坐骨神经结扎大鼠脊髓组织Toll样受体4及下游细胞因子表达的变化

目的:观察大鼠坐骨神经结扎(CCI)后脊髓背角Toll样受体4(TLR4)及脊髓内IL-1β、TNF-α表达的变化,探讨神经病理性疼痛可能的治疗靶点.方法:结扎大鼠右侧坐骨神经,术后1、3、7、10、14 d观察大鼠热痛阈及机械性痛闻的变化,采用实时定量RT-PCR、免疫荧光及Western印迹观察L4～L6段脊髓组织TLR4基因及蛋白表达的变化,ELISA法测量脊髓组织IL-1β、TNF-α表达的变化;以假手组大鼠作为对照.结果:坐骨神经结扎后,大鼠右足热痛闻及机械性痛阈明显降低.脊髓背角TLR4基因及蛋白表达明显增加,明显高于假手术组(P＜0.05);脊髓组织IL-1β、TNF-α的含量也明显升高,明显高于假手术组(P＜0.05).结论:坐骨神经结扎可能通过诱导TLR4表达,促进下游细胞因子释放,导致痛阈降低;TLR4有望成为治疗病理性疼痛的新靶点.     

Toll样受体在神经病理性疼痛中的作用

Toll样受体(TLR)是Ⅰ型跨膜蛋白质,是天然免疫细胞膜上最重要的模式识别受体,可以识别内源性分子。内源性分子可通过死亡细胞释放、应激细胞分泌、细胞外基质降解释放等使组织损伤。多项研究表明,脊髓胶质细胞表达的TLR参与神经病理性疼痛的发病机制,是神经病理性疼痛的潜在治疗标靶。研究TLR在神经病理性疼痛中的作用,可以为临床治疗疾病提供新的思路。     

晚期糖化终产物受体中和抗体缓解腰5脊神经结扎大鼠神经病理性疼痛的效果观察

目的：观察大鼠腰5脊神经结扎后注射晚期糖化终产物受体（ RAGE）中和抗体的镇痛效果,探讨其在背根神经节发挥作用的机制。方法雄性SD大鼠,体质量200～250 g,采用结扎腰5脊神经（ L5）制备神经根结扎（ SNL）模型。30只雄性SD大鼠按数字表法随机分为3组,每组10只。分别为药物组（ SNL术后每天鞘内注射RAGE中和抗体）、对照组（假手术后＋磷酸缓冲盐溶液）、安慰剂组（ SNL术＋磷酸缓冲盐溶液）。于术前及术后不同时点测定大鼠的机械撤爪阈值和热刺激缩爪潜伏期。取大鼠背根神经节,进行免疫荧光染色,采用ELISA检测各组中肿瘤坏死因子（ TNF）－α和白细胞介素（ IL）－1β的表达。结果 SNL术后,L5背根神经节RAGE平均荧光强度（42．80±4．19）比术前（19．78±4．19）增高,差异有统计学意义（ P＜0．05）。安慰剂组大鼠术后1、3、5、7 d机械缩爪阈值（9．30±2．10,4．60±1．35,3．80±1．40,3．60±1．26）与对照组（13．00±2．58,12．50±2．64,13．50±2．42,13．00±2．58）比较差异有统计学意义（P＜0．05）。安慰剂组大鼠术后1、3、5、7 d热刺激缩爪潜伏期（10．01±1．16,5．40±1．51,4．32±1．16,4．40±1．43）与对照组（12．80±1．14,13．00±1．25,12．70±1．34,12．80±1．55）比较差异有统计学意义（P＜0．05）。药物组大鼠术后3、5、7 d机械缩爪阈值（8．00±2．31,7．40±2．12,7．20±1．93）与安慰剂组（4．60±13．50,3．50±1．14,3．60±1．26）比较差异有统计学意义（P＜0．05）。药物组大鼠术后3、5、7 d热刺激缩爪潜伏期（8．15±1．37,8．26±1．29,7．00±1．07）与安慰剂组（5．41±1．51,4．32±1．16,4．40±1．43）比较差异有统计学意义（ P＜0．05）。药物组大鼠术后L5背根神经节TNF－α表达量（70．53±6．57）与安慰剂组（109．90±4．97）比较差异有统计学意义（P＜0．05）。药物组大鼠术后L5背根神经节IL－1β表达量（88．24±3．60）与安慰剂组（168．77±6．34）比较差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论 RAGE中和抗体通过抑制背根神经节TNF－α和IL－1β生成,缓解SNL大鼠的痛觉敏感。     

宫内生长受限大鼠肝脏Toll样受体4表达的变化

目的 检测宫内生长受限(IUGR)大鼠肝脏中Toll样受体4(TLR4)及细胞因子的表达,探讨IUGR个体革兰阴性(G-)细菌感染率增加的分子机制.方法 采用孕期蛋白质营养不良法建立IUGR大鼠模型,应用荧光定量RT-PCR技术检测3周龄子鼠肝脏中TLR4的mRNA含量变化,Western blot方法检测子鼠肝脏TLR4的蛋白表达,并应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素1β(IL-1β)的水平.结果 与对照组相比,IUGR组子鼠肝脏TLR4的mRNA和蛋白表达都明显降低(P<0.01);而TNF-α和IL-1β的表达水平明显增高,且与TLR4蛋白含量呈负相关(P<0.05).结论 宫内生长受限引起肝脏中细胞因子TNF-α和TL-1β的浓度增高,可能导致TLR4表达下降,后者可引起IUGR个体革兰阴性细菌炎症和败血症增加.     

脊髓Toll样受体4与神经病理性疼痛

Toll样受体4（Toll-likereceptor4,TLR4）是一类介导天然免疫的跨膜信号传递受体,在促进细胞因子的合成与释放、诱发炎性反应、抗病毒感染、调节免疫应答、介导全身免疫病理损伤等方面起重要作用。本文主要对TLR4的生物学特征、TLR4在神经病理性疼痛中的作用、TLR4参与神经病理性疼痛的可能机理和TLR4作为疼痛治疗的药物靶点等方面做一综述,以阐述脊髓TLR4在神经病理性疼痛发生发展中的作用,可能为临床神经病理性疼痛的治疗提供方向和思路。     

盐酸文拉法辛对坐骨神经慢性结扎损伤模型大鼠神经病理性疼痛的影响

目的 观察盐酸文拉法辛对坐骨神经慢性结扎损伤模型大鼠神经病理性疼痛的影响.方法 采用坐骨神经慢性结扎损伤模型,将21只SD大鼠随机分为3组,即文拉法辛组（术后每天给予盐酸文拉法辛25 mg/kg,连续给药14 d）、假手术组和模型组（予等量生理盐水）.分别于术前1d和术后2,7,14 d采用YLS-6B智能热板仪测定热痛缩爪潜伏期（TWL）,用意大利UGO BASILE 37450动态足底触觉仪测定机械痛缩爪潜伏期（MWT）.结果 术前3组TWL和MWL差异无统计意义（P＞0.05）.术后2d与术前1d比较,模型组和文拉法辛组的痛阈值变化有高度统计意义（P＜0.01）,而假手术组无统计意义（P＞0.05）.术后14 d与术后2d比较,文拉法辛组的TWL和MWL均有统计意义（P＜0.05）,而模型组无统计意义（P＞0.05）.文拉法辛组术后7d与术后2d比较,痛阈值变化无统计意义（P＞0.05）.结论 盐酸文拉法辛能减轻大鼠坐骨神经慢性结扎损伤模型引起的神经病理性疼痛.     

严重烧伤早期大鼠脾脏Toll样受体4的表达及意义

目的:探讨Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)在严重烧伤早期炎症过程中的作用.方法:建立大鼠30%体表面积Ⅲ度烧伤模型,在烧伤前及烧伤后2、5、8、12、24、48、72 h等不同时间点留取脾脏组织和外周血,采用RT-PCR方法检测脾脏TLR4、TNF-α mRNA表达,Western 印迹法检测脾脏TLR4蛋白表达,鲎试剂法测定血浆内毒素(ET)含量.结果:与正常对照组比较,严重烧伤可明显上调TLR4、TNF-α的表达及ET水平(P＜0.01或P＜0.05).TLR4 mRNA、蛋白及ET均在烧伤后8 h达高峰,TNF-α表达高峰在烧伤后12 h(P＜0.01).伤后TLR4 mRNA的表达与ET和TNF-α mRNA之间均呈正相关(r=0.811,0.462).结论:严重烧伤可导致血中ET升高,并上调脾脏组织TLR4的基因以及早期炎症因子TNF-α的基因表达,TLR4的上调可能参与了严重烧伤后失控性炎症反应的病理生理过程.     

体外筛选针对大鼠Toll样受体4 mRNA的小分子干扰RNA序列

目的:筛选能高效干扰大鼠Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)mRNA的最佳小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列.方法:克隆大鼠TLR4基因全长,将TLR4基因与含增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的质粒pEGFP-C1重组,构建pEGFP-rTLR4,化学合成法合成3对干扰大鼠TLR4的siRNA后,将3对siRNA、阴性对照siRNA和干扰EGFP的siRNA分别与pEGFP-rTLR4经Lipofectamine2000共转染HEK-293细胞株,通过倒置相差显微镜和流式细胞仪观察EGFP的荧光强度.结果:与阴性对照组相比,3对针对TLR4的siRNA及针对EGFP的siRNA均明显抑制EGFP的荧光表达(P＜0.05).其中尤以siRNA2(核苷酸序列为5'-GTC TCA GAT ATC TAG ATC T-3',位于TLR4基因序列的1 352～1 370位)的抑制效果最强,干扰效率＞75%.结论:成功筛选出体外可高效干扰大鼠TLR4mRNA的siRNA片段.     

柚皮苷抑制腰5脊神经结扎引起的神经病理性疼痛

【目的】 观察不同剂量柚皮苷对腰5脊神经结扎加切断(L5 SNL)引起的神经病理性疼痛的抑制作用&#65377; 【方法】 利用行为学测试的方法,我们检测了口服柚皮苷对L5 SNL大鼠50%机械刺激撤足阈值的影响&#65377;【结果】 30, 90,100 mg/kg柚皮苷可显著提高L5 SNL大鼠的50% 机械刺激撤足阈值,10 mg/kg无效&#65377;单次给药(30或90 mg/kg)对大鼠50%机械刺激撤足阈值缓解作用可达6 h左右,连续7天给予柚皮苷(30 mg/kg,每天1次)其作用可持续至停药后4 d&#65377;【结论】 口服柚皮苷可缓解外周神经损伤引起的神经病理性疼痛&#65377;     

鞘内注射眼镜蛇毒活性成分对大鼠神经病理性疼痛的镇痛作用

目的观察鞘内注射眼镜蛇毒活性成分(the antinociceptive fraction,AF)对L5脊神经结扎并切断(L5SNL)所致神经病理性疼痛的镇痛作用,初步探讨其可能的镇痛机制。方法利用机械性刺激的方法,观察鞘内给予AF对L5SNL大鼠镇痛作用,以及观察给予胆碱能受体阻断剂阿托品和阿片肽受体阻断剂纳洛酮对AF镇痛作用的影响。结果 SNL 7 d时大鼠后足机械刺激痛阈值均下降,鞘内给予AF后,手术侧及非手术侧痛阈值均显著升高(P<0.05)。在给药后3 h,手术侧的机械性刺激撤足阈值达到(21.213±2.155)g(P<0.05);手术对侧达到(15.876±1.500)g(P<0.05)。给予阿托品和纳洛酮后可部分阻断AF的镇痛作用。纳洛酮从给药后1 h开始明显阻断手术同侧AF的镇痛作用。阿托品在给药后3、6、12 h显著阻断了手术同侧AF的镇痛作用。结论鞘内给予AF可缓解外周神经损伤引起的神经病理性疼痛,其镇痛机制可能与胆碱能受体和阿片肽受体有关。     

神经慢性挤压伤疼痛模型大鼠脊髓GABAA受体mRNA表达的变化

目的：了解大鼠坐骨神经慢性挤压伤（chronic constriction injury, CCI）模型脊髓GABAA受体α2、γ2亚型mRNA表达的变化。方法：SD大鼠20只，5只为正常对照，15只做成CCI模型，用Von Frey细丝和CO2激光测定大鼠足爪的疼痛阈值变化，并于术后3d、7d和14d处死（n=5每组），取L4－5脊髓用RT－PCR方法测定不同时点大鼠脊髓GABAA受体α2、γ2亚型mRNA的表达量。结果：CCI大鼠结扎侧在术后3d即开始出现机械感觉异常和痛觉过敏，7d、14d组逐渐加重（P＜0．05）。与正常大鼠比较，CCI大鼠GABAA受体α2、γ2亚单位mRNA表达量于术后7d开始出现下降（P＜0．05），且术后14d组进一步降低（P＜0．01）。结论：CCI大鼠疼痛模型中脊髓GABAA受体α2、γ2亚单位的表达量明显下降，其在慢性神经性疼痛中发病机制中的确切作用尚待进一步研究。     

鞘内注射可乐定和氯胺酮对慢性神经病理性疼痛大鼠的镇痛效应

目的:观察鞘内注射氯胺酮(ketamine) 及可乐定(clonidine) 对慢性神经病理性疼痛的镇痛效应.方法:体质量220～280g的雄性SD大鼠32只,水合氯醛300mg/kg腹腔麻醉后,制作坐骨神经松弛结扎(CCI)模型,术后第4天随机分为4组,每组8只,每日给药1次,连续7d.对照组于鞘内给0.9%的生理盐水20μL;氯胺酮组于鞘内注射氯胺酮1mg/kg;可乐定组于鞘内注射可乐定20μg/kg;联合用药组给予氯胺酮0.5mg/kg加可乐定10μg/kg.采用BME-410A型热痛刺激仪测试痛阈,给药前及给药后30min各测1次.痛阈测试完毕后处死大鼠,取其腰段脊髓冻存测定其一氧化氮合酶(NOS)和NO的活性及含量. 结果:鞘内联合注射氯胺酮及可乐定的镇痛效应显著大于单独注射氯胺酮(1mg/kg) 或可乐定(20μg/kg).联合注射组大鼠的NOS活性和NO的含量明显低于单独用药组(P＜0.05).4组给药后体质量均较给药前增加(P＜0.05). 结论:氯胺酮与一定剂量的可乐定鞘内联合应用时具有显著的协同镇痛作用,而且能减少各自的副作用.     

大鼠慢性神经病理性疼痛模型的建立

目的:制作大鼠坐骨神经慢性压迫(CCI)疼痛模型,为慢性疼痛的实验研究奠定基础.方法:取成年SD大鼠30只,随机均分为CCI组与假手术组.CCI组大鼠(n=15)以6.0丝线结扎右侧坐骨神经,假手术组大鼠(n=15)仅暴露右侧坐骨神经,不结扎.2组各取10只分别于术后第3天测量左、右爪热痛周,隔天测1次,测至第6周末.第3周末2组各取剩余的5只采用免疫组化法检测大鼠脊髓背角NR2B蛋白的表达.结果:CCI术后第7天结扎侧热痛觉过敏出现,持续到第33天,第35天后消失.不同时间点CCI组和假手术组左右侧热痛阈的差值相比差异有统计学意义(F时间=13.724,P=0.001;F组间=237.012,P<0.001).CCI组大鼠结扎侧脊髓背角NR2B蛋白阳性区积分光密度为(26224.32±2182.00),明显高于CCI假手术组(16572.52±2013.67)(t=8.652,P=0.005).结论:大鼠慢性神经病理性疼痛模型造模成功.     

槲皮素减轻坐骨神经慢性缩窄性损伤大鼠的神经病理性疼痛及其相关机制

目的 探究槲皮素对坐骨神经慢性缩窄性损伤(chronic constriction injury,CCI)模型大鼠神经病理性疼痛的影响及其机制.方法 构建CCI大鼠模型,用不同浓度槲皮素干预,通过行为学实验检测机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL),ELISA试剂盒检测大鼠脊髓中炎性因子的表达,Western blot和qRT-PCR分别检测iNOS、COX-2和Wnt3a、β-catenin的蛋白以及mRNA的表达.结果 与对照组相比,模型组大鼠MWT和TWL值明显下降(P＜0.05),脊髓TNF-α、IL-1β,疼痛相关分子iNOS、COX-2,WNT通路Wnt3a、β-catenin蛋白水平均显著上升(P＜0.05),而槲皮素使模型组大鼠MWT和TWL值显著提高,TNF-α和IL-1p,iNOS和COX-2,Wnt3a和β-catenin水平均显著下降(P＜0.05),并呈现一定的剂量依赖效应.而Wnt/β-catenin通路激活剂可阻断槲皮素对CCI大鼠的作用.结论 槲皮素可能通过抑制Wnt/β-catenin通路及其下游靶分子COX-2和iNOS的表达减轻CCI大鼠的神经病理性疼痛.     

慢病毒介导GDNF过表达对CCI大鼠神经病理性疼痛的影响

目的 观察鞘内注射过表达胶质细胞源性神经生长因子（GDNF）慢病毒载体对慢性缩窄性神经损伤（CCI）大鼠神经病理性疼痛的影响.方法 采用结扎大鼠坐骨神经制备CCI模型.CCI造模成功后第7天鞘内注射GDNF过表达慢病毒载体.CCI造模前及造模后第3、5、7、14、21天测定大鼠机械痛阈,并于术后第21天采用Western免疫印迹法测定脊髓GDNF表达.结果 Western免疫印迹显示CCI组GDNF表达较假手术组减少（P＜0.05）;鞘内注射GDNF过表达慢病毒载体后,脊髓GDNF表达上调,且CCI大鼠机械痛敏显著降低（P＜0.05）.结论 上调脊髓GDNF表达可减轻CCI大鼠神经病理性疼痛.     

脊髓CXCR2在CCI大鼠神经病理性疼痛中的作用研究

探讨脊髓趋化因子受体2（CXCR2）在坐骨神经慢性压迫（CCI）模型大鼠神经病理性疼痛（NPP）中的作用。方法18 只成年Sprague-Dawley 雄性大鼠,随机分为3 组,每组6 只。对照组：大鼠不做任何处理;模型组：复制CCI大鼠模型;实验组：复制CCI 大鼠模型后第3 天腹腔注射漆树酸5 mg/kg。于复制大鼠CCI模型前1 天,以及第1、3、5 和7 天分别测定大鼠后足热痛阈及机械痛阈,并应用Western blot测定腰段脊髓CXCR2 的蛋白表达。结果CCI 大鼠术后第3天开始术侧下肢热痛阈值降低,模型组、实验组术侧下肢热 痛阈值与对照组比较,差异有统计学意义（p <0.05）;实验组大鼠第5 和7 天术侧热痛阈值与模型组比较,差异有统计学意义（p <0.05）。机械痛阈变化趋势与热痛阈一致。模型组、实验组大鼠脊髓CXCR2 表达与对照组比较,差异有统计学意义（p <0.05）;实验组CXCR2 表达与模型组比较,差异有统计学意义（p <0.05）。结论脊髓CXCR2表达的异常上调,可导致NPP产生和维持。腹腔注射漆树酸能够部分抑制CCI大鼠脊髓腰段CXCR2的表达上调,并缓解CCI大鼠的疼痛行为。     

鞘内注射GDNF对神经病理性疼痛大鼠的影响及可能机制

目的评价鞘内注射胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对神经病理性疼痛大鼠行为学的影响,以及脊髓背角C—Jun氨基末端蛋白激酶（JNK）和细胞外调节蛋白激酶（ERK）蛋白表达的影响。方法取鞘内置管成功的健康雄性sD大鼠120只,随机分为对照组（C组）、假手术组（S组）、神经病理性疼痛组（P组）和GDNF治疗组（G组）,每组30只。P组和G组采用结扎大鼠右侧坐骨神经建立坐骨神经慢性压迫损伤（chronicconstric—tioninjury,CCI）模型。C组不给予任何处理;S组只暴露坐骨神经,但不结扎;P组鞘内注射生理盐水10叫,隔日1次,连续14天;G组鞘内注射GDNF2I,zg,用生理盐水稀释至10μl,隔日1次,连续14天。各组大鼠分别于处理前及处理后3、7、14天测定热刺激缩足反射潜伏期（pawwithdrawthermallatency,PWTL）和机械刺激缩足反射阂值（pawwithdrawalmechanicalthreshold,PWMT）,然后每组取10只大鼠处死,取L4-6脊髓背角,采用Westernblot法测定磷酸化JNK（P—JNK）蛋白和磷酸化ERK（P—ERK）蛋白的表达水平。结果与C组比较,P组和G组PWTL和PWMT均缩短,脊髓背角P—JNK蛋白和P—ERK蛋白表达上调（P〈0．05）;与P组比较,G组PWTL和PWTL均延长,脊髓背角P—JNK蛋白和P—ERK蛋白表达下调（P〈0．05）。结论鞘内注射GDNF可以通过抑制脊髓背角P—JNK蛋白及P—ERK蛋白的表达减轻大鼠神经病理性疼痛。