血红素加氧酶-1对人气道黏液高分泌的影响

目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对炎性刺激时人气道上皮细胞黏液分泌的影响.方法 通过人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)刺激人肺腺癌细胞A549,构建炎性刺激下气道黏液高分泌模型,给予HO-1诱导剂氯化高铁血红素(Hemin)及HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP Ⅸ)干预,观察黏蛋白5AC(MUC5AC)、表皮生长因子受体(EGFR)、磷酸化EGFR(p-EGFR)、HO-1及双功能氧化酶1(Duox1)的表达.将A549细胞分为对照组、HNE刺激组、Hemin干预组和ZnPP Ⅸ干预组.用四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定Hemin及ZnPP Ⅸ对细胞活性的影响;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组HO-1、Duox1、EGFR 及MUC5AC mRNA的转录水平;Western blot法检测p-EGFR、EGFR、Duox1和HO-1蛋白的表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞裂解液中MUC5AC蛋白表达水平的变化;并用细胞免疫化学激光共聚焦显微镜观察不同条件下MUC5AC蛋白表达的变化.结果 HNE刺激组MUC5AC mRNA积分吸光度值和蛋白水平分别为(0.845±0.044)和(192.68±4.71)μg/mg,EGFR mRNA和蛋白的积分吸光度值分别为(0.868±0.039)和(0.623±0.052),均较对照组[(0.462±0.053)、(104.95±6.82)μg/mg和(0.528±0.054)、(0.297±0.055)]明显升高(均P＜0.01);p-EGFR蛋白水平亦明显升高,且HO-1及Duox1的mRNA和蛋白水平也较对照组显著增高(均P＜0.01).给予Hemin预处理后,与HNE刺激组相比,HO-1 mRNA及蛋白明显增多,p-EGFR蛋白水平、Duox1、EGFR及MUC5AC的mRNA和蛋白水平均降低(均P＜0.01).给予ZnPP Ⅸ预处理后,与对照组相比,HO-1 mRNA及蛋白水平无明显增高(P＞0.05),而p-EGFR蛋白水平、Duox1、EGFR及MUC5AC的mRNA和蛋白水平均明显增高(均P＜0.01).结论 HO-1可通过下调Duox1的表达,阻断EGFR活化上游的配体依赖信号途径,减少EGFR活化,抑制MUC5AC的表达,此机制为气道黏液高分泌疾病的防治提供了新的方向.     

血红素氧合酶-1在姜黄素抑制氧化型低密度脂蛋白诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的观察姜黄素对氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响,并探讨血红素氧合酶-1(HO-1)在姜黄素抑制血管平滑肌细胞增殖中的作用及机制。方法体外分离培养大鼠血管平滑肌细胞并行免疫组化鉴定,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖率、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测HO-1mRNA水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测HO-1及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达水平。结果 Ox-LDL呈浓度依赖性(0～150μg/mL)地诱导VSMC增殖,达到200μg/mL具有细胞毒性;姜黄素呈浓度依赖性(40、80μmol/L)地抑制Ox-LDL(100μg/mL)所诱导的VSMC增殖,HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ(ZnPPⅨ)可明显减弱此抑制效应;姜黄素可诱导VSMC上调HO-1mRNA和蛋白表达;姜黄素可减弱Ox-LDL诱导VSMCs增殖细胞核抗原的高表达,此效应可被HO-1抑制剂ZnPPⅨ抑制。结论姜黄素通过降低HO-1介导的PCNA表达,进而抑制Ox-LDL诱导大鼠血管平滑肌增殖。     

血红素氧合酶-1抗大鼠肾缺血再灌注损伤细胞凋亡实验研究

目的 探讨血红素氧合酶-1（HO-1）对肾缺血再灌注（IR）损伤中细胞凋亡的影响及其可能的作用机制.方法 24只雄性Wistar大鼠随机均分为单纯IR组、HO-1诱导组及HO-1抑制组,分别给予生理盐水、血晶素、锌原卟啉Ⅸ（ZnPPⅨ）腹腔内注射预处理.8h后行右肾切除用于检测HO-1蛋白表达及活性,左肾动脉夹闭缺血50min再灌注18h,检测血Cr、BUN及肾组织中丙二醛（MDA）浓度、髓过氧化物酶（MPO）活性及bcl-2蛋白表达与细胞凋亡指数（AI）.结果 血晶素与ZnPPⅨ预处理分别显著诱导与抑制了肾内HO-1蛋白表达及活性.与单纯IR组比较,HO-1诱导组Cr、BUN、MDA浓度及MPO活性显著降低,bcl-2蛋白表达升高伴AI明显下降,而HO-1抑制组Cr、BUN、MDA、MPO升高,HO-1表达降低伴AI显著升高.结论 HO-1可能通过抗炎、抗氧化、上调bcl-2蛋白表达等作用抑制肾IR损伤中的细胞凋亡.     

血红素氧合酶-1对人胃癌SGC7901细胞5-氟尿嘧啶化疗敏感性的影响

目的:体外观察血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)对人胃癌细胞SGC7901 5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗敏感性的影响及其可能的机制?方法:应用不同浓度锌原卟啉(ZnPP)?氯化血红素(Hemin)单独或联合5-FU作用于人胃癌SGC7901细胞不同时间,四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察药物对细胞生长抑制作用;Western blot分析细胞HO-1蛋白表达变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;活性氧(ROS)检测试剂盒分析其凋亡机制?结果:ZnPP和5-FU均可明显抑制人胃癌SGC7901细胞生长,呈剂量依赖性;5-FU联用ZnPP(10 μmol/L)与单用药相比,明显提高了细胞生长抑制率和凋亡率(P < 0.05),联用Hemin(10 μmol/L)则明显降低细胞生长抑制率和凋亡率(P < 0.05);人胃癌SGC7901细胞中可见HO-1表达,单用5-FU或Hemin后均能使其表达增强,联用ZnPP可逆转此现象;单用5-FU与对照组比较,细胞内ROS活性明显增高,联用后ZnPP可进一步提高细胞内ROS活性(P < 0.05),而联用Hemin明显降低细胞内ROS活性水平(P < 0.05)?结论:ZnPP抑制HO-1表达,能够增强人胃癌SGC7901细胞对5-FU化疗敏感性,这一作用可能与增加细胞内ROS活性有关?     

P38MAPK与HO-1在急性肺损伤中的探讨

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶P38(P38MAPK)与血红素加氧酶-1(HO-1)在急性肺损伤中的相互关系.方法 健康雄性Wistar大鼠40只,随机分为5组(n=8).对照组(NS组)、内毒素组(LPS组)、血晶素组(Hemin组)、锌原卟啉Ⅸ组(ZnPPⅨ组)、SB203580组(SB组).于6 h后用Western Blot和免疫组化法分别检测肺组织P38MAPK和HO-1蛋白表达,检测肺泡灌洗液(BALF)中中性粒细胞比、肺组织湿/干重、蛋白含量和动脉血气,并进行病理学观察.结果 与NS组比较,LPS组、Hemin 组、SB组、ZnPPⅨ组P38MAPK含量蛋白表达明显增高(P<0.05),HO-1强阳性表达(P<0.01或P<0.05),肺组织湿/干重明显增加(P<0.05),中性粒细胞比、蛋白含量显著增加(P<0.05或P<0.01),PaO2、PaCO2和HCO3ˉ较NS组显著下降(P<0.05);与LPS组比较,Hemin 组、SB组P38MAPK蛋白表达显著降低(P<0.05),HO-1的表达明显升高(P<0.05),肺组织湿/干重、中性粒细胞比、蛋白含量明显减少(P<0.05),而ZnPPⅨ组恰好相反;Hemin 组、SB组之间无显著差异(P>0.05).ZnPPⅨ组肺组织损伤最重,LPS组次之,Hemin组和SB组最轻.结论 P38MAPK与HO-1在急性肺损伤中各自独立,相互抑制.     

臭苜蓿根提取物对巨噬细胞血红素氧合酶-1表达的影响

目的：探讨血红素氧合酶-1在LPS诱导急性炎症中的表达及臭苜蓿根提取物的干预作用。方法：通过脂多糖（LPS）干预RAW264．7细胞系建立炎症细胞模型。实时荧光定量RT—PCR法检测血红素氧合酶-1（HO-1）的基因表达差异,Western blot法测定HO-1的蛋白表达量。结果：臭苜蓿根提取物明显升高巨噬细胞HO-1的mRNA表达水平,Western blot结果显示,臭苜蓿根提取物干预后HO-1的蛋白表达水平也明显升高。结论：臭苜蓿根提取物能提高巨噬细胞HO-1基因的表达,促进HO-1的释放而发挥一定的抗炎作用。     

HO-1介导黄芪甲苷抗原代心肌细胞缺氧/复氧损伤作用研究

[目的]研究黄芪甲苷（AS-Ⅳ）对乳鼠原代心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤的保护作用及机制。[方法]培养乳鼠原代心肌细胞,以缺氧4 h,复氧4 h建立心肌H/R损伤模型。四甲基噻唑蓝（MTT）法检测细胞活力。检测细胞培养液中心肌肌钙蛋白（cTnT）、乳酸脱氢酶（LDH）含量,炎症细胞因子超敏C反应蛋白（hs-CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）浓度。分别以聚合酶链式反应逆转录（RT-PCR）、蛋白免疫印迹（Western blot）法检测心肌细胞血红素氧化酶1（HO-1）mRNA及蛋白表达水平。[结果]与H/R组比较,AS-Ⅳ、HO-1激动剂原卟啉氯化钴（CoPP）均可显著降低细胞上清中cTnT、LDH含量（P<0.01）,降低炎症因子hs-CRP、TNF-α水平（P<0.01）,而HO-1拮抗剂原卟啉Ⅸ锌（Ⅱ）络合物（ZnPP）作用趋势则相反。与H/R组比较,CoPP组及AS-Ⅳ组HO-1 mRNA、蛋白表达水平显著升高（P<0.01）,ZnPP组则显著下降（P<0.01）。[结论]AS-Ⅳ对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有显著的保护作用,其机制与诱导具有保护作用的HO-1表达有关。     

低氧培养的PC12细胞凋亡的研究

目的研究PCI2细胞在低氧状态下,内源性一氧化碳（CO）的生成及其导致细胞凋亡的作用。方法将PCI2细胞分为常氧对照组（C组）、低氧组（H组）和低氧加血红素氧合酶（HO）抑制剂卟啉锌-9组（H＋ZnPP组）。检测2h时间点PCI2细胞血红素氧合酶的表达及内源性CO水平和细胞凋亡率。结果氧应激状态下,HO-1明显表达,HO-2无表达;H组HO水平与C组、H＋ZnPP组比较明显升高（P〈0．01）,H＋ZnPP组的HO水平高于C组（P〈0．01）;内源性CO水平以及细胞凋亡率与C组、H＋ZnPP组比较均明显升高（P〈0．01）。结论低氧状态下,PCI2细胞表面HO-1高表达,HO-2无明显表达,PC12细胞的凋亡率与内源性CO的水平密切相关,提示HO／内源性CO可能导致细胞凋亡的发生。     

HO-1介导H2O2 预处理对PC12细胞氧化应激损伤的适应性细胞保护作用

目的探讨血红素氧合酶-1(HO-1)对H2O2预处理的适应性细胞保护效应的介导作用。方法PI染色流式细胞仪(Flowcytometer,FCM)检测PC12细胞凋亡,流式细胞仪检测PC12细胞HO-1蛋白的表达。结果PC12细胞经10μmol/L H2O2预处理90 min后,20、30、50、100μmol/L H2O2对PC12细胞凋亡的诱导作用明显下降;10μmol/L H2O2预处理90 min后,PC12细胞HO-1蛋白表达量明显增加;给予10μmol/L的HO-1蛋白特异性阻断剂ZnPP后,可显著阻断10μmol/L H2O2预处理90 min对50μmol/L H2O2损伤PC12细胞的保护作用。结论血红素氧合酶-1(HO-1)介导了H2O2预处理对PC12细胞氧化应激损伤的适应性细胞保护作用。     

调控血红素加氧酶-1诱导K562A02细胞增殖、凋亡及耐药机制研究

目的 通过血红素加氧酶-1(HO--1)诱导剂Hemin及抑制剂ZNPP Ⅸ调控HO-1,并联合阿霉素逆转K562A02细胞化疗耐药机制的研究,为慢性髓系白血病(CML)的逆转耐药提供新的策略.方法 培养K562及K562A02细胞,采用荧光原位杂交(FISH)法检测K562A02细胞中bcr-abl融合基因表达.分别用HO-1诱导剂Hemin及抑制剂ZNPP Ⅸ调控HO-1基因表达联合阿霉素处理K562A02细胞后;流式细胞术检测药物诱导细胞凋亡情况.Western blot检测耐药相关基因及凋亡基因蛋白表达水平.结果 K562A02细胞中bcr-abl融合基因阳性细胞占94％.阿霉素处理细胞后,随着阿霉素浓度的增加,HO-1表达下降,耐药相关基因MDR1、NF-KB(P65)、MRP1、TopoⅡα、ABCD2表达亦降低;用HO-1诱导剂Hemin、抑制剂ZNPP Ⅸ、阿霉素单药分别及联合处理K562A02细胞后,显示HO-1高表达后耐药相关基因表达升高,细胞凋亡率下降.而降低HO-1表达,耐药相关基因表达下降,细胞凋亡率增加.结论 HO-1可作为逆转耐药的靶基因,可以使K562A02对阿霉素重新敏感,起到增敏效应.     

小儿耳鼻喉手术麻醉的新进展

因小儿耳鼻喉手术刺激强,时间短,且常与气道相关,故麻醉的控制有一定难度,现对国内外现阶段小儿耳鼻喉手术麻醉的改良方法及新观点进行评述,以期对临床工作有较好的指导意义。     

云南省2006年登革热监测分析

目的了解云南省登革热的疫情动态、人群抗体水平、媒介伊蚊种群（包括成幼虫孳生和密度变化）的动态变化、为登革热流行趋势的预测、预警和制定防治对策、措施提供科学依据。方法各级医疗、卫生、检疫机构的医务人员对疑似、临床病例进行及时发现和诊断;在流行季节前随机抽取正常人群血清,-20℃保存,用ELISA方法进行血清学检测;在6～10月采用定时、定点调查法,对登革热的主要传播媒介白纹伊蚊、埃及伊蚊的种群、孳生环境、伊蚊幼虫指数和成蚊密度进行监测,每月1次。结果2006年云南省发生输入性登革热病例18例;健康人群登革热IgG抗体阳性率8．09％。伊蚊幼虫密度布雷图指数（BI）、容器指数（Cl）分别在14～98、4．7～73．68之间,白纹伊蚊成蚊密度在3．5～34只,人工小时之间。结论云南省输入性登革热疫情有不断上升的趋势;人群抗体水平登革热IgG抗体阳性率较高,提示当地人群中可能存在该病毒的既往感染或隐性感染;媒介伊蚊幼虫布雷图指数、容器指数和白纹伊蚊成蚊密度均较高。对登革热传播具有极高的危险性,应引起高度注意。     

大鼠脑出血灶周围星形胶质细胞内糖原含量的变化

目的：研究脑出血后局部超微结构的变化，探讨脑出血的病理生理过程，为临床治疗提供理论依据．方法：健康雄性SD大鼠4只，随机等分为实验组和对照组．实验组采用细菌胶原酶注射制作纹状体脑出血模型，对照组采用相同方法在相应部位注入等体积生理盐水，采用透射电镜观察脑出血后24h病变局部及其周围和对照组超微结构的变化和糖原的水平变化．结果：电镜观察到在脑出血动物出血灶周围区，不同类型的细胞内均可见到各种各样的超微结构改变．最为醒目的是在脑内血肿周围星形胶质细胞胞质和突起内有大量的糖原颗粒聚集，尤其在毛细血管周围的胶质细胞突起内非常明显；小胶质细胞和少突胶质细胞内均未发现明显糖原颗粒存在．在生理盐水对照组动物，相应部位的各种细胞的超微结构正常；而且神经元、各种胶质细胞和毛细血管内皮细胞内均无明显糖原颗粒聚集．结论：脑出血周围糖原含量增高，局部存在明显的糖代谢障碍．     

2001年我国医药研究的若干进展

随着国内外生命科学和生物技术等的飞速发展,我国医药技术在2001年取得了长足的进步。提前完成了我国所承担的人类基因组汁划中的1％测序任务,到2000年,中国科学家在功能基因研究和基因组多样性领域共完成研究论文1850篇,遍及医药各领域,研究手段和水平可于国际先进水平媲美,中国完全有条件在“后基因时代”成为主角之一。     

黄芪在体内抗氧化作用的实验研究

目的:探讨黄芪水提物抗氧化、清除体内自由基的生物活性。方法:将昆明种小鼠随机分为对照组和黄芪低、中、高剂量组,每组10只。连续灌胃给药7天,采血后,迅速取出肝组织,制成匀浆。测定超氧化物歧化酶(SOD)的活力及丙二醛(MDA)含量。结果:黄芪可减少MDA含量,增强SOD活力。结论:黄芪可有效清除体内的氧自由基,具有减少氧化应激引起的器官损伤和延缓机体衰老的作用。     

癫痫发病中突触机制的研究进展

反复的癫痫发作可导致突触蛋白的表达异常、突触重塑和异常神经元网络的形成,这是难治性癫痫的病 理生理学机制之一。近年来发现突触蛋白在原发性癫痫的发病机制中同样发挥重要的作用。多个突触调控蛋白以及 突触后膜受体蛋白表达异常可导致癫痫发作。绝大多数的抗癫痫药物是以离子通道为作用靶点,但卡马西平及唑尼 沙胺可通过影响突触融合蛋白及可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子附着蛋白受体复合物的功能而发挥抗癫痫作用。 突触囊泡蛋白2A是新型抗癫痫药物左乙拉西坦、布瓦西坦和seletracetam的作用靶点。     

2005年汕头市登革热定点监测结果分析

目的 通过定点监测为汕头市登革热流行趋势的预测、预警和制定防治对策、措施提供科学依据。方法收集监测点的登革热疫情、人群抗体水平和媒介伊蚊等监测资料，用EPI2002软件统计分析。结果2005年汕头市无登革热疫情，抗登革热病毒IgG、IgM阳性率低，伊蚊幼虫孳生密度高峰在6、8、9、10月份，低谷在4、7、11月份，孳生情况随着月平均降水量、平均气温变化而变化；孳生场所以农村、暂时性容器为主。结论汕头市有登革热流行的自然、社会环境条件，人群普遍对登革热易感，8～10月是发动爱国卫生运动，清除伊蚊孳生地，预防、控制登革热流行的适当时机。     

Cohort Mortality Study in Three Ceramic Factories in Jingdezhen in China

To investigate the health impacts of crystalline silica mixed dust and other potential occupational hazards on workers in ceramic factories, a cohort study of 4851 workers registered in the employment records in 3 ceramic factories in Jingdezhen city of China between 1972 and 1974 was identified. The cohort mortality was traced throughout 2003 with an accumulation of 128970.2 person-years, revealed 1542 deaths. Standardized mortality ratios （SMRs） were calculated for the main causes of death by using Chinese national mortality rates as reference. The mortality from all causes in three ceramic factories was 12.0‰ and the cumulative mortality was 31.8%. Malignant neoplasm, cardiovascular diseases, respiratory diseases, infectious diseases were the first four illnesses that threaten workers’ life, and they accounted for 73.2% of all deaths. The results of this study showed that the standardized mortality ratio for all subjects was 1.02, which is very close to that expected on the basis of the China national mortality rates. Statistically significant mortality excesses for respiratory disease （SMR=1.36）, pneumoconiosis （SMR=37.34）, infectious disease （SMR=5.70） and pul- monary tuberculosis （SMR=3.88） were observed. The mortality of 2938 dust-exposed workers was higher than that of 1913 non dust-exposed workers. Except for pneumoconiosis, the mortality from lung cancer, non-malignant respiratory diseases and pulmonary tuberculosis in dust-exposed workers were significantly increased as compared with that in non-exposed workers, and the relative risks （RRs） were 1.86 （1.16–2.99）, 2.50 （1.84–3.40）, 1.81 （1.34–2.45）. The exposure-response relationships between cumulative dust exposure level and mortality from all causes, colorectal cancer, lung cancer, respiratory diseases, and pulmonary tuberculosis were also identified. The findings indicated that silica mixed dust in ceramic factories has harmful impact on the workers’ health and life span in ceramic factory.