大肠杆菌中表达的rhTNFαD11a的分离纯化

在大肠杆菌中表达的重组人ＴＮＦα衍生物（ｒｈＴＮＦαＤ１１ａ）以可溶性形式存在，诱导后的菌体超声破碎后，依次经阶段盐析、离子交换层析及凝胶过滤，最终获得的ｒｈＴＮＦαＤ１１ａ纯度达９９％，在Ｌ９２９细胞上测定的比活性约为１×１０８Ｕ／ｍｇ蛋白     

大肠杆菌表达的新型肿瘤坏死因子衍生物中试发酵工艺的研究

基于肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）在体内外可以特异性地对多种肿瘤细胞产生杀伤作用［１］，但因其在治疗剂量下毒副作用大而限制了它的广泛应用［２］，我们利用基因工程技术获得了一种在大肠杆菌中高效表达的新型ＴＮＦ衍生物［３，４］，经药效学、急性毒性和慢性毒性等一系列动物实验研究证明，该ＴＮＦ衍生物（ｒｈＴＮＦαＤ１１ａ）与原型重组人ＴＮＦα（ｒｈＴＮＦα）相比，生物学活性大大提高，毒副作用显著降低，故很有可能成为临床治疗肿瘤的一种新型基因工程药物。为了给ｒｈＴＮＦαＤ１１ａ的进一步研究和应用打基础，我们对它的…     

人TNF—α及其突变体在大肠杆菌中的高效表达

利用重组ＤＮＡ技术，将不含非编码区和信号肽编码区的肿瘤坏死因子－αｃＤＮＡ插入原核表达载体ｐＢＶ２２０，并在大肠杆菌中进行表达。竽组产物具有匀伤鼠Ｌ９２９细胞的细胞毒活性，且均在可溶性ＴＮＦ，表达量占菌体总蛋白６０％左右。     

不同启动子对肿瘤坏死因子α在大肠杆菌中表达水平的影响

不同启动子对肿瘤坏死因子α在大肠杆菌中表达水平的影响谢宝树，刘丽临床实验科主题词肿瘤坏死因子，基因表达肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）主要是由激活的巨噬细胞分泌产生的一种细胞因子，因它在体内外可以特异性地对多种肿瘤细胞产生杀伤作用而引起人们的重视。除具有抗肿瘤...     

人突变型TRAIL在大肠杆菌中的表达及诱导多种肿瘤细胞的凋亡

目的：研究突变型肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）的表达及体外诱导多种恶性肿瘤细胞的凋亡作用，为TRAIL临床治疗恶性肿瘤提供实验依据。方法：分段合成TRAIL寡核苷酸，并改变其中90个碱基，然后全长拼接，克服入原核表达载体pGEX-2T，转化E.coli DH 5a,丙基硫代－β-D－半乳糖苷诱导表达，亲和层析分离纯化融合蛋白，凝血酶酶切得到TRAIL蛋白。MTT法和流式细胞仪定量分析纯化产物对多种肿瘤细胞的诱导凋亡作用。结果：突变型TRAIL表达产物为可溶性，对人BGC823胃腺癌，A549肺腺癌，H69小细胞肺癌，KB鼻咽癌，A172人脑胶质细胞瘤，SKNSH人成神经细胞瘤株有明显的诱导凋亡作用，结论：原核表达突变型TRAIL具有明显的诱导多种恶性肿瘤细胞凋亡的作用。     

肿瘤坏死因子在宫颈癌组织中表达的免疫组化研究

肿瘤坏死因子在宫颈癌组织中表达的免疫组化研究２６５２００莱阳解放军第１４５医院徐廷香，李西启，王剑波关键词肿瘤坏死因子；子宫颈肿瘤；免疫组织化学中国图书资料分类号Ｒ７１１．７４早期发现的ＴＮＦ是由活化巨噬细胞和淋巴细胞产生的多功能细胞因子，对某些肿瘤...     

人TNFα衍生物11a在体外对肿瘤细胞的细胞毒作用

人ＴＮＦα衍生物１１ａ在体外对肿瘤细胞的细胞毒作用１０００３６北京空军总医院李景泰刘丽赵建增谢宝树冷爱军关键词肿瘤坏死因子衍生物；细胞毒作用中国图书资料分类号Ｒ７３０．５３肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）对多种肿瘤细胞具有显著的细胞毒作用，并可通过调节机体的自...     

脓毒症大鼠组织中细胞因子信号转导抑制因子表达的研究

为观察盲肠结扎穿孔(CLP)所致脓毒症大鼠重要脏器细胞因子信号转导抑制因子 (SOCSs)基因表达的规律及其意义 ,将 5 4只Wistar大鼠随机分为正常对照组 (n =6 )、CLP组 (n=36 )和重组杀菌 /通透性增加蛋白(rBPI2 1)治疗组 (n=12 ) ,检测动物肝、肺、肾组织中SOCS1和SOCS3mRNA的表达 ,同时测定组织中内毒素和TNF α水平。结果显示 ,CLP后肝、肺、肾组织中内毒素和TNF α水平均迅速升高 ,于 2～ 12h达峰值 (P <0 0 5 ) ,其后逐渐降低。脓毒症大鼠肝、肾组织中SOCS1和SOCS3的基因表达均显著升高 ,其中SOCS3基因表达升高迅速且持续时间较长 ,于术后 6h即达到峰值 (P <0 0 5 ) ,72h仍维持于较高水平 ,而肝、肾组织中SOCS1表达呈一过性升高 ,分别于术后 6h和 4 8h显著高于正常对照组 (P <0 0 5 )。rBPI2 1治疗对CLP大鼠肝、肺、肾组织中SOCS1和SOCS3mRNA表达均无显著影响。上述结果提示 ,严重腹腔感染可导致大鼠体内SOCSs表达上调 ,其改变可能与内毒素介导TNF α的刺激作用有关。SOCSs作为内源性细胞内信号转导抑制物在脓毒症的病理生理过程可能发挥了调节作用。     

人源抗HBsAg Fab工程化大肠杆菌优化表达的实验研究

目的：探讨表达人源抗HBsAg Fab工程化大肠杆菌的优化培养模式及诱导方法，以期大量获取人源抗HBsAg Fab。方法：在摇瓶发酵条件下探讨工程菌的生长和表达规律，筛选最佳的培养模式及诱导表达条件，后于发酵罐中行补料高密度发酵试验，以确定最佳补料模式。结果：由摇瓶发酵获得的数据表明，当培养体系处于对数生长中期为诱导表达的起点，在250℃下以O．2％arabinose诱导12h条件下Fab的产率最佳，采用溶氧控制补料模式可使培养体系的最大OD600达到55．2，相当于湿菌含量110g/L水平。同时，经证实Fab的抗原结合活性良好。结论：确定了周期短、产率高且稳定可靠的发酵工艺，为应用原核表达体系工业化大批量生产基因工程抗体奠定了基础。     

肿瘤坏死因子拮抗剂防治脓毒症的研究现状

内毒素诱生多种介质的参与是脓毒症发病率的重要环节,其中肿瘤坏死因子－α（TNF-α）可能在内毒素诱发的炎症介质“瀑布效应”中起重要作用。本文针对TNF－α合成的5个作用环节,概述了TNF－α拮抗剂防治脓毒症的研究现状。     

瘢痕组织中TNFα,IL—1β,IL—6的表达及其意义

目的：研究白细胞介素－１β，肿瘤坏死因子α和白细胞介素－６在瘢痕组织中的表达，并对其意义进行探讨，方法：本文运用免疫组化法，分别应用抗白细胞介素－１β肿瘤坏死因子α和白细胞介素－６的单克隆抗体，对２０例烧伤患者肉芽和瘢痕组织中白细胞介素－１β－肿瘤坏死因子α和白细胞介素－６的表达水平进行了检测，结果：在伤后一个月的肉芽和三个月的瘢痕组织中白细胞介素－１β－肿瘤坏死因子α和白细胞介素－６有较多表达阳     

四氯化碳致肝损伤对小鼠血清TNF-α IL-6的影响

目的探讨四氯化碳(CCl4)致肝损伤模型小鼠血清TNF-α、IL-6水平的变化与肝损伤的相关性.方法紫外分光光度法分别测定血清ALT和肝匀浆MDA含量,放免法测定血清TNF-α、IL-6水平.结果单次或多次ip四氯化碳均可复制肝损伤模型,小鼠肝指数增加,血清ALT、肝匀浆MDA水平升高(P<0.01).病理组织学检查可见显著改变,IL-6水平未见显著变化,而血清TNF-α水平差异明显.单次四氯化碳给药模型组TNF-α水平降低,多次四氯化碳给药模型组TNF-α水平升高(P<0.01).结论四氯化碳致小鼠肝损伤模型,血清TNF-α的降低和升高可能与TNF-α作用的双重性,四氯化碳的作用机制,血清生化指标与病理组织变化的时间差异性及肝损伤的严重程度有关.     

大肠杆菌表达系统在红霉素基因工程中应用的研究进展

大肠杆菌表达系统在红霉素基因工程中的应用面临着许多难题：聚酮合成酶中ACP的后修饰、6-dEB生物合成前体供应、大环内酯糖基化修饰等。通过向大肠杆菌中转入枯草杆菌磷酸泛酰巯基转移酶基因sfp，使大肠杆菌中合成的ACP得以后修饰；6-dEB生物合成前体丙酰CoA和丙二酰CoA可通过Pfeifer途径和Dayem途径提供；目前，在大肠杆菌体内已可以合成6-dEB。利用大肠杆菌系统合成新的大环内酯化合物、对大环内酯糖基化修饰和提高大肠杆菌系统合成大环内酯类抗生素产量将是今后研究的重点。     

子宫内膜异位症患者腹水中TNF-α、TNF-β的测定

目的：了解子宫内膜异位症（内异症）患者腹水中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和肿瘤坏死因子-β（TNF-β）的水平。方法：应用ELISA法,检测42例内异症患者（Ⅰ-Ⅱ期22例、Ⅲ-Ⅳ期20例）腹水TNF-α、TNF-β的浓度,并与对照组40例非内异症患者进行比较,分析TNF-α、TNF-β的浓度与内异症的相关性。结果：内异症组患者腹水中TNF-α、TNF-β的浓度明显高于对照组（P〈0.01和P〈0.01）,特别是Ⅲ、Ⅳ期比Ⅰ、Ⅱ期增高更明显（P〈0.01）,且两者的浓度呈正相关,相关系数为0.963。结论：内异症患者腹水中TNF-α、TNF-β明显增高,且与疾病严重程度相关。     

狗慢性膝关节炎症期滑膜组织中细胞因子的表达

目的研究狗慢性膝关节炎症期滑膜组织中各种细胞因子(TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-10)表达水平。方法Beagle狗17条,分为正常组(n=8)和慢性非感染性炎症组(n=9)。分别取其膝关节滑膜组织,采用ELISA方法检测滑膜组织中各种细胞因子的表达水平。结果与正常组相比,慢性非感染性炎症组滑膜组织内IL-1β、IL-6浓度显著增高(P<0.05),TNF-α、IL-10浓度无明显变化(P>0.05)。结论慢性非感染性炎症期,狗膝关节滑膜组织中IL-1β、IL-6表达显著增加。     

X线照射对肝癌细胞株HepG2 TNFR-p75表达的研究

目的研究X线照射在体外培养人肝癌细胞株HepG2后,膜TNFR-p75表达变化情况。方法免疫细胞化学检测TNFR-p75蛋白的表达,流式细胞仪分析细胞凋亡率,光镜及电镜观察细胞形态变化。结果X线照射后的TNFR-p75蛋白表达显著增强(P<0.05);光镜及电镜发现细胞体积缩小,变圆,胞浆浓缩,核固缩深染;流式细胞仪分析细胞凋亡率显著增高。结论X线可通过上调TNFR-p75蛋白的表达,诱导细胞凋亡来发挥其抗增殖作用。     

单核巨噬细胞系统在肝切除后余肝损伤中作用的实验研究

以大鼠肝部分切除为实验对象，观察单核巨噬细胞系统吞噬与分泌功能改变，并探讨其在余肝损伤中的作用。结果表明：肝切除后随着肝脏枯否细胞清除功能的下降，以肺泡巨噬细胞为代表的肝外单核巨噬细胞相应激活，并且血清肿瘤坏死因子活性与余肝损伤程度呈线性正相关。提示肝切除后肝损伤机制可能在于肝切除后肝清除功能下降，肠源内毒素溢入体循环，并激活肝外单核巨噬细胞释放肿瘤坏因子等因素，从而介导肝损伤。