几种凋亡细胞检测方法的比较

在细胞凋亡的基础研究领域 ,如有关凋亡信号转导、基因调控等方面的研究 ,以及在细胞凋亡的应用研究领域 ,诸如将细胞凋亡作为化疗药物的筛选模式、检测肿瘤组织切片中凋亡细胞数以评价肿瘤预后等 ,都涉及到凋亡细胞的识别与检测这一基本问题 ,因此 ,选择合适的检测凋亡细胞的方法便成为各个实验室必须解决的问题。本文结合相关文献及在研究中的体会 ,就凋亡细胞与坏死细胞的区别、几种常用凋亡细胞检测方法适用范围及应用中的影响因素、结果分析等简述如下。1　凋亡细胞与坏死细胞的区别在凋亡检测时必须将其与坏死区别开来 ,而将二者加以…     

TNF-α诱导Molt-4细胞周期特异性凋亡及cyclin B1的表达

目的:观察TNF-α诱导Molt-4细胞的凋亡现象以及cyelin B1的表达,探讨膜受体途径细胞凋亡机制.方法:用TNF-α处理指数生长期的Molt-4细胞:应用API、免疫印迹电泳等方法检测细胞凋亡和cyclin B1的表达.结果:Molt-4细胞经TNF-α诱导后出现了明显的细胞凋亡.细胞凋亡主要发生在细胞周期的G1期,cyclin B1在G1期呈阳性表达.结论:TNF-α诱导的细胞凋亡具有细胞周期特异性.cyclin B1在G1期细胞中表达升高可能与G1期细胞凋亡有关.     

喉癌细胞周期和细胞凋亡的同步检测及意义

目的：检测喉鳞癌细胞的细胞周期变化和细胞周期各时相细胞凋亡情况,探讨细胞周期的变化和细胞周期各时相的细胞凋亡在喉癌发生、发展及预后中的作用。方法： 应用流式细胞仪双参数分析结合脱氧核苷酸原位末端标记（TUNEL）技术,检测15例声带息肉和387例喉鳞癌细胞周期和细胞周期各时相的细胞凋亡。结果：与声带息肉组比较,喉鳞癌组在G₀G₁期细胞构成比增加,但差异无显著性（P>0.05）,S期和G₂M期细胞构成比无明显变化,其细胞凋亡指数明显低于声带息肉组（P<0.05）,而且主要是由于G₀G₁期细胞凋亡的下降所引起;低分化鳞癌较高、中分化鳞癌G₂M期细胞构成比显著性增加,S期、G₂M期和总的细胞凋亡指数反而明显增加（P<0.05）;5年内死亡组与复发转移组的G₂M期构成比显著性增加,S期、G₂M期和总的细胞凋亡指数明显增加（P<0.05）;存活5年以上组和未复发转移组G₂M期细胞构成比下降明显,G₀G₁期和总的细胞凋亡指数亦较声带息肉组明显下降（P<0.05）。结论：肿瘤G₂M期细胞比例显著性增加,S期、G₂M期和总的细胞凋亡指数的明显增加可以作为喉癌恶性度高、预后不良、需要辅助治疗的客观指标。     

EL一4细胞凋亡与细胞周期的辐射效应

采用流式细胞术（ＦＣＭ）研究了０．５、１、２、４ＧｙＸ射线照射后，小鼠淋巴瘤细胞ＥＬ一４的凋亡与细胞周期的剂量效应关系。结果表明：以上剂量照射后２４ｈ，Ｇ１期细胞呈剂量依赖性增加，出现明显的Ｇ１阻滞；而Ｓ期细胞则剂量依赖性减少；Ｇ２期出现明显的Ｇ２阻滞；细胞凋亡亦呈剂量依赖性增力。该结果提示：ＥＬ一４细胞经较高剂量ｘ射线照射后，出现明显的ＤＮＡ合成抑制和Ｇ２阻滞，致使ＥＬ一４细胞的有丝分裂延迟。统计分析表明：Ｇ１阻滞与细胞凋亡高度相关ｒ＝０．９１。     

人重组Fas配体体外诱导细胞周期特异性凋亡模型的建立

目的 运用人重组Fas配体（rhFasL），体外诱导稳定而又典型的Fas介导的细胞周期特异性凋亡模型，为针对其细胞凋亡过程中的细胞周期机制研究、肿瘤的生物学治疗和自身免疫性疾病的防治等提供科学的研究平台。方法 以白血病细胞系（Molt-4和Jurkat细胞系）和进入细胞周期的外周血淋巴细胞为载体，用人重组Fas配体诱导细胞6～36h后，用亚G1峰法、传统的AnnexinV／PI和改良后的API法进行标记并用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 改良后的API法显示人重组Fas配体诱导的细胞凋亡具有细胞周期特异性及始动位点；传统的AnnexinV／PI显示在将细胞凋亡控制在10％～20％并以早期细胞凋亡为主时诱导的模型最典型；亚G1峰法只能检测晚期细胞凋亡和进行DNA直方图分析。结论人重组Fas配体体外诱导的细胞凋亡具有细胞周期特异性并始动于G1期，联合应用传统的Annex-in-V／PI及改良后的API法能为建立稳定而又典型的体外Fas介导的细胞周期特异性凋亡模型提供技术支撑。     

喉癌细胞周期各时相的细胞凋亡检测及意义

目的:探讨细胞周期各时相的细胞凋亡在喉癌发生、发展及预后中的作用。方法:结合387例喉鳞癌患者的随访资料,应用流式细胞仪(FCM)双参数分析和脱氧核苷酸原位末端标记(TUNEL)技术,检测15例声带息肉和387例喉鳞癌细胞周期各时相的细胞凋亡。结果:喉鳞癌组细胞凋亡明显低于声带息肉组(P<0.05),而且主要由G0G1期细胞凋亡的下降所引起;细胞周期各时相的细胞凋亡和肿瘤的临床分型、临床分期及T分级无显著性相关;高分化鳞癌和中分化鳞癌的细胞凋亡未见显著性差异,但是低分化鳞癌S期、G2M期和总的细胞凋亡指数明显增加(P<0.05);5年内死亡组与复发转移组的S期、G2M期和总的细胞凋亡指数明显增加(P<0.05);5年内死亡组与复发转移组G0G1期的细胞凋亡指数明显高于存活5年以上组和未复发转移组(P<0.05),而与声带息肉组无明显差异。结论:G0G1期细胞凋亡的明显下降是喉癌发生过程中的一个早期事件;总的细胞凋亡指数的变化并不能准确反应喉癌的预后;在综合考虑细胞凋亡与细胞周期因素的条件下,S期、G2M期和总的细胞凋亡指数的明显增加可以作为喉癌恶性度高、预后不良、需要辅助治疗的客观指标。     

谷氨酸对大鼠胶质细胞细胞周期和凋亡及坏死的影响

关于缺血期间胶质细胞的功能状态、细胞周期的变化以及胶质细胞的死亡形式研究较少。谷氨酸(Ｇｌｕ)作为脑内主要的兴奋性神经递质,与癫痫的发生以及神经元的损伤有密切联系[1],我们观察了离体培养的大鼠皮层胶质细胞经不同浓度的谷氨酸刺激后胶质细胞细胞周期的改变和细胞凋亡及坏死的比例,以期明确脑缺血病理损害介质Ｇｌｕ对胶质细胞功能状态的影响,为探讨缺血性神经细胞的生存与死亡机制提供理论依据。一、材料与方法1胶质细胞培养:(1)神经细胞原代培养:参照Ｍａｎｔｈｒｏｐｅ等[2]的方法,取孕18ｄＳＤ大鼠鼠脑皮质,用完全培养基37℃,…     

流式细胞仪法检测4HPR诱导Hela细胞凋亡的百分率

目的：实验结果表明４ＨＰＲ抑制Ｈｅｌａ细胞生长的机理之一是诱导该细胞凋亡。本文用流式细胞仪检测不同浓度的４ＨＰＲ作用不同时间Ｈｅｌａ细胞凋亡的百分比及细胞周期变化。方法：体外细胞培养及流式细胞仪检测法。结果：２μｇ／ｍ的４ＨＰＲ作用２４、４８、７２ｈ后，Ｈｅｌａ细胞的凋亡百分比分别为４．１％、６．６％、２６％；４μｇ／ｍｌ的４ＨＰＲ分别为５．１％、８．３％、２８％、８ｕｇ／ｍｌ的４ＨＲ分别为５．０     

晚期糖基化终产物对心肌细胞细胞周期和凋亡的影响

目的：探讨晚期糖基化终产物（advanced glycation end products,AGEs)对体外培养乳鼠心肌细胞细胞周期及凋亡的影响。方法：体外培养3－5d的乳鼠心肌细胞，用含1％和10％胎牛血清的DMEM培养基中继续培养24h，应用流式细胞仪和在位末端标记技术观察不同浓度AGEs(50、100μg/ml）对心肌细胞刺激12、24、48h后细胞周期分布、凋亡率及凋亡小体／凋亡细胞核分布的影响。结果：AGEs对心肌细胞细胞周期分布无明显影响；在正常培养液培养时，心肌细胞的凋亡随着培养时间延长而增加，24、48h与12h相比，凋亡小体／凋亡细胞核分别增加了0．55、1．23倍、AGEs可以明显增加心肌细胞的凋亡程度，并随着刺激时间、刺激浓度的增加而增加，50、100μg/ml AGEs组与对照组相比，凋亡小体／凋亡细胞核12、24、48h分别增加了0．74和1．21、1．15和1．78、0．83和1．19倍。结论：AGEs对心肌细胞细胞周期分布无影响，但可以通过增加心肌细胞凋亡率对心肌细胞造成损伤。     

细胞凋亡主要检测方法及其应用

细胞凋亡是在一定的生理或病理条件下,受基因调控的细胞生理性主动死亡的过程,其在维持生物体内环境稳态、组织器官的正常形态、胚胎的正常发育以及生物体的正常生理活动和功能等方面起着不可或缺的作用。凋亡机制的异常会使细胞失去控制,与包括肿瘤在内的许多疾病的发生发展密切相关,准确地对细胞凋亡进行检测是开展凋亡研究的必需步骤。近年来,随着对凋亡研究的深入,在细胞凋亡的识别、确认及机制等方面的研究进展显著,用于检测细胞凋亡的新方法不断涌现,原先使用的技术方法也日趋成熟,在形态学观察的基础上,生物化学、分子生物学和免疫学等方面的技术均已广泛应用于细胞凋亡的检测。     

胸腺细胞体外培养对细胞凋亡和细胞周期进程的影响

本文采用流式的细胞仪研究了小鼠胸腺细胞体外培养对细胞内ＤＮＡ合成、细胞周期以及细胞凋亡的影响。结果表明：胸腺细胞体外培养引起ＤＮＡ合成抑制，细胞有丝分裂延迟，体外培养后４小时即表现出明显的ＤＮＡ合成抑制。８～１２ｈ抑制最深，２４ｈ蛋白质的合成开始恢复，细胞凋亡则表现时间依赖性增高。     

半夏泻心汤对胃癌SGC-7901细胞株细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:研究半夏泻心汤对胃癌SGC-7901细胞株细胞凋亡及细胞周期的影响。方法:将半夏泻心汤分为半夏泻心汤低浓度组(0.125 g·L-1)、半夏泻心汤中浓度组(0.5 g·L-1)、半夏泻心汤高浓度组(2 g·L-1),按细胞凋亡检测试剂盒说明书及细胞DNA含量检测试剂盒说明进行,流式细胞仪检测样品,CELLQuest软件获取并分析数据。结果:半夏泻心汤能够增加SGC-7901细胞在G1期的比例,促进细胞凋亡,其中半夏泻心汤高浓度组优于半夏泻心汤中浓度(P<0.05),但半夏泻心汤低浓度对此没有作用。结论:一定程度半夏泻心汤可抑制细胞增殖,并有浓度依赖性,其机理可能与药物阻滞细胞至G1期和诱导细胞凋亡有关。     

甲醛对小鼠睾丸细胞凋亡和细胞周期的影响

目的：研究甲醛对小鼠睾丸细胞凋亡和细胞周期的影响,探讨甲醛对雄性小鼠的生殖与遗传毒性及其作用机制。 方法：雄性健康昆明种小鼠随机分为阴性对照组（NC）、甲醛染毒组和阳性对照组（PC）,每组12只。采用静式吸入染毒,各染毒组吸入甲醛浓度分别是21(1/24LC₅₀)、42 (1/12 LC₅₀>)和84 mg·m^-3 (1/6 LC₅₀),阴性对照组吸入正常空气,阳性对照组腹腔注射环磷酰胺（50 mg·kg-1）。染毒结束后处死小鼠,检测各组小鼠睾丸细胞凋亡和细胞周期的变化。结果：1/6LC₅₀染毒组小鼠睾丸细胞凋亡率显著高于阴性对照组(P<0.05);随着甲醛剂量的增加,S期细胞百分数逐渐增加,G0/G1和G2+M期的细胞百分数逐渐减少,各剂量染毒组小鼠睾丸细胞S期细胞百分数显著高于阴性对照组,1/6LC₅₀染毒组G0/G1和G2+M期的细胞百分数显著低于其他剂量组(P<0.05)。 结论：甲醛可以使小鼠睾丸细胞凋亡率增加,并影响其细胞周期,具有一定的生殖遗传毒性。     

胸腺细胞体外培养对细胞凋亡和细胞周期进程的影响

本文采用流式的细胞仪研究了小鼠胸腺细胞体外培养对细胞内ＤＮＡ合成、细胞周期以及细胞凋亡的影响。结果表明：胸腺细胞体外培养引起的ＤＮＡ合成抑制，细胞有丝分裂延迟，体外培养后４小时即表现出明显的ＤＮＡ合成抑制。８－１２ｈ抑制深，２４ｈ蛋白质的合成开始恢复，细胞凋亡则表现时间依赖性增高。     

大鼠脑缺血后神经元凋亡的细胞周期特异性和相关基因表达

目的:探讨大鼠局灶性脑缺血后神经元凋亡的细胞周期特异性分布以及相关基因表达之间的内在关系。方法:建立大鼠大脑中动脉阻塞模型,利用流式细胞分选和原位末端标记及RT-PCR技术,检测正常组和缺血后大鼠脑组织中的神经元凋亡的细胞周期特征,及其Cyclin D1和Cyclin B1基因的表达规律。结果:神经元凋亡可以发生在细胞周期的各个时相,细胞凋亡多发生在G0/G1期,而且神经元也可在S期甚至到达G2期发生凋亡。正常脑组织中神经元表达Cyclin D1,缺血后表达增加;Cyclin B1在正常脑组织的神经元中不表达,缺血后呈现弱表达。结论:脑缺血后神经元可以重新进入细胞周期,其细胞凋亡是多点启动的,可发生在细胞周期的各个时相。Cyclin D1和Cyclin B1的异常激活可能参与了缺血后神经元凋亡的细胞周期调控过程。     

细胞凋亡和继发性坏死的Annexin法定量检测

目的 探讨分析凋亡与坏死淋巴瘤（Raji)细胞的定量方法。方法 以1.0μmol/L地塞米松（DEX）诱导Raji细胞凋亡,用异硫氰酸荧光素标记的连接素V（Annexin V)和碘化丙锭（PI）分别与凋亡细胞膜上的磷脂酰丝氨酸和继发性坏死细胞内降解的DNA结合,并以流式细胞术分析和分选标记细胞,用电镜和DNA凝胶电泳对分选细胞及其DNA进行鉴定。结果 Annexin^ 细胞数随DEX孵育时间的延长而增加（r=0.97);Annexin^ /PI^-与Annexin^ /PI^ 细胞经电镜和DNA梯形带确证具有凋亡与坏死细胞的特征;Annexin法可准确测定10^5-10^6细胞中标记细胞。结论 Annexin法可快速、准确地定量混合细胞内的凋亡与坏死细胞数。     

生存素与细胞周期和凋亡

在细胞凋亡调控中，IAPs家族越来越受到人们的关注。IAPs家族蛋白既可抑制caspases的活化，又可抑制caspases酶的活性。Survivin(生存素)是新近发现的哺乳动物IAP。1997年由耶鲁大学的Altieri等利用杆状病毒凋亡抑制蛋白重复序列-1(EPR-1)基因cDNA作为探针筛选人基因组文库，得到一个与其编码区序列高度互补的基因，这就是Survivin。它独     

流式细胞仪在细胞凋亡检测中的应用

凋亡是一种细胞主动参与的自毁过程,与细胞坏死有根本区别。异常的凋亡状态与多种密切相关,凋亡研究在临床有广泛的应用前景。本文介绍了４种应用流式细胞仪检测凋亡的方法。ＤＮＡ含量分最为常用,操作简便、成本低廉;Ｃaspase－３是凋 亡的早期检测指标可以发现细胞内蛋白酶的升高;Ａnnexin-Ｖ探针能检测凋亡早期胞浆膜的改变;ＤＮＡ断裂 点标记是对凋亡形态学改变特征的流式检测方法。