线粒体DNA3160-3755区域基因突变与2型糖尿病的关系

目的研究线粒体DNA3160-3755区域基因在延边地区2型糖尿病（T2DM）患者中的突变情况,探讨该区域线粒体基因突变与2型糖尿病的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（polymorphismchainreaction-restrictionfragmentlengthpolymorphism,PCR-RFLP）技术和直接测序法对延边地区人群108例正常健康体检者、328例T2DM患者（其中2例合并耳聋）,进行线粒体DNA3160-3755区域基因突变筛查。结果线粒体DNA3316G-A在糖尿病组和正常对照组中的突变率分别为3．7％和3．8％。两组间差异无统计学意义（P〉0．05）;3394T→C在糖尿病组和正常对照组中的突变率分别为7．3％和1．9％,两组间差异有统计学意义（P〈0．05）;在糖尿病组及正常对照组中均未检测到线粒体DNA3243A→G、3593T→C和3714A→G突变。结论线粒体DNA3316G→A突变与延边地区T2DM的发生无关;线粒体DNA3,394T→C突变与延边地区T2DM的发生有关;线粒体DNA3423A→G,3593T→C,3714A→G突变在延边地区T2DM中的发生率为0,提示上述位点基因突变率极低。     

线粒体DNA3316、3394等4个突变位点与2型糖尿病的关系研究

目的:探讨DNA tRNA Leu(UUR)基因及ND-1基因3316 G/A、3394 T/C等4个突变位点与2型糖尿病的关系。方法:对236例海南地区2型糖尿病患者和252例健康对照者进行空腹血糖测定并采用聚合酶链式反应—限制性核酸内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)的分析方法进行mtDNA的3243、3316、3394、和3593共4个位点进行突变筛选,并采用DNA测序方法确证。结果:实验组空腹血糖(9.37±3.01)mmol/L与健康对照组(4.96±0.76)mmol/L差异有统计学意义(P<0.05);实验组检出3316(G→A)突变8例,3394(T→C)突变3例;健康对照组未发现上述突变;突变检测结果与测序一致。两组间3316(G→A)突变率差异有统计学意义(P<0.05)。结论:线粒体DNAtRNALeu(UUR)基因及ND-1基因3316、3394位点的基因突变,尤其是3316位点(G→A)突变可能与某些核基因或环境因素协同促进了2型糖尿病的发生。     

线粒体DNA3243、3316点突变与中国云南2型糖尿病的关系（摘要）

目的：研究中国云南2型糖尿病人群中线粒体水．NA^Leu（UUR）基因nt3243A／G突变和ND-1基因nt3316G／A突变的发生频率及其与2型糖尿病的相关性．寻求准确、快速、简易的临床糖尿病基因诊断技术．对象及方法：随机选择225例中国云南2型糖尿病患者和195例无糖尿病家族史的健康对照者作为研究对象．通过聚合酶链反应及限制性片断长度多态性分析（PCR-RFLP）检测tRNA^Leu（UUR）基因3243A／G突变和ND-1基因3316G／A突变，并经DNA直接测序确证.     

线粒体DNA ND1基因G3316A突变与2型糖尿病相关性研究

目的 研究浙江台州地区汉族人群线粒体DNA ND1基因中G3316A突变的发生率与2型糖尿病的相关性.方法 应用聚合酶链反应技术对无血缘关系的270例2型糖尿病患者和185例健康对照者的外周血DNA进行检测.结果 发现10例T2DM患者存在G3316A突变(3.70%),对照组中有1例突变(0.54%),G3316A在两组间比较有显著性差异(P＜0.05).结论 线粒体DNA ND1 G3316A突变可能与浙江台州地区汉族人群2型糖尿病的发生与发展有关.     

线粒体DNA 3243、3316、3394位点突变与精神分裂症相关分析

目的分析线粒体tRNALeu(UUR)基因3243位点及ND1基因3316、3394位点突变对精神分裂症(SZ)发病的影响。方法采用PCR扩增、限制性内切酶消化、琼脂糖凝胶电泳分型检测、DNA测序等方法,对随机抽取的无亲缘关系的250例患者(SZ组)和292例对照组的外周血mtDNA进行3243、3316和3394位点的突变检测。结果在SZ组中发现8例3316G/A突变,对照组中3例,两组相比差异无统计学意义(P=0.138)。在SZ组中发现15例3394T/C突变,对照组中有4例,两组相比差异有统计学意义(P=0.007)。在精神分裂症患者组和对照组中均未发现3243A/G突变。结论 mtDNA3394T/C突变可能与SZ发生有一定关系,mtDNA 3243A/G、3316G/A突变可能与SZ发生无关。     

糖尿病线粒体ND1基因3316 G→A突变的功能研究

目的 探讨线粒体ND1基因3316 G→A突变对线粒体生物学功能的影响及其在糖尿病发病中的作用.方法 利用真核表达载体pcDNA3.1B和大肠杆菌DH5α构建野生型和线粒体DNA的ND1基因3316 G→A突变型重组子pcDNA3.1B-ND1;设计特异性siRNA序列干扰Hela细胞内源性线粒体DNA表达,使其内源性ND1基因沉默;经脂质体转入野生型和突变型重组子pcDNA3.1B-ND1,使其在Hela细胞内表达.通过RT-PCR、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和荧光显微镜,从mRNA水平→蛋白质水平→线粒体膜电势位检测干扰效果,以筛选有效干扰siRNA序列.结果 线粒体ND11和线粒体ND12 siRNA序列均具有一定的干扰效果,后者效果明显优于前者;转入3316 G→A突变型重组子pcDNA3.1B-ND1的Hela细胞表达的线粒体蛋白低于野生型.结论 线粒体DNA的ND1基因正常表达对维持正常的呼吸链功能和细胞增殖至关重要,携有3316 G→A突变基因的糖尿病的发病与线粒体蛋白表达下降有关.     

线粒体ND1基因nt3434A→G突变与糖尿病关系的研究

目的 探讨线粒体NADH脱氢酶1（ND1）基因nt3434A→G突变与糖尿病的关系。方法 运用PCR-RFLP技术在糖尿病组（216例）和正常对照组（203例）中筛查线粒体ND1基因nt3434A→G突变,并分析其家系的突变特点和临床特征。结果 在糖尿病组中发现1例nt3434A→G突变者,而正常对照组中未发现,两组间突变频率差异无统计学意义。携带nt3434A→G突变的糖尿病患者胰岛素水平稍低,体质量指数低,伴高乳酸血症,家系中其妹和女儿携带nt3434位点突变且伴高乳酸血症,但糖耐量正常。结论 线粒体ND1基因nt3434A→G突变与糖尿病的发病风险增高是否相关值得进一步研究.     

浙江汉族人群线粒体DNA ND1基因G3316A突变与2型糖尿病

目的：研究与日本人2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）相关的线粒体DNA（mitochondria DNA,mtDNA）ND1基因G3316A突变在浙江汉族T2DM人群中的发生率及其临床意义。方法：采用PCR产物直接测序法对浙江籍汉族人群中无血缘关系的315名T2DM患者及158名正常对照的外周血mtDNA进行检测,并用DNASTAR和Antheprot 5.0软件分析突变位点。结果：在T2DM患者中检测到6例（占1.90%）G3316A突变,对照组中发现3例（占1.90%）突变,突变发生率在两组间差异无显著性（P＆gt;0.05）。携带G3316A位点突变的T2DM组与无该突变的T2DM组之间的临床特点（发病年龄、体重指数和血糖水平等）比较差异亦无显著性。蛋白二级结构中α-螺旋、β-折叠、β-转角和不规则卷曲的构成比没有发生改变。结论：线粒体DNA ND1基因G3316A突变可能与浙江汉族人群T2DM的发生无关,仅为人群中的基因多态性。     

中国人2型糖尿病人群中线粒体基因tRNAleu~((UUR))nt324 3A→G和ND-1基因nt331 6G→A突变的发生率及其临床特点的研究(英文)

目的　为了解线粒体tRNALeu(UUR) nt32 4 3A G突变和ND 1基因nt3316GA突变在中国人 2型糖尿病人群中的精确发病率及该基因突变所导致的II型糖尿病的临床特征。方法　我们采用PCR RFLP技术对 716例随机抽取的无亲缘关系的 2型糖尿病患者进行了突变的筛查。结果　在 2型糖尿病组中发现 3例 (0 4 % )该基因突变携带者 ,并在先证者一级亲属中又发现 4例携带该突变的2型糖尿病患者。比较mt32 4 3A G突变阳性的 2型糖尿病患者与mt32 4 3A G突变阴性的 2型糖尿病患者的临床特点后发现mt32 4 3A G突变阳性的 2型糖尿病患者具有以下特征 :1) 发病早 (38 0± 10 1vs 5 3 4± 10 0岁 ,P <0 0 0 1) ;2 ) 体重减轻 (BMI,19 5± 2 0vs 2 4 9± 10 9kg/m2 ,P <0 0 0 0 1) ;3) 胰岛素分泌能力下降 (OGTT试验胰岛素曲线下面积 ,2 94 6± 16 47 2vs74 6 9± 6 6 47 7,P <0 0 1)。在 2型糖尿病组中发现ND1基因nt3316G A突变16例 (2 2 % ) ,在 181例正常对照组中发现 5例突变携带者 (2 7% ) ,突变的发生率在两组间无显著性差异。携带mt3316位点G A突变的 2型糖尿病组与无该突变的 2型糖尿病组之间的临床特点亦无显著差异。结论　线粒体tRNALeu(UUR) nt32 4 3A G突变在中国人 2型糖尿病人群中的发病率为 0 4     

线粒体DNA 3243、3316点突变与中国云南2型糖尿病的关系(摘要)

目的:研究中国云南2型糖尿病人群中线粒体tR-NALeu(UUR)基因nt 3243A/G突变和ND-1基因nt3316G/A突变的发生频率及其与2型糖尿病的相关性.寻求准确、快速、简易的临床糖尿病基因诊断技术.对象及方法:随机选择225例中国云南2型糖尿病患者和195例无糖尿病家族史的健康对照者作为研究对象.通过聚合酶链反应及限制性片断长度多态性分析(PCR-RFLP)检测t RNALeu(UUR)基因3243A/G突变和ND-1基因3316G/A突变,并经DNA直接测序确证.结果:225例2型糖尿病患者及195例对照者中无1人携带线粒体3243A/G突变;225例2型糖尿病患者中检出线粒体3…     

弱精子症精子线粒体DNAA3243G，G3316A和T3394C突变的检测

目的：检测弱精子症精子线拉体tRNA^1eu3243位点、线粒体NDI3316位点和3394位点碱基突变频率,分析三个位点突变与弱精子症的相关性。方法：按WHO标准随机收集了69例弱精子症患者精子标本和60例正常人正常活动力精子标本,以聚合酶链反应、ApaⅠ和HaeⅢ限制性内切酶长度多态性分析和测序检测mtDNAA3243G、G3 316A和T3 394C三个位点的突变,比较两组突变频率的差异。分析G3316A和T3394C突变的氨基酸变异情况并结合生物信息学工具分析错义突变氨基酸进化保守性。结果：弱精子症精子mtDNAG3316A突变率（4．35％）、T3394C突变率（2．90％）和总突变率（7．25％）与正常对照纽（分别为5．00％、1．67名和6．67％）比较,差异无显著性。氨基酸变异分析发现,G3316A（Ala-〉Thr）、T3394C（Tyr-〉His）均为错义突变,其中T3394C突变位点所编码的氨基酸在人、牛、小鼠、爪蟾4种生物中进化具有高度保守性。结论：G3316A和T3394C突变可能不是影响人类精子活动力的主要因素。     

2 型糖尿病患者线粒体常见基因突变PCR检测的局限性

目的:研究北京地区汉族人群中线粒体DNA(m itochondrial DNA,m tDNA)多位点突变频率与2型糖尿病之间的相关性。方法:采用直接PCR、PCR-限制性片段长度多态性(restriction fragm ent length polymorph ism,RFLP)、PCR-时相温度梯度凝胶电泳(temporal temperature grad ient gel electrophoresis,TTGE)法筛查m tDNA 4977片段缺失、线粒体tRNALeu(UUR)A3243G突变和m tDNA T14577C突变。结果:在250例2型糖尿病患者及142例健康对照外周血基因组总DNA中,未发现m tDNA 4977缺失、线粒体tRNALeu(UUR)A3243G突变及m tDNA T14577C突变。结论:m tDNA 4977缺失、线粒体tRNALeu(UUR)A3243G突变及m tDNA T14577C突变在外周血中没有检出,采用常规PCR法检测2型糖尿病患者外周血线粒体DNA突变具有较大的局限性。     

Relationship between mutations of mitochondrial DNA ND1 gene and type 2 diabetes

Background Recent studies have indicated that many mutations in mitochondrial (mt)DNA NDI gene region are related to diabetes mellitus. In this study we explored the relationship between various mtDNA ND1 gene mutations and type 2 diabetes mellitus (DM) among Chinese. Methods Using PCR restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) analysis and gene sequencing, 4 spots of mtDNA (nt3243, nt3316, nt3394, nt3426) were screened in 478 diabetics and 430 non-diabetic subjects.Results In diabetic group, there were 13 carriers (2.72%)of 3316 G→A mutation,12 (2.51%) of 3394 T→C mutation and 2 (0.42%) of 3426A→G mutation. In controls, only 3394 T→C mutation was observed in 2 subjects (0.47%). There was significant difference in the frequency of 3316 and 3394 mutation between two groups (P&lt;0.05, respectively). More subjects with mitochondrial DNA ND1 gene mutations had DM family history and greater tendency of maternal inheritance when compared to those patients without mutation in diabetic group（P&lt;0.01）. A 3426 mutation diabetic pedigree was studied, and we found 12 maternal members in the family had the same mutation. Conclusion mtDNA ND1 gene mutations at nt3316 (G→A), nt3394 (T→C) and 3426 (A→G) might contribute to the pathogenesis of DM with other genetic factors and environment factors.     

有家族史的非胰岛素依赖型糖尿病患者线粒体tRNA Leu(UUR) A3243G基因突变的研究

目的 探讨有家族史和无家族史的非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)患者线粒体tRNA^Leu(UUR) A3243G基因突变的发生率，筛查与糖尿病发生相关的新的线粒体基因突变位点。方法 48例有家族史和44例无家族史的NIDDM患者测 定体重指数(BMI)、口服葡萄糖耐量试验(OGTT)、胰岛素释放试验、糖化血红蛋白(HbA1c)等指标，并应用多聚酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术对所选糖尿病患者的白细胞线粒体DNA进行基因突变分析。结果 ①两组患者的BMI、血糖、胰岛素、HbA1c无显著性差异。②扩增区域未发现任何线粒体DNA基因突变位点，国内外报道相对较为多见的tRNA^Leu(UUR) 3243A→G基因突变也未在本试验中发现。结论 线粒体tRNA^Leu(UUR) A3243G基因突变糖尿病的发生率很低。     

线粒体DNA13731点突变与脊髓小脑性共济失调相关性研究

目的探索线粒体DNA（mtDNA）突变位点与脊髓小脑性共济失调（SCA）的关系。方法采用聚合酶链反应（PER）对基因确诊的四个SCA家系10例患者及其亲属共34例与40例健康对照的线粒体ND5基因片段进行扩增,扩增产物进行单链构象多态性分析（SSCP）,对SSCP出现异常的样本进行相应mtDNA片段测序。结果在一家系的1名确诊患者及1名症状前患者检测到mtDNA13731（T〉C）点突变。结论脊髓小脑性共济失调的发生、发展可能与mtDNA突变有关。     

非综合征型耳聋的不同听力学表型与常见致聋基因的相关性

目的：探讨非综合征型耳聋（NSHL）患者的发病年龄、听力学特征等与核基因GJB2、GJB6 和线粒体DNA（mtDNA）A1555G 、C1494T 突变的相关性。方法：按不同的听力学表型对269 例NSHL患者进行分组及GJB2、GJB6 和mtDNA A1555G、C1494T 基因检测。结果：269例NSHL患者GJB2 和GJB6 的检出率分别为16.73%和0.37%，mtDNA A1555G 和C1494T 检出率分别为23.79%和0.37%；按患者听力损失程度分为轻度、中度、重度、极重度，其构成比分别为9.67%、27.88%、23.42%和39.03%，GJB2 和GJB6 在4组间的总检出率分别为7.69%、8.00%、25.40%和20.95%，组间差异有统计学意义（χ2=10.163，P =0.017）；mtDNA A1555G 和C1494T 总突变率分别为38.46%、34.67%、30.16%和9.52%，组间差异有统计学意义（χ2=20.932，P ＜0.001）；在语前聋组（0～3岁）、学龄前组（3～6岁）、学龄组（6～18岁）及成年组中，GJB2 和GJB6 总突变率分别为26.57、13.51%、5.56%、1.89%， mtDNA A1555G 和C1494T 总突变率分别为14.69%、24.32%、41.67%、37.74%，组间差异有统计学意义（χ2=21.199、18.357，均P ＜0.001）。结论：核基因GJB2 和GJB6 致病突变主要在重度和极重度耳聋中检出，mtDNA基因突变在各个程度的耳聋中均有检出，听力损失越严重，检出率越低；语前聋中核基因GJB2 和GJB6致病突变多于mtDNA A1555G 和C1494T，语后聋中主要为mtDNA A1555G 和C1494T 突变。     

特异性寡核苷酸探针反向杂交在mtDNA点突变检测中的应用研究

目的：建立一种快捷、有效的mtDNA点突变检测体系。方法：线粒体病患者15例，根据临床表现分为3组，线粒体脑肌病伴高乳酸血症、卒中样发作（MELAS）组7例，单纯型线粒体肌病组4例，慢性进行性眼外肌麻痹（CPEO）组4例。用苯酚／氯仿法提取外周全血DNA，采用PCR／ASO反向杂交技术。用PCR扩增mtDNA的突变“热区”——tRNA^Leu（UUR）基因，在下游引物的5’端标记上地高辛，与点在尼龙膜上的5对寡核苷酸（AS0）探针：A3243／A3243G（野生型／突变型）、T3271／T3271C、G3460／G3460A、T3291／T3291C、C3256／C3256T进行反向杂交，根据杂交显色信号，确定有无突变。同时利用PCR／RFLP方法加以验证。结果：MELAS组中有A3243G点突变3例，但没有其他4个位点的突变。单纯型线粒体肌病组和CPEO组均未发现以上5个位点的突变。PCR/ASO反向杂交法与PCR／RFLP法结果一致。结论：PCR/ASO反向杂交技术，适用于已知mtDNA点突变的检测，具有敏感、节时、节省费用的特点。尤其适用于大批量标本的筛选。