肺癌与肺良性疾病血清蛋白质双向电泳差异分析

目的:分析肺癌与肺良性疾病差异表达的血清蛋白质.方法:以肺癌和肺良性疾病患者血清标本为研究对象,利用双向电泳(2-DE)分离2组血清蛋白质,银染显色,Umax扫描仪获取图像,Melanie4软件分析图像,寻找肺癌相关差异蛋白质.结果:建立了较稳定的肺癌和肺良性疾病血清蛋白质2-DE图谱,平均蛋白质点数约400个.软件分析显示2组共有6个差异蛋白质点,肺癌组量上调的差异点5个,量下调的差异点1个.结论:差异蛋白质的分离为进一步的肺癌相关血清蛋白质的鉴定和其他肿瘤血清蛋白质组学研究奠定了良好的工作基础.     

鼻咽癌血清蛋白质双向电泳图谱分析

目的:探讨和分析鼻咽癌(NPC)差异表达的血清蛋白质。方法:以NPC和正常血清标本为研究对象,利用双向电泳(2-DE)分离NPC和正常血清蛋白质,银染显色,Umax扫描仪获取图像,Melanie4软件分析图像,寻找鼻咽癌相关差异蛋白质。结果:建立了较稳定的NPC和正常血清蛋白质2-DE图谱,平均蛋白质点数约400个。软件分析显示2组共有11个差异蛋白质点,10个仅在NPC血清中出现,1个仅在正常血清中出现。结论:差异蛋白质的分离为NPC的相关血清蛋白质的鉴定和其他肿瘤血清蛋白质组学研究奠定了基础。     

基于iTRAQ技术卵巢癌铂耐药的蛋白质组学分析

目的 研究卵巢癌化疗铂耐药的蛋白质表达，探寻卵巢癌铂耐药的相关生物标志物及新的治疗靶标。方法 收集2019年1月至2022年12月在莆田市第一医院住院卵巢癌化疗铂敏感与铂耐药患者各20例，应用同位素标记相对和绝对定量(i TRAQ)技术联用液相色谱分离、质谱鉴定（LC-MS/MS）卵巢癌铂敏感组与铂耐药组的血浆蛋白质，筛选表达差异蛋白质。结果 共鉴定蛋白质477个，铂耐药组与铂敏感组比较分析表达差异蛋白质点10个，其中上调的有FUCA1、SOD3、PROZ，下调的有KRT14、KRT6B、KRT2、KRT17、GPLD1、MMRN2、LYVE1, GO富集分析生物学过程包括磷脂酰肌醇代谢、糖胺聚糖分解代谢、中间丝组织、血管生成、细胞角化，KEGG富集主要参与的通路有聚糖降解、磷脂酰肌醇合成、雌激素、溶酶体。结论 10个差异表达蛋白可能与卵巢癌化疗铂耐药相关，有望成为卵巢癌铂耐药新的生物标志物或治疗靶标。     

脑脊液S-100B与儿童病毒性脑炎脑脊液蛋白组学关系的研究

目的分析病毒性脑炎(VE)患儿和对照组儿童脑脊液(CSF)蛋白质组的表达差异,筛选VE特异性蛋白,探讨其与VE的关系,为VE的早期诊断提供线索。方法以三氯醋酸/丙酮沉淀法提取VE患儿和对照组儿童CSF总蛋白,固相pH梯度二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)技术分离蛋白质,应用双向电泳凝胶分析软件(PDQuest 7.3.1)对2-DE凝胶进行量化比较分析,识别差异表达明显的蛋白质点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)得到肽质量指纹图谱(PMF),在Mascot数据库中进行蛋白质匹配,鉴定部分差异蛋白质。结果VE患儿和对照组CSF蛋白2-DE凝胶图谱上分别平均显示442和401个点,有23个点蛋白质表达存在2倍以上的差异,选取5个表达明显上调的蛋白质点进行质谱鉴定,成功鉴定出钙结合蛋白S100B。结论钙结合蛋白S100B在VE患儿和无中枢神经系统病变的对照组儿童CSF的蛋白表达上存在明显差异,可能是VE密切相关的疾病特异性蛋白,并有可能成为VE诊断的分子标志物。     

膀胱癌BIU-87细胞羟基喜树碱耐药的蛋白质组学研究

目的研究与膀胱癌BIU-87细胞羟基喜树碱（HCPT）耐药相关的蛋白质。方法应用二维凝胶电泳（two-dimensionalelectrophoresis，2-DE）和基质辅助激光解吸电离一串行飞行时间质谱（matrix-assistedlaserdesorption-ionizationtimeofflighttandemmassspectrometry，MALDI-TOF-TOF）寻找羟基喜树碱耐药的膀胱癌BIU-87细胞与非耐药细胞的差异表达蛋白质。结果通过对2组细胞总蛋白质二维凝胶电脉图谱进行分析，找到差异蛋白质点12个；通过质谱分析，12个蛋白质均得到鉴定。这些蛋白质包括热休克蛋白27、细胞角蛋白8、nm23蛋白等。结论通过蛋白质组学技术，发现了膀胱癌羟基喜树碱耐药细胞和非耐药细胞之间差异表达蛋白质12个，这些差异蛋白质可能参与膀胱癌细胞羟基喜树碱耐药的过程。     

先天性甲状腺功能减退症大脑蛋白质双向电泳分析

目的:比较新生正常大鼠和先天性甲状腺功能减退症(CH)大鼠大脑蛋白质表达的差异,为探讨CH致脑发育障碍发病机制提供线索.方法:制作CH仔鼠动物模型,于出生时称体质量后处死仔鼠,取大脑皮质,应用双向电泳(2-DE)技术分析正常仔鼠与CH仔鼠大脑蛋内质表达的差异情况.放射免疫分析法检测2组大鼠血清游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4),水平.结果:CH组仔鼠体质量、FT3、FT4水平均低于正常组仔鼠.建立了稳定的正常仔鼠与CH仔鼠大脑皮质2-DE图谱,发现2组共有8个蛋白质点存在差异.与正常仔鼠相比,CH仔鼠大脑有3个蛋白质点量上调,2个蛋白质点量下调,有3个蛋白质点仅出现于CH仔鼠组.结论:CH仔鼠大脑差异蛋白表达可能与CH致脑发育障碍的发生、发展密切相关.     

双向电泳分析叶酸对神经干细胞蛋白表达的影响

目的:探讨叶酸缺乏对胚胎大鼠神经干细胞(NSCs)蛋白质表达的影响。方法:采用无血清体外细胞培养方法,培养胚胎大鼠NSCs并进行鉴定,采用叶酸缺乏培养基培养NSCs,根据叶酸添加终浓度将细胞分为对照(Con?trol)组、叶酸缺乏(Folate-D)组、叶酸补充(Folate-L)组,各组叶酸终浓度分别为4、0.6、8mg/L。应用双向电泳(2-DE)技术分析各组蛋白质表达的差异。结果:建立了稳定可重复的NSCs2-DE图谱,与Control组相比,Folate-D组2个蛋白点表达量降低,4个蛋白点表达量升高;Folate-L组2个蛋白点表达量降低,1个蛋白点表达量升高。结论:叶酸缺乏或补充叶酸影响NSCs蛋白表达,差异蛋白分离为进一步研究叶酸对NSCs增殖分化调控机制奠定了基础。     

Ⅰ期非小细胞肺癌相关血清差异表达蛋白的研究

目的:寻找Ⅰ期非小细胞肺癌(NSCLC)与健康人血清的差异表达蛋白.方法:收集天津市胸科医院经手术、病理证实的6例Ⅰ期NSCLC患者血清,等量混合后设为肺癌组;同期15例健康体检血清,等量混合后设为健康对照组.利用双向凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分离、筛选和鉴定2组间的差异表达蛋白.结果:成功获得了2组的双向凝胶电泳图谱,PDquest软件分析显示,2组间差异大于2倍的蛋白质点共有128个,质谱鉴定后确定了10种蛋白质,其中7种表达量上调,分别为α1-酸性糖蛋白、C1酯酶抑制物、血管紧张素原、转铁蛋白、转甲状腺素蛋白、间-α-胰蛋白酶抑制剂重链H2及无花果酶-3;3种表达量下调,分别为纤连蛋白、补体C4-A及补体C3.结论:应用2-DE及MALDI-TOF-MS在Ⅰ期NSCLC血清中鉴定出4种与肿瘤关系密切的差异表达蛋白,可作为开发NSCLC早期诊断标志物的候选蛋白.     

吗啡成瘾和正常大鼠的前额叶皮质表达蛋白质组变化的初步研究

目的建立和比较吗啡成瘾与正常大鼠前额叶皮质(PFC)蛋白质双向电泳图谱,寻找和鉴定吗啡成瘾大鼠PFC中的差异蛋白表达谱。方法以固相pH梯度等电聚焦为第一向和垂直SDS-PAGE为第二向,分别对正常对照大鼠和吗啡成瘾大鼠的PFC蛋白质样品进行二维分离,2-DE图谱经ImageMaster 2D Platinumv5.0软件分析,选取4个差异蛋白点用基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定。结果通过对2-DE图谱蛋白斑点的匹配及对比分析,与吗啡成瘾相关的差异表达蛋白斑点为87个;经质谱鉴定出2个有意义的差异表达的蛋白斑点:Snap25亚型β-Snap25突触相关蛋白25、β-肌动蛋白。结论吗啡成瘾组与正常对照组大鼠PFC蛋白表达存在差异;初步鉴定了大鼠前额叶皮质中与吗啡成瘾相关的差异蛋白,其表达的变化可能通过多种途经影响PFC神经元功能,为我们研究阿片类物质依赖作用机制提出了新的思路和方向。     

线粒体DNA缺失A549细胞与其母本细胞核蛋白质组差异分析(英文)

目的比较线粒体DNA(mtDNA)缺失A549细胞(Rho0细胞)与其母本细胞(Rho+细胞)核蛋白表达谱,并探讨细胞核对线粒体功能缺陷的应答反应。方法二维凝胶电泳(2-DE)和表面增强激光法解吸电离-飞行时间(SELDI-TOF)蛋白芯片测定Rho0细胞和Rho+细胞核蛋白表达谱,基质辅助激光解吸电离-飞行时间(MALDI-TOF)质谱结合数据库检索鉴定差异表达的蛋白点,Western印迹法测定核磷蛋白和P53表达,激光共聚焦显微镜测定线粒体膜电位。结果 2-DE显示Rho0细胞核中11个蛋白点表达下调,21个蛋白点表达上调。基于NP20蛋白质芯片的SELDI-TOF质谱分析发现4个蛋白质峰在Rho0细胞核中明显下降。其中1个表达下调的蛋白点被鉴定为eIF-6,4个表达上调的蛋白点被鉴定为核磷蛋白,SFRS1,SFRS3和hnRNP G。Western印迹实验结果显示,Rho0细胞中核磷蛋白表达增加。P53和线粒体膜电位(MMP)测定结果显示,Rho0细胞中P53表达高于Rho+细胞,两种细胞MMP基本一致。结论 mtDNA缺失诱导了细胞核蛋白质组改变。Rho0细胞可以作为研究线粒体与核交互作用的模型。     

胸水标本满足双向电泳的样本前期处理与制备

目的:建立胸水标本满足双向电泳的样本前期制备方法。方法:采用离心去除细胞成分、去除高丰度白蛋白和IgG、丙酮沉淀去除杂质等前期处理的方法以满足双向电泳的条件。结果:蛋白质的回收率为14.55%;处理前,240μg的胸水蛋白上样量在双向电泳图中可检出(412±24)个蛋白质点,处理后240μg的胸水蛋白上样量可检出(552±20)个蛋白质点。经上述胸水前期处理后得到的双向凝胶电泳图谱更加清晰,检出蛋白质点增加,分辨率提高。结论:成功建立了胸水前期处理满足双向电泳条件的方法,已建立的胸水蛋白双向凝胶电泳技术将为进一步的胸水蛋白质成分研究奠定基础。     

低剂量砷染毒SD大鼠肝脏差异蛋白的研究

目的观察低剂量急性砷染毒SD大鼠肝脏差异蛋白,为筛选有意义的低剂量砷中毒早期肝脏改变的特异性生物标志物提供依据。方法健康雄性SD大鼠48只,体质量180～220g,按体质量随机分为4组,每组12只,分别饮用含亚砷酸钠0、0.05、0.15、0.45mg/L的水。染毒4周后断头处死。采用双向凝胶电泳技术,对低剂量砷染毒后的大鼠肝脏蛋白表达谱进行分析。结果与对照组相比,0.05mg/L剂量组不表达的蛋白质点数有31个,表达下调的蛋白质点数有11个,表达上调的蛋白质点数1个;0.15mg/L剂量组不表达的蛋白质点数有23个,表达下调的蛋白质点数有15个,没有出现表达上调的蛋白质点数;0.45mg/L剂量组没有出现不表达的蛋白质点数,表达下调的蛋白质点数有8个,表达上调的蛋白质点数1个。结论染砷组肝脏差异蛋白主要表现为表达下调或不表达,染毒0.05mg/L剂量和0.15mg/L剂量不表达和表达下调的蛋白质点较多,其中重复不表达和重复表达下调的蛋白质点居多数,这些重复的蛋白质点可能和低剂量砷中毒肝脏早期损伤有密切的联系。     

低砷染毒大鼠肾脏蛋白质组学研究

目的对低剂量砷暴露大鼠肾脏进行蛋白质组学研究,探讨早期砷暴露的生物学标志物。方法选取健康雄性SD大鼠48只,按体质量随机分为4组,每组12只,即对照组(0μg/L),低剂量染毒组(50μg/L),中剂量染毒组(150μg/L),高剂量染毒组(450μg/L)。染毒4周后处死大鼠,取其肾脏运用蛋白质组学技术(双向凝胶电泳)分离蛋白,凝胶经扫描后用Pdquest图形分析软件对2-DE图谱进行了分析,鉴定染毒SD大鼠和正常SD大鼠肾脏蛋白质的差异表达。结果定性分析发现,与对照组比较,低剂量组新出现了2个蛋白质点,消失了4个蛋白质点;中剂量组新出现了4个蛋白质点,消失了3个蛋白质点;高剂量组新出现了3个蛋白质点,消失了7个蛋白质点。定量分析发现,与对照组比较,低剂量组表达量升高的蛋白质点有4个,降低的有4个;中剂量组表达量升高的蛋白质点有11个,降低的有2个;高剂量组表达量升高的蛋白质点有3个,降低的有4个。结论低砷染毒导致大鼠肾组织中蛋白质差异表达,这些蛋白质可能与砷暴露的毒性作用有关。     

二烯丙基二硫诱导人胃癌MGC803细胞分化的差异蛋白质分析

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人胃癌MGC803细胞分化过程中蛋白质的差异表达。方法用固相pH梯度双向凝胶电泳分离DADS处理前后人胃癌MGC803细胞总蛋白,凝胶经过银染后用PDQuest软件进行分析,差异蛋白质点经胶内原位酶解,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定肽质量指纹图(PMF),将所得的数据进行生物信息学处理。结果 DADS处理MGC803细胞前后的总蛋白质的双向电泳银染图谱,经扫描成像及PDQuest软件分析,对照组与处理组蛋白质点与平均匹配率分别为(576±14)个和(583±4)个与76%和70%,421个匹配,200个未被匹配。经相关数据库查询,在初步鉴定的差异蛋白质点中,发现24个与细胞分化、肿瘤转移、细胞凋亡、细胞周期、细胞免疫及代谢等相关的蛋白质,如gastric mucin、nM23、CDC2、uPAR、LIMK、RORα、MHC DR-beta-1 chain、TCR等,这些蛋白质可能在胃癌的发生发展中起着潜在的作用。结论 DADS可能通过多种途径诱导MGC803细胞分化。蛋白质组差异表达的初步分析为进一步研究胃癌分化的相关蛋白质及标记物奠定一定基础。     

结核性胸腔积液蛋白质组学初步研究

目的本实验利用二维凝胶电泳-肽质量指纹谱的蛋白质组学方法,对结核性、恶性和漏出性胸腔积液的相关蛋白质二维凝胶电泳（2-DE）图谱识别、鉴定,寻求结核性胸腔积液的特异蛋白质及其对临床诊断的意义。方法收集我院2010年5月～2011年6月收治的符合要求的胸腔积液患者50例,其中结核性胸腔积液20例,恶性胸腔积液17例,漏出性胸腔积液13例。利用二维凝胶电泳分离技术,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析到相应的肽质量指纹谱（PMF）,最后借助Mascot软件结合NCBInr数据库进行检索鉴定相关结构蛋白质。结果通过对结核性、恶性和漏出性胸腔积液的蛋白质肽质量指纹图比较、分析发现3个存在明显差异蛋白,它们分别是：C1-抑制蛋白、甲状腺三级结构A链和补体C3b。C1-抑制蛋白在结核性胸腔积液高表达,在恶性胸腔积液中低表达。甲状腺素三级结构A链和补体C3b在恶性腔积液中高表达,在漏出液中低表达。结论利用二维凝胶电泳技术和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术对胸腔积液进行蛋白质组学研究,得到结核性、恶性和漏出性胸腔积液的蛋白质图谱,获得差异蛋白质,为结核性胸腔积液的鉴别诊断提供新的思路和方法。     

DADS诱导人结肠癌细胞双向电泳图谱的差异分析

目的近年来,蛋白质组学技术已广泛应用于肿瘤研究领域,但对结肠癌的研究较少。该实验旨在研究二烯丙基二硫(DADS)体外诱导人结肠癌SW 480细胞蛋白质组差异表达的相关分子机制。方法采用蛋白质组学相关技术,如二维电泳、图像分析、质谱技术等方法,获得DADS体外培养的人结肠癌SW 480细胞蛋白质组的肽质量指纹图,将所得的数据进行生物信息学处理。结果在相同条件下,对DADS处理前后SW 480细胞两种样品的总蛋白质进行双向电泳,经PDQuest软件分析,结果显示,其中167个匹配的蛋白质点存在表达量上的差异,与对照组相比,处理组蛋白质表达量下调的有69个,利用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱技术(MALD I-TOF-MS)对其中8个表达明显下调的蛋白质斑点进行分析鉴定,获得相应的肽质量指纹图谱(PMF),通过数据库搜索,初步确定这8个蛋白质分别是:细胞角蛋白19(Cytokeratin-19)、肌动蛋白解聚因子(Actin-de-polym erizing factor)、V-1蛋白(V-1 prote in)、果糖二磷酸醛缩酶(Fructose b isphosphate aldolase,FBA)、FK506结合蛋白(FK506-b ind ing prote in,FKBP)、成帽蛋白(Capp ing prote in)、硫氧还蛋白过氧化物酶(Th ioredoxin peroxidase)和敏感性转化蛋白(Transform ation-sensitive prote in)。结论这些差异蛋白质涉及细胞周期调控、细胞分化、细胞凋亡及细胞分裂增殖等众多事件,从而说明,DADS可能具有抑制结肠癌细胞生长,阻滞细胞周期,诱导细胞分化及凋亡的作用。     

运用血清药理学方法探讨滋肾降糖丸对小鼠MSC成骨分化的影响及其机制

目的：运用血清药理学方法研究滋肾降糖丸对小鼠骨髓基质干细胞（MSC）模型成骨分化的作用及其机制。方法：首先空腹6h后的小鼠口服滋肾降糖溶液,剂量为1.5g·kg^-1,随后在0、0.5、1、2和4h不同时间段收集含药血清;随后用茜素红染色和碱性磷酸酶活性检测的方法调查上述含药血清对MSC成骨诱导分化的影响;最后用实时荧光定量PCR的方法进一步调查含药血清对MSC成骨诱导过程中相关关键基因骨形态发生蛋白（BMP2）及成骨特异性转录因子（RunX2）的表达。结果：含药血清可显著促进MSC的成骨分化,以2h后收集的血清效果最强。Q-RT-PCR实验结果显示,2h含药血清显著促进诱导后第3、6dMSC细胞BMP2及RunX2基因的表达。结论：滋肾降糖丸抗骨质疏松的作用可能与上调MSC上BMP2及RunX2的基因表达,从而促进MSC的成骨分化有关。     

Antigen-subtracted 2-DE/MS strategy,a novel proteomic analysis platform

In the present study, we developed a novel proteomic research strategy named antigen-subtracted 2-DE/MS strategy and applied it to comparative proteomic analysis of anti-benzo(a)pyrene-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxide-transformed human bronchial epithelial cell line (16HBE-C) and its parental cell line (16HBE) G0/G1 cells. Following pre-purification by ammonium sulfate precipitation, rabbit antibodies against 16HBE G0/G1 cells were coupled with protein A/G PLUS-agarose under the maximal coupling rate of about 50%. The agarose-antibody complex was then used in immunoprecipitation known as antigen subtraction. When the mass ratio of antibody to the sample was 2.5–3:1, the subtraction rates for 16HBE and 16HBE-C G0/G1 cell proteins were 44 and 34%, respectively. Both subtracted and unsubtracted samples were then subjected to the 2-DE resolution. In 16HBE-subtracted 2-DE maps, 315 protein spots were subtracted and 49 new protein spots were detected, whereas in 16HBE-C-subtracted 2-DE maps, 287 protein spots were subtracted and 33 new protein spots were detected. Taken together, antigen subtraction results in 65 new protein spots being allowed to be detected, therefore, makes it possible to get more information of the samples. Finally, 4 protein spots only detected in 16HBE-C-subtracted 2-DE maps were analyzed by the Q-TOF MS/MS, and successfully identified as U6 snRNA-associated Sm-like protein LSm3, 60S acidic ribosomal protein P1, Peroxiredoxin-6 and 60S acidic ribosomal protein P2. These proteins are involved in carcinogenesis, oxidation stress and protein synthesis. In conclusion, the antigen-subtracted 2-DE/MS strategy could reduce the complexities of protein samples and therefore, improve the resolution for the sample analysis.