瞬时受体电位阳离子通道6作为疾病治疗靶点研究进展

瞬时受体电位阳离子通道6(TRPC6)在肾、心脏和肺等多个器官均有表达,是构成细胞膜钙库操纵性通道的分子基础,在细胞信号转导中起着重要作用。其基因突变或过量表达可引起细胞内钙离子信号通路异常,使得大量钙离子内流,导致机体各种病理生理过程的变化。通过特异性TRPC6通道抑制剂和RNA干扰技术干预其在相关疾病中的过量表达,可以改善或缓解病情,提示TRPC6可能作为疾病治疗的新靶点。本文就近年来关于TRPC6作为疾病治疗靶点的研究进展进行综述。     

经典瞬时受体电位C亚族通道在心血管疾病中的作用

经典瞬时受体电位通道C亚族（canonical transient receptor potential,TRPC）通道是细胞膜上的一种非电压门控性阳离子通道,广泛表达于心血管系统。胞质内Ca2+参与许多生命活动过程,其稳态对维持机体正常生理功能具有重大意义。几乎所有TRPC通道都能非选择性地渗透Ca2+。当TRPC基因突变或过度表达引起Ca2+内流变化,常造成一些心血管系统细胞基本功能的紊乱,参与相关疾病的病理生理过程。本文着重对TRPC通道在高血压、肺动脉高压、心肌肥厚、动脉粥样硬化和心律失常等心血管疾病中的作用新进展及可能的疾病治疗靶点进行综述。     

钙激活性中电导钾离子通道在子宫内膜癌细胞周期中的调控作用

目的探讨子宫内膜癌组织中钙激活性中电导钾离子通道(KCa3.1)的表达变化及其在子宫内膜癌细胞周期中的调控作用。方法应用蛋白质印迹法、Real-time PCR技术检测25例正常子宫内膜、26例非典型增生的子宫内膜和25例子宫内膜癌组织中KCa3.1蛋白和mRNA的表达;用克霉唑阻断剂和siRNA干扰两种方法,阻断KCa3.1的作用后,观察子宫内膜癌细胞HEC-1A细胞周期的变化。结果子宫内膜癌组织中KCa3.1 mRNA和蛋白的表达水平明显高于非典型增生的子宫内膜和正常子宫内膜组织(P<0.01);克霉唑呈剂量依赖性方式将细胞阻滞于G0～G1期,使S期细胞减少;转染siRNA细胞KCa3.1蛋白表达量为转染阴性对照siRNA细胞的(40.27±6.09)%,与转染阴性对照siRNA的HEC-1A细胞比较,转染KCa3.1 siRNA可将细胞阻滞于G0～G1期、使S期细胞减少;同时降低cyclin D1蛋白的表达。结论子宫内膜癌组织中KCa3.1的表达增高,KCa3.1可能通过影响cyclin D1蛋白表达参与子宫内膜癌细胞周期调控。     

子痫前期病人血清瞬时受体电位通道蛋白6检测

目的研究子痫前期病人血清经典瞬时受体电位通道蛋白6（TRPC6）水平变化及其意义。方法选取轻度子痫前期孕妇20例（轻度组）、重度子痫前期孕妇23例（重度组）以及因社会因素和头盆不称因素剖宫产病人25例（对照组）,采用EusA法检测3组孕妇血清中TRPC6的水平,并分析血清TRPC6与血压、血生化指标和24h尿蛋白总量的相关性。结果轻度组及重度组孕妇血清TRPC6水平均高于对照组,差异有显著性（F=5．98,q=3．43、4．68,P〈0．05）;轻度组和重度组TRPC6差异无显著性（P〉0．05）。轻度组与重度组血清TRPC6水平与24h尿蛋白总量呈正相关（r=0．841、0．897,P〈0．05）;与收缩压及舒张压也呈正相关（r=0．712、0．774,P〈0．05）;与三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）均无相关性（P〉0．05）。结论子痫前期病人血清TRPC6水平升高,并且与子痫前期病情严重程度有关。     

瞬时受体电位通道家族M8型受体转基因小鼠模型的建立

目的 建立瞬时受体电住通道家族M8型受体(TRPM8)转基因小鼠模型.方法 通过显微注射法将pcDNA3.1-hTrpm8导入C57BL/6J×CBA F1小鼠的受精卵中,并将其移植到假孕母鼠输卵管中获得子代小鼠.采用PCR方法鉴定子代基因型,通过RT-PCR和免疲印迹法检测Trpm8基因及蛋白在组织中的表达.结果 将405枚注射受精卵移植给15只假孕鼠,其中13只顺利妊娠并产下95只子鼠,经PCR鉴定得到5只转基因阳性首建鼠,其中4只小鼠可稳定传代,经与C57BL/6J小鼠回交7代后互交数代建系.子代转基因小鼠经RT-PCR检测发现Trpm8基因在心脏、肝脏、肾脏、脂肪和骨骼肌中均有表达,且TRPM8蛋白表达在转基因小鼠中显著增加.结论 通过显微注射法成功建立了Trpm8转基因小鼠模型.     

瞬时受体电位通道6在大鼠大脑冲击伤后铁代谢中的作用

目的 探讨瞬时受体电位通道6 (transient receptor potential channels 6,TRPC6)在大鼠大脑冲击伤后铁代谢中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠39只,分为假手术组、致伤组和DFO治疗组(n=13).参照Feeney法致伤,假手术组只开颅,不打击,致伤组和DFO治疗组开颅后,打击部位和打击量完全一致,2h后予以生理盐水及去铁胺100 mg/kg,间隔12h给药,持续28 d.于28 d取致伤灶周围脑组织进行脑铁含量检测,采用免疫荧光和Western blot检测方法,分别定性、定量检测瞬时受体电位通道6(TRPC6)在致伤灶周围的表达情况,并采用荧光双标检测TRPC6在神经元上的定位分布情况.结果 与假手术组比较,致伤组脑组织铁离子显著增加(P＜0.05),但DFO治疗组并未显著降低其含量(P＞0.05);免疫荧光检测结果显示致伤组TRPC6显著上调,DFO治疗组显著下调其表达;Western blot检测结果显示,与假手术组比较,致伤组TRPC6显著上调(P＜0.05),DFO治疗组显著下调其表达(P＜0.05);免疫荧光双标检测TRPC6与NeuN共表达情况,结果显示假手术组仅少量细胞表达TRPC6,且密度低,NeuN染色阳性的细胞胞体形态呈椭圆形,仅部分细胞共表达;致伤组致伤灶周围TRPC6表达明显增强,但却未见NeuN染色阳性的细胞;DFO治疗组可见NeuN染色阳性的细胞数量多,形态欠规则,与TRPC6共表达细胞数量增多.结论 大鼠TBI后铁离子具有神经毒性作用,能增加致伤灶周围神经元的损伤,而TRPC6可能在铁离子的神经毒性作用中扮演重要角色.     

瞬时受体电位通道蛋白6在人乳腺癌细胞中的表达及其对乳腺癌细胞侵袭能力的影响

目的：探讨瞬时受体电位通道蛋白6（TRPC6）在人乳腺癌细胞中的表达,阐明TRPC6与乳腺癌细胞侵袭能力的关联性。方法：常规培养的不同侵袭能力乳腺癌细胞株分为MCF-7（低侵袭组）和MDA-MB-231（高侵袭组）,采用Western blotting法和RT-PCR法检测2组中TRPC6蛋白和mRNA的表达;将MDA-MB-231细胞分为空白对照组和SKF96365组,不同浓度SKF96365（5、25和40 μmol/L）预处理MDA-MB-231细胞,阻滞TRPC6通道,采用Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭能力。结果：Western blotting和RT-PCR法检测,高侵袭组MDA-MB-231细胞中TRPC6蛋白及mRNA表达水平均高于低侵袭组MCF-7细胞（P<0.05);划痕实验, 5、25和40　 μmol/LSKF96365组迁移细胞数(76.24±7.54、45.33±4.50和25.12±1.57)均少于空白对照组(130.48±9.55)（P<0.05);Transwell体外侵袭实验,不同浓度SKF96365（5、25和40 μmol/L）组迁移细胞数明显低于对照组(P<0.05)。 结论：高侵袭乳腺癌细胞MDA-MB-231可通过上调TRPC6表达提高乳腺癌细胞的侵袭能力,提示TRPC6在乳腺癌转移中可能起作用。     

心力衰竭后心房瞬时受体电位通道的变化

目的:研究心力衰竭对心房组织瞬时受体电位通道C1(TRPC1)基因表达及其蛋白水平的影响。方法:新西兰白兔20只随机分为2组:对照组10只(其中假手术5只),心力衰竭组10只。采用主动脉瓣返流联合腹主动脉缩窄的方法制作慢性心力衰竭模型,10周后超声心动图检测心功能指标,应用RT-PCR和Western blot技术检测左心耳TRPC1基因表达和蛋白水平的变化。结果:心力衰竭组左房内径、室间隔厚度、左室后壁厚度、左室收缩和舒张末内径均明显增加(P<0.05),射血分数及左室短轴缩短率显著降低(P<0.05);与对照组相比,心力衰竭组左心耳TRPC1基因表达明显上升(P<0.05),TRPC1蛋白含量也显著高于对照组(P<0.05)。结论:兔心力衰竭后心房组织的TRPC1基因表达及其蛋白水平均明显升高,可能与心力衰竭后房性心律失常的发生有关。     

嗅觉受体家族13亚家族C成员2在肝细胞癌中的表达及临床病理意义

目的 探讨嗅觉受体家族13亚家族C成员2(olfactory receptor family 13 subfamily C member 2,OR13C2)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)中的表达及临床病理意义。方法 收集2017年8月至2022年3月于右江民族医学院附属医院进行手术切除治疗的HCC患者为研究对象,取石蜡包埋的癌组织及癌旁非癌肝组织适量,采用免疫组化染色EnVision二步法检测OR13C2在上述组织中的表达情况,通过Logistic回归模型分析OR13C2的表达与HCC组织学分级、癌旁肝纤维化等临床病理特征的相关性。结果 OR13C2在HCC癌组织中的表达明显低于癌旁肝组织,差异具有统计学意义(P<0.05);HCC肿瘤组织中OR13C2的表达与HCC组织学分级差异有统计学意义(P<0.05),HCC中OR13C2的表达与HCC的组织学分级呈负相关(r=-0.213,P<0.05),OR13C2表达下调为肿瘤去分化风险因子(风险值为3.914,P<0.05);OR13C2在癌组织中的表达与HCC的发病年龄...     

鞘内注射瞬时受体电位通道A1 shRNA对部分坐骨神经结扎小鼠神经病理性疼痛的作用及其机制

探讨瞬时受体电位通道 A1（TRPA1）在部分坐骨神经结扎（pSNL）小鼠神经病理性疼痛模型中的作用,阐明其作用机制。     

活性维生素D3通过抑制TRPC6表达发挥糖尿病肾病的保护作用

目的:探讨活性维生素D3对链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病(DN)大鼠的肾保护作用是否与抑制瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)有关.方法:30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、DN组及DN加活性维生素D3干预组(DN+ VD组)3组各10只.造模成功后6、12、18周检测大鼠体重、24 h尿蛋白量;造模成功后18周末处死大鼠,检测血样及肾组织指标变化.结果:DN+ VD组与DN组相比蛋白尿显著减少,肾脏病理损伤改善.DN组与NC组比较,Podocin、Nephrin蛋白表达量均明显降低(均P＜0.05),Desmin和TRPC6蛋白表达量均显著升高(均P＜0.05),活性维生素D3干预后上述改变明显改善,差异有统计学意义.相关性分析显示:TRPC6与Podocin(r=-0.808,P＜0.05)、Nephrin(r=-0.791,P＜0.05)呈负相关,而与24 h尿蛋白(r=0.886,P＜0.05)、Desmin(r=0.929,P＜0.05)呈正相关.结论:活性维生素D3显著抑制STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏损伤,其作用机制与调节足细胞TRPC6的表达有关.     

特异性针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因SiRNA表达载体的构建、鉴定及对高糖状态下INS-1细胞周期的影响

目的 构建并筛选携带针对大鼠甲状旁腺激素受体1基因(PTH1R)的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体以及鉴定及观测高糖下对INS-1细胞周期的影响.方法 根据Genbank筛选PTH1R三个阳性克隆及一个阴性克隆序列,定向克隆入逆转录病毒载体pSUPERretro-GFP/Neo,并用RT-PCR和测序鉴定,将其转染至INS-1细胞中,Westernblotting观察PTH1R表达,鉴定其转染效率,筛选出最佳抑制基因后,应用流式细胞仪检测25mmol/LD-葡萄糖处理INS-1细胞周期.结果 菌落RT-PCR及基因测序鉴定结果表明序列正确.并能成功转染到INS-1细胞株中,Westernblot筛选最佳抑制基因.细胞周期检测提示PTHIR沉默后抑制INS-1细胞从G0/G1期进入S期.结论 成功构建并筛选出特异性沉默大鼠甲状旁腺激素受体1基因的pSUPERretro-GFP/Neo干扰逆转录病毒载体,高糖状态下PTH1R表达可能为INS-1细胞自我保护的一种作用.     

UbcH10基因沉默对肺癌NCI-H226细胞增殖及细胞周期的影响

目的：通过脂质体转染siRNA方法沉默人肺鳞癌细胞NCI-H226中UbcH10基因,观察基因沉默后细胞增殖活性的变化及其对细胞周期的影响。方法：设计3条针对UbcH10基因CDS区不同位点的siRNA序列并构建shRNA表达载体,脂质体法转染重组质粒至NCI-H226细胞。转染后48小时,RT-PCR,Western-blot检测细胞内UbcH10 mRNA及蛋白含量。使用有效siRNA序列（pshRNA2）转染细胞,转染后24、48小时CCK-8检测细胞活性。使用有效siRNA序列转染细胞,转染后48小时收集细胞,流式法检测细胞周期。结果：成功构建shRNA重组质粒并转染NCI-H226细胞。转染siRNA 48小时后,3组NCI-H226细胞中UbcH10基因的mRNA及蛋白含量均明显下降;其中2号siRNA序列的沉默效果最好,UbcH10基因剩余表达量为对照组的14%。使用有效序列转染NCI-H226细胞24、48小时,细胞增殖活性明显降低,与基因未干预组比较,差异显著（P＜0.05）。使用有效序列转染NCI-H226细胞48小时,细胞明显阻滞于G2期,与基因未干预组比较有显著差异（P＜0.05）。结论：UbcH10基因沉默,可显著抑制NCI-H226细胞增殖活性,并使肺癌细胞阻滞于细胞G2期。     

规范瞬时受体电位离子通道对血管重构的作用机制及研究进展

 规范瞬时受体电位离子通道（canonical transient receptor potential channel,TRPC）对钠和钙离子具有通透性。各种TRPC同聚体或异聚体复合物调节着血管中平滑肌和内皮细胞的诸多生理功能,它们的异常表达通常与高血压、内皮通透性增加等疾病的发生相关,是导致血管重构的重要分子基础。因此,研究TRPC在血管重构过程中的作用,能够为疾病的治疗提供新思路。     

富含半胱氨酸蛋白61对子宫内膜癌细胞增殖及细胞周期的影响及其机制研究

目的 研究富含半胱氨酸蛋白61(CYR61)对子宫内膜癌(EC)细胞株HEC-1B增殖及细胞周期的影响,并探讨其机制。方法 取对数生长期HEC-1B细胞,随机分为Control组(不处理)、pcDNA3.1-NC 组(转染 pcDNA3.1-NC)、pcDNA3.1 CYR61组(转染 pcDNA3.1 CYR61)、pcDNA3.1 CYR61+ LiCl(Wnt/β-catenin 通路激活剂)组(转染 pcDNA3.1 CYR61,并加入 LiCl 使其终浓度为 60 mmol/L)。转染48 h后采用MTT法检测增殖抑制率,PI染色法检测细胞周期占比,Western blotting检测细胞β-catenin、Caspase-3、Cyclin D1蛋白的表达。结果 与Control组、pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1 CYR61组CYR61、β-catenin、Caspase-3、Cyclin D1 蛋白相对表达量、G₀/G₁期占比升高(P <0.05),S、G₂/M 期占比降低(P <...     

经典瞬时受体电位通道1在大鼠牙胚发育过程中的表达

目的研究经典瞬时受体电位通道1(TRPC1)在大鼠牙胚发育过程中的表达并探讨其意义。方法 制备大鼠牙胚发育各阶段(蕾状期E14.5、帽状期E16.5、钟状期E18.5、钟状晚期P1及牙根形成期P7)标本,进行TRPC1的免疫组化研究。结果 TRPC1在牙胚发育过程中呈动态时空表达。在蕾状期增厚的牙板上皮,帽状期和钟状早期的内釉上皮和外釉上皮,钟状晚期的成釉细胞和前成牙本质细胞及牙根形成期的成牙本质细胞和成釉细胞均可见阳性信号表达,且呈增强趋势。结论 TRPC1可能是一种新的参与调控牙胚细胞的增殖分化和牙齿发育矿化的跨膜信号转导分子。     

TRPC离子通道参与硝普钠诱导海马神经元凋亡

目的 探讨TRPC离子通道在一氧化氮供体硝普钠(SNP)诱导原代培养海马神经元凋亡中的作用.方法 原代培养的海马神经元作为空白对照组,实验组分为3组,分别为原代培养神经元中加入SNP;SNP TRPC通道阻断剂组;SNP TRPC通道激活剂组.细胞处理24 h后MTT比色法检测各组细胞存活率,Hoechest33342荧光染色观察细胞凋亡.结果 SNP处理24h,神经元存活率为67.4％;与空白对照组有显著差异(P<0.05),SNP TRPC阻断剂组神经元存活率分别为102％、92.7％,与SNP组有显著差异(P<0.05);而SNP TRPC激活剂组神经元存活率为56.9％.与SNP组有统计学差异(P<0.05);单纯给予TRPC阻断剂或激动剂对神经元存活率无明显影响.荧光显微镜下观察.空白对照组神经元胞核均匀蓝染;SNP处理组胞核明显固缩、凝聚,可见凋亡小体;SNP TRPC激动剂组可见大量凋亡细胞;而SNP TRPC阻断剂组胞核均匀蓝染.结论 TRPC离子通道参与SNP诱导海马神经元凋亡.