恶性肿瘤胸腺水中TIL生物学活性研究

从卵巢癌腹水和肺癌胸水中分离出肿瘤浸润淋巴细胞，用ｒＩＬ－２诱导培养，观察其增殖活性。同时观察了ＰＪ－ＣＷ，ＰＯＧＰ，ＰＨＡ等对其杀伤活性的调节作用。结果表明，在培养５－１０天时ＴＩＬ增殖较快，其表面产生的ＣＤ３，ＣＤ４，ＣＤ８，Ｔａｃ等抗原，随培养时间的处长，表达量增加，尤以ＣＤ８增加较明显，ＣＤ４／ＣＤ８比值逐降。     

rIL-2对大肠癌TIL体外培养的影响

将大肠癌ＴＩＬ在含有ｒＩＬ-２浓度为６０、６００和６００Ｕ／ｍｌ的培养基中分别培养扩增，观察不同浓度ｒＩＬ-２对ＴＩＬ增殖力、杀伤活性、表型的影响。结果表明：低浓度ｒＩＬ-２组较中、高浓度组增殖力减弱，但对自身肿瘤细胞的杀伤活性较中、高浓度组增高。三组ＴＩＬ培养后ＣＤ３＋细胞比例显著增加，ＣＤ４＋细胞比例无明显变化，低、中浓度组ＣＤ８＋细胞比例显著增加，低浓度组ＣＤ２５＋细胞比例显著增加。说明低浓度ｒＩＬ-２可选择性刺激ＣＤ８＋、ＣＤ２５＋Ｔ细胞克隆增殖，使大肠癌ＴＩＬ对自身肿瘤杀伤活性提高。     

不同来源的TIL临床应用研究

以５１例晚期肿瘤患者作为研究对象，对其不同来源的肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）进行治疗研究，发现肿瘤组织来源的ＴＩＬ其有效率及一年生存率明显高于胸腹水及转移淋巴结的ＴＡＬ；其中肿瘤组织的ＴＩＬ，胸腹水、转移淋巴结的ＴＡＬ有效率分别为８０．９％、４０．０％、４６．６％；三者治疗肿瘤患者的一年生存率分别为８１．０％、４６．７％、６０．０％；另外发现胸腹水ＴＡＬ对实质性肿块治疗疗效较低，为４０％，其中静脉滴     

人肺癌浸润淋巴细胞抗肿瘤活性的诱导及其实验性扩增

人们早就发现,肿瘤组织并非仅由肿瘤细胞所组成。除支持肿瘤生长的血管和间质细胞外,还有相当数量的浸润淋巴细胞(TIL)。近2、3年,人们对TIL有了不少新的认识,但TIL的确切功能、活性调节、增殖特征等都还未完全明了,有关人肺癌TIL的研究更是少见。本工作的目的在于研究人肺癌TIL抗肿瘤活性的诱导、体外抗肿瘤的特性、体外实验性扩增及抗肿瘤活性的变动情况,探讨利用TIL进行临床抗肿瘤抗转移免疫过继疗法的可行性。     

一种高活力分离肿瘤浸润淋巴细胞方法的建立

肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）的增殖力、活力、杀伤力是ＴＩＬ临床治疗的基本问题。由于Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ方法存在着许多不足之处，本实验室对其一些重要步骤进行了改进：①用单一冷胶原酶消化肿瘤组织块；②省去影响ＴＩＬ活力的离心操作；③ＴＩＬ培养４８ｈ内除去掺杂在ＴＩＬ中的肿瘤细胞等。由于除去了影响ＴＩＬ活力的抑制因素，ＴＩＬ的增殖率、生存率、活力、杀伤力明显增加。有８０％肿瘤组织的ＴＩＬ经扩增可超过１×１０     

自身LAK和肿瘤细胞在TIL大量扩增中的作用

将肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）分别与自身ＬＡＫ细胞、肿瘤细胞以及后二者共同混合培养，结果均使ＴＩＬ的体外扩增能力和细胞毒活性大为提高，体外扩增有效期和高细胞毒活性持续时间均较单纯ＩＬ－２培养的ＴＩＬ延长。以与自身ＬＡＫ和肿瘤细胞混合培养的ＴＩＬ对自身肿瘤的杀伤活性提高最明显。     

卵巢癌组织不同部位取材分离TIL细胞

卵巢癌组织不同部位取材分离ＴＩＬ细胞蔡晓敏，陆静，华祖德（上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科上海２０００２５）李彪如，朱佑明，童善庆（上海第二医科大学微生物学教研室上海２０００２５）为了获得高活力的肿瘤浸润淋巴细胞（ｔｕｍｏｒｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ...     

LAK及TIL对靶细胞杀伤活性中效靶作用的细胞表面物质基础

在ＬＡＫ及ＴＩＬ杀伤靶细胞过程中介导效靶作用的细胞表面分子主要包括细胞粘附分子（ＣＡＭ）群类中的各种分子，其它一些尚未鉴定分属ＣＡＭ大类的糖蛋白，糖脂，层粘连层白（ｌａｍｉｎｉｎ）类似物和波形纤维蛋白（ｖｉｍｅｎｔｉｎ）类似物等。这些分子是效靶特异识别，结合的物质基础。虽然ＴＩＬ较ＬＡＫ杀伤活性呈现对靶细胞的特异性，但两者均存在不同程度的非特异性。本文以介绍ＬＡＫ及ＴＩＬ杀伤活性中效靶作用的细胞…     

不同取材部位的TIL得率及活力研究

为了获得更多，活力更强的ＴＩＬ细胞本实验就实体瘤肝癌，肺癌及卵巢癌取材部位进行闻取自肝癌，肺癌组织的浸润结节，交界组织，实质部位，中心及坏死区域的得率与活力，结果发现，坏死部位的细胞得率与活力最差，淋巴细胞得率也最差，肝癌，肺癌组织分别为４．０５×１０＾４／ｇ、５．５×１０＾４／ｇ；中心部位较差，分别为３．６×１０＾５／ｇ、４．１９×１０＾５／ｇ；实质部位的细胞得率最高，淋巴细胞得率，最多，肝癌，     

树突状细胞激活的肿瘤浸润淋巴细胞对荷瘤小鼠免疫功能影响的研究

目的:探讨H22细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL体外抗小鼠肝癌活性;并将H22细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL(H22-DC-TIL)过继免疫荷瘤小鼠,研究其对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法:从小鼠四肢长骨骨髓中获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和肿瘤全细胞性抗原致敏DC,然后用DC激活TIL,观察TIL在体外对H22细胞、Hepal-6细胞和B16细胞的杀伤活性;检测应用H22-DC-TIL后荷瘤小鼠的脾淋巴细胞的NK、LAK、CTL活性及血清TNF活性,并与对照组相比较。结果:(1)H22-DC-TIL具有很强的对H22细胞杀伤活性(杀伤率为71.31%±3.11%),明显高于其对Hepal-6和B16细胞的杀伤活性(杀伤率分别为50.11%±3.03%和30.31%±2.89%);也明显高于未经DC激活的TIL、H22-DC-小鼠脾淋巴细胞和未经DC激活的小鼠脾淋巴细胞对H22细胞杀伤活性(杀伤率分别为49.80%±3.21%、48.76%±3.60%和19.23%±2.71%)和对Hepal-6细胞杀伤活性(杀伤率分别为39.40%±3.21%、38.62%±2.87%和18.73%±2.40%)以及对B16细胞杀伤活性(杀伤率分别为26.38%±2.51%、25.82%±2.70%和18.34%±3.01%),同时B16-DC-TIL(TIL来源于H22瘤体)也可诱导相对较低的对B16细胞的特异性细胞杀伤活性。(2)H22-DC-TIL可明显诱导提高荷瘤小鼠脾淋巴细胞NK、LAK和CTL活性(活性分别为30.43%±1.35%、31.40%±1.80%和35.30%±1.20%),并可检测到血清TNF水平明显上升[血清TNF为(40.41±1.85)U/m l],它们均达正常对照组水平,与未经DC激活的TIL组、H22-DC-小鼠脾淋巴细胞组、未经DC激活的小鼠脾淋巴细胞组、生理盐水组分别对应比较,差异均有显著性(P<0.01)。结论:(1)H22-DC-TIL可产生很强的体外针对H22细胞的特异性杀伤活性。(2)H22-DC-TIL可明显诱导提高荷瘤小鼠特异性抗肿瘤免疫反应。     

人参皂苷Rg1、Rh1对树突状细胞刺激T细胞增殖及LPAK抗肿瘤活性的影响

目的 :观察人参皂苷Rg1,Rh1对树突状细胞 (DC)刺激T细胞增殖及其对IL 2与PHA激活的杀伤细胞 (DC LPAK)对人乳头瘤细胞及L92 9细胞杀伤作用的影响。方法 :分离培养鉴定DC ,用MTT法检测Rg1及Rh1对DC刺激T淋巴细胞增殖作用的影响。用中性红摄入比色法观察DC LPAK的杀伤活性。结果 :T :DC为 10 :1及 2 5 :1时 ,仅Rg110 0 μg ml能促进T细胞增殖 (P <0 0 5 ) ,而Rh110 0 μg ml则抑制T细胞增殖 (P <0 0 1) ,同剂量的Rg1及Rh1相比有显著性差异 (P <0 0 5～0 0 1) ;T :DC为 10 :1时 ,Rh110 μg ml抑制T细胞增殖 ,而在T :DC为 2 5 :1时则表现为促增殖作用 (P <0 0 5 )。T :DC为 5 0 :1时 ,各加药组对T细胞增殖均无作用。Rg1及Rh1均能促进DC LPAK对乳头瘤细胞的杀伤能力 ;在对L92 9杀伤实验中 ,效靶比为 5 :1时 ,Rg1各剂量均能显著促进DC LPAK的杀伤活性 (P <0 0 1～ 0 0 5 ) ,而Rh1仅中剂量能提高DC LPAK的杀伤活力 (P <0 0 5 )。结论 :Rg1可增强DC刺激T细胞增殖及DC LPAK杀伤肿瘤的细胞能力。Rh1的作用则与其剂量范围及细胞比例密切相关。     

早、晚期胃癌肿瘤浸润免疫细胞的形态学研究

目的　探讨人早、晚期胃癌肿瘤浸润免疫细胞的形态学特征。方法　通过免疫组织化学、光镜和电镜的方法观察人早、晚期胃癌肿瘤浸润免疫细胞的分布和形态学变化。结果　肿瘤浸润树突状细胞 (TIDC)主要分布在癌周区 ,病变早期TIDC比病变晚期数量多 (P <0 .0 1)。肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)主要分布在癌交界区和癌周组织 ,病变早期TIL比病变晚期数量多 (P <0 .0 1)。电镜下 ,TIDC体积较大 ,形态不规则 ,表面有许多树枝状突起 ,细胞核不规则 ,可见核仁 ,胞质内有丰富的线粒体、核糖体、高尔基复合体和内质网。TIDC与TIL和肿瘤细胞接触方式和形式上呈多样性。一对一 ,一对多 ,或形成簇的接触方式。有紧密膜接触、指状膜接触和球状膜接触形式。结论　本实验提示TIDC和TIL数量多少与肿瘤的进展有关 ,TIDC与TIL和肿瘤细胞之间关系密切     

Hypoxanthine Guanine Phosphoribosyltransferase expression is negatively correlated with immune activity through its regulation of purine synthesis

IntroductionThe purpose of this study was to examine the effects of elevated Hypoxanthine Guanine Phosphoribosyltransferase (HPRT) on the immune response in the tumor microenvironment.MethodologyHPRT expression was evaluated in cancer patients and correlated with cytokine expression, survival, and immune cell infiltration. An HPRT knockdown cell line was created to evaluate HPRT impact on purine expression and subsequent purine treatment was administered to immune cells to determine their influence on cell activation.ResultsHPRT expression was negatively correlated with the general expression of both pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokines. Additionally, HPRT expression was also negatively correlated with the infiltration of immune cell subsets: B-cells, CD4 + T cells, macrophages, neutrophils, and dendritic cells (p < 0.001) and CD8 + T-cells (p < 0.01). When HPRT was knocked down in a Raji cell line, the levels of adenosine were reduced significantly compared to the wild type. When examining the level of Ca2+ influx of Raji compared to the HPRT Raji knockdown cell, there was a significant decrease in calcium influx in the knockdown cells when compared to the wild type cells. This demonstrates that HPRT had a significant impact on overall cell activation and the ability of the cells to properly influx calcium needed for their activation.ConclusionsWe conclude that purine levels significantly reduce immune cell activation in cancer and the upregulation of HPRT in malignant tissue is a contributing factors to the immunosuppressive microenvironment.     

恶性黑色素瘤生物免疫治疗的研究进展

恶性黑色素瘤是一种恶性程度极高的皮肤肿瘤,病人发生转移后应用传统治疗方法很难达到有效治疗.自从恶性黑色素瘤的肿瘤抗原表位被发现后,恶性黑色素瘤的免疫治疗就开始成为研究热点.过继性细胞治疗临床应用研究在近几年内得到快速发展,其中疗效最好的当属肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)回输治疗,其治疗有效率可以达到70%以上.同时,各种用...     

肿瘤标志物检测在良恶性胸腹水鉴别价值研究

目的 研究肿瘤标志物在良恶性胸腹水的临床鉴别价值.方法 169例恶性胸腹水患者设为恶性腹水组,146例良性胸腹水设为良性组,比较两组胸腹水癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)、糖类抗原(CA) 125、CA19-9水平,并对各肿瘤标志物对良恶性胸腹水的诊断进行方法学评价.结果 恶性组的CEA为(139.7-±56.4) ng/mL、AFP为(189.2±45.2) ng/mL、CA125为(314.7±86.2) U/mL、CA19-9为(158.5±24.2) U/mL,浓度均高于良性组,差异有统计学意义(均P＜0.05);ROC曲线分析CEA、AFP、CA125以及CA19-9曲线下面积分别为0.811、0.547、0.715和0.769,其对应的诊断切点分别为5.6 ng/mL、63.7 ng/mL、38.9 U/mL和30.4 U/mL;AFP因ROC曲线下面积过低不适于恶性胸腹水的诊断.三种肿瘤标志物单独检测方法学评价的各项指标均以CEA最好,灵敏度为75.7％,特异度为88.6％,联合检测以CEA、CA125以及CA19-9的联合检测效果较好,灵敏度为80.5％,特异度为94.0％.结论 肿瘤标志物联合检测对胸腹水的性质鉴别方面有重要的临床应用价值.     

单链双特异性抗体(BHL-I)介导的细胞毒作用及其可能机制研究

目的：观察单链双特异性抗体（BHL-I）介导的PBL对靶细胞SKOV3的杀伤作用，并研究其细胞毒作用的可能机制。方法：MTT法检测在不同效靶比、不同作用时间、不同靶细胞（SKOV3、BEL-7402）、不同BHL-I浓度等条件下，BHL-I介导PBL对靶细胞的杀伤作用；RT-PCR检测杀伤过程中PBL的穿孔素（Perforin）、颗粒酶（GranzymeB）mRNA的表达及细胞培养上清液中TNF-α、IFN-γ含量变化。结果：BHL-I介导的PBL对SKOV3细胞毒作用明显高于对BEL-7402的，并且在效靶比10∶1、作用36小时、BHL-I浓度为25μg/ml时，PBL对靶细胞SKOV3的细胞毒作用最为显著；在IL-2存在下，BHL-I可引起Perforin、GranzymeB mRNA较高表达及细胞培养上清液中TNF-α、IFN-γ含量升高，当作用时间为72小时时，这些细胞因子的表达有所下降。结论：BHL-I能介导PBL对表达有相应靶抗原的SKOV3细胞具有高效杀伤作用，其细胞毒作用可能与效应细胞表达Perforin、GranzymeB、TNF-α、IFN-γ等有关。     

树突状细胞在人皮肤黑色素瘤组织中抗原提呈效应的形态学观察

目的探讨人皮肤黑色素瘤组织中肿瘤浸润树突状细胞（TIDC）的抗肿瘤效应。方法采用光镜、透射电镜和免疫组化方法观察19例手术切除的人皮肤黑色素瘤中TIDC和肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）抗肿瘤效应的形态学表现。结果早期人皮肤黑色素瘤组织中的类高内皮微静脉和淋巴管内、外均可见大量淋巴细胞和树突状细胞集聚和迁移;病变早期TIDC和TIL浸润比晚期明显（P〈0．01）。透射电镜下,TIDC大致有两种形态。一种TIDC体积大,表面有许多树枝状突起,核不规则,胞浆内有丰富的细胞器;另一种TIDC突起较少,细胞器也较少。TIDC与肿瘤细胞、TIDC与TIL、TIL与TIL、TIL与肿瘤细胞之间存在多种形式的膜接触。与TIL接触的肿瘤细胞呈凋亡状态。晚期病变组织中TIDC与TIL数量明显减少,于癌巢内常见凋亡的TIDC与TIL。结论人皮肤黑色素瘤组织中存在不同形态的TIDC与TIL,并通过类高内皮微静脉和淋巴管迁移;TIDC、TIL、癌细胞彼此密切作用,在肿瘤局部即可发生抗肿瘤免疫应答反应,反应程度与肿瘤进展呈负相关。