人胰岛素样生长因子Ⅱ反义RNA对肝癌细胞恶性表型的抑制作用

研究人胰岛素样生长因子Ⅱ（ＩＧＦ－Ⅱ）反义ＲＮＡ对肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１的抑制效应。方法人ＩＧＦ－ⅡｃＤＮＡ０．１ｋｂ反向插人真核细胞表达载体ｐｃＮＡ３,获得ＩＧＦ－Ⅱ反义ＲＮＡ表达载体ｐＩＧＦ－ⅡＡＳ,将其导人人肝癌细胞株ＳＭＭＣ-７７２１,观察软琼脂培养集落形成的能力。流式细胞仪（ＦＣＭ）测定ｐＩＧＦ－ⅡＡｓ表达ＩＧＦ－Ⅱ反义ＲＮＡ对ＳＭＭＣ-７７２１细胞生长的影响。结果转导人ｐＩＧＦ－ⅡＡｓ的ＳＭＭＣ－７７２１细胞,不能在软琼脂上形成集落,ＦＣＭＭ实导人ＰＩＧＦ－ⅡＡｓ细胞Ｓ期增多,而对照组ＳＭＭＣ－７７２１细胞和带ＤＣＤＮＡ３空载体的ＳＭＭＣ－７７２１细胞则无明显变化．结论ｐＩＧＦ-ⅡＡＳ＆义ＲＮＡ体外可抑制肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１的致瘤性。     

奥曲肽和表皮生长因子受体单克隆抗体诱导人胃癌细胞凋亡

目的：定量检测奥曲肽（ＳＭＳ）和表皮生长因子受体单克隆抗体（ＥＧＦＲＭＣＡｂ）对人胃癌细胞系 ＳＧＣ－７９０１的诱 导凋亡作用。方法：将不同浓度的ＳＭＳ和ＥＧＦＲＭｃＡｂ与胃癌细胞共同孵育，用流式细胞术分析其细胞凋亡情况。 结果：ＳＭＳ ５ × １０－５和ＥＧＦＲＭｃＡｂ１：１００与胃癌细胞共同孵育７２ ｈ，胃癌细胞凋亡率分别为７．９６％和７．４９％，与对 照组（１．１９％湘比，有显著差异ｐ＜０．０５）。结论：诱导细胞凋亡是胃肠肽类激素发挥其抗肿瘤作用的重要途径之一。     

反流性食管炎、Barrett食管和食管腺癌中上皮钙粘蛋白的表达

目的：研究反流性食管炎（ＲＥ）,Ｂａｒｒｅｔｔ食管（ＢＥ）及食管腺癌（ＥＡＣａ）中上皮钙粘蛋白（Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ）的表达及其意义。方法：运用免疫组化法ＡＢＣ法检测了１３例ＲＥ,１７例ＢＥ,１１例ＥＡＣａ以及３０例正常食管粘膜（ＮＥ）中Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ的表达。结果：Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ在ＮＥ,ＲＥ,ＢＥ,ＥＡＣａ中表达呈逐渐降低趋势。     

顺铂对人肝癌细胞凋亡及相关基因野生型p53、p21WAF1/CIP1和c-myc表达的影响

１．材料与方法：主要试剂：人肝癌细胞株ＳＭＭＣ—７７２１引自第二军医大学,顺铂购自美国Ｓｉｇｍａ公司,生物素标记人野生型ｐ５３（ｗｔｐ５３）、ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１和ｃ－ｍｙｃ探针为北京中山公司产品,原位杂交试剂盒购自北京医科大学病理系,细胞总ＲＮＡ提取试剂盒购自华美生物工程公司。方祛：（１）细胞凋亡模型的构建：用ＭＴＴ比色法观察抗癌药顺铂对肝癌细胞生长的抑制作用并计算抑制率。收集不同药物浓度作用下的培养细胞,进行ＨＥ染色,倒置光显微镜下观察细胞凋亡及坏死的形态变化并计算凋亡率。不同作用点的细…     

HBV反义全基因真核细胞表达载体的构建及在肝癌细胞内的表达

１．材料与方法：乳哺动物细胞表达载体ｐＢＫ－ＣＭＶ,长约４．５ｋｂ,带有Ｔ_７公用序列。ｐＣＰ１０是ｐＢＲ３２２ＥｃｏＲＩ位点中插入双拷贝头尾相接的ＨＢＶａｙｗ亚型全基因ＨＢＶＤＮＡ重组质粒。ＰＣＲ引物ＸＩ１：１４２８－１４４８ｎｔ５'ＣＧＴ　ＣＣＣＧＴＣ　ＧＧＣＧＣＴＧＡＡＴＣＣ３',ＸＩ_２：１６７２－１６５３ｎｔ５'ＡＧＴＣＣＡＡＧＡＧＴＣＣＴＣＴＴＡＡＧ３'。人肝癌细胞系ＳＭＭＣ－７７２１,出上海细胞所提供。将ＥｃｏＲＩ酶切后回收的全基因ＨＢＶ片段。在Ｔ_４ＤＮＡ连接酶作用下,与ＥｃｏＲＩ酶切…     

c-myc反义寡核苷酸对缺氧内皮细胞条件培养液刺激的肺血管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸（ＯＤＮｓ）对缺氧内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）刺激的肺血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖的影响。方法制备ＨＥＣＣＭ，用其刺激肺动脉ＳＭＣ后，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析ｃ－ｍｙｃ基因表达，３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入试验及细胞生长计数分析ＳＭＣ增殖情况。结果ＨＥＣＣＭ显著刺激ＳＭＣ增殖及ｃ－ｍｙｃ基因表达增强，反义ＯＤＮｓ显著下调ＨＥＣＣＭ刺激的ｃ－ｍｙｃ表达，显著抑制ＨＥＣＣＭ刺激的ＳＭＣ增殖。同义ＯＤＮｓ无上述作用。结论ＨＥＣＣＭ可能通过刺激ＳＭＣ之ｃ－ｍｙｃ表达而使ＳＭＣ增殖，反义ＯＤＮｓ通过下调ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达而抑制ＨＥＣ－ＣＭ刺激的ＳＭＣ增殖。     

上皮钙粘蛋白（E—cadherin）在高侵袭性肝细胞癌中的表达

目的旨在探讨上皮型钙粘蛋白（Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ）与肝癌侵袭的关系。方法选择２５例原发性肝细胞癌及相应癌旁组织、２例门静脉癌栓标本和裸鼠高、低转移人肝癌模型（ＬＣＩＤ２０和ＬＣＩＤ２５），Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎｍＲＮＡ的表达采用半定量逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）检测。结果Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ在２５例肝细胞癌和相应的癌旁组织中基因表达值为８２．９％±５４．９％和４９．５％±２６．９％，两者差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。２例门静脉癌栓标本均不表达Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ，裸鼠高转移人肝癌模型（ＬＣＩＤ２０）也不表达Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ，而低转移模型（ＬＣＩＤ２５）的表达值为６７．４的±１６．０％。高侵袭性肝癌和低侵袭性肝癌Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ表达指数分别为４８．９％±３８．０％和７９．１％±１９．１％，两者差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ表达指数与肿瘤包膜和大小无关。结论肝细胞癌组织Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ表达低于其相应的癌旁组织，高侵袭性肝癌较低侵袭性肝癌表达更低，Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ的丧失或低表达是肝癌获得高侵袭转移能力的因素之一。     

CD3AK细胞体外对SMMC—7721人肝癌细胞株杀伤作用的实验研究

ＣＤ＿３ＡＫ细胞体外对ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌细胞株杀伤作用的实验研究赵志泉，沈斌，吕秀珍，徐顺福，孙宏训细胞过继免疫疗法是治疗肿瘤的主要方法之一。淋巴因子激活的杀伤细胞（Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｓ，ＬＡＫ）及肿瘤浸润...     

维甲酸对人肝癌细胞转化生长因子β_1基因及蛋白水平的影响

我们运用逆转录聚合酶链反应方法，以表达比较恒定的管家基因β－ａｃｔｉｎ为内对照，半定量检测全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）对肝癌细胞 ＴＧＦβ１ ｍＲＮＡ的变化，并用流式细胞术观察维甲酸（ＲＡ）对肝癌细胞ＴＧＦβ１蛋白表达的影响，以探讨ＲＡ作用的机制。 １．材料与方法：（１）细胞培养及药物配制：传代人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１，细胞接种于ＲＰＭＩ—１６４０培养液中，孵箱内培养，取对数生长期细胞用于实验。接种细胞２．５×１０~５到２５ｍｌ培养瓶，加ＡＴＲＡ（Ｓｉｇｍａ公司）使终浓度为０．５μｇ／ｍｌ，对照加…     

肾上腺髓质素抑制内皮素的促血管平滑肌细胞增殖作用

目的观察肾上腺髓质素ａｄｒｅｎｏｍｏｄｕｌｉｎ，ＡＭ）对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）内丝裂素活化蛋白激酶（ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏ－ｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ，ＭＡＰＫ）活性和ＶＳＭＣ增殖的作用。方法测定培养的ＶＳＭＣ内ＭＡＰＫ活性和３Ｈ－ＴｄＲ参入。结果１０－８ＥＴ－１可明显增加培养的ＶＳＭＣｓ内３Ｈ－ＴｄＲ参入（增加６７％，Ｐ＜０．０１）和ＡＰＫ激活（活性增高１１倍，Ｐ＜０．０１），而１０－１０～１０－７ｍｏｌ／Ｌ肾上腺髓质素（１３－５２）［ＡＭ（１３－５２）］与ＥＴ－１（１０－８ｍｏｌ／Ｌ）同时孵育，则可显著抑制ＥＴ－１的上述作用，与１０－８ｍｏｌ／ＬＥＴ－１单独应用时相比，３Ｈ－ＴｄＲ参入和ＭＡＰＫ活性分别减低２２％～５２％（Ｐ值均＜０．０１）和８．１～２９．４％（Ｐ值分别＜０．０５或０．０１）。而单用ＡＭ（１３－５２）对培养的ＶＳＭＣ３Ｈ－ＴｄＲ参入和ＭＡＰＫ活性无明显影响（Ｐ值＞０．０５）。结论ＡＭ（１３－５２）具有抑制ＥＴ所致的ＭＡＰＫ激活和ＶＳＭＣ增殖的作用。ＡＭ与ＥＴ相互作用，参与内皮源的细胞旁分泌调节体系的构成，共同维持循环系统功能的稳态     

大黄素对SV－40转基因小鼠系膜细胞生长和c－mycmRNA表达的影响

利用从ＳＶ－４０病毒转基因小鼠肾脏分离得到的系膜细胞株（ＳＶ－４０ＭＣ），观察了大黄素对ＳＶ－４０和ＭＣ生长、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）及原癌基因ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达的影响，大黄素可明显抑制ＳＶ－４０ＭＣ３Ｈ－ＴｄＲ掺入且与剂量呈正相关。经大黄素（５μｇ／ｍｌ）作用的ＳＶ－４０ＭＣ，ＰＣＮＡ阴性细胞数明显高于对照（２８％ｖｓ。５．５％、ｐ＜０．００１）大黄素同样抑制ＳＶ－４０ＭＣ，ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达，且不受蛋白合成抑制剂放线菌酮的影响。结果表明：大黄素对异常增殖状态的系膜细胞生长也有明确抑制作用，细胞分裂周期受抑制、此过程与细胞周期基因ｃ－ｍｙｃ表达受抑有关。     

Infusa Sleeve导管血管壁内局部导入基因预防血管成形术后再狭窄的实验研究(摘要)

我们于１９９７年７月～１２月进行了用Ｉｎｆｕｓａ Ｓｌｅｅｖｅ（ＩＳ）导管导入ｃ－ｍｙｃ反义寡核着酸预防再狭窄的实验研究。探讨ＩＳ导管局部在体导入ｃ－ｍｙｃ反义寡核着酸的可行性及其对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）和新生内膜的抑制作用。１材料和方法 ｃ－ｍｙｃ寡核苷酸（加拿大ＳＡＮＧＯＮ上海分公司合成）：用硫代磷酸盐修饰,纯度９９％。ｃ－ｍｙｃ正义核昔酸：５’ＡＴＧＣ－ＣＣＣＴＣＡＡＣＧＴＴ。ｃ－ｍｙｃ反义核苷酸：３ＴＡＣＧＧＧＧＡＧＴＴＧＣＡＡ。 家兔２１只,体重２．５～３．５ ｋｇ,雌雄各半。其中反…     

应用单克隆抗体检测血吸虫人血清特异性循环免疫复合物的初步研究

抗血吸虫ＭｃＡｂ应用于ＥＬＩＳＡ（ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ）检测血吸虫病人血清中抗原特异性ＣＩＣ，并与其提取的ＣＩＣ沉淀物为对照，二者结果完全相同。另与“抗原非特异性”ＣＩＣ检测法（ＰＥＧ法）作对照。慢性血吸虫病患者６７例ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ有４６例呈阳性反应（６８．７％），２１例呈阴性反应（３１．３％），对肺吸虫病患者５９例、健康人２３例全部呈阴性反应；而ＰＥＧ法，肺吸虫病患者全部呈假阳性反应，健康     

安替可胶囊抗肿瘤作用及对晚期消化道肿瘤的近期疗效

目的观察安替可胶囊（ａｎｔｉｋｅ）对荷人癌裸鼠的抑瘤作用及其治疗晚期消化道肿瘤的疗效．方法采用ＭＴＴ和人癌细胞克隆形成以及裸鼠荷瘤技术;临床上晚期消化系癌５３２例,其中Ⅱ期１１１例,占２０９％;Ⅲ期２２２例,占４１７％;Ⅳ期１９９例,占３７４％;均经病理证实,全部病例采用数表法随机分组．结果人癌细胞对ａｎｔｉｋｅ的敏感性顺序依次是：Ｍｇｃ８０３≥Ｅｃａ１０９＞ＳＭＭＣ７７２１;Ａｎｔｉｋｅ５００ｍｇ／ｋｇ对Ｍｇｃ８０３,Ｅｃａ１０９和ＳＭＭＣ７７２１人癌细胞裸鼠的瘤重抑制率分别为４７２％,４７２％和４５４％;Ａｎｔｉｋｅ治疗晚期食管癌、肝癌和肠癌２５８例,总缓解率（ＣＲ＋ＰＲ）为７４％,并能显著止痛,改善生存质量和提高免疫功能;放疗＋ａｎｔｉｋｅ治疗晚期食管癌１００例,总缓解率为７２０％,比单纯放疗组（３４４％）提高了３７６％（Ｐ＜００１）,同时,能显著改善吞咽困难,明显增加体重,保护血象和降低ＣＥＡ．结论Ｍｇｃ８０３,Ｅｃａ１０９和ＳＭＭＣ７７２１对ａｎｔｉｋｅ较敏感,并且ａｎｔｉｋｅ对其裸鼠移植瘤具有明显抑制作用;Ａｎｔｉｋｅ对食管癌、胃癌、肝癌有较好疗效,同时具有显著放疗增敏作用     

Cough and ACE Inhibitors

ＣｏｕｇｈａｎｄＡＣＥＩｎｈｉｂｉｔｏｒｓＳｉｍｏｎＳＲ，ＢｌａｃｋＨＲ，ＭｏｓｅｒＭ，ＢｅｒｌａｎｄＭＥ．ＤａｖｉｓＡｖｅｎｕｅＭｅｄｉｃａｌＣｅｎｔｅｒ（ＮｅｗＹｏｒｋ，１０６０５）ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ－ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇｅ...     

家兔十二指肠粘膜碳酸氢盐分泌机理的研究

本实验旨在探讨ＨＣＯ３－分泌的调节及其转运的离子通道。取大白兔近端十二指肠，置于尤氏小室间（ＵｓｓｉｎｇＣｈａｍｂｅｒ），测定血管活血肠肽（ＶＩＰ）、前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２），二丁酰环磷腺甙（ｄｂ－ｃＡＭＰ）及电刺激（ＥＦＳ）对碳酸氢盐（ＨＣＯ３－）分泌量、电流（Ｉｓｃ）和电位差（ＰＤ）的影响，以及缺氧、缺氯、缺钠和加入ＤＩＤＳ（４，４－ｄｉｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎｏｓｔｉｌｂｅｎｅ－２，２’－ｄｉｓｕｌｆｏｎｉｃａｃｉｄ）、哇巴因（Ｏｕａｂａｉｎ）和神经毒素（Ｔｅｔｒｏｄｏｔｏｘｉｎ，ＴＴｘ）后对上述指标的影响。结果示，ＶＩＰ、ＰＧＥ２、ｄｂ－ｃＡＭＰ和ＥＦＳ均刺激ＨＣＯ３－分泌和Ｉｓｃ、ＰＤ的升高，而缺氧、缺钠和哇巴因呈抑制作用。ＤＩＤＳ和缺氯则完全抑制由ＰＧＥ２引起的刺激作用，部分抑制（５０％）由ＶＩＰ的刺激作用，而对ｄｂ－ｃＡＭＰ则无抑制作用。ＴＴＸ抑制由ＥＦＳ引起的作用。ＨＣＯ３－分泌与ＶＩＰ、ＰＧＥ２及ｄｂ－ｃＡＭＰ引起的细胞内ｃＡＭＰ水平不成正相关。     

乳糖脂修饰的阿霉素脂质体体外杀伤肝癌细胞的实验研究

在ＮａＢＨ４还原作用下制备乳糖酰磷脂酸乙醇胺（Ｌａｃ－ＰＥ）,反应４００ｈ测定仍联率为４８．６％,硅酸柱纯化得纯品。用该脂质修饰阿霉素脂质体表面,观察体外对人肝癌细胞系ＳＭＭＣ－７７２１的杀伤作用。方法乳糖和磷脂酰乙醇胺经化学反应制备Ｌａｃ－ＰＥ,用１０％摩尔的糖脂整合到超声法制备的小单层阿霉素脂质体脂膜上进行体外杀瘤研究,ＮＴＴ法检测杀瘤活性。结果４８小时细胞毒试验糖脂阿霉素脂质体对人肝癌细胞系ＳＭＭＣ－７７２１的杀伤作用优于无糖脂阿霉素脂质体（Ｐ＜０．０１）,而对非靶细胞（Ｂ１６黑色素瘤细胞）的杀伤作用优于无糖脂阿霉素脂质体两者相近。０．５ｈ预处理实验表明：缩短药物与细胞接触时间后,糖脂阿霉素脂质体仍保持较强的杀伤肝癌细胞作用。结论乳糖脂阿霉素脂质体的杀伤作用来自乳糖中的半乳糖基配体的特异性介导和人肝癌细胞上肝半乳糖受体的识别内吞作用。     

C－sis、C－myc癌基因反义寡脱氧核苷酸抑制动脉平滑肌细胞增殖

用合成Ｃ－ｓｉｓ、Ｃ－ｍｙｃ癌基因反义寡脱氧核苷酸（ＡＯＤＮ）与兔动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣｓ）共同培养，旨在通过ＡＯＤＮ对癌基因的封闭，动态观察ＡＯＤＮ对ＡＳＭＣｓ增殖的影响，探讨ＡＯＤＮ对动脉粥样硬化（ＡＳ）尤其是冠脉成形术后再狭窄（ＲＡＣＡ）的防治作用。结果表明：①Ｃ－ｓｉｓＡＯＤＮ、Ｃ－ｍｙｃＡＯＤＮ具有明显抑制ＡＳＭＣｓ增殖作用，其抑制作用随浓度增加而加强；②Ｃ－ｓｉｓＡＯＤＮ＋Ｃ－ｍｙｃＡＯＤＮ具有协同抑制ＡＳＭＣｓ增殖作用；③Ｃ－ｓｉｓＡＯＤＮ、Ｃ－ｍｙｃＡＯＤＮ明显抑制ＤＮＡ合成，二者联合应用，具有加强抑制ＤＮＡ合成作用。研究结果提示：Ｃ－ｓｉｓ、Ｃ－ｍｙｃ癌基因ＡＯＤＮ抑制ＡＳＭＣｓ增殖，尤其是二者联合应用，有可能为ＡＳ，特别是ＲＡＣＡ防治提供一个新的途径。     

应用单克隆抗体检测血吸虫病人血清特异性循环免疫复合物的初步研究

抗血吸虫ＭｃＡｂ应用于ＥＬＩＳＡ（ＭｃＡｂ一ＥＬＩＳＡ）检测血吸虫病人血清中抗原特异性ＣＩＣ，并与其提取的ＣＩＣ沉淀物为对照，二者结果完全相同。另与“抗原非特异性”ＣＩＣ检测法（ＰＥＧ法）作对照。慢件血吸虫病患者６７例，ＭｃＡｂ一ＥＬＩＳＡ有４６例呈阳性反应（６８．７％），２１例呈阴性反应（３１．３％），对肺吸虫病患者５９例、健康人２３例全部呈阴性反应；而ＰＥＧ法，肺吸虫病患者全部呈假阳性反应，健康人６例呈假阳性反应（２６％）。初步结果表明，ＭｃＡｂ一ＥＬＩＳＡ检测血清ＣＩＣ具有较高的抗原特性。     

三种快速检测结核分支杆菌方法的评价

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术、单克隆抗体（ＭｃＡｂ）ＴＢ１５－Ｃ＿３经酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及抗酸染色等３种方法，对１０种抗酸杆菌及２种非分支杆菌进行检测。ＰＣＲ仅对结核分支杆菌复合体扩增出２４５ｂｐ特异性条带，ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测除人型结核分支杆菌外，还与ＢＣＧ、鸟型及瘰疬分支杆菌反应阳性，抗酸染色则所有分支杆菌均呈阳性。用ＰＣＲ、ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ及抗酸染色检测了１２４份临床标本，ＰＣＲ的检出率高于抗酸染色涂片的阳性率（Ｐ＜０．０５），ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率明显高于抗酸染色涂片和ＰＣＲ的阳性率（Ｐ＜０．０１）。认为三种方法在使用中各自有其优点，不可偏废。