日本血吸虫成虫67kD蛋白的分离与鉴定

目的：分离日本血吸虫感染及免疫血清识别的成虫抗原（AWA）中的特异蛋白带，为血吸虫病免疫诊断提供新的抗原分子。方法：免疫印迹法分析AWA的特异蛋白带，电泳层析法分离靶抗原。结果：获得了感染血清和免疫血清识别的67kD蛋白。结论：电泳层析法是一种分离血吸虫抗原的有效方法。     

日本血吸虫成虫67kD抗原模拟表位的筛选及其免疫原性

目的：筛选日本血吸虫成虫67kD抗原的模拟表位，对其免疫学活性予以鉴定。方法：用粗提日本血吸虫成虫67kD抗原的抗体IgG作配体筛选噬菌体12肽库，随机挑取三轮筛选后的噬菌体克隆，Dot-ELISA检测其特异性：用混和阳性噬菌体克隆免疫小鼠3次，攻击感染后45d剖杀，计数虫荷。结果：经三轮筛选，特异噬菌体得到富集，挑取的11个噬菌体克隆经Dot-ELISA鉴定均与67kD抗原免疫血清呈阳性反应。混合噬菌体克隆的免疫血清可识别67kD抗原，并具有一定的抗血吸虫的免疫保护效果。结论：利用噬菌体随机肽库技术获得了日本血吸虫成虫67kD抗原的模拟表位，这些表位具有良好的免疫原性。     

日本血吸虫成虫脲溶42 kD蛋白的分离及其初步诊断应用

目的 :分离日本血吸虫成虫脲溶抗原中有免疫学活性的抗原分子 ,探讨其诊断血吸虫病的效果。方法 :利用SDS PAGE及免疫印迹法分析日本血吸虫成虫脲溶抗原 ,采用电泳层析法分离有免疫活性的 4 2kD蛋白 ,ELISA分析 4 2kD蛋白诊断血吸虫病的灵敏度和特异性。结果 :电泳层析获得了具有免疫学活性的 4 2kD蛋白 ;分离的 4 2kD蛋白诊断血吸虫病的灵敏度和特异性分别为 88.0 9%和 97.0 6 %。结论 :日本血吸虫成虫脲溶 4 2kD蛋白是一种日本血吸虫的血清学抗原 ,可用于血吸虫病诊断     

日本血吸虫成虫分泌抗原的鉴定

目的制备日本血吸虫成虫分泌代谢抗原,对其免疫原性以及免疫反应性进行初步鉴定。方法日本血吸虫尾蚴感染家兔,42 d后剖杀获取成虫,将虫体置无血清DMEM培养基中,5%CO2孵箱37℃培养4 h,得到成虫分泌代谢抗原;用该抗原免疫小鼠,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体反应;用该抗原包板,ELISA法检测血吸虫感染人血清抗体效价;采用十二烷基硫酸钠聚丙酰烯胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对其组分进行分析,然后用Western blot分析其对抗成虫分泌代谢抗原单抗发生反应的蛋白条带。结果成功制备日本血吸虫成虫分泌代谢抗原;免疫小鼠可产生较高滴度(1∶16 000)抗体反应;急性血吸虫病患者、慢性血吸虫病患者、晚期血吸虫病患者和钩虫病患者血清抗该抗原的抗体效价分别为1∶800、1∶400、1∶800和1∶100,华支睾吸虫患者和正常人血清均为阴性;SDS-PAGE显示其具有4条蛋白条带,分子量分别是13、40、60和180 ku左右;Westernblot结果表明该抗原能够被抗成虫分泌代谢抗原单抗在5ku左右处识别。结论制备的日本血吸虫成虫分泌代谢抗原具有较强的免疫原性和免疫反应性。     

日本血吸虫成虫67kDa分子抗原的纯化及其对血吸虫病的诊断和疗效考核

目的 为检测日本血吸虫成虫67kDa分子抗原(SjAWA67)对血吸虫病的诊断及疗效考核价值。方法 通过SDS-PAGE和电渗方法,从日本血吸虫成虫抗原中分离纯化出67kDa分子抗原,并用该抗原包被酶标反应板微孔,进行ELISA检测。结果 SjAWA67的纯度已达到电泳纯和免疫纯,对急、慢性血吸虫病患血清的捡出率分别为100％和95％,与正常人血清、肝吸虫病和肺吸虫病患血清均未出现明显的交叉反应,44例血吸虫病患治疗后3、6和12个月后的阴转率分别达45．5％、75．0％和90,9％。结论 SjAWA67分子抗原具有较好的疗效考核价值和现场应用前景。     

日本血吸虫成虫31／32KD蛋白的纯化及其免疫化学特性

本支采用制备型SDS-PAGE和电渗析法分离纯化日本血吸虫成虫31／32KD蛋白，分离纯化的血吸虫31／32KID蛋白经SDS--PAGE、EITB和ELlSA检测证明纯度高，活性不量影响．鉴于血吸虫成虫31／32KD蛋白是一种主要血清学抗原，它的分离纯化为改进和标化血吸虫病的诊断及分子疫苗的研制提供了条件。     

日本血吸虫成虫和虫卵主要血清学抗原的鉴定和理化学分析

应用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳、化学染色和免疫印斑对日本血吸虫成虫和虫卵的主要血清学抗原进行了鉴定和理化学分析。成虫有8个主要的血清学抗原分子,其分子量和化学性质分别为152kDa、脂蛋白;145kDa、脂蛋白;32kDa、脂蛋白;30kDa、脂蛋白;28kDa、糖脂蛋白;15kDa、糖脂蛋白;12kDa、糖脂蛋白;11kDa、糖脂蛋白。虫卵有7个主要血清学抗原分子,其分子量和化学性质性质分别为32kDa、脂蛋白;28kDa、脂蛋白;15kDa、糖蛋白;12.5kDa、脂蛋白;12kDa、糖蛋白;11kDa、糖蛋白;10.5kDa、糖蛋白。     

日本血吸虫成虫31／32KD蛋白保护性免疫力的研究

采用纯化的日本血吸虫成虫31／32KD蛋白加福氏佐剂免疫小鼠，不仅可减少虫负荷(减虫率28．1％)，还可降低血吸虫成虫的产卵量(减卵率71．4%)。抑制虫卵内芽肿的形成．结果提示，日本血吸虫成虫31／32KD蛋白具有较高的减卵率．可望作为混合多价疫苗的侯选组分．     

旋毛虫肌蚴可溶性抗原与日本血吸虫抗血清交叉反应的研究

目的 从分子水平研究旋竿虫诱导抗日本血吸虫保护性免疫。方法 应用ＥＩＴＢ技术对旋毛虫肌蚴上清抗原与多种日本吸虫抗血清的交叉反应进行分析。结果 旋毛虫肌蚴抗原与日本吸虫感染血清、抗雄虫家兔血清、抗尾蚴血清、抗成熟卵及未成熟血清、抗环卵血清、抗成虫表膜血清及抗ＧＳＴ血清存在广泛交叉反应带。结论 旋毛虫抗血吸虫抗原具有复杂性,其与血吸虫不同发育阶段、不同组分免疫血清存在交叉反应。     

日本血吸虫成虫和虫卵可溶性抗原及其组分抗原的研究

目的:探讨日本血吸虫雄虫、雌虫、虫卵的可溶性抗原雄虫(AWA-m、雌虫AWA-f、虫卵SEA)及其组分抗原的特性.方法:用DE22纤维素层析柱对日本血吸虫AWA-m,AWA-f,SEA抗原进行纯化,得到相应组分抗原.分别以SDS-PAGE和Western blot对组分抗原进行全面分析,并与相应未经纯化的可溶性抗原作比较.结果:经DE22纤维素层析处理的AWA-m,AWA-f,SEA,均能获得含多种蛋白的组分抗原.SDS-PAGE结果表明,AWA-m见10条主带和9条次带,其中Mr 37 000,28 000,25 000为特异性条带,出现8条免疫反应阳性带;而AWA-m组分抗原为9条蛋白带和6条免疫反应阳性带.AWA-f见15条蛋白带,其中Mr 26 500为特异性条带,组分抗原为8条蛋白带.AWA-f粗抗原及其组分抗原均见9条反应带.SEA见8条主带和10条次带,13条为免疫反应阳性条带;SEA组分抗原见11条带,其中9条为免疫反应阳性带.结论:AWA-m,AWA-f,SEA经DE22纤维素层析纯化获得组分抗原,方法简单、可靠.该组分抗原含有粗抗原的主要免疫反应成分,去除了多种与日本血吸虫病免疫反应无关的蛋白.     

东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库的初步报告

东方田鼠 (Microtusfortis,Mf)对日本血吸虫 ( Schistosomajaponicum ,Sj)感染具有抗性。为探讨Mf感染Sj后是否产生针对虫体某些抗原分子的免疫应答 ,作者用Mf受感染血清对Sj成虫cDNA文库进行免疫筛选 ,经初筛和复筛 ,共筛选出 1 2个阳性克隆 ,这些阳性克隆经辅助噬菌体自动剪切后PCR扩增显示 ,插入的SjcDNA片段大小在30 0bp～ 1 .8kb之间 ,其中 30 0bp片段 6个 ,1kb片段 1个 ,1 8kb片段 5个。说明Mf感染血清可识别Sj的特异性抗原分子。后者的免疫保护作用值得进一步研究     

日本血吸虫雌雄成虫可溶性蛋白组分的双向电泳分析

目的：分析日本血吸虫雌雄成虫可溶性蛋白组分。方法：双向电泳法。结果：用双向电泳分析雌雄虫体多肽斑点分别有310个和290个，匹配的蛋白点为51个。日本血吸虫雌雄成虫可溶性蛋白中存在一些共同多肽斑点，但不同的多肽斑点较多。结论：日本血吸虫雌雄成虫可溶性蛋白组分存在较大差异，值得进一步研究。     

紫外线致弱尾蚴免疫兔血清筛选血吸虫成虫cDNA文库

目的 :寻找照射致弱尾蚴中起免疫保护作用的抗原分子 ,为血吸虫病疫苗研究提供新的候选抗原。方法 :用紫外线照射致弱尾蚴免疫兔血清筛选日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)成虫cDNA文库 ,并对阳性克隆的插入基因片段进行PCR扩增及测序分析。结果 :经三轮筛选 ,获 10个阳性克隆 ,其插入的SjcDNA片段大小为 1 5～1.8kb。初步测序获 5个部分序列 ,其中 2个序列分别与Sj动力蛋白轻链 5 (DLC 5 )及Sj线粒体基因明显同源 ,其余 3个序列为未知的新基因片段。结论 :获得的阳性克隆插入基因片段可能为编码抗日本血吸虫感染的抗原基因     

日本血吸虫抗原的表位模拟肽筛选及免疫保护性

目的　筛选日本血吸虫雄虫抗原的表位模拟肽 ,并探讨其诱导小鼠抗日本血吸虫的免疫保护性。　方法　用日本血吸虫可溶性雄虫抗原的IgG对噬菌体随机 1 2肽库进行亲和筛选。 3轮筛选后 ,经Dot-ELISA检测获得阳性噬菌体克隆 ,并用混合特异性噬菌体克隆免疫小鼠及进行抗日本血吸虫免疫保护性分析。　结果　 1 8个特异性噬菌体克隆均显示有抗原性 ,其噬菌体混合克隆免疫诱导小鼠产生了特异性抗体 ,以及 31 72 %的减虫率和 51 54%的减卵率 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 0 1 )。　结论　筛选噬菌体肽库获得的日本血吸虫可溶性雄虫抗原的表位模拟肽分子能诱导小鼠产生抗日本血吸虫的保护性免疫。     

重组日本血吸虫副肌球蛋白的表达与纯化

用基因重组技术 ,将日本血吸虫副肌球蛋白 (rSj97)基因亚克隆至表达载体pQE30上。在IPTG诱导下 ,重组日本血吸虫副肌球蛋白在大肠杆菌中得以高效表达。通过快速蛋白质液相色谱仪 (FPLC) ,经TALON柱和离子交换柱两步分离纯化 ,获得大量高纯度的重组日本血吸虫副肌球蛋白 ,为水牛现场试验提供了充足的抗原     

日本血吸虫Nanos样蛋白基因的获得、表达及初步鉴定

目的 获得日本血吸虫Nanos样蛋白基因的cDNA 序列,克隆、表达和纯化原核蛋白并初步鉴定.方法 应用PCR法扩增获得日本血吸虫Nanos样基因的完整开放阅读框(ORF),将该基因亚克隆到原核表达载体pET28a(+),诱导表达并纯化融合蛋白.用纯化后的蛋白免疫家兔,制备该蛋白的多克隆抗体,分别用 ELISA 和 W...     

蒿甲醚对血吸虫抗氧化功能的影响

目的：观察蒿甲醚对小鼠体内日本血吸虫抗氧化功能的影响。方法：小鼠感染血吸虫尾蚴4-5周后，1次灌服蒿甲醚300mg/kg，并于治疗24h后剖杀，收集血吸虫合抱虫，测定其超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽．S-转移酶(GST)和谷胱甘肽还原酶(CR)活力以及总抗氧化能力(T-AOC)、还原型谷胱甘肽(GSH)、维生素C(VitC)、维生素E(VitE)和巯基(thiol)水平。结果：体内经蒿甲醚作用24h后，虫体的SOD活力及T—AOC、thiol、VitC水平显下降，而CSH水平及CR活力则显升高。结论：蒿甲醚干扰血吸虫的抗氧化功能，使其易受氧自由基的攻击。