城市大气PM10对HLF细胞增殖和细胞周期与凋亡及细胞内钙离子浓度的影响

[目的]研究北京市大气可吸入颗粒物（PM10）对HLF细胞增殖、周期、凋亡以及细胞内钙离子浓度变化的影响.[方法]以人胚肺成纤维细胞（human lung fibroblast,HLF）为模型,PM10终浓度分别为25、50、100、200、400μg/ml,染毒20～24 h,用MTT法测试PM10对HLF增殖的影响,用流式细胞法测试细胞内钙离子浓度和细胞周期,以AnnexinV-FITC/PI双染用流式细胞仪检测细胞凋亡.[结果]PM10浓度＜25 μg/ml刺激HLF增殖,使S期缩短,但随着PM10浓度增加,抑制细胞增殖作用增强,S期、G2/M期细胞明显增多,当PM10浓度＞100μg/ml,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.随着PM10浓度增加细胞凋亡增加,存在剂量-反应关系.PM10作用于HLF 1 h可引起细胞内钙浓度明显增加,有剂量-反应关系,随着作用时间的延长细胞内钙浓度进一步升高,发生钙超载.[结论]PM10对HLF有一定毒性,具有低浓度刺激细胞增殖、高浓度抑制增值的双向作用;使细胞阻滞在S期和G2/M期,并可诱导细胞凋亡.其作用机制可能与影响细胞内钙离子浓度变化有关.     

八氯二丙醚对体外培养CHL细胞DNA合成影响

目的研究八氯二丙醚对体外培养中国仓鼠肺细胞（CHL）DNA合成影响。方法采用DNA荧光定量测定方法，观察不同染毒浓度（0．250，0．187，0．125，0．062。0．046，0．031μg／m1）对CHL细胞DNA合成影响。结果八氯二丙醚浓度为0．062，0．046μg／ml时DNA合成量与对照组比差异有统计学意义，表现为合成增加（P〈0．05），浓度为0．250。0．187，0．125μg／ml时，则表现为合成抑制（P〈0．05），且呈剂量一反应关系（P〈0．05）；0．250μg／ml浓度在脱离染毒后2，4，6，12h内DNA合成量持续下降。结论在低浓度时（0．062，0．046μg/ml），八氯二丙醚可引起CHL细胞DNA合成能力增加。而在高浓度时（0．250，0．187，0．125μg／m1）则表现为DNA合成抑制，且这种抑制由DNA损伤引起。     

人蛔虫体腔液对人肠上皮细胞的毒性作用

目的探讨人蛔虫体腔液（Ascaris body fluid，ABF）对人肠上皮细胞株（HCT-8）的毒性作用及作用浓度和时间的关系。方法以体外细胞培养方法观察ABF对HCT-8细胞的毒性作用．比较不同浓度ABF作用下不同时间HCT-8细胞的死亡率和形态结构。结果HE染色显示，当ABF浓度为800μg／ml时，HCT-8细胞的毒性作用最大，除浓度为12．5μm/ml的实验组，各实验组（25～800μg／ml）的毒性均高于对照组。结论ABF对HCT-8细胞所产生毒性作用在一定程度上表现出浓度和作用时间的依赖关系，并诱导细胞凋亡的发生。     

丙烯腈对中国仓鼠肺细胞细胞活力和间隙连接通讯功能的影响

目的：探讨丙烯腈（ACN）对中国仓鼠肺细胞（CHL）细胞活力及细胞间隙连接通讯（GJIC）功能的影响。方法：镜下观察细胞形态学改变,采用MTT法测定细胞生长半数抑制浓度（IC50）,应用荧光染料示踪技术观测ACN对CHL细胞GJIC的影响。结果ACN染毒12和24h,细胞生长IC50分别为435．73和251．09μg/ml。低剂量组（12．5和25．0μg/ml）细胞形态与对照组相比无明显改变,较高剂量组（50．0－200．0μg/ml）细胞轻度受损（0－Ⅰ级）,高剂量组（800．0μg/ml）细胞明显受损（Ⅲ级）。ACN原形在无明显细胞毒辣性剂量（10．0－50．0μg/ml）时即可抑制GJIC,并呈持续抑制作用,存在剂量－效应和时间－0效应关系。ACN经代谢活化后,可加重对细胞GJIC的抑制作用和细胞受损程度,但在染毒12h后停止接触,该作用在一定程度上可逆转,牛磺酸作为一种重要的抗氧化剂,预处理细胞（牛磺酸剂为10和20mmol/L)可明显抑制ACN对细胞GJIC的下调作用。结论ACN在较高剂时对CHL人有毒性作用,但在无明显细胞损伤剂量时即明显抑制细胞GJIC功能,该抑作用停止接触ACN或有抗氧化剂存在可逆转,提示氧化应激在ACN所致细胞GJIC功能下调中具有重要作用。     

PM2.5对HTR8-SVneo细胞的毒性作用

目的：探讨大气中的PM2.5对HTR8-SVneo细胞的毒性作用。方法：采用0,30,60,120和200 μg/mL 5个浓度的PM2.5对HTR8-SVneo细胞染毒24 h,以0 μg/mL浓度为对照组,其余浓度为不同剂量PM2.5染毒组,通过CCK-8细胞增殖毒性检测试剂盒测定细胞存活率;激光全息细胞分析及成像系统观察细胞3D形态及动态监测24 h内各组细胞数量变化;流式细胞仪检测细胞生长周期;彗星试验检测细胞DNA损伤水平;活性氧簇（ROS）检测试剂盒测定细胞内ROS水平。结果：60,120和200 μg/mL浓度组细胞存活率及增殖能力低于对照组（P＜0.05或P＜0.01）;PM2.5可使HTR8-SVneo细胞的生长周期阻滞在G2/M期（P＜0.05或P＜0.01）;不同浓度PM2.5染毒组彗尾DNA百分比均高于对照组（P＜0.01）,且呈剂量依赖性。各浓度染毒组细胞中ROS的产生均高于对照组（P＜0.05或P＜0.01）。结论：PM2.5对 HTR8-SVneo细胞有一定毒性作用,造成DNA的损伤,阻碍细胞生长周期,这种毒性作用可能与氧自由基的产生增多有关。     

氢醌对体外培养鼠角质形成细胞毒性作用

目的 研究氢醌(Hydroquinone,HQ)对体外培养正常鼠表皮角质形成细胞的毒性作用.方法 用0,1,2.5,5,10和25μg/ml的氢醌处理鼠角质形成细胞,检测氢醌对角质形成细胞的增殖抑制率、乳酸脱氢酶(LDH)释放率、细胞中活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量,并对超氧化物歧化酶(SOD)和还原性谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)的活力进行测定.结果 氢醌可引起角质形成细胞活力剂量-时间依赖性降低;角质形成细胞用0,1,2.5,5,10和25 μg/ml氢醌处理4,8,12,24 h后,LDH释放率呈明显的时间-剂量-反应关系;同样剂量的氢醌处理角质形成细胞,12 h后可引起ROS、MDA含量呈浓度依赖性增加(最低浓度为5μg/ml),而SOD及GSH-Px活力呈浓度依赖性抑制(最低浓度为2.5μg/ml),与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 在体外培养条件下,氢醌可通过脂质过氧化和氧化应激对鼠角质形成细胞产生明显的毒性作用.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对不同HPV亚型宫颈癌胞株中miRNA调控的影响

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对不同HPV亚型宫颈癌细胞增殖和miRNA表达的调控作用。方法通过对宫颈癌细胞He La(HPV16/18+)、Si Ha(HPV16+)、Ca Ski(HPV16+)和C33A(HPV-)加入EGCG后24 h及48 h,MTT法检测EGCG对细胞增殖的抑制作用及其时间浓度依赖性,并用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测has-miR-210、has-miR-29、hsa-miR-203和has-miR-125 b在不同宫颈癌细胞中的表达。结果 100μg/ml、80μg/ml、60μg/ml、40μg/ml、20μg/ml、10μg/ml、0μg/ml 7个药物梯度浓度的EGCG与对照组比较,He La细胞生长明显减慢,差异有统计学意义(t=10.347 9,P0.05),且随着EGCG浓度的增加及处理时间的延长,抑制作用不断增强,有效抑制He La细胞的生长,且呈时间(t=8.250 7,P0.01)与浓度依赖性(t=16.349 4,P0.01),差异有统计学意义,24 h、48 h的半数抑制浓度IC50分别为90.74μg/ml、72.74μg/ml。C33A细胞株中,不同浓度的EGCG明显下调了has-miR-203(t=8.361 1,P0.01)及has-miR-125 b(t=10.553 9,P0.01)的相对表达量,差异有统计学意义;对has-miR-210、has-miR-29的调控作用不确定。He La细胞株中has-miR-125 b被上调,差异有统计学意义(t=11.867 6,P0.01);对has-miR-210、has-miR-29、has-miR-203作用不确定。Ca Ski细胞株,上调了has-miR-210(t=14.812 9,P0.01)、has-miR-29(t=14.257 2,P0.01)、has-miR-125 b(t=15.357 5,P0.01),差异有统计学意义;对has-miR-203的调控作用不确定。Si Ha细胞株,has-miR-125 b(t=16.219 7,P0.01)及has-miR-203被上调(t=13.030 3,P0.01),差异有统计学意义;对has-miR-210、has-miR-29的调控作用不确定。结论 EGCG对抑制宫颈癌细胞的增殖起重要作用,并能通过直接影响miRNA表达抑制宫颈癌细胞增殖,可能是其发挥抑制宫颈癌细胞增殖的机制之一。     

脂多糖对增生性瘢痕患者正常皮肤成纤维细胞增殖及I、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原酶mRNA表达的影响

目的探讨脂多糖（hpopolysaccharide,LPS）对皮肤成纤维细胞增殖和I、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原酶mRNA表达的影响．以了解LPS在增生性瘢痕形成中的生物学作用。方法取正常皮肤按黄勇等方法行成纤维细胞培养后,分为1个对照组及6个实验组。实验组分别与终浓度为O．005、0．010、O．050、0．100、0．500和1．000μg／ml大肠杆菌LPS（E．coli055：B5）培养,对照组为DMEM培养。分别通过MTT比色法及细胞计数法观察各组1—9d吸光度（A）值和细胞数量的变化;并对刺激后细胞进行传代,用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）法测定成纤维细胞I、Ⅲ型前胶原mRNA及胶原酶mRNA的表达,并以同一个体相同代数的瘢痕组织成纤维细胞作对照。结果与对照组比较,0．005～0．500μg/ml组A值增加,于5～9d差异有统计学意义（P〈0．05）;1．000μg／ml组A值降低,于3～9d差异有统计学意义（P〈0．05）。与对照组比较,0．005～O．500μg／ml组细胞数量显著增加,于1～6d差异有统计学意义（P〈O．05）;1．000μg／ml组细胞数量显著降低,于2～9d差异有统计学意义（P〈0．05）。与对照组比较,0．005～O．500μg／ml组促进细胞胶原合成,且O．100μg/ml组作用达高峰（P〈O．05）,1．000μg／mlLPS抑制细胞胶原合成（p〈O．05）。LPS刺激浓度在0．005～0．100μg/ml时,促进正常皮肤成纤维细胞I、Ⅲ型前胶原mRNA表达,抑制胶原酶mRNA表达,且呈一定的剂量依赖性;当LPS刺激浓度为O．500μg／m1,上述作用下降;而当LPS刺激浓度到达1．000μg／ml时,抑制正常皮肤成纤维细胞I、Ⅲ型前胶原mRNA表达,促进胶原酶mRNA表达。LPS刺激浓度在0．100μg／ml时．成纤维细胞I、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原酶mRNA表达与同一个体增生性瘢痕组织成纤维细胞近似。结论LPS对正常人皮肤成纤维细胞增殖及I、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原酶mRNA表达的直接调节可能是其参与增生性瘢痕形成的重要机制。     

IGF-Ⅱ、EGF对ICR小鼠早期胚胎体外发育的影响

目的：研究胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF鄄Ⅱ）、表皮生长因子（EGF）在含葡萄糖、胰岛素的CZB 培养液中对ICR 小鼠早期胚胎体外发育的影响。方法：①在含有葡萄糖、胰岛素的CZB培养液中分别添 加0,0.1,1,10,100 μg/L 的IGF鄄Ⅱ,体外培养观察其对ICR 小鼠1-细胞胚胎的作用,并设单独CZB培养 液对照组。②在含葡萄糖、胰岛素和0.1 μg/L IGF鄄Ⅱ的CZB 培养液中分别添加0,0.1,1,10,100 μg/L EGF,体外培养观察其对ICR 小鼠1- 细胞胚胎的作用,并设单独CZB 培养液对照组。比较各组囊胚率、孵 化率和胚胎细胞数的变化。结果：① 0 μg/L IGF鄄Ⅱ组囊胚率、孵化率及囊胚细胞数高于对照组（P＜0.05）。 100 μg/L IGF鄄Ⅱ组囊胚率、孵化率及囊胚细胞数低于0,0.1,1,10 μg/L IGF鄄Ⅱ各组（P＜0.05）;0.1 μg/L IGF鄄Ⅱ组囊胚细胞数最高（P＜0.05）。② 0 μg/L EGF组囊胚率、孵化率及囊胚细胞数高于对照组（P＜ 0.05）。0.1,1,10μg/L EGF 各组囊胚率、孵化率高于0,100 μg/L EGF 组（P＜0.01）;0.1 μg/L EGF组孵化 率最高（P＜0.05）,囊胚细胞数高于0μg/L EGF 组（P＜0.01）;100μg/L EGF组囊胚细胞数最低（P＜0.05）。 结论：① 1,10μg/L IGF鄄Ⅱ和葡萄糖及胰岛素相互作用对胚胎细胞无明显抑制或促进作用。② 1,10 μg/L EGF 参与葡萄糖、胰岛素、IGF鄄Ⅱ对胚胎细胞分化的调节,却无增殖作用。③0.1 μg/L IGF鄄Ⅱ和EGF 作为 胚胎培养浓度较佳。④100μg/L IGF鄄Ⅱ和EGF 对胚胎有抑制作用。     

二十碳五烯酸联合依托泊苷对人肺腺癌A-549细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究二十碳五烯酸(EPA)联合依托泊苷对人肺腺癌A-549细胞株增殖与凋亡的影响.方法 分别用终浓度为40 μg/ml EPA、10 μg/ml依托泊苷、40 μg/ml EPA+ 10μg/ml依托泊苷、20μg/ml依托泊苷、40 μg/ml EPA+ 20μg/ml依托泊苷孵育A-549细胞,采用MTT法、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙锭双染法、吖啶橙/溴化乙锭双染法及流式细胞术研究细胞增殖抑制率、细胞形态学及凋亡情况.结果 EPA联合依托泊苷对A-549细胞的增殖抑制率显著高于依托泊苷单独的作用(P均＜0.05).细胞荧光染色显示:EPA联合依托白苷组的凋亡细胞数量多于依托泊苷单独作用组.EPA联合依托泊苷组的S期及G2/M期细胞显著多于依托泊苷单独作用的细胞(P均＜0.05).结论 EPA可能具有增强依托泊苷抑制人肺腺癌A-549细胞增殖、促进A-549细胞凋亡的作用.