Matrilin-4对大鼠牙髓损伤后修复性牙本质形成的促进作用

目的：研究Matrilin-4对大鼠牙髓损伤后修复性牙本质形成的作用,探讨其作为新型盖髓剂的可能性。方法：28只雄性Wistar大鼠,在大鼠的双侧上颌第一磨牙牙合面备洞至露髓后,左侧用含Matrilin-4的胶原蛋白海绵盖髓（Matrilin-4组）,右侧用含磷酸盐缓冲溶液（PBS）的胶原蛋白海绵盖髓（PBS组）,双侧均用玻璃离子封洞。分别于3、7、14和28 d灌流固定处死大鼠并取上颌双侧第一磨牙标本,HE染色和免疫组织化学染色观察分析各组大鼠修复性牙本质形成及成牙本质细胞中牙本质涎蛋白（DSP）的表达情况。结果：HE染色,3 d时与PBS组比较,Matrilin-4组穿髓孔下方较少量炎症细胞聚集,并可见明显的血管扩张;7 d时2组穿髓孔下方炎症反应加重,但Matrilin-4组明显轻于PBS组,且可见前期牙本质形成;14 d时Matrilin-4组露髓区域可被较连续完整的修复性牙本质桥覆盖;28d时,与PBS组比较,Matrilin-4组穿髓孔下方可见厚而完整的修复性牙本质桥,牙本质桥下面有重组的成牙本质细胞层。免疫组织化学染色,2组大鼠成牙本质细胞中DSP阳性表达强度在术后3、7和14 d呈逐渐增强趋势,28 d时减弱;盖髓后各时间点Matrilin-4组大鼠成牙本质细胞中DSP阳性表达强度均强于PBS组,且14 d时阳性表达达高峰。与PBS组比较,3、7和14 d时Matrilin-4组大鼠成牙本质细胞中DSP阳性表达强度明显升高（P<0.01）。结论：Matrilin-4对牙髓损伤后修复性牙本质的形成具有促进作用。     

谷氨酰胺对大鼠眼挫伤后视网膜HSP27和NF-κB表达的影响

目的制备大鼠视网膜挫伤模型,探讨谷氨酰胺对眼挫伤大鼠视网膜HSP27和NF-κB表达的调节作用。方法SD雄性大鼠45只,5只用于正常对照组,余下40只仿Allen’s重击法制作视网膜挫伤模型。将模型制备成功大鼠随机分为两组:模型组和Gln治疗组。每组又分12h,24h,3d,7d四个时间点,每个时间点大鼠5只。各组于给药给水停止后第2天取材,制备石蜡切片。应用免疫组织化学方法检测视网膜组织中HSP27和NF-κB蛋白的表达变化。结果正常组大鼠视网膜内均有HSP27和NF-κB蛋白表达;眼挫伤后HSP27蛋白表达逐渐下降,至3d时表达降至低谷。除12h外,模型组HSP27蛋白表达均比正常对照组低;而NF-κB蛋白表达在眼挫伤后逐渐上升,3d达峰值。除12h外,其余各组NF-κB蛋白表达均比正常对照组高;在Gln组,HSP27蛋白表达均比模型组高,而NF-κB蛋白表达均比模型组低。结论 HSP27和NF-κB参与了眼挫伤视网膜病变过程;谷氨酰胺上调了挫伤视网膜HSP27蛋白表达,下调了NF-κB蛋白表达,这可能是谷氨酰胺对眼挫伤视网膜病变产生保护作用的机理之一。     

胃肠乐对乙酸慢性胃溃疡大鼠HSP70、HSP27表达及溃疡愈合质量的影响

目的探讨胃肠乐(由党参、白术、田七、丹参、香附等组成)促进溃疡修复愈合的效应及其可能的机制.方法48只大鼠随机分为正常对照组、模型对照组及胃肠乐高、中、低剂量组和洛赛克组,复制乙酸慢性胃溃疡模型后给药12 d,计算各组溃疡指数,免疫组化法检测胃粘膜组织热休克蛋白70(HSP70)、热休克蛋白27(HSP27)的表达.结果胃肠乐高、中、低剂量组及洛赛克组胃粘膜溃疡指数均较模型对照组明显下降(P＜0.01).胃肠乐高、中、低剂量组胃粘膜HSP70、HSP27的表达均较模型对照组显著增强(P＜0.05).结论胃肠乐可促进乙酸慢性胃溃疡大鼠溃疡的愈合,提高溃疡愈合质量,此作用可能与其促进胃粘膜组织表达HSP70、HSP27有关.     

热休克诱导弹性蛋白原在培养的人真皮成纤维细胞中异常表达

目的:观察热休克对体外培养的人类真皮成纤维细胞中弹性蛋白原mRNA以及蛋白质表达的影响,以阐明环境因素中的热休克效应在皮肤日光弹力变性中所起的作用.方法:将原代培养的人类真皮成纤维细胞置于43℃水浴箱中30min,然后恢复37℃,5%(体积分数)CO2恒温培养,分别于24 h以及48 h收集标本,以Northern blot和Western blot方法分别检测弹性蛋白原mRNA及蛋白质的表达水平.结果:热休克刺激后弹性蛋白原mRNA表达明显上升,热休克后24 h上升为对照组的(163±12)%(P＜0.05),48 h上升为对照组的(221±22)%(P＜0.05),同时成纤维细胞培养上清液中弹性蛋白原的蛋白质表达水平也明显增高,24h上升为对照组的(149±12)%(P＜0.05),48 h上升为对照组的(783±10)%(P＜0.05).结论:在体外原代培养的人类真皮成纤维细胞中,热休克可诱导弹性蛋白原mRNA以及蛋白质的过度表达,提示该异常增多的弹性蛋白原可能在日光弹力变性的发生、发展中起重要作用.     

川芎嗪对大鼠反复惊厥后NCAM表达的影响

目的 研究幼年大鼠反复惊厥后大脑皮质组织神经细胞黏附分子(NCAM)蛋白表达的变化及川芎嗪干预对其的影响,探讨NCAM在幼年期惊厥性脑损伤发病机制中的作用及对川芎嗪脑损伤的可能保护机制.方法 72只20日龄健康Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为3组:正常对照组、惊厥组及川芎嗪干预组,通过三氟乙醚反复吸入(1次/d,连续6 d),制作幼年大鼠惊厥动物模型.用免疫组化(SP)法检测各组动物反复惊厥结束后1、3、7 d大脑皮质组织中NCAM蛋白的表达.结果 反复惊厥结束后1 d惊厥组大脑皮质组织NCAM蛋白表达下降,和对照组比较有显著性差异(P＜0.01).在反复惊厥后3、7 d大脑皮质组织中NCAM蛋白表达逐渐增多,与对照组无差异.川芎嗪干预组在反复惊厥结束后1、3、7 d大脑皮质NCAM蛋白表达均较惊厥组显著上调(P＜0.05).结论 ①幼年大鼠反复惊厥后NCAM表达由早期暂时降低,后逐渐增高且接近正常,提示NCAM参与了幼年期惊厥性脑损伤修复.②川芎嗪干预组上调反复惊厥后NCAM的表达,提示川芎嗪对幼年期惊厥性脑损伤的保护机制,可能与促进大脑皮质NCAM的表达增高有关.     

预防性应用不同剂量甲基强的松龙对缺血再灌注损伤大鼠脊髓热休克蛋白27表达的不同影响

目的 研究预防性运用不同剂量甲基强的松龙(MP)对脊髓缺血再灌注损伤(SCII)后热休克蛋白27(Hsp27)表达的不同影响,探讨运用MP预防SCII的最佳剂量.方法 随机将100只大鼠平均分成A、 B、 C、 D、 E五组,采用夹闭腹主动脉后再灌注的方法建立大鼠SCII模型.A组不夹闭腹主动脉,余组用上述方法制SCII模型,C、D、E三组在术前30 min分别预防性应用10、20、30 mg/kg MP,B组给予同等剂量生理盐水,都通过尾静脉注射给药.3 h后取各组大白鼠脊髓标本,行HE染色观察,并用免疫组化的方法测量Hsp27的相对含量.结果 E组大鼠神经元的形态改善最明显.E组Hsp27的表达量最高,五组之间总体上差异有统计学意义(P<0.05).结论 预防性运用30 mg/kg MP可使对脊髓缺血再灌注损伤具有保护作用的Hsp27表达上调最明显,减少脊髓缺血再灌注损伤效果最好.     

大鼠皮层神经元中磷酸化的细胞周期相关蛋白在发育过程中的表达

目的观察正常Wistar大鼠发育过程中皮层神经元的细胞周期相关蛋白及其磷酸化蛋白的表达,探讨发育过程中皮层神经元的细胞周期变化以及磷酸化细胞周期相关蛋白在其中的调控作用。方法采用免疫荧光方法观察不同发育时期CyclinD1、CDK2、P27以及磷酸化CDK2、磷酸化CDC2、磷酸化Rb表达的规律。结果在各年龄组NeuN阳性细胞数量随着年龄增加而逐渐减少。细胞周期相关蛋白(CyclinD1、CDK2、P27)在皮层神经元中广泛表达,各组间差异无显著性;磷酸化CDK2、磷酸化Rb阳性细胞的数量随着年龄增加而逐渐增多,各组间差异有显著性;磷酸化CDC2阳性细胞在各年龄组神经元中均无表达。结论随着年龄的增长,磷酸化CDK和Rb逐渐增多,使得进入细胞周期的皮层神经元增加。细胞周期相关蛋白的磷酸化调控作用可能与衰老时皮层神经元的凋亡有关。     

HSP27和HSP70在老年性白内障和透明晶状体中的表达

目的观察热休克蛋白HSP27和HSP70在老年性白内障和透明晶状体中的表达情况。方法WesternBlot法测定HSP27和HSP70在老年性白内障和透明晶状体中的表达情况。结果老年性白内障的晶状体和透明晶状体中均有HSP27和HSP70的表达。经t检验,老年性白内障晶状体中HSP27(1.08±0.33)的表达与正常对照组(0.61±0.13)相比,差异存在统计学意义(P<0.05),老年性白内障晶状体中HSP70(1.41±0.48)的表达与正常对照组(0.67±0.12)相比,差异亦存在统计学意义(P<0.05)。结论老年性白内障晶状体中HSP27和HSP70的表达高于透明晶状体。     

热休克蛋白27在大肠癌中的表达及其与淋巴结转移的关系

目的 探讨热休克蛋白27(HSP27)表达与大肠癌淋巴结转移的关系.方法 应用免疫组化方法检测68例临床大肠癌组织标本中Hsp27的表达情况.应用RT-PCR、Western blotting和免疫组化方法检测不同转移潜能大肠癌细胞株中Hsp27 mRNA和蛋白的表达情况.结果 在大肠癌组织中,热休克蛋白27的表达率与年龄、性别、淋巴结转移、临床分期无相关性(χ2test,P＞0.05),但其过表达和大肠癌淋巴结转移显著负相关(Fisher's exact test,P=0.035).应用RT-PCR、Western blotting和免疫组化方法检测结果显示Hsp27基因和蛋白在高淋巴结转移潜能的SW620细胞中呈低表达,在低淋巴结转移潜能的SW480细胞中呈高表达.结论 Hsp27和大肠癌肿瘤细胞的转移行为可能为负相关,可能在阻止其转移中发挥重要作用.     

热休克蛋白27在大鼠反流性食管炎食管组织的表达

Background  Little attention has been paid to the expression of heat shock protein 27 (HSP27) in patients with reflux esophagitis (RE), and few studies of the importance of HSP27 in esophagitis have been carried out in animal models. This study aimed to explore the expression of HSP27 in the esophageal tissue of rats with RE.

Methods  Eighty female Wistar rats were randomly divided into experimental groups A and B and control groups C and D (n=20 in each group). To establish RE, rats in the two experimental groups received pylorus and forestomach ligations, while rats in the control group received gastrostomy and gastric perforation repair. The rats in groups A and C were sacrificed 7 days after surgery, and the rats in groups B and D were sacrificed 14 days after surgery. In groups A and B, 10 and 8 rats were diagnosed with RE by pathological examination, respectively (they were included in groups A’ and B’, respectively). The histopathological diagnosis of all the lower esophageal tissues in groups C and D was normal and 20 normal specimens were randomly selected for groups C’ and D’ with 10 specimens in each group. Macroscopic and microscopic esophagitis scores were assessed for the specimens in groups A’ and B’. Lower esophageal tissues were collected from groups A’, B’, C’, and D’, and paraffin-embedded slices were made using part of the tissues. The expression of HSP27 in the tissues was detected using the two-step streptavidin-peroxidase immunohistochemical method. Some collected tissues were frozen, and expressions of HSP27 mRNA were detected using fluorescence quantitative polymerase chain reaction (FQ-PCR).

Results  Median macroscopic and microscopic esophagitis scores in groups A’ (n=10) and B’ (n=8) were 1.0 and 1.5, and 2.0 and 2.5, respectively. There were no significant differences in the macroscopic or microscopic esophagitis scores between the two groups (Z=–0.330, P=0.741; Z=–0.142, P=0.887, respectively). Immunohistochemical staining showed that HSP27 was expressed in all layers of the esophageal epithelia in RE and control rats. FQ-PCR showed that HSP27 mRNA levels in the lower esophageal tissue in RE group (groups A’ and B’) were higher than those in control group (groups C’ and D’) (Z=–0.249, P=0.001). HSP27 mRNA expression in the lower esophageal tissue was significantly different in groups B’ and D’ (Z=–3.027, P=0.002). And the levels of HSP27 mRNA expression in severe RE group (microscopic esophagitis score: 3) were higher than in mild RE group (microscopic esophagitis score: 1–2) and control group (Z=–3.396,P=0.001; Z=–3.855, P <0.001).

Conclusions  HSP27 mRNA expression in the lower esophageal tissue of rats with RE is significantly higher than in the normal controls. Although reflux is a persistent stimulating factor, increased expression of HSP27 in the lower esophageal tissue of rats with RE requires aggravated esophageal injury.

     

热休克蛋白-27与磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3在原发性肝癌中的表达及意义

目的通过检测热休克蛋白-27(HSP-27)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC-3)在原发性肝癌(PHC)中的表达,探讨二者在诊断PHC的作用及其临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学染色法检测32例PHC组织、30例肝硬化组织、25例肝脏良性占位组织及31例肝炎组织中GPC-3、HSP-27的水平,并分析其与PHC的临床因素之间的关系。结果 HSP-27和GPC-3均在肝癌组织中高表达,与肝硬化、肝脏良性占位、肝炎组织中的表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HSP-27在肝癌组织的表达与肿瘤的病理分级及TNM分期有关,但GPC-3的表达与肿瘤的病理分级及TNM分期无关。结论 HSP-27、GPC-3在肝癌组织中高表达,与肝癌的发生、发展、转移有关,可能成为新的肿瘤标志物。     

热休克蛋白27在单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质损伤中的表达

目的：研究肾小管间质损伤大鼠肾组织中热休克蛋白27(HSP7)的表达及其可能的作用。方法：建立单侧输尿管梗阻(UU0)肾小管间质损伤大鼠模型，应用组织病理学和免疫组织化学SP法观察模型组和对照组大鼠肾小管间质损伤情况，以及HSP27的表达。结果：对照组肾小球、少数肾小管和集合管HSP27弱阳性。模型组梗阻肾皮质HSP27的表达明显上调，分布于扩张的肾小管，肾小管HSP27阳性表达率于实验第3天达高峰，以后随着肾小管间质损伤程度的加重逐渐下降，并与肾小管损伤指数呈负相关。结论：肾小管间质损伤过程中，皮质肾小管HSP27表达明显上调：HSP27的表达可能是损伤肾小管上皮细胞的自身保护反应。     

HSP27和P53蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

目的：分析热休克蛋白27（ HSP27）及P53蛋白在胃癌组织及癌旁组织中的表达及其与临床病理参数之间的关系,探讨其作为预后指标的意义。方法建立组织芯片,通过免疫组化SP法检测75例无术前放化疗史的胃癌手术标本和52例癌旁组织中HSP27及P53蛋白的表达情况,并对随访患者进行生存分析。结果 HSP27阳性表达率在胃癌组织中为64．0％,在癌旁组织中为30．8％,2组差异有统计学意义（ P＜0．01）;HSP27表达与肿瘤TNM分期、分化程度、肿瘤大小和淋巴结转移有关（ P＜0．05）。 P53蛋白阳性表达率在胃癌组织中为68．0％,在癌旁组织中为7．7％,2组差异有统计学意义（P＜0．01）;P53蛋白表达与肿瘤TNM分期和分化程度有关（P＜0．05）。 Pearson相关分析显示,在胃癌中,HSP27与P53表达呈正相关（r＝0．319,P＜0．01）。 Kaplan -Meier生存分析结果显示,HSP27高表达与胃癌预后不良有关（χ2＝13．109,P＝0．000）。经Cox比例风险回归模型分析显示,肿瘤的分期、大小、有无淋巴结转移以及HSP27的表达与患者预后有关（ P＜0．05）。结论 HSP27高表达与胃癌有关,提示HSP27可能在胃癌的发生、发展中起重要作用。 HSP27与P53表达呈正相关,提示两者在肿瘤的发生、发展中可能具有协同作用。     

热休克蛋白70和热休克蛋白27在宫颈鳞癌中的表达及其意义

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)和热休克蛋白27(HSP27)在宫颈鳞癌中的表达及其相关性。方法应用免疫组织化学方法检测HSP70、HSP27在60例宫颈鳞癌,18例宫颈上皮内瘤变(C IN),7例正常宫颈组织中的表达。结果宫颈鳞癌组织中HSP70,HSP27阳性表达率与正常宫颈组织相比差异有统计学意义(P<0.05);宫颈鳞癌中HSP70的阳性表达与病理分级、临床分期、淋巴结转移密切相关(P<0.05),HSP27的阳性表达与病理分级密切相关(P<0.05);HSP70与HSP27在宫颈鳞癌中的表达无相关关系(P>0.05)。结论HSP70、HSP27均在宫颈鳞癌发生和发展中起重要作用,HSP70可能作为判断宫颈癌预后的重要指标。     

Expression of Heat Shock Protein 70 and 27 in Non-small Cell Lung Cancer and Its Clinical Significance

The heat shock proteins （HSPs） 70 and HSP 27 expression in patients with non-small cell lung cancer （NSCLC） was studied and the relation.ship between HSP 70 and HSP 27 with the clinicopathological features of NSCLC was investigated. The expression of HSP 70 and HSP 27 was detected in tumor tissues from 60 patients with NSCLC by S-P immunohistochemistry. The findings were analyzed in combination with the histological types, histopathological differentiation, lymph node metastasis, patients＇ clinical stages, smoking history and gender. The results showed that of the 60 NSCLC tissue specimens studied, the immunoreactivity of HSP 70 and HSP 27 was detected in 47 （78.3 %） and 43 （71.7 %） specimens, respectively. A positive correlation was found between the overexpression of HSP 70 and HSP 27. The histopathological differentiation, lymph node metastasis, clinical stages and smoking history were correlated to the expression of HSP 70, but not to the expression of HSP 27. No statistical significance was observed in histological types and gender with respect to both HSP 70 and HSP 27 expression. It is suggested that the HSP 70 expression is a powerful and significant prognostic indicator and is related to histopathological differentiation, lymph node metastasis, patients＇ clinical stages, smoking history, whereas HSP 27 expression is not.     

HSP27在左侧结肠癌和右侧结肠癌差异表达的实验研究

目的：应用蛋白质组学技术筛选左侧结肠癌和右侧结肠癌组织中差异表达的蛋白,为左侧结肠癌（1eft sided coloncan cer,LSCC）和右侧结肠癌（right sided colon cancer,RSCC）在肿瘤生物学方面的差异提供分子遗传学依据。方法：收集人LSCC和RSCC组织标本,置-80℃超低温冰箱中保存。应用双向凝胶电泳、质谱分析和生物信息学分离和鉴定LSCC和RSCC中差异表达的蛋白质。应用RT—PCR,Western印迹和免疫组织化学技术检测差异表达蛋白的表达状态。结果：筛选出55个差异蛋白质点,成功鉴定出21种差异蛋白质。与RSCC比较,14种蛋白在LSCC表达上调,7种蛋白在LSCC表达下调,其中LSCC中HsP27表达下调。通过RT—PCR,Western印迹和免疫组织化学方法证实：在mRNA和蛋白水平,LSCC中HSP27的表达均低于RSCC。结论：LSCC和RSCC的蛋白质组存在差异表达,特别是HSP27在mRNA和蛋白水平均存在差异,这些可能是LSCC和RSCC生物学行为差异的分子遗传学基础。     

热休克蛋白27在缺血后处理肾组织中的表达及意义

目的 观察热休克蛋白27（HSP27）在缺血后处理（IPO）肾组织中的表达及分布情况,探讨其在肾缺血后处理中的作用.方法 结扎右侧肾蒂,夹闭左侧肾蒂60 min、再灌注24 h制备肾缺血/再灌注损伤模型.雄性SD大鼠24只,随机分为假手术组（S组）、缺血/再灌注组（I/R组）、缺血后处理组（IPO组）,每组8只.再灌注24 h后处死大鼠,腹主动脉取血并切取左肾.测定血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）浓度;光镜下观察肾组织病理学改变;免疫组织化学方法检测肾组织中HSP27的表达;TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡指数（AI）.结果 与S组比较,I/R组Cr和BUN浓度显著升高,组织损伤明显,肾组织中HSP27表达增多,肾小管上皮细胞凋亡指数较高（P〈0.05）;与I/R组比较,IPO组Cr和BUN浓度显著降低,组织损伤较轻,HSP27表达进一步增强,肾小管上皮细胞凋亡指数较低（P〈0.05）.结论 肾缺血后处理能上调肾组织中HSP27的表达,抑制肾小管上皮细胞凋亡,继而减轻肾缺血/再灌注损伤.