过氧化氢酶高表达抑制活性氧诱导的人晶状体上皮细胞凋亡

晶状体上皮细胞(lens epithelial cell,LEC)凋亡是除先天性白内障外各种类型白内障发生的共同分子机制,活性氧损伤是LEC凋亡的主要原因。本研究以过氧化氢为处理因素,探讨活性氧诱导LEC凋亡的机制;同时采用稳定转染的方法,提高LEC过氧化氢酶(catalase,CAT)的表达水平,观察其对活性氧诱导的LEC凋亡的抑制作用。     

人及小鼠白内障晶状体上皮细胞凋亡的超微结构

目的 探讨人老年性白内障及小鼠先天性白内障与其晶状体上皮细胞凋亡的关系。方法 用透射电镜观察４例老年性白内障患者及２例先天性白内障小鼠晶状体上皮细胞凋亡的超微结构,并分别与同类正常晶状体上皮细胞超微结构进行比较。结果 老年性白内障患者及先天性白内障小鼠晶状体上皮细胞中均可见凋亡细胞,而正常晶状体未见凋亡细胞。结论 人老年性白内障及小鼠先天性白内障的发生均与其晶体上皮细胞的凋亡有关。     

晶状体上皮细胞凋亡与硒性白内障关系的实验研究

目的 探讨晶状体上皮细胞凋亡与亚硒酸钠诱发的硒性白内障形成的关系。方法 给ＳＤ大鼠注射亚硒酸钠后１,３,７天剥取日状体吓膜。用流式细胞仪（ＦＣＭ）计数晶状体上皮细胞凋亡百分率,ＤＮＡ片断凝胶电泳检测晶状体上皮细胞核提取物,并应用透射电镜观察晶状体上皮细胞凋亡的开矿学变化。结果 给药后第１天晶状体上皮细胞凋亡百分率即显著增高,第３天达高峰,以后逐渐下降。而晶状体混浊程度持续加重,给药后第７天形成典型     

老年性白内障晶状体上皮细胞凋亡的DNA片段分析及TUNEL检测

目的 探讨老年性白内障晶状体上皮细胞凋亡的生化特征。方法 用ＤＮＡ片段分析及ＴＵＮＥＬ法共检测３１例老年性白内障患者晶状体上皮细胞凋亡。结果 ＤＮＡ片段分析显示,老年性白内障患者晶状体上皮细胞有ＤＮＡ“梯状”图谱,而健康成年人晶状体上皮细胞未见ＤＮＡ断裂现象;ＴＵＮＥＬ检测发现,老年性白内障患者晶本上皮细胞中有凋亡细胞,而健康成年人晶状体上皮中无明显的凋亡细胞。结论 老年性白内障发生与晶状体上皮细     

紫外线诱导晶状体上皮细胞凋亡的实验研究

目的 探讨紫外线对体外培养的牛眼晶状体上皮细胞凋亡作用。方法 以TUNEL技术和DNA片段分析法研究紫外线照射牛晶状体后不同时间晶状体上皮细胞发生凋亡的情况。结果 经紫外线照射后,TUNEL法显示,照射组晶状体上皮细胞中有凋亡细胞,对照组晶状体上皮细胞中无明显的凋亡细胞;DNA片段分析发现照射组晶状体上皮细胞有DNA“梯状”图谱,而对照组晶状体上皮细胞未见DNA断裂现象。结论 紫外线可诱导牛晶状体上皮细胞发生凋亡。     

半胱氨酸天冬氨酸酶在过氧化氢诱导大鼠晶状体上皮细胞凋亡中的表达

目的 探讨半胱氨酸天冬氨酸酶（caspase3)在氧化损伤致大鼠晶状体上皮细胞凋亡过程中的表达及意义。方法 离体大鼠晶状体于MEM培养液中培养，实验组加入终浓度为2mmol/L的过氧化氢（H2O2），对照组不加H2O2，观察培养过程中两组晶状体混浊程度；透射电镜下观察晶状体上皮细胞超微结构改变；免疫组织化学方法测定细胞中caspase3表达。结果 在H2O2作用下随培养时间延长，晶状体混浊度加重，伴随晶状体上皮细胞凋亡增加；caspase3表达量随细胞凋亡及晶状体混浊度的增加而增加。结论 晶状体上皮细胞凋亡是氧化损伤诱发白内障模型的细胞学基础；caspase3可能参与晶状体上皮细胞凋亡和白内障的形成，在白内障的发病机制中占有重要地位。     

细胞凋亡与白内障

细胞凋亡为一种区别于细胞坏死的特殊细胞死亡形式已引起人们的极大关注,包括眼科在内在各个生物医学学科对细胞凋亡的研究正日益深入。阐述了细胞凋亡的形态及生化特征,细胞凋亡的诱导,信号传递途径及其基因调控,并详细叙述了国外关于细胞凋亡与白内障关系研究的最新进展。     

白内障晶状体上皮细胞端粒酶与凋亡增龄性研究

目的 探讨白内障晶状体上皮细胞端粒酶活性的表达随着年龄的增长与凋亡的关系,及其在白内障发生发展中的作用机制.方法 选取行超声乳化白内障手术的患者91例91眼,取晶状体前囊膜.根据年龄分为三组,即Ⅰ组为≤30岁的患者11例,Ⅱ组为31-60岁的患者30例,Ⅲ组为≥61岁的患者50例.采用脱氧核苷酸末端转移酶缺口标记原位细胞检测法(the terminal deoxynueleotidyl transferass (TDT)-medinted dUTP nick-end lsbeling(TUNEL)检测三个不同年龄组白内障患者晶状体上皮细胞的凋亡细胞.采用TRAP-ELISA法检测三个不同年龄组白内障患者晶状体上皮细胞的端粒酶活性.结果 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组白内障晶状体上皮细胞凋亡百分率分别0%、13%、23%.三组白内障晶状体上皮细胞中端粒酶活性随着年龄增高明显降低.各项指标经统计学分析具有统计学意义(P＜0.05).结论 随着年龄的增长白内障晶状体上皮细胞端粒酶的活性逐渐降低,凋亡逐渐增强,端粒酶活性的降低促进了晶状体上皮的凋亡,是引起发生白内障的一个重要机制.     

牛磺酸抑制晶状体上皮细胞凋亡的实验研究

目的 探讨牛磺酸对过氧化氢所诱发的晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用。方法 取兔晶状体离体培养，分为对照组、H2O2氧化损伤组、氧化损伤同时加牛磺酸共3组，每组64只晶状体，分别以不同时限观察各组晶状体混浊情况，DNA缺口末端原位检测法(TUNEL法)及DNA片段分析检测各组晶状体上皮细胞凋亡情况。结果 牛磺酸组的晶状体混浊情况和晶状体上皮细胞凋亡率均明显低于H2O2氧化损伤组，与对照组差别无统计学意义。DNA片段琼脂糖凝胶电泳：H2O2组培养24、36、48及72h各时限均呈现凋亡细胞的典型梯状条带；而培养24h的对照组、牛磺酸组均未出现此变化而仅呈现正常细胞电泳条带。结论 牛磺酸可抑制H2O2氧化损伤所诱导的兔晶状体上皮细胞凋亡，从而延缓或减轻白内障形成。     

转化生长因子β诱导晶状体上皮细胞凋亡

目的 探讨转化生长因子β（ＰＧＦ－β）对体外培养的牛眼晶状体上皮细胞凋亡的作用。方法 ＭＴＴ法测定细胞经不同浓度ＴＧＦ－β作用后的增殖情况;以ＴＵＮＥＬ技术研究ＴＧＦ－β作用不同时间后细胞凋亡的变化。结果 ＴＧＦ－β可显著抑制晶状体上皮细胞的增殖,抑制率高达３５％。原位凋亡测定显示ＴＧＦ－β作用３０ｍｉｎ至８小时可明显诱导晶体上皮细胞凋亡,阳性细胞核由边缘着色逐渐变为整个核均匀 以。结论 转化生长     

Calpains在过氧化氢诱发大鼠晶状体上皮细胞凋亡中的机制探讨

目的 探讨calpains住过氧化氢(H2O2)诱发大鼠离体晶状体上皮细胞(LECs)凋亡中的可能机制。方法 离体培养大鼠品状体，阴性对照组培养液中不加H2O2；阳性对照组加H2O2；实验组同时加入H2O2和ealpains抑制剂PD150606。光学显微镜下观察3组品状体混浊程度的改变并行图像分析，秩和检验分析，用流式细胞术(FCM)检测H2O2对大鼠LECs凋亡的影响，单因素方差分析3组LECs凋亡数量的改变。结果 H2O2可明显诱发大鼠离体品状体产生白内障及LECs凋亡，PD150606可部分抑制H2O2诱发大鼠晶状体的混浊和LECs的凋亡，与阴性对照组和阳性对照组比较，差异有显著性意义(P=0．000，P=0．006)。结论 Calpains表达的激活并引发随之的大鼠LECs的凋亡，可能是H2O2诱发离体大鼠产生白内障的机制之。Calpains抑制剂PD150606可部分抑制H2O2诱发的大鼠LECs的凋亡，从而部分抑制大鼠白内障的产生。     

氧化性白内障中晶状体上皮细胞内Ca2+浓度的变化

目的 通过测定过氧化氢诱发的白内障中晶状体上皮细胞内Ca^2 浓度的变化，探讨Ca^2 浓度的改变在氧化性白内障发生机制中的作用。方法 用过氧化氢诱发实验组离体培养的大鼠晶状体产生白内障，用Fura-2／AM荧光标记法测定晶状体上皮细胞胞浆内Ca^2 的浓度，并与对照组正常晶状体相比。结果 经过氧化氢作用的实验组，6、12和24h时，晶状体上皮细胞胞浆内Ca^2 浓度与对照组相比明显升高，差异有显著性(P=0．001，0．000，0．000)。结论 本研究证实过氧化氢作用于大鼠晶状体后，其上皮细胞内Ca^2 浓度明显升高，从而为Ca^2 依赖的蛋白水解酶如钙蛋白酶等的激活创造必要条件。     

热休克预处理对晶状体上皮细胞过氧化氢氧化损伤的保护作用

目的热休克预处理诱导的热休克蛋白27对晶状体上皮细胞的保护作用,并初步探讨其机制。方法体外培养人晶状体上皮细胞株HLB3细胞,分为正常对照组、氧化损伤组和热休克处理组,观察过氧化氢(H2O2)处理后各组细胞活力、SOD、CAT的改变情况;AnnexinⅤFITC流式细胞仪检测晶状体上皮细胞凋亡;RTPCR检测各组中HSP27及p21基因的表达。结果热休克预处理可诱导HSP27产生,显著增加细胞活力0.27±0.04(与氧化损伤组0.24±0.02相比P<0.05),细胞凋亡率明显降低(8.34±1.19)%(与氧化损伤组15.69%±1.54%比较P<0.05),保护超氧化物岐化酶0.61±0.07(与氧化损伤组0.41±0.08比较P<0.05)、过氧化氢酶活性0.99±0.14(与氧化损伤组0.33±0.06相比P<0.05),降低p21mRNA的表达。结论热休克预处理可能通过诱导HSP27的表达保护氧化损伤的晶状体上皮细胞;降低p21基因表达并抑制氧化损伤后晶状体上皮细胞凋亡可能是其保护机制之一。     

小白菊内酯对氧化应激诱导人晶状体上皮细胞凋亡的防护作用

目的探讨植物成分小白菊内酯对过氧化氢(H2O2)诱导的人晶状体上皮细胞(LECs)凋亡的保护作用及其作用机制。方法人LECs(SRA01-04)用50μmol/L的H2O2诱导凋亡,同时加入不同浓度(0、10、20、50μmol/L)的小白菊内酯观察细胞形态变化;用流式细胞仪检测细胞凋亡,用实时定量反转录PCR以及Westernblot检测caspase-3和caspase-9的表达。结果H2O2能明显诱导人LECs凋亡,促进caspase-3和caspase-9在转录水平和蛋白水平的表达;小白菊内酯能明显抑制H2O2诱导的人LECs凋亡,抑制caspase-3和caspase-9的表达,而作用呈浓度依从性。结论小白菊内酯对氧化应激诱导的人LECs凋亡具有保护作用,提示可能对白内障的发生具有潜在的防治作用。     

晶状体上皮细胞凋亡调控基因与白内障的研究

白内障是最常见的致盲眼病之一,晶状体上皮细胞的凋亡是除先天性白内障以外的所有类型白内障发生的共同细胞学基础。近些年的研究表明:多种调控基因参与了晶状体上皮细胞凋亡。我们将近年来晶状体上皮细胞凋亡调控基因与白内障的研究情况做一综述。     

过氧化氢对人晶状体上皮细胞增生及VEGF表达的影响

目的:研究不同浓度的过氧化氢(H2O2)对体外培养的人晶状体上皮细胞增生及VEGF表达的影响。方法:体外培养的人晶状体上皮细胞系SRA01/04,在培养液中分别加入浓度为1,10,100nmol/L;1,10,100μmol/L和1mmol/L的过氧化氢处理40min,对照组无过氧化氢,随后在正常培养液中继续培养,在0,6,12和24h用MTT方法检测晶状体上皮细胞的增生活力;在24h用ELISA方法检测培养液上清中血管内皮生长因子(VEGF)的含量。结果:在培养液中加入1nmol/L~10μmol/L浓度的H2O2处理组,晶状体上皮细胞增生率(A值)随浓度较对照组明显增加,其中以10nmol/L最为明显;而100μmol/L,1mmol/L处理组,晶状体上皮细胞出现生长抑制。ELISA检测结果显示,1nmol/L~10μmol/L的过氧化氢刺激后,VEGF水平均高于对照组,且呈浓度依赖性,峰值出现在10nmol/L和10μmol/LH2O2处理组。结论:低浓度(1nmol/L~10μmol/L)的H2O2可以促进晶状体上皮细胞增殖,并使VEGF分泌增加;提示VEGF可能作为一种氧化应激产物,对晶状体上皮细胞起到保护、免受损伤的作用。     

硅油并发性白内障和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中凋亡因子的表达差异

目的:分析硅油并发性白内障和年龄相关性白内障晶状体上皮细胞中凋亡因子的表达差异.方法:将我院2014-03/2016-03收治的硅油并发性白内障患者50例50眼作为研究组,另选同期收治年龄相关性白内障患者50例50眼作为对照组,两组患者均已如实掌握此次研究方案具体内容并签署知情同意书后对其晶状体上皮细胞中凋亡因子的表达进行测定和比较.结果:研究组Bcl-2蛋白表达阳性率92％、Bax蛋白表达阳性率100％、Caspase-3蛋白表达阳性率100％,而同期对照组Bcl-2蛋白表达阳性率80％、Bax蛋白表达阳性率84％、Caspase-3蛋白表达阳性率82％,组间差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:硅油并发性白内障晶状体上皮细胞中凋亡因子的表达显著高于年龄相关性白内障,提示晶状体上皮细胞中部分凋亡因子全程参与硅油并发性白内障的发生发展过程.     

细胞色素c在年龄相关性白内障晶状体上皮细胞凋亡中的作用

目的观察年龄相关性白内障晶状体上皮细胞细胞色素c表达情况，探讨其与晶状体上皮细胞凋亡的关系。方法取手术中取下的年龄相关性白内障患者的晶状体前囊膜。采用免疫组织化学染色法（SP）检测晶状体上皮细胞细胞色素c表达情况，TUNEL法检测晶状体上皮细胞凋亡情况，并分析与细胞色素c表达的关系。透射电镜观察分析晶状体上皮细胞超微结构。结果正常人晶状体上皮细胞可见细胞色素c均匀胞浆低表达。年龄相关性白内障组在细胞色素c胞浆低表达细胞中，可见散在分布的胞浆高表达细胞。TUNEL阳性细胞仅存在于白内障组。细胞色素c表达与凋亡指数成正相关（P〈0．01）。电镜下可见染色质边集、凋亡小体和线粒体肿胀等特征。结论晶状体上皮细胞凋亡可能参与年龄相关性白内障的形成，线粒体细胞色素c凋亡途径可能在白内障的发生发展中起重要作用。