（对）膀胱癌组织,用qRT-PCR检测FENDRR的表达量;同样在T24、5637、EJ和 253J-BV 等4种膀胱癌细胞系中验证其表达水平。用χ2检验分析FENDRR和患者临床特征的相关性,用Kaplan-Meier生存曲线分析不同表达组患者的生存状况,用Log-rank检验两组患者的肿瘤特异性生存 率差异。结果:LncRNA-FENDRR在膀胱癌组织中明显下调（t=7.222,P＜0.000 1）,细胞系中验证结果一致,其中膀胱癌细胞系5637中表达量最低（P＜0.000 1）。相关性分析发现FENDRR表达水平与患 者浸润深度有关（χ2=4.612,P＜0.05）。生存分析发现,lncRNA-FENDRR低表达组患者的肿瘤特异性生存率显著低于高表达组（HR=3.17,95%CI:1.37～7.32,P<0.05）。结论:LncRNA-FENDRR在膀胱 癌组织中显著下调,其低表达与膀胱癌患者的不良预后有关。     

SLC39A6基因表达与膀胱癌的关系研究

目的 探讨SLC39A6基因在膀胱癌中的表达情况及其临床意义。方法 采用荧光定量PCR检测54例膀胱癌患者手术切除的病理标本中膀胱癌组织和相应的癌旁正常组织中SLC39A6基因的表达情况,并分析膀胱癌组织中SLC39A6基因的表达量变化与肿瘤的分级和临床病理分期之间的关系。结果 SLC39A6基因在癌旁正常组织中呈低表达,相对表达量为0.353±0.057;在膀胱癌组织中高表达,相对表达量为0.592±0.069,两组SLC39A6基因相对表达量比较差异有统计学意义（P<0.05）。在膀胱癌组织中,SLC39A6基因相对表达量与癌组织的临床分期、分化程度呈正相关（P=0.000）。结论 人膀胱癌组织中SLC39A6基因的表达水平较正常膀胱组织增高,并可能促进了膀胱癌细胞的侵袭和转移。     

乳腺癌前病变组织原代成纤维细胞生物学特征初步研究

目的比较乳腺导管不典型增生成纤维细胞(atypical intraductal hyperplasia fibroblasts,AFs)与正常乳腺成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)、乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)在生物学特征上的差异。方法采用Ⅰ型胶原酶法分离并培养AFs、NFs和CAFs,免疫细胞荧光化学检测其粘连蛋白(fibronectin,FN)表达以鉴定细胞纯度。比较3种细胞的细胞生长曲线、细胞周期和周期蛋白cyclin D1、p21waf1及p53的变化。结果获得并鉴定了NFs、AFs、CAFs;其生长速度依次增加(P<0.05),细胞周期S期百分比(8.24±2.47)、(16.94±4.77)、(33.31±7.90)依次增大(P<0.05);与NFs相比,AFs周期蛋白cyclin D1表达增加(P<0.05),p21waf1和p53蛋白表达降低(P<0.05);与CAFs相比,AFs的周期蛋白cyclin D1没有升高(P<0.05),p21waf1蛋白和p53蛋白表达更强(P<0.05)。结论 AFs相对于NFs和CAFs,细胞生长增殖具有特异性,这种变化提示乳腺肿瘤的癌前病变阶段AFs可能是NFs逐步向CAFs转变的过渡阶段。     

胍丁胺鞘内注射对骨癌痛大鼠痛行为及脊髓CXCL13表达的影响

目的 探讨胍丁胺鞘内注射对骨癌痛大鼠痛行为及脊髓趋化因子CXC配体13（CXCL13）表达的影响。方法 成年雌性SD大鼠60只,体质量200~220 g,采用随机数字表法分为3组：假手术组（A组）、骨癌痛组（B组）、骨癌痛+胍丁胺组（C组）,各20只。B、C组采用大鼠胫骨上端骨髓腔内注入Walker 256癌细胞的方法建立骨癌痛模型,A组胫骨髓腔内注射等量生理盐水,B、C两组鞘内置管。造模成功后,C组鞘内注射胍丁胺160 mg/kg,连续6天;B组鞘内给予等量生理盐水,连续6天;A组不作处理。于造模后第12天用von Frey丝测定3组大鼠机械缩足反射阈值（MWT）;痛阈测定结束后,麻醉处死大鼠,取脊髓组织,采用免疫荧光法检测CXCL13在神经元中的表达;采用Western blot法分析CXCL13蛋白表达及逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测CXCLl3 mRNA的表达。结果 建模后12天,与A组比较,B、C组大鼠MWT明显低于A组,与B组比较,C组MWT高于B组,差异均有统计学意义（P<0.05）。建模后12天,与A组比较,B、C组大鼠CXCL13在脊髓背角神经元中表达增加,CXCL13蛋白及其mRNA表达明显增加（P<0.05）;与B组比较,C组大鼠CXCL13在脊髓背角神经元中表达降低,CXCL13蛋白及其mRNA表达明显减少（P<0.05）。结论 鞘内注射胍丁胺可有效改善大鼠骨癌痛痛觉过敏行为,其机制可能与抑制大鼠脊髓CXCL13表达有关。