兔视网膜色素上皮细胞移植的实验研究

目的 用改良的二步酶法制备视网膜色素上皮（RPE）细胞悬液，不做玻璃体切割，直接进行视网膜下间隙的移植。方法 用酶I（含220kU/L)透明质酸酶和0.1%胰蛋白酶）分离视网膜神经上皮层与RPE之间的联系，再用酶Ⅱ（含0.25%胰蛋白酶）将RPE从玻璃膜上分离下来获得悬浮的RPE细胞，用特制的移植针头通过人为造成的局限性视网膜脱离区将其移植入受体视网膜下间隙。结果 术后2周供体RPE细胞呈单层排列于受体视网膜下间隙并存活，未见明显炎症反应。电镜观察术后5周供体RPE细胞位于受体Bruch膜上并与受体感光细胞外节盘膜形成镶嵌关系。结论 改良的内路法可以将供体RPE细胞成功移植在受体眼视网膜下间膜，并至少存活7周。     

心肌细胞凋亡与急性心脏移植排斥的关系

目的：探讨心肌细胞凋亡,Fas蛋白,FasL蛋白表达与心脏移植急性排斥的关系。方法：利用大鼠腹腔异位心脏移植模型。实验组为异基因心脏移植,供体为Wistar大鼠,受体为SD大鼠。对照组为同基因心脏移植,供体与受体均为SD大鼠,设立4个观察点,分别为术后第1,3,5,9天,每个观察点7只动物,应用免疫组化法检测心肌组织Fas蛋白,FasL蛋白的表达,应用3－原位末端标记法（TUNEL法）检测凋亡心肌细胞。结果：（1）实验组移植心肌术后第3天即有一定量TUNEL阳性心肌细胞,术后第5天TUNEL阳性心肌细胞数达高峰,持续至术后第9天,对照组心肌检测到极少量的TUNEL阳性细胞。（2）术后第5,9天标本,实验组检测到大量FasL阳性心肌浸润细胞。（3）实验组与对照组心肌都检测到大量Fas阳性信号。结论：（1）心肌细胞凋亡是心脏移植排斥心肌细胞死亡的一种方式。（2）心脏移植排斥时同时检测到了Fas蛋白,FasL蛋白,TUNEL（＋）心肌细胞,可能是表达FasL的心肌浸润细胞诱导Fas阳性心肌细胞凋亡,介导移植排斥。     

自体静脉移植术后血管平滑肌细胞凋亡与增殖的研究

目的检测静脉移植术后不同时期血管平滑肌细胞(VSMCSs)增殖与凋亡,进一步探讨其在血管内膜增生(IH)发生中的作用.方法60只Wistar大鼠建立自体静脉移植模型,自身正常静脉做对照,应用DNA原位缺口末端标记技术(TUNEL)及免疫组织化学方法检测不同时期(术后1、2、4、6、8周)凋亡及Ki-67表达情况,并作相关分析.结果术后1～8周,移植静脉VSMCS的TUNEL及Ki-67的阳性表达均显著高于对照组(P＜0.01).术后1、2周,二者表达均达高峰,且TUNEL表达低于Ki-67表达;而术后4～8周,TUNEL表达高于Ki-67表达.二者的表达具有显著相关性(r=0.813,P＜0.05).结论静脉移植术后VSMCSs的增殖与凋亡共存,且具有明显相关性,提示二者均参与静脉的重塑过程;术后移植静脉的再狭窄可能与VSMCS的凋亡和增殖失衡有关;对再狭窄的防治应采用调节VSMCS增殖和凋亡平衡的联合策略.     

供体脾脏对大鼠移植胰腺细胞凋亡的影响

目的: 观察供体脾脏对胰腺移植大鼠免疫反应的影响。方法: 制作异基因大鼠胰、脾、十二指肠联合移植模型,观察供体胰腺的病理学改变,测定供体胰腺组织中细胞凋亡的变化、转化生长因子β1 (TGF β1 )mRNA的表达及CD4+ T淋巴细胞和CD8+ T淋巴细胞的变化。结果: 胰、脾、十二指肠联合移植组:术后 3 d胰腺小叶间质水肿,腺泡细胞和胰岛细胞轻度水肿;术后5 d炎细胞浸润,腺泡细胞灶状坏死;术后7 d腺泡细胞和胰岛细胞部分坏死、自溶。胰、十二指肠移植组:术后3 d胰腺腺泡细胞片状坏死;术后 5 d胰腺小叶和部分胰岛细胞坏死;术后7 d腺泡细胞大片坏死,胰岛结构消失。胰、脾、十二指肠联合移植组供体胰腺组织中凋亡细胞数和 TGF β1mRNA的表达于术后各时点均高于胰、十二指肠移植组(P<0.001);其 CD4+ 和 CD8+ T细胞数高于正常对照组,但低于胰、十二指肠移植组(P<0.001)。结论: 细胞凋亡和 TGF β可减轻受体大鼠对供体胰腺的免疫排斥反应;调高供体胰腺组织TGF βmRNA的表达是供体脾脏发挥免疫抑制作用的机制之一。     

TUNEL法检测ER(-)乳癌细胞凋亡和Ki-67表达的研究

目的：探讨雌激素受体阴性乳癌细胞中Ki-67与细胞凋亡之间的关系。方法：通过1．25（OH）2D3诱发雌激素受体阴性乳癌细胞株MDA－MB－435s凋亡,采用MTT法检测细胞增殖情况,TUNEL法检测细胞凋亡指数,免疫组化法检测Ki-67阳性表达指数,进行相关性分析。结果：在10^-8mmol/L 1.25(OH)2D3诱发MDA－MB－435s凋亡过程中,肿瘤细胞 凋亡指数与Ki-67阳性表达指数呈负相关。结论：对凋亡指数及Ki-67阳性表达指数的综合分析,可全面反映细胞凋亡和增殖的平衡状态,对于判断肿瘤细胞的增生具有参考价值。     

大鼠坐骨神经损伤修复术后相应脊髓节段Bcl-2、Bax蛋白表达及神经细胞凋亡

目的探讨成年大鼠坐骨神经损伤修复术后相应脊髓节段Bcl-2、Bax蛋白表达及神经细胞凋亡为临床治疗周围神经损伤提供实验依据。方法选取健康成年大鼠68只,随机分为正常对照组、假手术组和实验组,分别于术后不同时间取相应脊髓节段做HE染色、TUNEL染色、免疫组化染色,进行脊髓切片形态观察、检测神经细胞的凋亡及脊髓Bcl-2、Bax蛋白表达。结果假手术组术后无阳性变化。实验组术后脊髓前角运动神经元胞体数目减少,1d后可见脊髓内TUNEL阳性细胞,14d后表达至高峰。1d后,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达,14d后达高峰,28d后仍有表达。Bcl-2/Bax值越小,凋亡细胞数量越多。结论大鼠坐骨神经损伤修复术后相应脊髓节段存在神经细胞凋亡,Bcl-2/Bax比值的变化是神经凋亡的重要指标。     

大鼠肺移植受体OB与细胞凋亡关系的初步研究

目的探讨大鼠肺移植受体闭塞性细支气管炎(OB)与细胞凋亡的关系。方法采用大鼠气管异位移植模型模拟肺移植术后OB。随机分为对照组、移植组和免疫抑制剂治疗组,分别于术后7、14和28?d取出移植物。原位末端标记法（TUNEL）检测移植气管细胞凋亡情况;免疫组织化学EnVison法检测移植气管Caspase 3和Bax基因蛋白的表达。结果① 动物模型气管HE染色检测到术后排斥反应,与OB组织学改变符合;② TUNEL检测到大鼠OB模型存在细胞凋亡,免疫抑制剂治疗组较移植组细胞凋亡数少,移植中后期两组差异有统计学意义（P＜0.05）;③ 免疫组织化学检测到大鼠OB模型Caspase 3、Bax基因蛋白表达在移植组和免疫抑制剂治疗组增高,移植中后期两组差异有统计学意义（P＜0.05）。结论① 大鼠肺移植受体OB与细胞凋亡相关;② 抑制细胞凋亡可治疗肺移植受体OB。     

重组hIL-10诱导皮肤移植家兔T细胞凋亡的探讨

目的 探讨重组hIL-10诱导皮肤移植家兔与外周血T细胞凋亡的关系。方法 将18只受体家兔随机分成重组hIL-10实验组(低剂量5μg/kg/d;高剂量10μg/kg/d),CsA阳性对照组（低剂量5mg/kg/d;高剂量10mg/kg/d）,hIL-10+ CsA联合组（5μg + 5mg kg/d）,生理盐水阴性对照组（1ml/d）共6组,每组3只;供体18只。实验组及对照组均在术前1d及术后9d持续肌肉注射药物。并观察各组移植术后皮片情况。 流式细胞术检测各组家兔术后1、4、7、14d外周血T细胞凋亡率的变化。用ELISA法检测家兔术后1、4、7、14d血清中细胞因子IL-2的变化。结果 重组hIL-10具有诱导外周T细胞凋亡,下调外周血T细胞所诱导的IL-2水平,并可延长皮肤移植存活时间,其作用呈剂量依赖性;重组hIL-10与免疫抑制剂CsA联用,显示二者具有协同效应。结论 重组hIL-10对家兔皮肤移植排斥有抑制作用,延长移植皮片存活时间,其机制可能是通过诱导外周血T细胞凋亡,下调外周血IL-2水平,实现免疫抑制或诱导免疫耐受有关。     

柔红霉素和Bax过表达对培养人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响

目的　观察柔红霉素 (DNR)和外源 bax基因转染对培养人视网膜色素上皮 (RPE)细胞凋亡的影响 .方法　通过脂质体法将外源 bax基因转入 RPE细胞 .采用 TUNEL荧光染色方法 ,观察 2 0 0 μg·L- 1 DNR作用 12 h对正常和转基因后 RPE细胞凋亡的影响 ;同时采用专用试剂盒 ,通过荧光比色法检测细胞碎片中半胱氨酸蛋白酶 - 3(Caspase- 3)的活性 .结果　正常 RPE细胞可见 TU NEL 阳性着色 ,经 bax基因转染和 DNR作用后阳性细胞比例增加 ,而且染色加深 .经DNR作用不同时间后 ,转基因 RPE细胞的 Caspase- 3活性升高比例均大于正常细胞 Caspase- 3活性升高的比例 (P<0 .0 1) .结论　 DNR可以诱导 RPE细胞的凋亡 . bax基因转染可以促进细胞的凋亡 ,并增加 DNR诱导凋亡的敏感性     

硫酸软骨素酶ABC联合骨髓间充质干细胞移植对脊髓损伤后神经功能的恢复作用

目的探讨骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)移植联合硫酸软骨素酶ABC(chondro-itinrase ABC,Ch ABC)降解对脊髓损伤后神经功能修复作用。方法成年雄性SD大鼠60只,制作脊髓损伤模型并按随机数字表法分成4组(n=15):假手术组(A组)、Ch ABC降解组(B组)、BMSCs移植组(C组)、Ch ABC联合BMSCs移植组(D组)。4组分别在术后7、14 d观察记录动物情况并处死动物进行标本检测。伤后7、14 d,BBB评分评价大鼠后肢运动感觉功能;伤后7 d TUNEL法检测神经细胞凋亡情况;伤后14 d,HE染色测损伤区总面积;免疫组化法观察胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、神经丝蛋白-200(NF-200)和勿动蛋白A(Nogo-A)的表达。结果伤后7 d各组BBB评分比较差异无统计学意义(P>0.05);伤后14 d,4组BBB评分分别为(6.33±1.00)、(7.25±0.96)、(7.33±0.58)、(9.75±0.96)分。D组BBB评分明显高于其他3组(P<0.05);伤后14 d,HE染色结果显示,4组损伤区均形成空洞,4组空洞相对面积分别为(4.44±0.18)、(3.70±0.21)、(3.23±0.22)、(2.33±0.31)mm2,D组空洞面积显著小于其他3组(P<0.05);伤后14 d GFAP/Nogo-A免疫组化染色结果显示D组GFAP/Nogo-A表达低于他3组(P<0.05);NF-200免疫组化染色结果显示D组阳性表达显著高于其他3组(P<0.05);伤后7 d TUNEL法检测结果显示D组阳性细胞数显著低于其他3组(P<0.05)。结论 Ch ABC联合BMSCs移植可以溶解胶质瘢痕,减少神经元细胞凋亡,促进神经纤维再生并越过脊髓损伤区域,对脊髓损伤后有明显的修复作用。     

Long-term studies on allotransplantation of rabbit retinal pigment epithelial cells double-labelled with 5-bromodeoxyuridine and natural pigment

Ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ（ＲＰＥ）ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ,ａｔｒｏｐｈｙａｎｄｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｈａｖｅｂｅｅｎｉｍｐｌｉｃａｔｅｄａｓｔｈｅｃａｕｓｅｏｆｍａｎｙｒｅｔｉｎａｌｄｉｓｅａｓｅｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇａｇｅ?..     

异体恒河猴视网膜色素上皮细胞移植探讨

目的 观察供体视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)在视网膜下腔生长情况,为视网膜色素上皮细胞移植的临床应用提供实验基础.方法 体外获取恒河猴视网膜色素上皮细胞经传代培养至第3代,用5-溴脱氧尿嘧啶标记后经外路将供体色素上皮细胞移植到受体恒河猴视网膜下腔,用光镜和电镜观察移植细胞的存活情况.结果 供体细胞在受体视网膜下腔形成有极性的单细胞层,贴附于Brueh膜上,并形成微绒毛和基底内褶,细胞内可见吞噬体.结论 外路法是一种切实可行的视网膜色素上皮移植方法,移植后的细胞可存活并恢复正常的结构和功能.     

survivin、Ki-67在口腔癌中的表达及预后意义

目的:探讨survivin及Ki-67在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达、预后意义及相关性。方法:来源于外科手术的诊断用组织切片接受了survivin及Ki-67蛋白的免疫组织化学染色。标记指数(LI)代表阳性细胞百分率。结果:具有低survivin表达的仅接受外科手术治疗的患者拥有更好的生存率(P<0.01),而Ki-67 LI与患者的预后无关。此外,survivin LI与Ki-67无相关性。结论:在评价OSCC上survivin较Ki-67更敏感,有助于患者预后判断。     

Ki-67的表达与喉癌转移或复发的关系

目的　研究 Ki- 6 7在喉良恶性肿瘤的表达情况及其与喉癌预后的关系。　方法　收集 33例喉良恶性肿瘤病理标本 ,标准链球菌卵白素标记生物素方法标记并记数 Ki- 6 7阳性表达细胞数 ,观察 Ki- 6 7在喉肿瘤的表达情况。　结果　 Ki- 6 7在喉癌的表达明显高于良性肿瘤 ,差异有显著性 (P<0 .0 5 )。喉癌有淋巴结转移或复发的病例Ki- 6 7记数明显高于无转移或复发的病例 (P<0 .0 5 )。　结论　 Ki- 6 7在喉癌的表达明显高于良性肿瘤 ,其表达水平与喉癌的增殖活性一致 ,可代表喉癌的增殖水平     

实验性光损伤大鼠视网膜光感受器细胞凋亡的研究

目的：观察较强可见光所致大鼠视网膜光感受器细胞凋亡现象，探讨视网膜光化学损伤发病机制。方法：取健康成年SD大鼠50只，随机分成正常对照组（CON）、光损伤后1天（D1）、3天（D3）、5天（D5）、7天（D7）组，每组10只。各组大鼠在12h明12h暗环境中饲养7天，然后暗适应36h。D1、D3、D5、D7组大鼠采用4178Lux照度的可见光进行12h间歇光照射，连续3天，总计36h，然后在正常环境中分别饲养1天、3天、5天、7天。10％水合氯醛麻醉大鼠，摘取眼球，制备视网膜石蜡切片及超薄切片，行HE染色、TUNEL法标记及重金属染色，光镜、透射电镜观察，MIAS-1000图像分析系统检测。结果：正常大鼠视网膜组织结构层次清楚，外核层排列规则，染色质电子密度均匀。TUNEL法染色阴性。光照后1天，外核层开始变薄，其厚度减少11.88％。核染色质开始固缩。可见少量TUNEL法标记的阳性细胞核，染色质向核膜下聚集，呈现典型的凋亡细胞表现。光照后3天，外核层厚度减少26.80％。电镜下核染色质向中心聚集。TUNEL法标记的凋亡细胞增加。光照后5天，外核层厚度减少39.76％。TUNEL法标记的凋亡细胞更。光照后7天，外核层厚度和TUNEL法标记的凋亡细胞数与光照后5天基本相似。视网膜色素上皮细胞、节细胞及内核层均无明显变化。也未了现炎症细胞。结论：实验性光损伤导致大鼠光感受器丧失，光感受器丧失的性质为细胞凋亡。实验结果初步证实光感受器细胞凋亡是实验性大鼠视网膜光损伤的重要机制。     

家兔视网膜色素上皮移植细胞ACP酶的功能研究

将长耳白兔视网膜色素上皮细胞（ＲＰＥ）悬液植入到青紫蓝兔视网膜下腔，然后移植细胞的结构及酸性磷酸酶（ＡＣＰ）的活性恢复过程进行了动态观察分析，包括用直接检眼镜、透射电镜、酶组织化学及计算机图像分析系统等方法与手段。结果：移植细胞的超微结构及毗邻关系在术后第１４ｄ恢复正常，ＡＣＰ酶的活性在术后第３ｄ开始恢复，第７ｄ恢复加速，第２１ｄ恢复正常。提示：移植的ＲＰＥ细胞能够成活，其结构的恢复先于功能恢复，并能代替原位细胞执行生理功能。     

肿瘤坏死因子对人鼻咽癌CNE3细胞增殖相关基因蛋白表达的影响

目的 :探讨肿瘤坏死因子 ( TNFα)对人鼻咽癌 CNE3细胞生长相关基因表达的影响。方法 ;体外培育的人鼻咽癌低分化上皮细胞株 CNE3,通过 MTT细胞毒试验确定TNFα的最佳抑制剂量 ,用免疫组织化学技术观察 TNFα作用 48h后 ,CNE3细胞中增殖相关的几种蛋白表达的变化。结果 :TNFα可下调 PCNA、Ki- 67、p2 1 ras、mtp5 3等蛋白的表达 ,增强 p2 1 WAF1蛋白表达。结论 :TNFα可通过影响有关细胞周期进程基因蛋白表达而抑制细胞生长     

GST-π、Ki-67的表达与体质量指数在直肠癌预后中的临床意义

目的：探讨直肠癌组织GST-π、Ki-67的表达及患者体质量指数（BMI）与患者临床生物学特征的相关性及临床意义。方法：收集温州医科大学附属第二医院2010年1月至2013年1月共308例直肠癌患者的临床资料、术后病理及5年生存率。分析BMI及肿瘤指标（GST-π、Ki-67）的表达与患者临床及病理特征的相关性,进一步分析BMI与GST-π、Ki-67表达之间的相关性及临床意义。分析Ki-67高阳性患者5年生存率与BMI的关系。结果：肿瘤组织Ki-67的高表达与TNM分期、组织浸润深度及术后5年生存率低相关（P ＜0.05）。与正常BMI组相比,消瘦组且Ki-67的表达高阳性患者5年生存率偏低（P ＜0.05）。GST-π的阳性表达与消瘦、肿瘤位置低、淋巴结转移及较高的TNM分期显著相关（P ＜0.05）。结论：结合分析BMI与GST-π、Ki-67的表达水平及相关性,对评估肿瘤的恶性度、预后情况起到重要作用。     

Effects of Peptide Nucleic Acids against Ki-67 Gene on the Proliferation and Apoptosis of Human Renal Carcinoma Cell Line

Ki-67 antigen is a DNA-binding protein which is an absolute requirement for proliferation of tumor cells[1]. Since transformation of malignant cells is frequently associated with high cell proliferation and proliferation is closely associated with the Ki-67 protein labeling index, this protein may serve as a potential target for cancer therapy although a causative involvement of Ki-67 ex-pression has not been conclusively demonstrated so far. PNAs are synthetic structure homologues of antise…