蓖麻毒素的提纯及生物学活性测定

本文用亲和层析和凝胶过滤方法从浙江产小蓖麻籽中提纯了蓖麻毒素.测得其分子量为63000,等电点7.3;其两个组成亚基的分子量分别为29500和33000.蓖麻毒素对动物和体外培养细胞有强烈的毒性作用.其小鼠LD~(50)为(36.27±6.17)×10~(-6)g/kg;它对HeLa和WISH细胞的半数杀伤剂量分别为1.8×10~(-12)和2.4×10~(-12)mol/L电泳和氨基酸组成分析结果表明:这种蓖麻毒素与文献报道的从新疆植物中提纯的蓖麻毒素有所差异.     

全反式维甲酸对大肠癌细胞间隙连接蛋白Cx32与Cx43表达及增殖和迁移能力的影响

目的:检测全反式维甲酸(ATRA)对大肠癌细胞Caco-2及SW480增殖、迁移及间隙连接蛋白Cx32与Cx43胞膜表达的影响,分析其对大肠癌效应作用机制.方法:取对数生长期大肠癌细胞分为ATRA处理组及阴性对照组,以1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5及1×10-4 mol·L-1 ATRA处理Ca...     

芸香苷诱导Caspase-3在白血病细胞凋亡时的表达

【目的】研究芸香苷诱导白血病K562细胞凋亡过程中Caspase-3基因的表达。【方法】体外培养白血病K562细胞,锥虫蓝拒染法观察芸香苷对K562细胞的生长抑制作用。Hoechst33342/PI双荧光染色后,观察细胞核变化。TRIzol试剂提取芸香苷组及对照组细胞RNA,核酸定量仪检测纯度,RT-PCR扩增,紫外透射检测扩增产物,扩增产物测序,观察Caspase-3 mRNA的表达。【结果】芸香苷浓度为2×10-5、4×10-5、8×10-5mol/L时,细胞生长受到显著抑制,并呈剂量依赖性;RT-PCR产物经过序列测定证实经浓度为2×10-5mol/L、4×10-5mol/L的芸香苷处理后细胞诱导Caspase-3基因表达升高。【结论】芸香苷诱导白血病细胞发生凋亡,Caspase-3基因表达是其作用机制之一。     

P38信号转导通路在胃泌素促进人大肠癌细胞SW480增殖中的作用及其机制

目的:探讨胃泌素对人大肠癌细胞株SW480增殖、凋亡的影响,以及P38-丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的关系。方法:体外培养大肠癌SW480细胞株,将细胞分为对照组、胃泌素组、丙谷胺组和胃泌素+丙谷胺组,对照组不加药,其余组加不同浓度的药物处理。运用MTT法观察细胞凋亡情况,确立5-肽胃泌素和丙谷胺处理SW480细胞的最佳浓度;流式细胞术检测各组细胞增殖指数的变化;qRT-PCR检测大肠癌SW480细胞株胃泌素受体/胆囊收缩素-B受体(CCK-2R)mRNA表达情况;Western blot检测P38蛋白表达及其磷酸化水平。采用方差分析和SNK-q检验进行统计学分析。结果:SW480细胞中存在CCK-2R mRNA表达。胃泌素在6.25²00.00 mg/L范围内能抑制大肠癌SW480细胞的凋亡,且当浓度达12.50 mg/L时为最佳浓度(P<0.05);单独丙谷胺对大肠癌SW480细胞凋亡无明显影响(P>0.05),但丙谷胺在8.00200.00 mg/L范围内能抑制大肠癌SW480细胞的凋亡,且当浓度达12.50 mg/L时为最佳浓度(P<0.05);单独丙谷胺对大肠癌SW480细胞凋亡无明显影响(P>0.05),但丙谷胺在8.00²56.00 mg/L范围内能明显拮抗胃泌素抑制SW480细胞的凋亡作用,其最佳浓度为16.00 mg/L(P<0.05)。胃泌素(12.50mg/L)组细胞增殖指数为(34.56±1.41)%,显著高于对照组的(28.74±1.61)%和胃泌素(12.50 mg/L)+丙谷胺(16.00 mg/L)组的(28.72±1.78)%(P<0.05),而丙谷胺(16.00 mg/L)组细胞增殖指数为(27.75±2.29)%,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);P38蛋白及其磷酸化在胃泌素组(12.50 mg/L)中表达水平低于对照组(P<0.01),也低于胃泌素(12.50mg/L)+丙谷胺(16.00 mg/L)组(P<0.01)。结论:胃泌素可以抑制大肠癌细胞株SW480的凋亡、促进增殖,其作用可能是通过抑制P38及其磷酸化水平来实现的,但能够被其受体拮抗剂丙谷胺抑制。     

钌卟啉03及04对鼻咽癌细胞1及2、结肠癌SW480细胞体外增殖和凋亡的影响

目的 探讨新型钌卟啉化合物(Rup)-03、Rup-04对高分化鼻咽癌细胞(CNE)-1、低分化CNE-2和结肠癌SW480细胞体外增殖和凋亡的影响.方法 经光照和不同浓度(10-10 mol/L、10-9 mol/L、10-8 mol/L、10-7 mol/L、10-6 mol/L、10-5 mol/L)Rup-03或Rup-04联合作用后,联合磺酞罗丹明B法和吉姆萨染色法观察CNE-1、CNE-2和SW480细胞的形态学变化及其增殖和凋亡的情况,邻苯三酚自氧化法和Griess法测定其超氧阴离子和NO表达.结果 随着Rup-03、Rup-04作用浓度的升高,CNE-1、CNE-2和SW480细胞凋亡增多,对超氧阴离子的清除能力降低,细胞内NO表达升高(均P<0.05),且Rup-03对3种肿瘤细胞的光动力抑制作用均强于Rup-04(P<0.05).结论 Rup-03和Rup-04均对CNE-1、CNE-2和SW480肿瘤细胞有浓度依赖性的促凋亡作用,其抗肿瘤机制可能与Rup-03、Rup-04产生自由基诱导细胞凋亡有关.     

槲皮素诱导人白血病细胞K562的凋亡

目的:研究槲皮素对人白血病细胞株K562增殖抑制和诱导凋亡作用. 方法:四氮甲唑蓝(MTT)观察细胞的生长状况,应用彗星分析法、TUNEL技术和流式细胞仪检测细胞凋亡. 结果:槲皮素在(1～8)×10-5 mol/L浓度范围内能明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性,8×10-5 mol/L槲皮素作用72 h的K562细胞株A值最低;彗星分析法显示经槲皮素作用的K562细胞出现长的彗尾条带;原位细胞凋亡可见细胞变小,核固缩为一个或多个染色质团块;流式细胞仪检测细胞凋亡主要发生在G1/S期. 结论:槲皮素在体外一定浓度范围内能抑制K562细胞增殖,诱导凋亡.     

羟基脲对脑膜瘤培养细胞的作用

目的:建立脑膜瘤短期原代培养的体外模型,研究羟基脲对脑膜瘤培养细胞的抑制作用及其可能机理.方法:进行脑膜瘤细胞原代培养,应用羟基脲作药敏试验,利用细胞计数、MTT法、流式细胞仪等检测结果.结果:显微镜下可见羟基脲明显影响脑膜瘤培养细胞的生长状态;5×10-3 mol/L组的细胞数减少84%,5×10-4 mol/L组减少46%,而5×10-5 mol/L组减少20%(P<0.01);5×10-3 mol/L组的细胞活力减少86%,5×10-4 mol/L组减少60%,而5×10-5 mol/L组减少28%(P<0.01).应用流式细胞仪检测细胞凋亡,5×10-3 mol/L组的细胞凋亡率增加了8.82倍,5×10-4 mol/L组增加了3.94倍,而5×10-5 mol/L组增加了0.73倍(P<0.01).结论:羟基脲能抑制脑膜瘤培养细胞的增生,且呈浓度依赖性;羟基脲抑制脑膜瘤培养细胞的增生可能与羟基脲诱导其凋亡有关.     

维甲酸对甲状腺鳞癌细胞株SW579细胞增殖的影响

目的 观察全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)对甲状腺鳞癌细胞株SW579诱导分化作用中细胞增殖的影响.方法 以终浓度为10-7、5×10-7、10-6、5×10-6、10-5 mol/L的全反式维甲酸作用SW579细胞株,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;采用MTT比色法测定细胞存活率;流式细胞仪检测细胞周期.结果 全反式维甲酸能使细胞趋向良性分化,抑制了肿瘤细胞增殖,使细胞滞留在S期.结论 全反式维甲酸对甲状腺鳞癌细胞株SW579有剂量依赖性的增殖抑制作用,并且在低浓度时(10-7、5×10-7、10-6 mol/L)可能对细胞具有诱导分化作用.     

白藜芦醇诱导大肠癌SW480细胞发生铁死亡及机制研究

目的:研究白藜芦醇对大肠癌SW480细胞铁死亡的激活,并探讨其可能的作用机制.方法:利用不同剂量白藜芦醇(0、10、20、40、80、160μmol/L)干预SW480细胞24、48、72 h后,CCK8法分析白藜芦醇对细胞增殖抑制率的影响;不同剂量白藜芦醇(0、20、40、80μmol/L)干预SW480细胞48 h...     

Regulatory Effect of Triptolide on Cell Cycle of Colorectal Cancer Cells

目的:观察雷公藤甲素对大肠癌SW480细胞生长增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法:体外培养大肠癌SW480细胞,分别给予不同浓度的雷公藤甲素进行干预,采用四甲基耦氮唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度药物对SW480细胞生长的抑制率,流式细胞术(FCM)测定SW480细胞周期及凋亡率变化.结果:MTT实验结果显示当药物浓度在20～100 mol/L之间时,体外雷公藤甲素可明显抑制SW480细胞的生长;FCM检测显示药物作用后,细胞凋亡率没有明显变化,但是S期细胞数目显著增多,细胞周期受到明显阻滞.结论:雷公藤甲素对细胞生长有明显的抑制作用,呈现时效-量效关系,其机制可能是使细胞周期发生阻滞.     

蓖麻毒素及其A、B链的提取分离纯化的研究

本文研究蓖麻毒素及其A、B链的提取、分离、纯化,根据B链能与Sepharose-6 B上的半乳糖结合,而A链不具有这一性质,用β-巯基乙醇使蓖麻毒素直接在Sepharose-6B柱上断链,然后分别用Tris-HCl和Tris-HCl-半乳糖溶液洗脱,首次把蓖麻毒素的制备、纯化以及A、B链的断链、分离结合起来,大大简化了工艺。     

Immunotoxin depletion of T cells and its effect on hematopoietic progenitor cells in human cord blood

Objective　To study the selective toxicity of immunotoxin (IT) on T cells in cord blood and simultaneously determine its effect on hematopoietic progenitor cells. Methods　The percentage of CD5 and CD8 T cell subsets in cord blood (CB) and bone marrow (BM) as well as peripheral blood (PB) was measured by immunoenzymatic labeling of monoclonal antibodies using immune complexes of alkaline phosphatase and monoclonal anti-alkaline phosphatase (APAAP complexes). One-way mixed lymphocyte cultures (MLC) were performed to compare the proliferative response of CB with that of PB. The proliferative capability of cord blood T cells and T lymphocyte transformation capacity were evaluated in the presence of anti-CD8 or anti-CD5 immunotoxin by one-way MLC and colorimetric MTT (tetrazolium) assay, respectively. The effect of IT on the growth of hematopoietic progenitor cell of colony forming unit-granulocyte and macrophage (CFU-GM), burst forming unit-erythroid(BFU-E), multipotential hemotapoietic progenitors (CFU-Mix) from CB were estimated by colony-forming assays. Results　A certain proportion of CD5 and CD8 T cells existed in CB. The alloproliferative capacity of CB was similar to that of PB. CD5: Ricin at a dosage of 1×10-10-1×10-8 mmol/L and CD8: Ricin concentration in the range of 1×10-9-1×10-8 mmol/L effectively decreased both the proliferative capability of T cells in MLC during CB and T cell transformation. Over the dosage of 1×10-10-1×10-9 mmol/L, both kinds of IT didn’t obviously affect the growth of hematopoietic progenitor cells. Conclusion　CD5: Ricin and CD8: Ricin may effectively deplete T cells and may not significantly inhibit the function of hemaptopoietic cells at a specific dosage.     

木犀草素抗肿瘤细胞增殖及增敏抗肿瘤药物作用研究

目的:研究黄酮类化合物木犀草素(Luteolin)对体外抗肿瘤细胞增殖,以及其与抗肿瘤药联用的增敏作用.方法:选用5 μmol/L或10 μmol/L木犀草素与不同浓度抗肿瘤药联合作用肿瘤细胞24 h后,用MTS法检测其体外抗增殖作用.结果:5 μmol/L木犀草素对人非小细胞肺癌细胞(A549)、人子宫颈癌细胞(Hela)、人乳腺癌细胞(MCF-7)、人胃腺癌细胞(AGS)、人胃癌细胞(MGC-803)的抗增殖作用均<20%,对人结肠癌细胞(Caco2)和人肝癌细胞(HepG2)的抗增殖作用约20%.Bexarotene单一用药时对Hela细胞抑制率达50%(IC_(50))的浓度约为2 μmol/L,与5 μmol/L木犀草素联用后IC_(50)约0.2 μmol/L,5 μmol/L木犀草素与0.1 μmol/L Bexarotene联用对Hela细胞的抗增殖作用达44%,Bexarotene与木犀草素联用在MGC-803、HepG2、A549细胞中增敏较小,在Caco2和MCF-7细胞中无增敏作用;顺铂单一用药时对Hela细胞的IC_(50 )>30 μmol/L,与5 μmol/L木犀草素联用后IC_(50)约3 μmol/L,联用后在MGC-803、HepG2和A549中增敏较小;博来霉素单一用药时对Hela细胞的IC_(50)>100 μmol/L,对A549细胞的IC_(50)约为100 μmol/L,与5 μmol/L木犀草素联用后Hela细胞的IC_(50)约为1 μmol/L,与10 μmol/L木犀草素联用后A549细胞的IC_(50)约为10 μmol/L.木犀草素与格列卫联用在MGC-803、HepG2、A549和AGS中增敏较小.结论:木犀草素在低于10 μmol/L浓度时,对肿瘤细胞体外抗增殖作用较小.低浓度(5 μmol/L~10 μmol/L)的木犀草素在不同的肿瘤细胞中对抗肿瘤药的增敏作用强度不同,在Hela细胞中增敏作用最显著.     

过氧化物上调人结肠癌细胞血管内皮生长因子的表达

目的　探讨过氧化氢等活性氧类对于大肠癌的进一步发展可能存在的影响。方法　以低浓度过氧化氢 (10 -5mol/L、10 -7mol/L及 10 -9mol/L)作用人结肠癌细胞系LS174T和HCT8共 2 4h ,与人血管内皮细胞系ECV 30 4共培养 ,观察过氧化氢对结肠癌细胞诱导的内皮细胞迁移的影响。以逆转录 聚合酶链反应、酶联免疫吸附分析检测相对定量过氧化氢作用下癌细胞血管内皮生长因子的表达强度 ,以放线菌素D(1 5 μg/ml)抑制癌细胞的转录观察过氧化氢产生作用的机制 ,同时以激光扫描细胞仪直接定量肿瘤细胞NF KappaB活性的变化。结果　外源性低浓度过氧化氢促进两种结肠癌细胞诱导的内皮细胞迁移 ,其中在 10 -5mol/L过氧化氢的作用下 ,LS174T诱导的迁移数为 2 0 2 6±70 2 (个 ) (与对照组比t=3 4 75 1,P =0 0 0 83) ,HCT8诱导的迁移数为 14 5 4± 6 5 3(个 ) (与对照组比t=4 4 183,P =0 0 0 84 ) ,高于同组其余各浓度引起的迁移数目。同时癌细胞血管内皮生长因子的表达也见增强 ,放线菌素D能阻断过氧化氢的这种作用。半衰期分析提示过氧化氢未影响血管内皮生长因子mRNA的稳定性。两种癌细胞NF KappaB的活性在 2 4h的过氧化氢作用后获得提高 ,这与血管内皮生长因子的增强表达情形相仿。结论　过氧化氢在一定程度上     

蓖麻毒素的毒性作用机制及其在肿瘤治疗中的应用

蓖麻毒素对哺乳动物细胞具有很强的毒性,属于Ⅱ型核糖体失活蛋白。其A链是活性链,可使核糖体失活,从而使蛋白质合成受阻,细胞死亡。基于蓖麻毒素的细胞毒性,人们将蓖麻毒素及其A链应用于肿瘤治疗领域,目的在于特异性杀伤肿瘤细胞,并减小对正常细胞的毒性。本文就蓖麻毒素的分子结构、毒性机制以及近年来在肿瘤治疗领域的研究进展作一综述。     

Effects of calcium channel antagonist on gastrin-induced proliferation of HT29 colon carcinoma cells]

OBJECTIVE: This study aimed to assess the effects of nifedipine on gastrin-induced proliferation of HT29 colon carcinoma cells and inquire into the possible mechanisms. METHODS: Flow cytometry was used to monitor the cytoplasmic free calcium; MTT colorimetry was used to determine the proliferation of HT29 cells. RESULTS: The results showed that 2.5 x 10(-6) mol/L pentagastrin (PG) induced a quick rise of intracellular free calcium ([Ca2+]i) (P < 0.01). 10(-5) mol/L nifedipine can significantly inhibited the rise of [Ca2+]i induced by pentagastrin (P < 0.01), in parallel, at growth assay we demonstrated that 10(-5)-10(-6) mol/L nifedipine could obviously block the increase in cell number elicited by 2.5 x 10(-6) mol/L PG. CONCLUSION: These data indicate that nifedipine can stop the influx of Ca2+ and hence inhibit the pentagastrin-induced proliferation.     

姜黄素对人结肠癌Lovo细胞VEGF表达的影响

目的 研究姜黄素体外对人结肠癌Lovo细胞血管内皮生长因子VEGF表达的影响。方法不同浓度（0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L）姜黄素处理2013年8月—2014年2月中南大学提供的人结肠癌细胞株Lovo24 h后,用Real-time PCR检测姜黄素对人结肠癌细胞株血管内皮生长因子VEGF m RNA表达的变化,用Western blot法检测姜黄素对人结肠癌细胞株VEGF蛋白表达的变化。结果人结肠癌Lovo细胞经过姜黄素处理24 h后,5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L姜黄素组VEGF m RNA及蛋白的表达均明显下降,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论姜黄素能下调人结肠癌Lovo细胞VEGF的表达,并呈剂量依赖,这可能是姜黄素抑制结肠癌Lovo细胞增殖及侵袭性的机制之一。     

Rg3对人肺腺癌A549细胞及其内源性VEGF的影响

目的探讨人参皂甙-RG3在抑制肿瘤新生血管生成过程中的作用,对人肺腺癌A549细胞的影响及其内源性分泌的血管内皮细胞生长因子(VEGF)的作用。方法培养人肺腺癌细胞株A549细胞,采用MTT法检测不同浓度RG3(10-4MOL/L,10-5MOL/L,10-6MOL/L)对人肺腺癌A549细胞增生的影响、流式细胞仪观察不同浓度RG3(3×10-7MOL/L、10-6MOL/L,3×10-6MOL/L)对A549细胞凋亡的影响、放射免疫分析法定量检测细胞培养液中加入不同浓度RG3(10-7MOL/L、10-6MOL/L、10-5MOL/L和10-4MOL/L)后内源性VEGF含量的变化。结果RG3对A549细胞的增生无明显抑制作用,3×10-6MOL/L RG3作用120H后A549细胞凋亡百分数为29.8%(P<0.05)。RG3浓度为10-5MOL/L和10-4MOL/L组的VEGF明显低于对照组(P<0.05),10-4MOL/L RG3组的VEGF低于10-7MOL/L和10-6MOL/L RG3组,作用72H的VEGF水平明显低于48H和24H组(P<0.05)。结论适当浓度的RG3作用一定时间后,可促使人肺腺癌A549细胞的凋亡,并可抑制肿瘤细胞内源性分泌的VEGF含量,RG3抑制肿瘤血管生成机制之一是通过影响细胞分泌上述因子而起作用的。     

黄连素对缺血再灌注心肌细胞损伤的保护作用

目的　研究黄连素对新生大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用。方法　取体外培养的新生大鼠心肌细胞于缺氧 2 4h复氧 1h造成缺血再灌注 ( I/ R)模型 ,观察细胞损伤情况 ;并将黄连素以 1.5× 10 - 6 m ol/ L、1.5× 10 - 5m ol/ L、1.5× 10 - 4 mol/ L 三种浓度分别加入培养基中 ,预处理 2 4h后 ,再置于上述缺氧复氧环境中培养 ,检测以上不同条件下细胞上清液中的乳酸脱氢酶 ( L DH)、丙二醛 ( MDA)、超氧化物歧化酶 ( SOD)含量 ,并检测各组细胞的凋亡率。结果　与正常对照组相比 ,缺血及再灌组细胞上清液中 L DH、MDA含量明显升高 ( P<0 .0 1) ,SOD活力则显著降低 ( P<0 .0 1) ,缺血组和再灌组凋亡率均升高明显 ( P<0 .0 1)。而用黄连素预处理后缺血及再灌组的 L DH、MDA显著低于用药前 ( P<0 .0 1) ,SOD则高于单纯缺血和再灌组 ( P<0 .0 1) ,上述作用在本实验黄连素浓度为 1.5× 10 - 6 m ol/ L～ 1.5× 10 - 4 mol/ L 范围内 ,随浓度升高而更加明显。特别是用黄连素 1.5× 10 - 5mol/ L 浓度预处理后 ,缺血组和再灌组的细胞凋亡率分别是 14.4%和 2 0 % ,分别与用药前 ( 17.4%和 41% )比较有显著性差异 ( P<0 .0 1)。结论　黄连素对缺血再灌心肌细胞有保护作用 ,其作用与浓度有一定依赖关系