miR-137对肾癌GRC-1细胞增殖与凋亡的影响

目的 研究miR-137对肾癌GRC-1细胞增殖与凋亡的影响.方法 采用miR-137模拟物转染至肾癌GRC-1细胞,实验分为未转染组(未进行miR-137模拟物转染)、miR-137对照组(转染随机序列)、miR-137转染组(进行miR-137模拟物转染).荧光定量PCR检测各组转染后48h细胞中miR-137表达水平,应用噻唑蓝细胞增殖试验(MTT)、流式细胞检测技术与免疫荧光评价miR-137对肾癌GRC-1细胞增殖和凋亡的影响.结果 转染miR-137模拟物48h后,荧光定量PCR检测发现未转染组、miR-137对照组及miR-137转染组GRC-1细胞中miR-137的相对表达量依次为(24.43±2.03)％、(26.57±2.55)％、和(73.30±3.29)％,差异有统计学意义(P＜0.05).MTT细胞增殖实验与流式细胞仪检测结果显示,与未转染组、miR-137对照组相比,miR-137转染组转染48h后肾癌GRC-1细胞的增殖率显著降低,凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05),而未转染组、miR-137对照组肾癌GRC-1细胞的增殖率、凋亡率比较差异无统计学意义(P＞0.02).结论 miR-137可明显抑制肾癌GRC-1细胞增殖和促进其凋亡,故有望成为肾癌基因治疗的新靶点.     

MicroRNA-17-92基因对胃癌干细胞更新和增殖的影响

背景：研究表明,miRNA对肿瘤干细胞的更新分化有调节作用,有关miRNA-17-92在胃癌干细胞更新及增殖中的作用尚未完全阐明。 目的：分析miRNA-17-92在胃癌干细胞自我更新及增殖中的作用。 方法：①利用细胞培养使胃癌干细胞贴壁分化并送miRNA芯片检测,寻找并验证不断缺失的miRNA。②构建并转染miRNA-17-92分子慢病毒稳定转染细胞。③通过tumorsphere实验研究miRNA-17-92与胃癌细胞更新的关系。④通过MTT、平板克隆试验检测miRNA-17-92与胃癌干细胞增殖的关系。 结果与结论：①miR-19b/20a/92a在胃癌干细胞贴壁分化过程中表达逐渐减低。②慢病毒携带的miRNA-17-19基因在MKN28细胞和CD44-/EpCAM-细胞中的表达均明显增加;瞬时转染pre-miR-19b/20a/92a能使CD44-/EpCAM-和MKN28的miRNA表达增高,瞬时转染pre-miR-19b/20a/92a拮抗剂能使SGC7901和CD44+/EpCAM+的miRNA表达降低;过表达lenti-miR-19b/20a/92a能显著增加胃癌细胞形成肿瘤球的能力;在化疗药的作用下,lenti-miR-19b/20a/92a感染细胞的生存时间延长;瞬时转染pre-miR-19b/20a/92a 能够显著增加CD44+/EpCAM+细胞数,转染其拮抗剂可以降低CD44+/EpCAM+细胞数。③miR-19b/20a/92a稳定表达组的胃癌细胞增殖速度较对照组快。瞬间转染miR-19b/20a/92a前体组加快胃癌细胞的增殖速度,而瞬时转染其拮抗物组减慢胃癌细胞的增殖速度;瞬间转染 miR-19b/20a/92a前体组的克隆数较对照组多,而瞬时转染miR-19b/20a/92a拮抗物组的克隆数较对照组少。结果表明miR-19b/20a/92a基因在胃癌干细胞分化过程中不断缺失,miR-17-92基因能够促进胃癌干细胞的更新和增殖。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

miR-141表达异常对人肝癌细胞恶性生物学表型的影响

 目的: 研究微小RNA-141(miR-141)在人肝癌细胞和正常胎肝细胞中的表达,同时分析miR-141表达异常对人肝癌细胞恶性生物学表型的影响。方法: 分别提取人肝癌细胞SMMC-7721和正常肝细胞HL-7702的总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测miR-141的表达。采用脂质体介导的转染方法分别将miR-141 mimic转染SMMC-7721细胞,将miR-141 inhibitor转染HL-7702细胞;MTS试剂盒和BrdU-ELISA检测细胞增殖能力,流式细胞术检测转染前后细胞周期和凋亡率的变化。Transwell实验检测miR-141表达变化对细胞体外迁移能力的影响。结果: miR-141在SMMC-7721细胞中的表达较HL-7702细胞明显下降。与空白组、脂质体组和阴性对照组相比,转染25 nmol/L miR-141 mimic的SMMC-7721细胞中,细胞增殖速度减慢,S期细胞比例降低,凋亡细胞比例上升,细胞体外迁移能力下降;转染50 nmol/L miR-141 inhibitor的HL-7702细胞中,细胞增殖速度加快,S期细胞比例上升,凋亡细胞比例下降,细胞体外迁移能力增强。结论: miR-141在人肝癌细胞中表达下降,上调miR-141表达可抑制肝癌细胞体外增殖活性和迁移能力,影响细胞周期和凋亡。在肝癌发病进程中,miR-141可能扮演抑癌基因的角色。     

敲减microRNA-205靶向PTEN抑制食管癌细胞TE1的增殖并促进细胞凋亡

目的:探讨miRNA-205对食管癌细胞株TE1增殖和凋亡能力的影响及其作用机制.方法:实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和Western印迹检测正常食管黏膜细胞Het-1A和不同食管癌细胞株(KYSE70,TE12,TE1)中miRNA-205的mRNA及蛋白表达水平.转染miRNA-205抑制剂下调TE1细胞中miRNA-205的表达,采用CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖能力、细胞周期和细胞凋亡情况;Western印迹检测细胞增殖和细胞凋亡相关CDK2,cyclin D1,P21,Bcl-2,cleavedcaspase-3,caspase-3,p-Rb,Rb,p-Akt和Akt的蛋白表达水平.双荧光素酶报告基因分析法预测及验证其可能的靶基因.结果:MiRNA-205在各型食管癌细胞中高表达.沉默miRNA-205后,TE1细胞的增殖能力降低并表现为细胞周期阻滞,而细胞凋亡率显著升高(p＜0.05).同时细胞中cyclin D1,CDK2,bcl-2,p-Rb及p-Akt的蛋白表达水平均显著降低,p21及cleaved-caspase-3的蛋白表达水平显著升高.双荧光素酶报告基因分析显示PTEN是miRNA-205的可能作用靶点,TE1中共转染miRNA-205抑制剂和PTEN siRNA可部分逆转miRNA-205介导细胞增殖抑制及凋亡诱导作用.结论:沉默miRNA-205可靶向PTEN抑制食管癌细胞株TE1的增殖,并促进其凋亡,提示miRNA-205可作为食管癌诊疗的一个潜在作用靶点.     

miR-634 在肝癌中的表达及对肝癌细胞生物学行为的影响

目的:检测microRNA-634(miR-634)在肝癌中的表达水平及其对肝癌细胞常见生物学行为的调控作用。方法:采用实时荧光定量PCR(RT鄄qPCR)法检测肝癌细胞系(HepG2、SMMC7721、Bel7402、Bel7404、SNU739)、69 例肝癌组织及匹配癌旁组织中miR-634 的相对定量,分析miR-634 表达与肝癌患者性别、年龄、肿瘤直径、分化程度、Child-Pugh 分级、BCLC 分期、门静脉癌栓及肝外转移的关系,同时构建miR-634 的真核表达载体并转染肝癌细胞系,采用活细胞计数试剂盒CCK-8、流式细胞仪Annexin V/ PI 双染法和Transwell 侵袭实验检测转染miR鄄634 对细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。结果:与正常人肝细胞系L-02 相比,肝癌细胞的miR-634 水平均降低(P <0.05),表达量依次为HepG2 >SNU739 >Bel7402 > Bel7404 >SMMC7721;69 例肝癌组织的miR鄄634 水平为(0.253±0.019),低于匹配癌旁组织(P<0.05),且与肿瘤直径、分化程度、BCLC分期、门静脉癌栓及肝外转移均有关(P<0.05)。过表达组转染24 ~96 h 后的miR鄄634 水平持续升高,与对照组和空转染组的差异有统计学意义(P<0.05);与对照组和空转染组相比,转染组的增殖抑制率、凋亡率均升高,但穿膜细胞数降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-634 在肝癌组织和细胞中均为低表达,且与临床病理参数有关,上调其水平可抑制肝癌细胞增殖及侵袭并诱导凋亡,对于肝癌防治有重要借鉴价值。     

微小RNA-21转染介导食管鳞癌细胞生物学行为及细胞放射敏感性的变化

目的 探讨微小RNA-21（miRNA-21）表达介导食管鳞癌细胞的生物学特性。方法 转染miRNA-21正义表达载体、miRNA-21空载体及miRNA-21抑制剂,通过Real-time PCR实验,以食管鳞状上皮癌TE-1正常细胞为对照组,检测转染结果。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8）对细胞增殖活性进行检测;采用流式细胞术检测细胞凋亡能力;通过Transwell小室和划痕实验观察TE-1细胞侵袭能力及迁移能力;通过集落形成实验观察TE-1细胞对放疗敏感性变化;采用SPSS 19.0统计学软件对所得数据进行分析。结果 Real-time PCR结果显示,转染miRNA-21抑制剂后,TE-1细胞中miRNA-21的表达水平明显降低（P<0.05）。相比正常细胞生长组,阳性对照组、阴性对照组转染miRNA-21抑制剂后,TE-1细胞增殖能力降低,细胞凋亡加快（P<0.05）。此外,实验抑制组中细胞侵袭和迁移能力下降。集落形成实验分析显示,抑制miRNA-21表达明显提高了TE-1细胞对放射的敏感性。结论 下调miRNA-21可降低食管鳞状上皮癌TE-1细胞的增殖、侵袭、迁移能力及放疗的敏感性,是未来治疗食管癌的潜在靶点。     

MicroRNA-106a functions as an oncogene in human gastric cancer and contributes to proliferation and metastasis in vitro and in vivo

Mounting evidences has shown that miRNAs are involved in the development and progression of gastric cancer acts as tumor suppressor genes or oncogenes. In our previous studies, we have found that the up-regulation of miR-106a occurs frequently in human gastric cancer tissues compared with that of normal tissues. Here, we investigate the role of the ectopic expressed miR-106a in the progression and metastasis of gastric cancer in vitro and in vivo. FFPE samples have the priority to be included and qRT-PCR was used to detect the miR-106a expression. Human gastric cancer cells and immortalized gastric epithelial cell were selected and the miR-106a mimic and inhibitor were transfected. Cell growth was determined by MTT method. The flow cytometric analysis for cell apoptosis and transwell assays for evaluating the cell migration and invasion were conducted. Luciferase assay and western blot confirmed the direct binding site of miR-106a and its target. BALB/c nude mice were randomly divided to explore the implantation of gastric cancer cells transfected with miR-106a antagomir. Abnormal over-expression of miR-106a significantly promoted gastric cancer cell proliferation, metastasis, inhibited the cell apoptosis. Functional experiment ascertained that miR-106a interacted with FAS and mediated caspase3 pathway. Knockdown of miR-106a leaded to the attenuation of gastric cancer implantation capacity in vivo. Moreover, expression of TIMP2 was inversely associated with miR-106a in nodule tissues. Apoptotic body was also seen under electron microscope accompanied by silencing of miR-106a. Together, this data indicated that miR-106a may act as an oncogene and contribute to gastric cancer development.     

微小RNA-146a影响血管平滑肌细胞增殖和凋亡的机制*☆◆

背景：微小RNA-146a通过负调控核因子κB信号通路介导免疫细胞和肿瘤细胞的增殖,但是否参与血管平滑肌细胞的增殖或凋亡未见研究报道。 目的：观察微小RNA-146a对血管平滑肌细胞增殖、凋亡的影响及其相关机制。  方法：采用脂质体2000将50 nmol/L微小RNA-146a反义寡核苷酸转染至大鼠血管平滑肌细胞,以转染错义链及PBS的细胞作为对照。  结果与结论：微小RNA-146a反义寡核苷酸转染48 h后,血管平滑肌细胞增殖减少(P < 0.01)、凋亡增多(P < 0.05),细胞的微小RNA-146a水平明显降低(P < 0.01),核因子κBp65、增殖细胞核抗原蛋白表达明显降低(P < 0.05)。说明微小RNA-146a可以促进血管平滑肌细胞的增殖,抑制凋亡,其机制与增加核因子κBp65表达有关。关键词：微小RNA-146a;血管平滑肌细胞;核因子κB;转染;增殖;凋亡 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.20.024     

MicroRNA-125b在胃癌组织中的高表达并促进胃癌细胞系HGC-27和MGC-803的增殖

 目的 探讨microRNA-125b (miR-125b)基因在胃癌患者组织中的表达改变情况,及其对胃癌细胞系增殖和凋亡的影响。方法 使用real-time PCR方法检测miR-125b在40例临床诊断为胃癌患者的癌组织与癌旁对照组织中的表达情况。随后使用miR-125b mimic转染胃癌细胞系HGC-27和MGC-803,确认过表达成功后,分别使用CCK-8试剂盒和流式细胞仪检测过表达miR-125b对细胞增殖和凋亡的影响。结果 证实在胃癌患者组织中miR-125b的表达水平显著高于癌旁对照组（P<0.01）。在胃癌细胞系HGC-27和MGC-803中过表达miR-125b后,细胞增殖明显增加：转染72h,HGC-27（scramble组：1.632±0.09,mimic组：2.473±0.08）,MGC-803（scramble组：1.603±0.05,mimic组：2.554±0.07））,同时细胞凋亡也受到抑制。结论 miR-125b可能作为癌基因在胃癌中发挥作用,并对细胞增殖和凋亡具有显著影响。     

miRNA-101-3p靶向调控EZH2蛋白抑制胃癌细胞增殖和迁移

目的:研究微小RNA-101-3p(miRNA-101-3p)对人胃癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响及其可能的调控机制。方法:Real-time PCR检测2种人胃癌细胞和1种胃黏膜细胞中miRNA-101-3p和zeste增强子同源物2(EZH2)的表达水平;采用脂质体瞬时转染技术过表达miRNA-101-3p;流式细胞术检测miRNA-101-3p对胃癌细胞周期和凋亡的影响;Transwell实验、CCK-8法和台盼蓝染色法检测miRNA-101-3p对胃癌细胞迁移和增殖能力的影响;Western blot法检测EZH2的表达。结果:miRNA-101-3p在胃癌细胞的表达水平显著低于胃黏膜细胞(P0.05);过表达miRNA-101-3p后,流式细胞术结果显示胃癌细胞的S期比例减少,G0/G1期比例增加,早期凋亡率增加(P0.05);CCK-8法、台盼蓝染色法及Transwell实验结果显示胃癌细胞的增殖和迁移能力显著降低(P0.05);Western blot结果显示胃癌细胞中EZH2蛋白的表达明显下降(P0.05)。结论:miRNA-101-3p可能通过靶向负调控EZH2蛋白的表达抑制胃癌细胞的增殖和迁移,进而促进胃癌细胞凋亡。     

miR-132 靶向调控Ezrin 抑制卵巢癌细胞增殖、促进凋亡的实验研究

目的:探讨微小核糖核酸分子(miRNA)-132 在卵巢癌中生物学作用和作用靶点。方法:收集22 例卵巢癌及癌旁非肿瘤组织标本,RT-PCR 检测miR-132 表达量;RT-PCR 检测人正常卵巢上皮细胞和卵巢癌细胞系中miR-132 表达量;选择miR-132 表达量最高或最低的卵巢癌细胞株,分别转染阴性对照质粒(NC)和miR-132 mimic 质粒,RT-PCR 检测转染后miR-132 表达量;CCK-8 法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot 检测Ezrin 蛋白表达。结果:卵巢癌组织中miR-132 表达量显著低于癌旁非肿瘤组织,而卵巢癌细胞系中miR-132 表达量显著低于正常卵巢上皮细胞,差异均有统计学意义(P<0.05);选择卵巢癌细胞株中miR-132 表达量最低卵巢癌SKOV3 细胞株进行基因转染,与转染阴性对照质粒相比,转染miR-132 mimic 质粒后miR-132 表达量显著上升,细胞增殖显著降低,细胞凋亡显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05);Western blot 结果显示,上调miR-132 表达后,卵巢癌SKOV3 细胞株中Ezrin 蛋白表达显著上升(P<0.05)。结论:在卵巢癌中,miR-132 可能作为一种抑癌基因通过靶向调控Ezrin 抑制卵巢癌细胞增殖、促进凋亡。     

Level of circulated microRNA-421 in gastric carcinoma and related mechanisms

As one of the most popular and deadly malignant tumors, gastric cancer still has difficulty in early-diagnosis. Recently the level of circulated DNA related with tumors can be used for diagnosis. MicroRNA-421 (miR-421) has been found to be up-regulated in tumor cells. Whether peripheral miR-421 can be used as a marker for diagnosis of gastric carcinoma, however, remains unclear. The expression level of miR-421 in both gastric cancer and normal people were firstly quantified. We then performed in vitro transfection of gastric carcinoma cell line to potentiate or silence miR-421 level. Cell apoptosis and apoptotic protein levels were quantified by flow cytometry and Western blotting, respectively. MiR-421 level in the peripheral blood of gastric cancer patients was significantly elevated. In gastric cancer cell line, the up-regulation of miR-421 significantly inhibited cell apoptosis. The silencing of miR-421 promoted cell apoptosis. Such anti-apoptotic role of miR-421 was accomplished by inhibiting caspase 3, up-regulating Bcl-2 and inhibiting Bax. MiR-421 was up-regulated in both tumor tissue and peripheral blood, and can modulate cell apoptosis. Circulated miR-421 can work as a serological marker for early diagnosis of gastric cancer.     

miR-300通过LEF-1调控卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡的实验研究

目的探究miR-300介导LKF-1调控卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用的机制。方法体外培养卵巢癌SK0V3细胞及正常卵巢上皮细胞,使用RT-PCR检测卵巢癌SK0V3细胞及正常卵巢上皮细胞中LEF-1及miR-300的表达情况;利用生物信息学软件预测LEF-1为miR-300的靶基因,并通过双荧光素酶等实验进行验证;将卵巢癌细胞分为空白对照组、空白转染组和miR-300抑制剂组。空白转染组使用miR-NC转染卵巢癌SKOV3细胞;miR-300抑制剂组采用miR-300 inhibitor转染细胞。使用CCK-8检测细胞增殖情况;使用蛋A质印记检测各组细胞的增殖相关蛋白Ki-67表达情况;划痕实验法检测各组细胞迁移能力;使用蛋白质印记法检测迁移相关蛋白N-cadherin、E-cadherin表达情况;使用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;使用蛋A质印记法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达情况。结果卵巢癌SK0V3细胞中LEF-1及miR-300的表达显著高于正常卵巢上皮细胞(T=4.528,P=0.017;T=6.328,P=0.017);相比空白对照组,空白转染组卵巢癌细胞增殖、迁移能力均无显著改变(P>0.05);相比空白转染组,miR-300抑制剂组Ki-67蛋内相对表达(T15.687;P=0.001)、增长率(T=9.732;P=0.024)、划痕愈合率(T=11.558;P=O.005)、E-cadherin蛋白相对表达(T=18.558;P=0.003)、Bcl-2蛋白相对表达(T=11.001;P=0.035)均显著降低;N-cadherin蛋白相对表达(T=22.478;P=0.001)、B ax蛋白相对表达(T=18.528;P=0.004)、细胞凋亡率(T=19.975;P=0.000)均显著升高。结论miR-300可以介导LEF-1抑制卵巢癌细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制与调控增殖、凋亡相关蛋白和调控EMT过程相关。     

过表达miR-138抑制TCF-4对甲状腺癌细胞CAL-62增殖，凋亡和运动的调节作用

目的　探究过表达miR-138抑制T细胞因子4（TCF-4）对甲状腺癌细胞CAL-62增殖,凋亡和运动的调节作用机制。 方法　转染miR-138 mimic于CAL-62细胞,使用RT-PCR检测miR-138的表达;使用TCF-4构建pcDNA过表达载体转染CAL-62细胞,使用Westen blot检测TCF-4、增殖核抗原67（Ki67）、增殖细胞核抗原（PCNA）、半胱天冬酶3（caspase-3）、半胱天冬酶9（caspase-9）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和靶基因cycD、c-Myc的表达;使用EDU染色检测细胞增殖;使用Hoechst染色检测细胞凋亡情况;transwell检测细胞侵袭能力。 结果　相比空白组,miR-138转染+TCF-4组caspase-3、caspase-9、Vimentin蛋白表达显著减少,且有显著性差异（P<0.01）;Ki67、PCNA、E-cadherin、cycD、c-Myc蛋白表达显著增加（P<0.01）;甲状腺肿瘤细胞凋亡受到显著抑制（P<0.01）,增殖、侵染受到显著的促进（P<0.01）。相比TCF-4组,miR-138转染+TCF-4组caspase-3、caspase-9、Vimentin蛋白表达显著增加、（P<0.01）;Ki67、PCNA、E-cadherin、cycD、c-Myc蛋白表达显著减少（P<0.01）,抑制了甲状腺肿瘤细胞增殖、侵染（P＜0.01）,凋亡受到了显著的促进（P<0.01）。 结论　表达miR-138抑制TCF-4使得甲状腺癌细胞CAL-62的增殖、侵染受到显著抑制,凋亡受到显著促进。     

过表达miR-138抑制TCF-4对甲状腺癌细胞CAL-62增殖，凋亡和运动的调节作用

目的　探究过表达miR-138抑制T细胞因子4（TCF-4）对甲状腺癌细胞CAL-62增殖,凋亡和运动的调节作用机制。 方法　转染miR-138 mimic于CAL-62细胞,使用RT-PCR检测miR-138的表达;使用TCF-4构建pcDNA过表达载体转染CAL-62细胞,使用Westen blot检测TCF-4、增殖核抗原67（Ki67）、增殖细胞核抗原（PCNA）、半胱天冬酶3（caspase-3）、半胱天冬酶9（caspase-9）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和靶基因cycD、c-Myc的表达;使用EDU染色检测细胞增殖;使用Hoechst染色检测细胞凋亡情况;transwell检测细胞侵袭能力。 结果　相比空白组,miR-138转染+TCF-4组caspase-3、caspase-9、Vimentin蛋白表达显著减少,且有显著性差异（P<0.01）;Ki67、PCNA、E-cadherin、cycD、c-Myc蛋白表达显著增加（P<0.01）;甲状腺肿瘤细胞凋亡受到显著抑制（P<0.01）,增殖、侵染受到显著的促进（P<0.01）。相比TCF-4组,miR-138转染+TCF-4组caspase-3、caspase-9、Vimentin蛋白表达显著增加、（P<0.01）;Ki67、PCNA、E-cadherin、cycD、c-Myc蛋白表达显著减少（P<0.01）,抑制了甲状腺肿瘤细胞增殖、侵染（P＜0.01）,凋亡受到了显著的促进（P<0.01）。 结论　表达miR-138抑制TCF-4使得甲状腺癌细胞CAL-62的增殖、侵染受到显著抑制,凋亡受到显著促进。     

上调microRNA-383对人髓母细胞瘤D341细胞系中PRDX3表达的影响

目的探讨microRNA-383(miR-383)对人髓母细胞瘤D341细胞系中PRDX3基因的表达及细胞增殖活性与凋亡等细胞功能学的影响。方法应用实时荧光定量PCR法检测人髓母细胞瘤D341细胞系、正常脑组织中miR-383及PRDX3 mRNA表达水平;采用Western blot法检测人髓母细胞瘤D341细胞系、正常脑组织中PRDX3基因、蛋白表达水平;人工合成miR-383模拟体(mimics)转染MBD341细胞系,采用cck-8法、流式细胞术等实验方法检测转染人髓母细胞瘤D341细胞系后各组D341细胞增殖与凋亡、细胞内活性氧水平、线粒体膜电位水平的变化。结果人髓母细胞瘤BD341细胞系中miR-383表达水平为正常脑组织的0.524倍,明显下调。而PRDX3基因mRNA表达水平为正常脑组织的5.214倍,蛋白表达水平较正常脑组织明显上调。miR-383 mimics转染D341细胞系24、48 h,实验组miR-383表达水平均明显高于空白对照组,且48 h作用更加明显;而PRDX3基因mRNA、蛋白表达水平48 h较空白对照组降低。cck-8法检测提示实验组中细胞增殖率降低(P<0.05)。An-nexinV-FITC法检测转染后24、48 h细胞凋亡结果显示miR-383 mimics实验组细胞早期凋亡率明显增高,且24 h作用较明显(P=0.000)。细胞内活性氧水平和线粒体膜电位水平检测结果分别显示,转染后24、48 h实验组较对照组细胞内活性氧水平明显升高,而线粒体膜电位水平较对照组明显降低。结论与正常脑组织相比,miR-383在人髓母细胞瘤D341细胞系中表达降低,PRDX3基因表达升高。上调miR-383可敲低D341细胞系中PRDX3基因表达,并可抑制D341细胞增殖活性,促进D341细胞凋亡,出现D341细胞内活性氧水平升高、线粒体膜电位水平降低的细胞功能学变化。     

Diagnostic significance of miR-106a in gastric cancer

As one of the most common malignant tumors, gastric cancer still lacks tumor markers with enough specificity and sensitivity. Therefore the development of novel tumor markers is necessary for early diagnosis in clinics. MicroRNA (miR) has been known to be of unique expressional patterns in various tumors and may work as potential tumor markers for clinical use. This study thus explored the significance of plasma miR-106a in clinical diagnosis of gastric cancer and its effects on proliferation of cancer cells. Plasma miR-106a levels were quantified by real-time quantitative fluorescent PCR methods in 80 cases of gastric cancer patients and healthy individuals to analyze the correlation between miR-106a and clinical features. MiR-106 inhibitor was further transfected into human gastric carcinoma cells for further cell proliferation using CCK-8 approach. MiR-106a was significantly up-regulated in gastric cancer patient plasma samples compared to healthy individuals (P<0.01). The area under ROC curve was 0.895 (95% CI: 0.846~0.943). It has a specificity of 93.8% and a sensitivity of 77.5% in diagnosing gastric cancer. MiR-106a level was also correlated with cancer differentiation stage, lymph node metastasis, TNM stage and tumor size (P<0.05). The down-regulation of miR-106 in gastric carcinoma cells inhibited cell proliferation (P<0.05). MiR-106a was significantly up-regulated in gastric cancer patients and can facilitate the in vitro proliferation of tumor cells. It may work as a biological marker for gastric cancer.     

MiR-150-5p inhibits the proliferation and promoted apoptosis of pancreatic cancer cells北大核心CSCD

Objective: To investigate the role of miR-150-5p in cell proliferation and apoptosis in human pancreatic cancer cell lines. Methods: The expression of miR-150-5p in pancreatic cancer was detected by real time qPCR analysis in 11 pairs of pancreatic cancer tissue and matched adjacent normal tissue samples and in 4 pancreatic cancer cell lines. PANC-1, MIA PaCa-2, BxPC-3 and AsPC-1 cells were transfected with chemically synthesized MiR-150-5p mimics, and CCK-8 assays was then performed to assess cellular functions. To fully understand the mechanisms by which miR-150-5p exerted its function, cell cycle analysis was performed on MIA PaCa-2 and PANC-1 cells 48 hours after transfection, by incubating with propidium iodide (PI) and subsequently analyzed by fluorescence-activated cell sorting (FACS). Apoptosis assay was performed on MIA PaCa-2 and PANC-1 cell lines 24 hours after transfection using the Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit I (BD Biosciences) and analyzed by FACS. Results: The expression of miR-150-5p was consistently lower in the pancreatic cancer tissues than in normal tissues,and the miR-150-5p was also down-regulated in pancreatic cancer cell lines (P < 0. 05). MiR-150-5p mimics transfection significantly raised the expression level of miR-150-5p mRNA in PANC-1 and MIA PaCa-2 (P <0. 01). The CCK-8 proliferation assay showed that cell growth was reduced in 4 pancreatic cancer cell lines (AsPC-1, BxPC-3, MIA PaCa-2, PANC-1) of miR-150-5p transfected cells compared with NC-transfected cells. The inhibition rates were 50. 7%,48. 6%,30. 8% and 42. 3%, respectively (P <0. 01). The apoptotic rate was increased in cells transfected with miR-150-5p mimics (P < 0. 01). The cell cycle analysis in MIA PaCa-2 indicated that miR-150-5p treatment induced cell cycle arrest in G1 phase with a significant increase in the percentage of cells in G, phase (P < 0. 01), and a reduction of the S-phase cell population in MIA PaCa-2 and PANC-1 (P<0.01). Conclusions: MiR-150-5p is down-regulated in pancreatic cancer. Overexpression of miR-150-5p inhibits cell proliferation, blocked the cell cycle, but promotes cell apoptosis in pancreatic cancer cells.     

RNA干扰Notch1基因对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨RNA干扰技术沉默Notch1基因表达对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法设计并合成靶向Notch1基因的小分子干扰RNA质粒,在转染试剂Sofast介导下转染人乳腺癌细胞株MCF-7,用RT-PCR和Western blot法检测转染前、后Notch1基因的表达,挑选干扰效率最强的一组表达载体;cck8比色法检测分析各组细胞的存活率;流式细胞术检测细胞凋亡比例;Western blot法检测转染各组MCF-7细胞Notch1、NF-κB及Caspase-3蛋白表达。结果 Notch1-shRNA能有效封闭Notch1基因的表达,Notch1基因和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);Notch1-shRNA能明显抑制细胞增殖(P<0.05);转染48h后细胞凋亡比例增加(P<0.01)。NF-κB蛋白水平表达降低,Caspase-3蛋白表达水平增高。结论利用RNA干扰技术沉默Notch1基因的表达可以明显抑制MCF-7细胞的增殖,促进MCF-7细胞凋亡,其机制可能通过NF-κB信号通路调节相关凋亡蛋白的表达,进而影响细胞的凋亡和增殖,靶向Notch1的RNA干扰技术在乳腺癌的基因治疗中具有一定的研究价值。