甲状腺滤泡癌P—AKT表达异常与血管生成的关系

目的探讨P—AKT异常表达与甲状腺滤泡癌血管生成之间的关系。方法采用免疫组织化学PV-6000两步法检测甲状腺滤泡癌、甲状腺腺瘤及结节性甲状腺肿标本中P—AKT、VEGF及CD34的表达。结果P—AKT在甲状腺滤泡癌中的表达较甲状腺腺瘤和结节性甲状腺肿中显著增高（P〈0．001）。甲状腺滤泡癌组织中,P—AKT、VEGF蛋白表达均与微血管密度（MVD）相关（P〈0．05）,P—AKT阳性标本的MVD值高于P—AKT阴性标本（P〈0．05）,VEGF阳性标本的MVD值亦高于VEGF阴性标本（P〈0．05）。P-AKT表达与VEGF表达的相关性有统计学意义（P〈0．05）。结论P-AKT在甲状腺滤泡癌中的高表达在甲状腺滤泡癌的发生发展及继发转移过程中发挥着重要作用。甲状腺滤泡癌中可能存在AKT／VEGF通路,AKT是调控VEGF表达通路的关键因子。     

甲状腺乳头状腺癌CD44V6、p53蛋白的表达及意义

目的探讨CD44V6基因蛋白在甲状腺乳头状腺癌组织的表达及其临床意义。方法用免疫组织化学S-P法,检测印例甲状腺乳头状腺癌,12例甲状腺滤泡性腺瘤组织中CD44V6基因蛋白的表达情况,并分析其临床病理意义。结果CD44V6在甲状腺乳头状腺癌与甲状腺滤泡性腺瘤表达差异有极显著意义（P＜0．01）;甲状腺乳头状腺癌颈淋巴结转移组表达阳性率与无颈淋巴结转移组差异有极显著意义（P＜0．01）。p53蛋白在甲状腺乳头状腺癌染色阳性率为68．3%（41/60）;p53蛋白在甲状腺滤泡性腺瘤染色均阴性。甲状腺乳头状腺癌颈淋巴结转移组表达阳性率与无颈淋巴结转移组阳性率差异无显著意义（P＞0．05）。结论CD44V6异常表达与甲状腺乳头状腺癌的恶性行为有关,CD44V6的检测对于甲状腺乳头状腺癌的诊断及转移潜能的判断具有一定临床意义。     

VEGF-C、COX-2在细支气管肺泡癌中的表达及其意义

目的探讨细支气管肺泡癌（BAC）中VEGF．C、COX-2蛋白表达及意义。方法BAC60例为实验组,肺腺癌伴BAC20例和肺腺癌22例为对照组,采用免疫组化法分别检测VEGF—C、COX-2蛋白在3种组织中的表达并分析其临床意义。结果VEGF．C在BAC、肺腺癌伴BAC和肺腺癌中阳性率分别为66．7％、90．0％和95．5％,各组间表达差异有统计学意义（P〈0．05）;VEGF—C在BAC非黏液型表达阳性率显著高于黏液型（P〈0．05）,伴淋巴结转移组阳性率明显高于无转移组（P〈0．05）,VEGF—C表达与性别、年龄、肿块部位、大小及TNM分期均无关联（P〉0．05）。COX-2在BAC、肺腺癌伴BAC和肺腺癌中阳性率分别为63．3％、75．0％和77．3％,各组间表达差异无统计学意义（P〉0．05）;COX-2在BAC伴淋巴结转移组表达阳性率明显高于无转移组（P〈0．05）,肿块直径≥3cm组阳性率明显高于肿块直径〈3cm组（P〈0．05）,COX-2表达与性别、年龄、肿块部位、病理类型及TNM分期均无关（P〉0．05）。VEGF-C与COX-2表达呈正相关（r=0．269,P〈0．05）。结论VEGF—C联合COX-2检测可用于BAC侵袭、转移特性的评估及预测。     

p27-CyclinD1/CDK4-Rb蛋白在不同类型甲状腺肿瘤组织中的表达及临床意义

目的：探讨细胞周期调控基因蛋白p27、CyclinD1、CDK4、Rb在不同类型甲状腺肿瘤组织中的变化，为甲状腺肿瘤的发生学以及临床诊断提供参考。方法：应用流式细胞术和免疫荧光技术对甲状腺乳头状癌（40例）、甲状腺腺瘤（16例）、结节性甲状腺肿（21例）、正常甲状腺组织（10例）的CyclinD1、CDK4、p27、Rb基因蛋白的表达进行定量检测。结果：CvclinD1和CDK4基因蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达量显著高于其它三组（P〈0．01），而后三组间差异无显著性（P〉0．05）；p27基因蛋白在结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤和甲状腺乳头状癌表达量依次减少，均低于正常甲状腺组织（P〈0．05）；Rb基因蛋白的表达量在正常甲状腺组织、甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿、甲状腺乳头状癌中依次减少，但各组间无显著性差异（P〉0．05）。结论：CyclinD1／CDK4高表达、p27低表达在甲状腺乳头状癌的发生中起着重要的作用．而Rb基因在甲状腺乳头状癌的发生中可能不起主要作用。     

甲状腺滤泡性肿瘤DNA含量与AgNOR计数研究

目的：探讨DNA含量与AgNOR对甲状腺良恶性滤泡性肿瘤的鉴别诊断价值。方法：应用流式细胞术和胶体银染技术对9例正常甲状腺组织和36例滤泡性肿瘤（22例腺瘤和14例腺癌）进行DNA含量分析和AgNOR计数。结果：14例滤泡性癌中，11例为DNA异倍体，而22例滤泡性腺癌仅1例为DNA异倍体，且伴有不典型增生。AgNOR由正常甲状腺组织、滤泡性腺癌至滤泡性癌逐渐增加，相互之间有显著性差异（P＜0．05）；但各组间AgNOR计数有重叠，且DNA含量与AgNOR无明显相关性。结论：尽管AgNOR染色方法简便。经济，但在区别良恶性滤泡性肿瘤方面，DNA含量异常更具意义。     

甲状腺肿瘤中p16基因甲基化及p16蛋白的表达

目的探讨甲状腺肿瘤细胞中p16基因异常甲基化及p16蛋白的表达。方法采用甲基化敏感的限制性内切酶SmaI消化DNA，PCR扩增p16基因外显子1，分析60例甲状腺肿瘤中p16基因外显子15′CpG岛异常甲基化，采用免疫组化Envision法检测60例甲状腺肿瘤标本细胞中p16蛋白的表达。结果60例甲状腺肿瘤中p16基因外显子。5′CpG岛异常甲基化率为15．0％（9／60）。30例甲状腺癌中为30．0％（9／30）；30例腺瘤中无异常甲基化，组间比较差异有显著性（P〈0．001）。60例甲状腺肿瘤中p16蛋白阳性表达率为46．7％／60）。30例腺瘤中p16蛋白阳性表达率为60．0％（18／30）；30例甲状腺癌中为33．3％（10／30），组间较差异有显著性（P〈0．05）。结论p16基因外显子t5′CpG岛异常甲基化与甲状腺癌的发生、发展有关，其主要机制可能与甲状腺恶性肿瘤中p16基因失活导致P16蛋白表达缺失有关。     

彩色多普勒超声对甲状腺腺瘤与甲状腺癌的鉴别诊断价值

目的：探讨彩色多普勒超声对甲状腺腺瘤与甲状腺癌的鉴别诊断价值。方法回顾性分析甲状腺腺瘤患者60例及甲状腺癌患者60例的超声资料,进行鉴别诊断分析。结果两组患者在结节数量、结节形态、结节边界、内部回声及后方回声方面进行比较,差异有统计学意义（P＜0．05）。甲状腺腺瘤患者最大峰值流速及阻力指数均显著低于甲状腺癌患者,差异具有统计学意义（P＜0．05）。甲状腺腺瘤患者血流分级以Ⅰ级为主（65．00％）,而甲状腺癌患者血流分级以Ⅲ级为主（51．67％）,两组患者在血流分级方面比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论彩色多普勒超声对甲状腺腺瘤与甲状腺癌的鉴别诊断具有重要的临床价值。     

RegⅣ、EGFR、PI3K蛋白在胃腺癌中的表达及意义

目的：研究再生基因蛋白Ⅳ（ Regenerating gene typeⅣ,RegⅣ）、表皮生长因子受体（ Epider-mal growth factor receptor ,EGFR）及磷脂酰肌醇3-激酶（ Phosphatidylinositol -3-kinase,PI3K）蛋白在胃腺癌中的表达及临床意义。方法应用S-P免疫组化技术检测73例胃腺癌及其相应的癌旁正常组织中RegⅣ、EGFR和PI3K蛋白的表达情况。结果73例胃腺癌组织中RegⅣ、EGFR、PI3K蛋白的阳性表达率分别为50．7％（37/73）、56．2％（41/73）、69．9％（51/73）均高于癌旁正常组织20．5％（15/73）、19．2％（14/73）、21．9％（16/73）,差异具有统计学意义（ P＜0．05）;RegⅣ的表达与肿瘤分化程度相关,差异有统计学意义（P＜0．05）;EGFR蛋白的表达与浸润深度、淋巴结转移、临床分期相关,差异有统计学意义（P＜0．05）;PI3K蛋白的表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移、临床分期相关有统计学意义（P＜0．05）。 RegⅣ与EGFR、PI3K蛋白在胃腺癌组织中的表达呈正相关（r＝0．343、0．248,P＜0．05）,EGFR与PI3K蛋白在胃腺癌组织中的表达呈正相关（ r＝0．384,P＜0．05）。结论 RegⅣ可能通过激活EGFR/PI3K/Akt信号通路在胃腺癌的发生发展中发挥重要作用。     

MAGE-A4在人大肠肿瘤中的表达及其与淋巴结转移的关系

目的研究MAGE-A4在人大肠肿瘤组织中的表达，并探讨其与大肠腺癌侵袭和转移的关系。方法采用免疫组织化学技术SP法，观察38例正常大肠黏膜、31例大肠腺瘤、83例大肠腺癌组织中MAGE-A4蛋白的表达特点。结果MAGE-A4蛋白的表达定位于胞质及胞核。在正常大肠黏膜组织、大肠腺瘤、大肠腺癌组织中的阳性表达率分别为5．26％、38．71％及38．55％。正常大肠黏膜组织中的阳性表达率与在大肠腺瘤、大肠腺癌组织中的阳性表达率相比较，有非常显著性差异（P〈0．01）；而在大肠腺瘤中的表达强度与在大肠腺癌中的相比，无显著性差异（P〉0．05）；在不同组织学类型的大肠腺瘤中的表达也无显著性差异（P〉0．05）；不同性别、不同年龄、不同侵袭深度、有肝转移与无肝转移的大肠腺癌患者，其大肠肿瘤组织中MAGE-A4蛋白的表达均无显著性差异（P〉0．05）；但有淋巴结转移与无淋巴结转移的大肠癌患者，其MAGE-A4蛋白的表达有显著性差异，且呈正相关关系（P〈0．01，γs=0．312）。结论MAGE-A4蛋白在大肠肿瘤的发生中有一定作用，且与大肠腺癌患者有无淋巴结转移有正相关关系。     

β-连环素表达及基因突变与子宫内膜癌发生发展相关性的研究

目的：研究β-连环素（β-cat）在子宫内膜癌组织中的表达及基因突变在子宫内膜癌发生中的作用。方法：采用免疫组化SABC法和SSCP-PCR法检测31例子宫内膜癌标本和10例正常子宫内膜中β-cat的表达及基因突变，并对实验结果进行统计学分析。结果：31例子宫内膜癌74％为质／核聚集表达，明显大于正常子宫内膜，P〈0．05。其中，Ⅰ期为84％，明显高于Ⅱ、Ⅲ期（16％），P〈0．05；内膜样腺癌为88％，明显高于非内膜样腺癌，P〈0．01，且60％分化良好，P〈0．05。不同肌层浸润深度间比较差异无统计学意义，P〉0．05。SS-CP法检测出5例突变条带，均为FI-GOI期的子宫内膜癌，且4例为内膜样腺癌，但差异无统计学意义，P〉0．05。突变组均伴有肛cat聚集，与正常组相比差异有统计学意义，P〈0．05。结论：β-cat聚集与子宫内膜癌发生有关，尤其与早期、分化良好的内膜样腺癌的发生有关，但与肌层浸润深度无关。基因突变是β-cat聚集的重要分子事件，是导致子宫内膜癌发生的重要通路之一。     

CD57在滤泡状甲状腺肿瘤中的表达及其临床意义

目的　观察CD5 7在滤泡状甲状腺癌 (FTC)和滤泡状甲状腺腺瘤 (FTA)中的表达。方法　采用免疫组织化学SP法 ,共检测了91例甲状腺组织中CD5 7的表达 ,其中FTC 2 5例 ,FTA 5 0例 ,瘤旁正常甲状腺组织 16例。结果　① 16例瘤旁正常的甲状腺组织无一例表达CD5 7。②CD5 7在FTC、FTA上的表达率分别为 88 0 0 % ( 2 2 /2 5 )、2 8 0 0 ( 14 /5 0 )。CD5 7在FTC与FTA间的阳性表达均有显著性差异 (P <0 0 0 1)。结论　CD5 7可作为鉴别FTC与FTA较好的肿瘤标志物     

DDIT3在甲状腺滤泡型良恶性肿瘤中的表达及意义

目的探讨DDIT3在甲状腺良恶性滤泡型肿瘤中的表达及意义。方法采用免疫组化Envision法检测24例滤泡性腺瘤、44例滤泡癌中DDIT3的表达情况。结果DDIT3在甲状腺滤泡性腺瘤、滤泡癌中的表达率分别为20．8％和93．2％,两者比较差异有统计学意义（P〈0．001）。同时观察10例甲状腺滤泡癌癌旁组织,DDIT3不表达或表达甚少。结论DDIT3可作为鉴别甲状腺滤泡癌和滤泡性腺瘤的一个较有价值的指标。     

c-IAP1和bax蛋白在甲状腺癌中的表达与细胞凋亡

目的探讨甲状腺癌中c-IAP1和bax蛋白的表达及其与细胞凋亡的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测甲状腺肿瘤细胞中c-IAP1和bax蛋白的表达,用TUNEL法测定肿瘤细胞凋亡指数（AI）。结果20例甲状腺腺瘤中c-IAP1和bax阳性表达率分别为25.0%、60.0%,AI为0.33±0.21;47例甲状腺癌中c-IAP1和bax阳性表达率分别为87.2%、89.3%,AI为0.91±0.37。C-IAP1、bax和AI在腺瘤和癌组间比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。在甲状腺癌中,c-IAP1阳性组AI低于阴性组,bax阳性组AI高于阴性组。结论c-IAP1和bax可能与甲状腺癌的发生发展密切相关;c-IAP1高表达抑制了甲状腺癌细胞凋亡,bax高表达促进了甲状腺癌细胞凋亡。     

二甲双胍对人滤泡状甲状腺癌细胞生长和能量代谢的影响

目的:观察不同浓度二甲双胍对人滤泡状甲状腺癌(follicular thyroid cancer,FTC）细胞增殖、凋亡及能量代谢的影响。方法:体外培养人FTC细胞(FTC-133),分为对照组和不同浓度二甲双胍处理组（1、3和10mmol/L）,分别培养24h、48h和72h。四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡,Seahorse能量代谢分析仪检测细胞糖酵解及线粒体呼吸的变化。结果:与对照组相比,二甲双胍抑制FTC-133增殖,随浓度及处理时间的增加,抑制效应加大,呈剂量-时间依赖性（P＜0.05）。二甲双胍诱导FTC-133凋亡,随浓度及处理时间的增加,其中晚期凋亡率明显增加,呈剂量-时间依赖性（P＜0.05）。二甲双胍可影响FTC-133糖代谢,与对照组相比,随二甲双胍浓度增加,糖酵解和线粒体呼吸可明显抑制,呈剂量-时间依赖性（P＜0.05）。结论:二甲双胍抑制FTC-133增殖并诱导凋亡,其机制可能是影响癌细胞能量代谢进而抑制其能量供应。     

Discovery and validation of protein abundance differences between follicular thyroid neoplasms

Distinguishing between benign follicular thyroid adenoma (FTA) and malignant follicular thyroid carcinoma (FTC) by cytologic features alone is not possible. Molecular markers may aid distinguishing FTA from FTC in patients with indeterminate cytology. The aim of this study is to define protein abundance differences between FTC from FTA through a discovery (proteomics) and validation (immunohistochemistry) approach. Difference gel electrophoresis (DIGE) and peptide mass fingerprinting were performed on protein extracts from five patients with FTC and compared with six patients with FTA. Individual gel comparisons (i.e., each FTC extract versus FTA pool) were also performed for the five FTC patients. Immunohistochemical validation studies were performed on three of the identified proteins. Based on DIGE images, 680 protein spots were matched on individual gels. Of these, 102 spots showed statistically significant differences in abundance between FTC and FTA in the individual gel analyses and were therefore studied further. Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry was used to identify 54 of these protein spots. Three candidates involved in protein folding (heat shock protein gp96, protein disulfide isomerase A3, and calreticulin) were studied by immunohistochemistry. Moderate calreticulin immunohistochemical staining was the best single marker with a high negative predictive value (88%); combining all three markers (any marker less than moderate staining) had the best positive predictive value (75%) while still retaining a good negative predictive value (68%). With DIGE, we identified 54 proteins differentially abundant between FTC and FTA. Three of these were validated by immunohistochemistry. These findings provide further insights into the diagnosis, prognosis, and pathophysiology of follicular-derived thyroid neoplasms.     

Differentiation of follicular thyroid adenoma from carcinoma by means of gene expression profiling with adapter-tagged competitive polymerase chain reaction

OBJECTIVE: Since preoperative differentiation between follicular thyroid adenoma (FTA) and carcinoma (FTC) remains very difficult, the purpose of this study was to identify the genes differentially expressed in FTA and FTC in order to construct a diagnostic system based on such genes for differentiation of FTA and FTC. METHODS: Gene expression profiles of 45 FTAs and 22 FTCs were analyzed by means of adapter-tagged competitive polymerase chain reaction (ATAC-PCR) with 2,516 genes (learning set). The genes differentially expressed in FTAs and FTCs were then used to construct a diagnostic system based on the weighted-voting algorithm. In addition, a validation study of this diagnostic system was conducted using 12 FTAs and 6 FTCs (validation set). RESULTS: The diagnostic system for differentiation of FTA and FTC, constructed with the aid of the learning set samples, was based on 60 genes differentially expressed in FTA and FTC, which included several genes previously identified as overexpressed in FTC (DPP4, KRT19 and IGFBP3) or FTA (trefoil factor 3 and thyroid peroxidase).The leave-one-out cross-validation study showed that the accuracy of this diagnostic system was as high as 90% (sensitivity: 77.3% and specificity: 95.6%), and was confirmed by the validation study (diagnostic accuracy: 83.3%; 95% confidence interval: 62.8-95.4%, sensitivity: 66.7% and specificity: 91.2%). CONCLUSIONS: This diagnostic system using the ATAC-PCR assay is expected to be clinically useful for preoperative differentiation between FTA and FTC since ATAC-PCR can be used for the small amount of RNA obtained from fine needle aspiration biopsy.     

新辅助化疗对胃癌细胞凋亡与增殖及其细胞免疫功能的影响

目的探讨新辅助化疗对胃癌患者细胞免疫功能及胃癌细胞凋亡与增殖的影响.方法进展期胃癌患者60例,随机分为3组(每组20例),A组为单纯手术,B组为LF+手术,C组为LOF+手术.分别应用免疫荧光法检测T细胞亚群,核素释放法测定NK细胞活性,TUNEL法和免疫组织化学染色法检测胃癌细胞的凋亡(AI)与增殖(PI)及二者之比(AI/PI).结果B、C组与A组 AI、PI差异具有极显著意义,P<0.01;AI/PI差异有显著意义,P<0.05.化疗前、后及术后3组T细胞亚群的百分率差异无显著意义,P＞0.05.化疗后及术后,B、C组较A组NK细胞活性明显降低,P<0.05,P<0.01.结论新辅助化疗可明显促进胃癌细胞凋亡并抑制其增殖,对手术期患者的T细胞亚群免疫功能无明显影响,但可明显抑制NK细胞活性.     

Expression of matrix metalloproteinase-2, but not caspase-3, facilitates distinction between benign and malignant thyroid follicular neoplasms

Purpose: Definite diagnosis of follicular thyroid carcinoma (FTC) is based on the presence of capsularor vascular invasion. To date, no reliable and practical method has been introduced to discriminate thismalignant neoplasm from follicular thyroid adenoma (FTA) in fine needle aspiration biopsy material. Matrixmetalloproteinase-2 (MMP-2), by degrading extracellular matrix, and caspase-3, by induction of apoptosis, havebeen shown to play important roles in carcinogenesis and aggressive behavior in many tumor types. The aim of thisstudy was to examine expression of MMP-2 and caspase-3 in thyroid follicular neoplasms and to determine theirusefulness for differential diagnosis. Method: Sixty FTAs and 41 FTCs were analysed immunohistochemicallyfor MMP-2 and caspase-3. Result: MMP-2 was positive in 4 FTCs (9.8%), but in none of FTAs, with statisticalsignificance (p= 0.025). Caspase-3 was positive in 30 (50%) of FTAs and in 27 (65.9%) of FTCs. Conclusion: Ourresults show MMP-2 expression only in FTCs and suggest that this protein may be a useful marker to confirmdiagnosis of FTC versus FTA with 100% specificity and 100% predictive value of a positive test. We failed toshow any differential diagnostic value for caspase-3 in thyroid follicular neoplasms.     

脑胶质瘤组织中TGF-β1 和CD105 蛋白表达及其相关性

 目的 探讨胶质瘤组织中转化生长因子-β1（TGF-β1）和CD105蛋白表达的相互关系及其临床意义。方法 应用免疫组化SP法检测70例胶质瘤和10例正常脑组织中TGF-β1和CD105的表达水平，并分析它们与胶质瘤临床病理因素的关系。结果 TGF-β1和CD105表达均与胶质瘤病理分级相关（P〈0．01），与患者的性别、年龄及肿瘤大小无明显关系（P〉0．05）。TGF-β1阳性表达组的MVD（37．68±4．91）显著高于阴性表达组（30．01±5．26），（P〈0．01），且TGF-131表达与CD105-MVD呈正相关（r=0．6547，P〈0．05）。结论 TGF-β1和CD105高表达共同促进胶质瘤恶性增殖与血管形成。     

BRAF基因V600E突变在甲状腺病变中的表达

目的 分析BRAF基因V600E突变在中国汉族人群甲状腺病变中的表达情况.方法 240例甲状腺病变中,乳头状癌(PTC)129例(其中经典型PTC 121例,滤泡型PTC 8例).滤泡癌12例,髓样癌4例,甲状腺隙瘤30例,结节性甲状腺肿30例,Lp状腺乳头状增生35例.采用常规酚.氯仿法抽提87例新鲜组织样本的总DNA,改良试剂盒法抽提153例石蜡组织样本的总DNA,经过PCR、测序,检测BRAF V600E突变.结果 在240例甲状腺病变中,BRAF V6OOE突变61例,发生率为25.4%.61例BRAF V600E突,变患者均为PTC,占PTC的47.3%.BRAF V600E突变在经典型PTC中的表达率(49.6%)与在滤泡型PTC中的表达率(12.5%)比较,差异有统计学意义(P<0.05).BRAF V600E突变与PTC患者临床病理参数间的差异无统计学意义(P>0.05).结论 BRAFV600E突变与PTC的发生、发展可能有着重要联系,BRAF V600E突变可以作为PTC诊断的特异性标记;改良的试剂盒法抽提石蜡组织DNA具有高效、简便、价格栩对低廉的优点.