羧甲基壳聚糖抑制白细胞介素-1β诱导的软骨细胞凋亡及作用机制的研究

目的评价羧甲基壳聚糖对重组人白细胞介素(rhIL)-1β刺激下软骨细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养兔软骨细胞,加入不同浓度羧甲基壳聚糖预处理1h后,加入rhIL-1β共培养24h,通过Annexin V-FITC和PI双标及Hoechst 33342荧光染色检测软骨细胞凋亡；以罗丹明-123荧光染色检测线粒体膜电位和荧光素酶反应检测线粒体合成ATP能力来评价线粒体功能。结果羧甲基壳聚糖能明显抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,呈剂量依赖性；羧甲基壳聚糖可恢复IL-1β对软骨细胞线粒体功能的损害。结论羧甲基壳聚糖通过保护线粒体功能抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡。     

白细胞介素-1β诱导关节软骨细胞发生过早衰老的机制

目的 研究软骨降解因子白细胞介素(IL)-1β是否诱导关节软骨细胞发生过早衰老,以及caveolin-1是否介导IL-1β诱导的细胞衰老.方法 培养的关节软骨细胞在IL-1β(10 ng/ml)刺激后,流式细胞术分析细胞周期,染色法测定与衰老相关的β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)活性,测定累计的细胞群倍增次数反映细胞增殖寿命,Southem印迹测定平均端粒长度,细胞转染caveolin-1的反义寡核苷酸和外源性caveolin-1基因改变细胞内caveolin-1的表达水平,caveolin-1蛋白表达量采用Westem印迹分析.结果 IL-1p可诱导关节软骨细胞停滞在G0/G1期的比例明显升高,而处于S期的细胞比例减少.IL-1β单次刺激可使软骨细胞变得大而平、细胞内SA-β-Gal活性增高,IL-1β反复刺激可使细胞内平均端粒长度缩短加速、增殖寿命缩短.反义寡核苷酸抑制caveolin-1表达,可以阻抑IL-1β诱导的软骨细胞衰老;外源性基因增高细胞内caveolin-1表达,可诱导关节软骨细胞发生过早衰老.结论 IL-1β可诱导关节软骨细胞发生应激诱导的过早衰老和端粒依赖的复制性衰老,该作用是由caveolin-1介导的.提示IL-1β可能通过增高关节软骨细胞内caveolin-1表达,诱导细胞发生过早衰老,从而促进骨关节炎进展.     

透明质酸对白细胞介素-1β诱导软骨细胞基质增殖能力和表型的影响

目的 研究透明质酸对重组大鼠白细胞介素-1β(rrlL-1β)诱导体外骨关节炎(OA)软骨细胞的表型和增殖能力的影响,并探讨其作用机制.方法 体外分离、培养大鼠软骨细胞成功后.加入不同浓度的透明质酸(10、20、40 μg/ml),1 h后,以10ng/ml IL-1β刺激,培养24 h后,通过噻唑蓝(MTT)和流式细胞仪检测细胞增殖能力;以反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blotting检测Ⅰ、Ⅱ胶原及聚集蛋白聚糖的Mrna合成和蛋白表达.以Griess反应测定上清液中一氧化氮(NO)浓度,并通过诱导型一氧化氮合酶催化L-精氨酸和分子氧反应生成NO推算Inos的活力.结果 透明质酸可有效抑制IL-1β诱导OA软骨细胞Inos的活性和NO的产量.MTT和流式细胞仪检测显示透明质酸能恢复OA软骨细胞的增殖能力;RIT-PCR和Western-blotting检测显示透明质酸能提高OA软骨细胞Ⅱ型胶原和聚集蛋白聚糖mRNA的表达和蛋白合成,抑制Ⅰ型胶原mRNA的表达和蛋白合成,且呈剂量依赖性.结论 透明质酸对软骨细胞正常表型的维持有保护作用,并能明显拮抗IL-1β对软骨细胞增殖的抑制,这可能与透明质酸降低NO的含量和iNOS的活性有关.     

白细胞介素-1β对关节软骨细胞线粒体和细胞内活性氧影响的研究

目的 研究重组大鼠白细胞介素-1β (rrIL-β)诱导关节软骨细胞退变是否与其破坏线粒体的完整性和促进细胞内活性氧的表达有关.方法 体外分离、培养大鼠软骨细胞成功后,以10 ng/ml白细胞介素(IL)-1β刺激,培养24 h后,通过Annexin V-异硫氰酸荧光素(FITC)和碘化丙啶双标及Hoechst 33342荧光染色检测细胞凋亡;以罗丹明-123荧光染色和活性氧检测试剂盒检测线粒体膜电位及细胞内活性氧浓度;用荧光素酶反应检测线粒体合成三磷酸腺苷(ATP)能力来评价线粒体功能.采用t检验进行统计分析.结果 IL-1β刺激组软骨细胞的线粒体膜电位、ATP含量及软骨细胞内活性氧浓度分别为(24±4)U,(4.1 ±0.8) pmol/106个细胞及(89±7)U,均低于对照组[分别为(86±10)U,(13.3±3.0) pmol/106个细胞及(17±3)U],差异均有统计学意义(t值分别为2.693,2.587,2.665,P值分别为0.026,0.039,0.021).IL-1β刺激能明显降低软骨细胞的线粒体膜电位及其合成ATP的能力,并且能促进细胞内活性氧的表达.结论 IL-Iβ能通过破坏软骨细胞线粒体膜的完整性和促进细胞内活性氧的表达,来诱导软骨细胞去分化,从而促进关节软骨退变.     

独活寄生汤抑制白细胞介素-1β诱导的软骨细胞凋亡的作用机制

目的探讨独活寄生汤抑制白细胞介素(IL)-1β诱导的软骨细胞凋亡的作用机制。方法从8只SPF级SD大鼠膝关节分离获取软骨细胞并培养,采用Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定。噻唑蓝(MTT)检测不同浓度独活寄生汤对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡的影响,从而优化独活寄生汤最佳干预浓度。将第2代软骨细胞随机分为空白组、模型组、独活寄生汤组,空白组以含10%胎牛血清(FBS)的DMEM培养液培养,模型组以10 ng/ml IL-1β和10%FBS的DMEM培养液培养,独活寄生汤组采用300μg/ml独活寄生汤、10 ng/ml IL-1β和10%FBS的DMEM培养液培养。干预48 h,逆转录PCR检测各组软骨细胞中miR-98的表达;Western印迹法检测各组软骨细胞中B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达。结果Ⅱ型胶原免疫组化染色后阳性组软骨细胞胞质为棕黄色。100、200、300、400μg/ml独活寄生汤均能抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,以300μg/ml独活寄生汤最为明显(P0.01)。与模型组比较,独活寄生汤组软骨细胞中miR-98表达明显下降(P0.05)。与模型组比较,独活寄生汤组软骨细胞中的Bcl-2蛋白表达显著升高,而Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达明显下降(P0.05)。结论独活寄生汤能够抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡,可能是通过下调miR-98起作用的。     

透明质酸对骨关节炎软骨细胞白细胞介素-1β及肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的研究透明质酸(HA)对大鼠创伤性膝关节炎离体细胞模型白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α的影响。方法体外分离、培养大鼠软骨细胞成功后,加入不同浓度的透明质酸钠,1 h后以10μg/L的IL-1β刺激,培养24 h后,通过免疫荧光检测软骨细胞膜ATP,IL-1β和TNF-α水平。结果 IL-1β组软骨细胞线粒体ATP丢失较正常软骨细胞显著升高;IL-1β和TNF-α水平在IL-1β组显著升高,与空白对照组比较差异显著(P<0.05)。透明质酸钠干预IL-1β诱导的大鼠软骨细胞后,H20组和H40组的IL-1β及TNF-α水平明显低于IL-1β组(P<0.05),而H10组中IL-1β及TNF-α水平与IL-1β组比较无统计学意义(P>0.05)。结论透明质酸钠能够减少大鼠创伤性膝关节炎软骨细胞线粒体ATP的丢失,下调IL-1β和TNF-α水平。     

白细胞介素-1β对人软骨细胞Bax mRNA表达的作用

目的 探讨人透明软骨细胞中白细胞介素-1β(IL-1β)对凋亡基因Bax mRNA表达的作用。方法 应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和荧光定量PCR的方法检测IL-1β作用下传代培养的人透明软骨细胞Bax mRNA的含量。结果 对于传代培养人的软骨细胞，IL-1β浓度为1、10、100ng／ml作用12h，对Bax mRNA的调节作用存在剂量依赖关系，各组之间差异有显著性。结论 IL-1β可以按照剂量依赖方式正向调节软骨细胞Bax mRNA基因的表达，并通过对细胞凋亡的调控参与骨关节炎的发生、发展。     

肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β对人骨关节炎软骨细胞蛋白聚糖代谢的影响

目的 通过体外培养骨关节炎(OA)软骨细胞体系,了解肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β对蛋白聚糖代谢的调节作用.方法 软骨细胞来自OA患者进行膝关节置换术的股骨髁,实验采用第1代软骨细胞.随机将细胞分为4组:对照组、TNF-α组、IL-β组和联合组(TNF-α+IL-1β),在培养液中加入不同的刺激因子共培养4 d.采用3种方法了解蛋白聚糖的代谢水平:①用二甲基亚甲蓝分光光度法(DMMB法)检测细胞中及培养液中的糖胺多糖(GAG)含量;②酶联免疫吸附法通过2种抗蛋白聚糖单克隆抗体(Mab-383和5D4)检测培养液中蛋白聚糖的不同代谢片段;③反转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)半定量法检测软骨细胞的蛋白聚糖、带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解整链蛋白金属蛋白酶-4(ADAMTS-4)和ADAMTS-5的Mrna水平.结果 ①实验组培养液中(GAG含量均明显高于对照组(p＜0.01);②TNF-α组、IL-1β组及联合组的培养液中5D4片段的水平均高于对照组(P＜0.01),而各组383片段水平差异无统计学意义;③实验组的蛋白聚糖Mrna水平均低于对照组(P＜0.01),TNF-α组的ADAMTS-5、IL-β组的ADAMTS-4及联合组的两种酶的Mrna水平均显著高于对照组(P＜0.01).结论 TNF-α及IL-1β可下调人OA软骨细胞的蛋白聚糖Mrna表达,上调ADAMTS-4及ADAMTS-5的mRNA表达.并促进蛋白聚糖的分解,可能在OA的发病中起着一定的作用.     

氨基葡萄糖对IL-1β诱导人骨关节炎软骨细胞蛋白聚糖分解代谢的影响

目的 通过体外培养骨关节炎(OA)软骨细胞体系,了解氨基葡萄糖对白细胞介素(IL)-1β诱导OA软骨细胞蛋白聚糖分解代谢的影响.方法 软骨细胞采自OA患者,采用分阶段酶消化法体外原代培养人软骨细胞.在培养液中加入IL-1β诱导剂,设立兔血清对照组、IL-1β实验对照组和氨基葡萄糖加药实验组;给予实验兔以氨基葡萄糖等效剂量灌胃后,抽取含药血清培养细胞.采用3种方法了解蛋白聚糖的代谢水平:①用二甲基亚甲蓝分光光度法(DMMB法)检测细胞中及培养液中的糖胺多糖(GAG)含量;②酶联免疫吸附法检测培养液中蛋白聚糖的不同代谢片段(Mab-3 B3和5D4);③反转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量法检测软骨细胞的蛋白聚糖、可聚蛋白聚糖酶-1和可聚蛋白聚糖酶-2mRNA的表达水平.结果 各浓度氨基葡萄糖含药血清组体外培养的软骨细胞释放入培养液中GAG百分比均值明显低于对照组(P＜0.01),随氨基葡萄糖浓度的增加,释放入培养液中GAG的百分比逐渐降低;3B3含量的均值较对照组相比明显增高(P＜0.01),与氨基葡萄糖浓度呈正相关,释放入培养液中5D4含量的均值则明显降低(P＜0.05),与氨基葡萄糖浓度呈负相关;氨基葡萄糖可以增加OA患者软骨细胞和IL-1β诱导的OA患者软骨细胞蛋白聚糖mRNA表达,减低可聚蛋白聚糖酶-1、可聚蛋白聚糖酶-2mRNA的表达.结论 氨基葡萄糖可以抑制IL-1β对OA患者软骨细胞蛋白聚糖分解代谢的促进作用,达到保护软骨,防止OA的目的.     

白细胞介素-1受体拮抗蛋白间接体内转基因对骨关节炎软骨细胞凋亡的抑制作用

目的通过白细胞介素-1受体拮抗蛋白(IL-1Ra)间接体内转基因治疗试验性兔骨关节炎,探讨IL-1Ra对兔膝关节软骨细胞凋亡的抑制作用。方法①30只新西兰大白兔随机分成3组,左膝关节部分滑膜切除,分离并培养滑膜成纤维细胞。②用携带标记基因或IL-1Ra基因的逆转录病毒分别转染从第2组或第3组兔膝关节分离出来的滑膜细胞。③兔右膝关节前交叉韧带横断术(ACLT)建立骨关节炎模型。④把自体滑膜细胞回输第1组兔右膝关节腔内,再把转染标记基因或IL-1Ra基因的自体滑膜细胞回输第2组或第3组兔右膝关节腔内。⑤2、4周后,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测关节液中IL-1Ra水平。⑥TUNEL末端荧光标记法测关节软骨细胞凋亡发生率。结果第3组兔膝关节液中IL-1Ra水平,在基因转入关节腔后第2周时为(20.6±1.8)ng/ml,第4周时为(4.82±0.52)ng/ml;而2、4周时,第1、2组中IL-1Ra水平均极低。第3组软骨细胞凋亡被抑制,仅有18%发生细胞凋亡,而在第2组关节软骨细胞近40%发生细胞凋亡,正常对照组中只有2%~5%的软骨细胞发生凋亡。结论本试验证明关节腔内注入体外转染IL-1Ra基因的自体滑膜细胞,即IL-1Ra间接体内转基因治疗,能使关节腔局部IL-1Ra水平明显升高,使关节软骨细胞凋亡受到抑制。     

白细胞介素-1β转化酶与脑缺血损伤

综述近年来凋亡相关基因白细胞介素 1β转化酶 (ICE)在脑缺血损伤机制中的作用及其机制 ,认为ICE参与脑缺血后神经细胞凋亡的发生。ICE可能主要通过调节IL 1β发挥其凋亡调节作用 ,也可能通过其直接作用调节凋亡。应用ICE抑制剂可能是治疗卒中的一种有效方法。     

羧甲基壳聚糖抑制白细胞介素-1β诱导的大鼠软骨细胞核因子-κB活化

目的 探讨羧甲基壳聚糖对白细胞介素(IL)-1β诱导下大鼠软骨细胞核因子(NF)-κB活化及一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法 体外培养大鼠膝关节软骨细胞,用10ng/ml IL-1β刺激,并不加或加入不同浓度的羧甲基壳聚糖处理,通过蛋白质免疫印迹(Westem blot)检测NF-κBn和NF-κBc及I-κB表达,通过蛋白质免疫印迹和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法分析软骨细胞iNOS的表达.采用单因素方差分析.结果 羧甲基壳聚糖能明显抑制IL-1β诱导下软骨细胞I-κB的降解(0.21±0.06)和NF-κB的核转位,降低IL-1β诱导下软骨细胞iNOS和NO的产量.结论 羧甲基壳聚糖可能通过抑制NF-κB信号通路的活化,而下调IL-1β诱导的软骨细胞iNOS表达,从而保护IL-1β刺激下的软骨细胞.     

白细胞介素1β对培养的甲状腺细胞表面抗原表达及凋亡的影响

探讨白细胞介素1β（IL-1β）对正常人甲状腺细胞（TEC）CD54、HLA-DR、CD80及凋亡率、凋亡蛋白Fas／FaaL、基因Fas mRNA表达的影响，结果提示IL-1β可以通过增加CD54和CD80的表达激活TEC呈递抗原，同时IL-1β可以轻度增加TEC的凋亡和凋亡蛋白的表达并显著增加碘促TEC凋亡作用。     

白细胞介素——1促进肥大软骨细胞PG的分解代谢

本文了白细胞介素－１和硫代腺苷蛋氨酸对培养的肥大软骨细胞蛋白多糖分解代谢及其质金属蛋白水解酶活性的影响。ＩＬ－１β能够明显促进培养的肥大软骨ＰＧ分解，释放到培养液中的ＰＧ其分子量明显降低，缺乏透明质酸结合区。     

白藜芦醇对实验性兔骨关节炎软骨细胞凋亡及bcl-2 bax表达的影响

目的 研究白藜芦醇对兔实验性骨关节炎(OA)软骨细胞凋亡及凋亡调控基因bcl-2、bax表达的影响,探讨其治疗OA的机制.方法 30只新西兰大白兔随机平分为5组,A组(健康对照组)、B组(模型对照组)、C组(白藜芦醇高剂量干预组)、D组(白藜芦醇中剂量干预组)、E组(白藜芦醇低剂量干预组).除A组外,其他各组均以Hulth法复制膝OA模型.术后第4周开始,A组、B组每天以5 ml含0.1%二甲基亚砜的蒸馏水灌胃;白藜芦醇干预各组每天以相应剂量白藜芦醇溶液(浓度为60 mg/ml)灌胃,C、D、E组日剂量分别为120、60、30mg·kg-1·d-1,连续6周.第10周处死大白兔,取右膝关节股骨内髁内侧软骨,软骨组织切片用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法观察软骨细胞凋亡,免疫组织化学法观察软骨细胞bcl-2和bax的表达.结果 ①模型对照组关节软骨细胞凋亡率明显高于健康对照组;白藜芦醇干预各组可不同程度地降低OA软骨细胞凋亡率,差异有统计学意义(P＜0.05),且呈剂量依赖性.②与健康对照组相比,模型对照组关节软骨细胞bcl-2和bax阳性率均升高(P＜0.01),bcl-2/bax的比值降低;白藜芦醇干预后,bcl-2阳性率升高更为明显(P＜0.01);而bax阳性率有不同程度降低(P＜0.01);bcl-2/bax的比值均不同程度提高(P＜0.01).结论 白藜芦醇通过上调bcl-2的表达,下调bax的表达,提高bcl-2/bax的比值,以抑制兔实验性OA中软骨细胞的过度凋亡,达到保护软骨,防治OA的目的 .     

白细胞介素-1β与冠心病

动脉粥样硬化(AS)是冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)的主要病理基础。这些年来,人们致力于研究各种细胞因子与AS之间的关系,取得了很大的成果。白细胞介素1β(IL-1β)虽然不是新发现的但作为一种重要的细胞因子,参与体内免疫及炎症反应的调节,介导产生多种黏附分子及其他细胞因子,并与之相互作用,与冠心病的发生、发展,动脉粥样斑块的稳定性,心肌梗死后心室重构以及支架植入术后再狭窄密切相关。该文就近几年IL-1β与冠心病的最新研究进展作一综述。     

陷窝蛋白-1对永久性大脑中动脉闭塞小鼠缺血皮质白细胞介素-1β和白细胞介素-6表达的影响

目的：探讨陷窝蛋白-1（caveolin1,Cav1）对永久性大脑中动脉闭塞小鼠缺血皮质促炎性细胞因子白细胞介素（ interleukin, IL ）-1β和IL-6表达的影响。方法 Cav1基因敲除小鼠和野生型小鼠各40只,各随机分为缺血组和假手术组（每组20只）,再随机分为缺血或假手术3、7、10和14 d时间点（每个时间点5只）。采用线栓制作永久性大脑中动脉闭塞模型。采用免疫组织化学法检测缺血皮质IL-1β和IL-6表达。结果 Cav1基因敲除小鼠缺血组各时间点缺血皮质IL-1β和IL-6表达水平均显著高于野生型小鼠缺血组（P均<0.05）。结论 Cav1基因敲除小鼠促炎性细胞因子IL-1β和IL-6表达上调,提示Cav1在减轻脑缺血后炎性反应中发挥着重要作用。     

牛磺酸对白细胞介素－1β损伤的胰岛细胞分泌的影响

在Ｗｉｓｔａｒ新生大鼠离体培养胰岛细胞中定量观察了ＩＬ－１β对胰岛素分泌的抑制作用以及牛磺酸的反转效应。实验结果表明：①ＩＬ－１β（５～２０Ｕ／ｍｌ）可抑制胰岛β细胞的分泌功能，表现为胰岛素的基础分泌和葡萄糖刺激时的分泌量均明显减少。②经ＩＬ－１β处理的胰岛细胞加入牛磺酸共同孵育后，可见胰岛素的基础分泌量和糖刺激时的分泌量均显著增加，表明牛磺酸能反转ＩＬ－１β的抑制作用，并且这种反转效应有量效和时效关系。     

羧甲基壳聚糖对白细胞介素-1β刺激的软骨细胞增殖能力和表型的保护作用

目的评价羧甲基壳聚糖对重组人白细胞介素-1β（rhIL-1β）刺激下的软骨细胞表型、细胞增殖能力的影响,并探讨其作用机制.方法体外培养兔关节软骨细胞,用rhIL-1β刺激,同时加入不同浓度的羧甲基壳聚糖,培养24 h后,通过噻唑蓝（MTT）、流式细胞仪检测细胞增殖能力,以Na235SO4蛋白掺入试验检测蛋白多糖的合成,以Greiss反应测定上清液中一氧化氮（NO）浓度,通过反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法分析软骨细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原,蛋白多糖聚糖体（Aggrecan）及诱导性一氧化氮合酶（iNOS）mRNA的表达.结果羧甲基壳聚糖能明显拮抗IL-1β对软骨细胞增殖的抑制作用,恢复软骨细胞合成蛋白多糖的能力,减少软骨细胞NO的合成,提高Ⅱ型胶原和蛋白多糖聚糖体mRNA的表达,抑制Ⅰ型胶原、iNOS mRNA的表达,且羧甲基壳聚糖对软骨细胞的保护作用呈剂量依赖性.结论羧甲基壳聚糖能维持IL-1β刺激下的软骨细胞的增殖能力和表型.     

白细胞介素-1β和白细胞介素-6对妊娠相关血浆蛋白-A表达的影响

目的探讨炎性因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)对人冠状动脉平滑肌细胞(human coronary artery smooth muscle cell,HCASMC)表达妊娠相关血浆蛋白-A(pregnancy-associated plasma pro-tein-A,PAPP-A)的影响。方法应用20μg/L的IL-1β、10μg/L的IL-6各自刺激HCASMC,共同培养0、2、4、8、243、6 h后收集细胞。应用不同浓度的IL-1β(0、5、20、40μg/L)I、L-6(0、5、10、50μg/L)刺激HCASMC,共同培养6 h后收集细胞。应用实时定量聚合酶链反应的方法检测细胞内PAPP-A基因的表达量。结果在同剂量IL-1βI、L-6刺激下,PAPP-A的表达量在2 h时就开始发生上调,8 h达高峰,而后开始下降;在不同剂量IL-1βI、L-6刺激下,PAPP-A的表达量在实验剂量范围内随着剂量的加大呈上升趋势(IL-1β:r=0.972,P=0.000;IL-6:r=0.941,P=0.000)。结论炎性因子IL-1βI、L-6能促进HCASMC中斑块稳定相关标记物PAPP-A的表达,可能是炎症在急性冠状动脉综合征发生发展中的重要作用机制之一。