线粒体DNA Cyt-b和血管内皮生长因子mRNA在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨线粒体DNA(mtDNA)Cyt-b和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达在乳腺癌发生、发展过程中的意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),分别对19位乳腺癌患者的19例乳腺癌组织标本和19例癌旁组织标本的mtDNA Cyt-b、VEGF mRNA的表达进行检测(β-actin作为定量标准物),观察它们在乳腺癌组织和癌旁正常组织中的表达差异以及与临床病理参数的关系。结果19位乳腺癌患者中,乳腺癌组织mtDNACyt-b和VEGF mRNA的表达均高于癌旁组织,两组比较均有明显差异(P<0.01),而乳腺癌组织中VEGF的两个异构体VEGF145和VEGF189的mRNA表达高于癌旁组织,两组比较均有差异(P<0.05),并且mtDNA Cyt-b与VEGFmRNA的表达呈正相关性(P<0.01),与VEGF145、VEGF189的mRNA表达均呈正相关性(P<0.05);淋巴结转移组mtDNA Cyt-b和VEGF mRNA的表达较无淋巴结转移组高,两组比较均有差异(P<0.05);TNM分期Ⅰ期mtDNA Cyt-b和VEGF mRNA的表达较Ⅱ期低,两组比较均有差异(P<0.05);Ⅰ期与Ⅲ期比较两组mtDNA Cyt-b mRNA的表达有明显差异(P<0.01),而VEGF mRNA的表达有差异(P<0.05)。结论乳腺癌中mtDNA Cyt-b和VEGF mRNA的表达上调,并且在肿瘤的能量传递过程起着一定作用。     

食管鳞状细胞癌中血管内皮生长因子C mRNA的表达及其临床意义

目的:探讨食管鳞状细胞癌中血管内皮生长因子C(VEGF-C)的表达及临床意义。方法:收集中山大学附属第一医院2009年3月~2010年2月收治的39例食管鳞状细胞癌患者,采用原位杂交法检测肿瘤组织及正常食管组织中VEGF-CmRNA的表达情况,并进行随访观察。结果:食管鳞状细胞癌组织中VEGF-CmRNA表达阳性率为71.8%(28/39),正常食管组织中表达阳性率为12.8%(5/39),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。VEGF-CmRNA的表达与食管鳞状细胞癌的淋巴结转移和浸润深度有关,但与性别、年龄和肿瘤组织分化程度无关。随访至死亡或2012年2月29日(以先者为准),VEGF-CmRNA阳性组生存率低于阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:VEGF-CmRNA的表达与食管鳞状细胞癌的发展、淋巴结转移及预后有相关性。     

乳腺癌中RRIG1 mRNA的表达及意义

目的探讨维甲酸受体诱导基因1(retinoic receptor-induced gene 1,RRIG1)在人乳腺癌组织中的表达及其与患者临床病理参数的关系。方法以GAPDH为内对照采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法(real time quantitative reverse transcrip-tion polymerase chain reaction,RQ RT-PCR)检测76例新鲜乳腺浸润性导管癌组织5、例导管原位癌组织和20例乳腺良性增生组织中RRIG1 mRNA的表达水平,并分析其与患者临床病理参数的关系。结果乳腺导管原位癌、浸润性导管癌组织中RRIG1 mRNA相对表达水平(3.5±2.1、6.7±4.1)明显低于良性增生组织(10.2±6.5),差异具有统计学意义(P=0.004,P=0.036);乳腺浸润性导管癌中淋巴结转移组RRIG1 mRNA相对表达水平(5.2±3.1)明显低于无淋巴结转移组(7.48±4.5),两组之间差异具有统计学意义(P=0.023)。结论 RRIG1可能作为一种新的抑癌基因参与乳腺癌的发生、浸润和转移,对乳腺癌早期诊断和预后评估具有重要的参考价值。     

血管内皮生长因子C在食管鳞癌中的表达及其意义

目的：研究血管内皮生长因子C（vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C）在食管鳞癌中的表达及其意义。方法：应用免疫组化法检测食管鳞癌组织中VEGF-C的表达。结果：食管鳞癌组织VEGF-C阳性表达率为38．9％,VEGF-C的表达与患者年龄、肿瘤大小及分化程度无关,但与肿瘤浸润深度、淋巴结转移密切相关。结论：VEGF-C阳性表达与食管鳞癌的淋巴结转移密切相关。VEGF-C是促进食管鳞癌经淋巴转移的重要因素。     

低能量氦氖激光照射增加大鼠心肌血管内皮生长因子的表达

目的　探求低能量氦氖激光照射大鼠心前区 ,对心肌血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响。　方法　采用RT PCR和免疫组织化学染色图像分析的方法 ,实验动物分对照组和激光照射组 ,每组 8只 ,照射组的照射剂量为 6 0 5J cm2 。　结果　VEGF免疫组织化学染色示照射组心肌微血管内皮细胞的着色较重 ,其平均光密度值为 0 2 4 6± 0 0 15 ,明显高于对照组的 0 2 18± 0 0 12 (t=9 0 5 ,P <0 0 5 ) ;心肌组织VEGF16 5的RT PCR产物表达显示 ,激光照射组的VEGF16 5mRNA表达为对照组的 2 79倍。　结论　以剂量为 6 0 5J cm2 的He Ne激光照射大鼠心前区 ,心肌微血管及心肌组织VEGF的表达明显增强。     

血管生成素-Ⅱ在胃癌中的表达及其意义

目的：研究血管生成素-Ⅱ（Ang-Ⅱ）在胃癌和癌周正常组织中蹬表达及影响其表达的病理因素。方法：采用RT-PCR和免疫组化法检测72例胃癌组织和癌周正常组织中Ang-Ⅱ和血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果：Ang-Ⅱ在胃癌组织中的表达与癌周正常组织相比有显著差异（P<0.01）。在肿瘤组织中，Ang-Ⅱ和VEGF的表达相关（r=0.996，P<0.05）。Ang-Ⅱ的表达与肿瘤的分期（r=0.792，P<0.01）、血管侵犯（r=0.829，P<0.01）相关，而与肿瘤组织的分化类型（r=0.289，P=0.250）、淋巴结转移程度（r=0.290，P=0.259）、浆膜层侵犯（r=0.374，P=0.126）无关。结论：Ang-Ⅱ在胃癌中的表达与VEGF的表达、肿瘤的分期、血管侵犯相关。     

血管内皮生长因子C及血管内皮生长因子受体3在人直肠腺癌中的表达及其意义

目的:检测血管内皮生长因子C(VEGF-C)及血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3)在人直肠癌组织和淋巴结中的表达,探讨VEGF-C在人直肠癌发生、发展和淋巴结转移中的作用.方法:选用31例手术切除并经病理切片确诊为直肠腺癌的癌组织石蜡标本,采用免疫组织化学方法检测VEGF-C及VEGFR-3在癌组织和淋巴结内的表达.结果:在31例直肠腺癌组织的癌细胞质中,VEGF-C显色阳性者54.8%;VEGFR-3显色阳性者64.5%;在14例淋巴结中,VEGF-C显色阳性者71.4%;VEGFR-3显色阳性者64.3%.结论:VEGF-C和VEGFR-3在直肠癌组织和淋巴结中均有较高表达,VEGF-C通过与VEGFR-3结合,促使淋巴管内皮细胞增殖、迁移并形成新的淋巴管,导致癌细胞转移.     

基质金属蛋白酶2和9及血管内皮生长因子C在乳腺癌淋巴结转移中的作用

目的 研究血管内皮生长因子C(VEGF-C)与基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9在乳腺癌组织中的表达及三者在乳腺癌淋巴结转移中的作用.方法 应用免疫组织化学SP法对84例乳腺癌(有腋淋巴结转移者52例,无腋淋巴结转移者32例)的VEGF-C、MMP-2和-9以及血管内皮透明质酸受体-1(LYVE-1)的表达进行检测,统计分析VEGF-C、MMP-2和-9与乳腺癌淋巴管生成的关系.利用重组质粒表达载体介导的短发夹式干扰RNA(shRNA)靶向沉默乳腺癌MCF-7细胞株中VEGF-C基因,PCR检测VEGF-C、MMP-2和-9的表达.结果 VEGF-C与MMP-2和-9在乳腺癌组织中均呈过表达,分别为83.3%(70/84)、89.3%(75/84)和75.0%(63/84),且在腋淋巴结转移组[94.2%(49/52)、98.1%(51/52)和88.5%(46/52)]比无淋巴结转移组[65.6%(21/32)、75.0%(24/32)和53.1%(17/32)]明显高表达(P＜0.05);淋巴管密度在腋淋巴结转移组及无转移组的表达有统计学意义(P＜0.05),随着VEGF-C与MMP-2和-9表达强度增加,淋巴管数量也增加(P＜0.05);转染重组质粒后MCF-7细胞株的VEGF-C及MMP-2和-9的mRNA表达水平下调,抑制率分别为95.0%、53.0%和77.0%(P＜0.05).结论 VEGF-C与MMP-2和-9协同促进乳腺癌组织的淋巴管新生和乳腺癌淋巴结转移.     

血管内皮生长因子C在乳腺癌中的表达及其与淋巴结转移的关系

目的：检测血管内皮生长因子C（VEGF－C）在乳腺癌中有无表达及其表达程度与癌细胞淋巴结转移的关系,以探讨VEGF－C在肿瘤淋巴道转移中的作用以及肿瘤细胞通过淋巴道转移的机理。方法：选用67例行乳腺癌根治术或改良根治术后女患者肿瘤组织石蜡标本,采用免疫组化方法检测其VEGF－C蛋白的表达,结果：在部分乳腺癌的癌细胞胞浆中可检测到VEGF－C蛋白的表达（28／67）,且VEGF－C在伴腋淋巴结转移的病例组中的表达明显高于无腋淋巴结转移的病例组,结论：VEGF－C表达于乳腺癌中,且其表达与乳腺癌肿瘤细胞的淋巴结转移密切相关。     

血管内皮生长因子D的表达与乳腺癌淋巴管生成及淋巴结转移的相关性

目的 探讨乳腺癌患者不同区域淋巴管生成、淋巴管浸润特点以及与血管内皮生长因子D(VEGF-D)的表达关系,并结合腋淋巴结转移状态进行分析. 方法 选取乳腺癌根治术石蜡标本79例,分4个区域(肿瘤区、癌周区、近癌区、远癌区)取材.切片行免疫组织化学染色,采用D2-40对淋巴管进行标记,检测各区域淋巴管密度(LVD)、淋巴管浸润(LVI)及VEGF-D表达情况. 结果 癌周区LVD最高(20.25±2.03),肿瘤区VEGF-D和LVI阳性率最高,分别为87.34%和63.29%.肿瘤区VEGF-D表达与LVD之间、LVD与LVI之间、VEGF-D表达与LVI之间差异无统计学意义(P>0.05),但在其他各区域它们之间差异有统计学意义(P<0.05),且呈正相关.癌周区LVD与腋淋巴结转移状态有关(P<0.05);癌周区和近癌区的VEGF-D表达及LVI与腋淋巴结转移之间差异有统计学意义(P<0.05),但在其他区域差异无统计学意义(P>0.05). 结论 VEGF-D可能促进乳腺癌淋巴管生成,增加淋巴管浸润机会.LVD的增高易致淋巴管浸润,促进腋淋巴结转移.癌周区和近癌区在乳腺癌淋巴道转移以及评估腋淋巴结转移状态的研究中可能更具有意义.     

乳腺癌中同源异型盒基因(HOX)A5表达的研究

目的研究乳腺癌组织中同源异型盒基因（HOX）A5mRNA和蛋白表达,并分析其与乳腺癌临床病理参数间的相关性,以探讨HOXA5基因在乳腺癌发生、发展及转移中的作用。方法运用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（Real-time RT-PCR）技术检测60例乳腺癌（其中54例浸润性导管癌）和24例乳腺良性病变中HOXA5 mRNA表达,免疫组织化学SP法检测HOXA5蛋白表达。统计学办法分析HOXA5攮因表达与乳腺癌临床病理参数间的关系。结果（1）乳腺癌中HOXA5 mRNA相对表达量为0．73～193．07,均值为20．85;乳腺良性病变中相对表达量为5．42～81.91,均值为30．94。乳腺癌HOXA5 mRNA表达明显低于良性乳腺病变（P〈0．01）。（2）乳腺癌中HOXA5蛋白表达减少或消失。（3）淋巴结转移阳性乳腺癌病例HOXA5 mRNA表达明显低于转移阴性组,两者间差异有统计学意义（P〈0．05）。HOXA5蛋白在淋巴结转移阳性和阴性乳腺癌中的表达差异具有显著性（P〈0．01）。淋巴结转移阳性的乳腺癌中HOXA5蛋白主要呈弱阳性表达或表达缺失,在淋巴结转移阴性的乳腺癌中主要呈中度至强阳性表达。（4）HOXA5 mRNA和蛋白表达与乳腺癌患者年龄、肿瘤大小、临床分期、组织学分型、浸润性导管癌分级等其他临床病理学参数间未见相关性（P〉0．05）。结论HOXA5基因表达异常可能与乳腺癌有关。HOXA5基因表达抑制可能与乳腺癌淋巴结转移有关。     

血管内皮生长因子,微血管密度与乳腺癌淋巴结转移及预后？…

目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)、微血管密度 (MVD)与乳腺癌淋巴结转移和预后的关系。方法　应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)与免疫组织化学SP法 ,检测 92例乳腺癌、12例癌旁组织V组织VEGF表达、MVD以及 2 1例乳腺癌、12例癌旁组织VEGFmRNA的表达。结果　乳腺癌组织 ,VEGF12 1(1.16 %± 0 1% )和VEGF165(1.0 1%± 0 .1% )表达高于癌旁组织 (0 .96 %± 0 .14% )、(0 .88%± 0 .1% ) ,P <0 .0 5～ 0 .0 1。此外 ,MVD与VEGF表达具有显著的正相关关系 (r =0 .70 2 ,P <0 .0 1)。VEGF表达和MVD与乳腺癌淋巴结转移、肿瘤复发关系密切 (P <0 .0 5～ 0 .0 1)。VEGF高表达组和高MVD组的无复发存活时间低于VEGF低表达组和低MVD组 ,差异具有非常显著性 (P <0 0 1)。结论　VEGF与乳腺癌血管生成密切相关 ;VEGF和MVD表达的增高对乳腺癌淋巴结转移、肿瘤复发有促进作用 ;VEGF和MVD对乳腺癌患者的无复发存活时间能起到预测作用     

靶向血管内皮生长因子C短发夹式RNA对人乳腺癌MCF-7细胞生物学特性的影响

目的 研究重组质粒表达载体介导的短发夹式RNA(shRNA)对乳腺癌MCF-7细胞株中血管内皮生长因子C(VEGF-C)的表达及乳腺癌细胞增殖、侵袭能力的影响.方法 脂质体介导重组质粒pSIREN-VEGF-C转染乳腺癌MCF-7细胞株,嘌呤酶素筛选阳性克隆;荧光定量PCR及Western blot检测转染前后乳腺癌MCF-7细胞中VEGF-C基因的表达;MTT法及Transwell体外侵袭实验检测转染前后乳腺癌MCF-7细胞的增殖及侵袭能力.结果 转染重组质粒后乳腺癌MCF-7细胞中VEGF-C mRNA及蛋白表达均明显下调,抑制率分别为95%及100%(P<0.05);MTT法和 Transwell体外侵袭实验显示,与阴性质粒组和空白对照组比较,转染重组质粒后各时间段乳腺癌MCF-7细胞增殖均明显受抑制(P<0.05),同时穿膜的肿瘤细胞数也明显减少[(29.0±1.9)个与(59.0±2.1)个和(61.0±2.2)个相比,P<0.05].结论 表达VEGF-C shRNA的重组质粒载体pSIREN-VEGF-C在乳腺癌MCF-7细胞中能高效、特异地发挥靶基因沉默作用,并对乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力有显著抑制作用.     

乳腺癌发生模型MCF10各细胞系中APC基因启动子区甲基化及mRNA表达检测

目的探讨乳腺癌发生模型MCF10中抑癌基因APC启动子区甲基化状态及其对mRNA表达的影响。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）及双亚硫酸钠基因测序技术检测MCF10模型的乳腺增生细胞系MCF10A、癌前细胞系MCF10AT、导管内癌细胞系MCF10DCIS.com、浸润癌细胞系MCF10CA1a、MCF10CA1d、MCF10CA1h及经典乳腺癌细胞系MCF-7和正常乳腺组织中APC基因启动子1A甲基化状态,然后用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和实时PCR技术检测上述样品的mRNA表达水平。结果在MCF10模型的增生细胞系、癌前细胞系、导管内癌细胞系、浸润癌细胞系中,APC基因启动子1A处于低甲基化状态;与正常乳腺组织相比,各细胞系APC基因mRNA表达无明显减少,MCF10AT、MCF10CA1d、MCF10CA1h、MCF10DCIS．com的mRNA表达分别减少0．27、0．96、1．78、2．70、2．03倍,MCF10A和MCF-7分别增加0．02和0．33倍）。结论MCF10模型中乳腺癌的发生发展过程与APC基因启动子区异常甲基化无关。     

结直肠癌中胰岛素样生长因子结合蛋白-相关蛋白1表达上调与其5′CpG岛低甲基化的相关性

目的 探讨胰岛素样生长因子结合蛋白-相关蛋白1(IGFBP-rP1)在结直肠癌中的表达改变并分析其与该基因5′CpG岛甲基化改变的关系.方法 采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测46例结直肠癌组织和配对的正常黏膜中IGFBP-rP1基因的表达水平及5′CpG岛的甲基化状况,并通过T-A克隆、测序加以验证.不表达IGFBP-rP1基因的结肠癌细胞株LoVo和SW620经去甲基化药物5-氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycytidine,5-aza-dC)处理后,分别用RT-PCR和MSP检测IGFBP-rP1表达改变和甲基化状况.结果 mRNA水平上,IGFBP-rP1在结直肠癌组织中的表达水平高于配对的正常黏膜(P<0.01).在46例结直肠癌组织中,28例(60.9%)可检测到IGFBP-rP1基因5′CpG岛发生甲基化,而在配对的正常黏膜中,37例(80.4%)可检测到,二者差异有统计学意义(P<0.05).IGFBP-rP1基因的表达和甲基化水平之间存在负相关(P<0.05).5-aza-dC处理后,两株细胞均出现IGFBP-rP1基因的再表达,MSP法检测证实基因发生了去甲基化.结论 IGFBP-rP1基因的表达水平与5′CpG岛甲基化水平之间存在负相关.DNA甲基化是结直肠癌中IGFBP-rP1表达调控的一种机制.IGFBP-rP1低甲基化引起的基因表达上调可能与结直肠癌的发生发展有关.     

人IL-6 mRNA的实时定量检测法

目的：建立TaqMan-MGB技术实时定量检测人IL-6 mRNA的方法，并用于检测人外周血单个核细胞在牛膝多糖诱导下IL-6 mRNA的表达。方法：（1）抽取人外周静脉血，EDTA抗凝，用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，用Trizol裂解液提取总RNA，将总RNA逆转录为cDNA，PCR扩增IL-6后纯化PCR产物，与pMD 18-T载体进行连接，转化宿主菌DH-5α。提取重组质粒DNA，作为实时荧光定量检测的标准品。建立TaqMan-MGB技术实时定量检测IL-6 mRNA的方法。（2）终浓度分别为0、100、200、400、800和1 600 mg/L的牛膝多糖作用于人外周血单个核细胞，定量检测IL-6 mRNA的表达。结果：（1）酶切分析、PCR扩增以及测序结果均证实IL-6 cDNA成功重组到pMD 18-T载体上。（2）TaqMan-MGB技术检测IL-6 mRNA线性范围广；灵敏度高；特异性好；重复性好。（3）牛膝多糖作用于人外周血单个核细胞后IL-6 mRNA表达增高。结论：TaqMan-MGB技术能较为精确地定量IL-6 mRNA。     

下调血管内皮生长因子-C基因表达对乳腺癌MCF-7细胞侵袭抑制作用的研究

目的 探讨下调乳腺癌MCF-7细胞中血管内皮生长因子(VEGF)-C基因的表达后对乳腺癌细胞侵袭能力的影响.方法 脂质体介导重组质粒pSIREN-VEGF-C转染乳腺癌MCF-7细胞株.荧光定量PCR及Western印迹检测转染后对乳腺癌MCF-7细胞VEGF-C mRNA和蛋白质水平的影响.Transwell体外侵袭实验检测转染前后乳腺癌MCF-7细胞的侵袭能力.RT-PCR检测转染前后乳腺癌MCF-7细胞中MMP-2、-9 mRNA表达变化.结果 转染后获得稳定表达的细胞株.转染后的乳腺癌MCF-7细胞VEGF-C mRNA及蛋白表达均明显下调,抑制率分别为95%及100%(P<0.05).Transwell体外侵袭实验显示,转染后重组质粒组与阴性质粒相比,穿膜数明显减少(29.0±1.9比59.0±2.1,P<0.05).RT-PCR显示,转染后乳腺癌细胞的MMP-2、-9 mRNA表达均明显受抑制,抑制率分别为55%、75%(P<0.05).结论 下调VEGF-C表达对乳腺癌MCF-7细胞的侵袭能力有显著抑制作用.