c-FLIP-L影响乳腺癌MDA-MB-231细胞对TRAIL致凋亡作用的敏感性

目的：观察c-FLIP-L对TRAIL诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其具体机制。方法：构建靶向c-FLIP-L 的 siRNA 质粒,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞, RT-PCR、Weston blotting验证基因抑制效果。实验分空白对照组、TRAIL组、c-FLIP-L siRNA组和c-FLIP-L siRNA+TRAIL组共4组,MTT法检测各组MDA-MB-231细胞的增殖情况,流式细胞术检测MDA-MB-231细胞凋亡率,Transwell实验检测MDA-MB-231细胞侵袭能力,RT-PCR 、Western blotting检测MDA-MB-231细胞中c-FLIP-L、caspase-3、caspase-8、MMP-2、MMP-9的表达。结果：靶向c-FLIP-L的 siRNA 质粒转染至乳腺癌细胞株可有效抑制c-FLIP-L mRNA \[(37.12±3.02) vs (183.21±8.31),(174.65±10.06);P<0.05\]及其蛋白的水平。c-FLIP-L siRNA和TRAIL联合处理MDA-MB-231细胞,与两者单独处理相比,细胞增殖抑制率显著升高\[72 h时,（75.51±2.01)% vs （3375±1.60）%,（34.31±2.01）%;均P<0.05\],凋亡率显著升高\[72 h时,（76.30±4.11）% vs （38.95±214）%,（29.28±166）%;均P<0.05\],对细胞侵袭能力的抑制也显著增强。c-FLIP-L siRNA和TRAIL联合处理后,与两者单独处理相比,乳腺癌细胞中casepase-3、casepase-8的表达显著增强,而MMP-2、MMP-9的表达明显减弱。结论：抑制c-FLIP-L表达能够增强MDA-MB-231细胞对TRAIL的敏感性,从而提高诱导肿瘤细胞凋亡的能力,其机制可能与caspase-3、caspase-8的表达上调和MMP-2、MMP-9的表达下调有关。     

白介素22活化STAT3信号通路促进结直肠癌细胞的增殖及其可能机制

目的： 探究白介素22（interleukin-22,IL-22）对结直肠癌细胞增殖的影响,并阐明其信号通路机制。 方法： Real-time PCR检测结直肠癌细胞SW480和SW620中IL-22受体1（IL-22 receptor 1, IL-22R1 ）mRNA的表达;采用不同质量浓度IL-22(0、1、5、10 ng/ml) 处理结直肠癌细胞,MTT法及克隆形成实验检测IL-22对SW480和SW620细胞增殖的影响;IL-22处理SW480和SW620细胞不同时间后,采用Western blotting检测其STAT3、AKT、ERK、JNK、P38蛋白磷酸化的情况;观察特异性STAT3磷酸化抑制剂LLL12处理是否影响IL-22诱导的结直肠癌细胞的促增殖效应。 结果： IL-22R1 mRNA在结直肠癌SW480、SW620细胞中均有表达。IL-22剂量依赖性地促进SW480和SW620细胞增殖,10 ng/ml IL-22作用后,SW480与SW620细胞增殖倍数均明显增高\[（5.18±0.212） vs （2.64±0.27）,（8.14±0.61） vs （6.08±0.096）;均P<001\];且IL-22可提高SW480与SW620细胞克隆形成能力,细胞克隆数明显多于空白对照组\[（1 680.67±124.05） vs （730±64.29）,(2 668±116.37） vs （1 294±171.61）;均P<0.01\]。Western blotting证实IL-22能显著活化STAT3通路,而对AKT、ERK、JNK、P-38通路影响不明显;STAT3抑制剂LLL12处理后,IL-22对SW480和SW620细胞的促增殖效应明显减弱。 结论： IL-22通过活化STAT3信号通路促进结直肠癌细胞SW480和SW620的增殖。     

阿苯达唑抑制结肠癌SW480细胞的侵袭和迁移能力及其可能的机制

目的：探索阿苯达唑（albendazole）抑制结肠癌SW480细胞侵袭和迁移能力及其可能的机制。方法：体外培养人结肠癌SW480细胞,用不同质量浓度(0、1.0和2.0 mg/ml)的albendazole处理人结肠癌SW480细胞,CCK-8法检测albendazole对结肠癌SW480细胞增殖能力的影响,采用细胞划痕实验、Transwell小室实验检测细胞的迁移侵袭能力,免疫细胞化学及Western blotting检测SW480细胞中E-cadherin、MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平。结果：与空白对照组比较,albendazole各质量浓度（1.0和2.0 mg/ml）组细胞的增殖能力明显降低,SW480细胞侵袭细胞数显著下降\[ （51.33±3.96）、（23.42±403）vs （80.76±7.18）个/视野,F=3.975, P=0.026\];而且细胞迁移能力显著下降\[（9.6±1.13）、（6.4±0.81）vs （19.6±1.41） mm;F=5.012, P=0.023\];E-cadherin蛋白表达水平上调,MMP-2、MMP-9蛋白表达水平明显下调。结论：Albendazole能显著抑制SW480细胞增殖,并通过上调E-cadherin的表达水平和下调MMP-2和MMP-9的分泌水平抑制细胞的侵袭和迁移能力。     

慢病毒介导的RNA干扰沉默KIF14表达对结肠癌细胞生长和转移的影响

目的:探讨慢病毒介导RNA干扰沉默KIF14表达对结肠癌SW480细胞生长和转移的影响。方法:采用脂质体法将构建的慢病毒靶向siRNA-KIF14干扰载体转入SW480细胞后,采用RT-PCR和Western blot检测KIF14 mRNA和蛋白的表达,MTT法、流式细胞仪和Transwell小室实验分别检测SW480细胞增殖、凋亡和侵袭,Western blot检测上皮-间质转化相关蛋白N-cadherin、E-cadherin和Vimentin的表达。结果:转染SW480细胞后成功下调KIF14 mRNA和蛋白的表达。与未转染细胞相比,下调KIF14的表达可抑制SW480细胞增殖、侵袭和上皮-间质转化,并促进细胞凋亡（P＜0.05）。结论:下调KIF14表达可抑制结肠癌SW480细胞生长和转移。     

沉默 AQP-5 对人结肠癌HT-29细胞的增殖、凋亡及其化疗敏感性的影响

目的： 探讨小干扰RNA（small interference RNA,siRNA）沉默水通道蛋白-5（aquaporin-5, AQP-5 ）的表达对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡及化疗药敏感性的影响。 方法： 以合成的AQP-5-siRNA序列转染HT-29细胞,采用Western blotting检测AQP-5-siRNA的转染效率,磺酰罗丹明（sulphorhodamine B, SRB）染色法检测各组细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测HT-29细胞的凋亡。分光光度法检测HT-29细胞caspase-3活性,real-time PCR和Western blotting检测AQP-5-siRNA转染后HT-29细胞中 PCNA和P53 在mRNA和蛋白水平的表达。选用5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）和顺铂（cisplatin,DDP）刺激AQP-5-siRNA转染细胞,SRB染色法检测细胞的增殖抑制率,以金正均法计算两药联合作用的Q值。 结果： 与NC-HT-29细胞相比,AQP-5-siRNA-HT-29细胞中AQP-5蛋白的表达显著下降（P<0.05）。SRB检测显示,AQP-5-siRNA-HT-29细胞的增殖抑制率显著增加\[（9.23±0.51)% vs 0,P<0.05\]。流式细胞术检测显示,AQP-5-siRNA-HT-29细胞的凋亡率显著升高\[（1081±1.32)% vs (0.99±0.18）%, P<0.05\];caspase-3活性显著升高\[（0.19±0.03） vs （009±0.01）, P<0.05\]。Real-time PCR和Western blotting结果显示,AQP-5-siRNA-HT-29细胞中PCNA mRNA和蛋白表达明显下降（P<0.05）,同时,P53 mRNA和蛋白表达明显上升（P<0.05）。AQP-5-siRNA+5-FU组细胞的增殖抑制率显著高于AQP-5-siRNA组和5-FU组\[（44.93±2.28)% vs (9.11±0.32）%、（25.68±1.71）%,均P<0.05\],AQP-5-siRNA+DDP组细胞的增殖抑制率显著高于AQP-5-siRNA组和DDP组\[（39.01±1.76)% vs (9.11±0.32）%、（18.47±1.25）%, P<0.05\],而且,AQP-5-siRNA与5-FU或DDP联用的Q值分别为1.38和1.51,均表现为协同作用。 结论： AQP-5-siRNA能抑制HT-29细胞增殖、促进其凋亡、并提高HT-29细胞对5-FU和DDP的化疗敏感性。     

RNA干扰抑制人结肠癌SW480细胞EGFR的表达及其对体外生长情况影响的研究

目的研究利用RNA干扰技术抑制人结肠癌SW480细胞表皮生长因子受体(EGFR)基因的表达,并观察受抑制后SW480细胞体外生长情况的改变。方法利用脂质体将siRNA转染进入SW480细胞(野生型K-ras基因表达阳性),在细胞内形成双链siRNA,识别并降解EGFR mRNA。通过荧光定量RT-PCR检测EGFR mRNA的表达水平,Western blot检测EGFR蛋白的表达,MTT法检测SW480细胞的增殖抑制情况,流式细胞学检测细胞凋亡情况。结果转染EGFR395-siRNA和EGFR1499-siRNA的SW480细胞其EGFRmRNA及蛋白表达均较对照组明显降低(P<0.05);转染EGFR395-siRNA和EGFR1499-siRNA的SW480细胞增殖率较对照组降低(P<0.05),凋亡率增高(P<0.05)。结论 siRNA能有效抑制SW480细胞EGFR基因的表达,具有抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用。     

siRNA干扰CHRNA5基因的表达抑制尼古丁对人肺癌细胞的促增殖作用

目的： 研究siRNA干扰尼古丁乙酰胆碱受体α5（cholinergic receptor nicotinic alpha 5, CHRNA5 ）基因表达后对尼古丁促人肺癌A549细胞增殖作用的影响。 方法： 设计并合成CHRNA5-siRNA片段,并经脂质体介导转染A549细胞。荧光定量PCR、Western blotting检测转染后A549细胞中 CHRNA5 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测CHRNA5-siRNA对尼古丁促A549细胞增殖作用的影响。 结果： 成功构建了CHRNA5-siRNA并成功转染A549细胞。CHRNA5-siRNA转染组A549细胞的 CHRNA5 mRNA 表达量明显低于si-NC转染对照组（0.196±0.044 vs 0.944±0.027, P<0.01）,CHRNA5-siRNA转染组A549细胞的CHRNA5 蛋白表达量明显低于si-NC转染组（0.267±0.031 vs 0.745±0.035,P<0.01）。在无尼古丁作用时,CHRNA5-siRNA的转染不能抑制A549细胞的增殖。在尼古丁作用下,A549细胞增殖显著增加（P<001）,CHRNA5-siRNA转染可明显抑制尼古丁的促增殖作用（P<0.01）。 结论： siRNA下调肺癌A549细胞中 CHRNA5 的表达可以抑制尼古丁促细胞增殖作用, CHRNA5 可能是肺癌治疗的潜在靶点之一。     

siRNA CD31沉默 PECAM-1 对鼠源血管内皮瘤细胞VEGF表达的影响

目的： 研究siRNA CD31靶向沉默血管内皮细胞中血小板内皮细胞黏附分子1（platelet endothelial cell adhesion molecule 1, PECAM-1 ）基因对鼠源性血管内皮瘤（murine hemangioendothelioma,EOMA）细胞增殖及其VEGF表达的影响。 方法: 实验分为裸siRNA CD31组、siRNA CD31-FAM组、稳定阴性对照 （SNC）组、空白对照（Opti-Med）组,以阳离子脂质体（RNAi-mate）为载体将化学合成的2′-O-甲基修饰的siRNA CD31转染体外培养的EOMA细胞,以激光共聚焦显微镜观察siRNA CD31的转染效果,以四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测siRNA CD31对EOMA细胞增殖的影响,以RT-PCR、Western blotting分别检测EOMA细胞中 PECAM-1 、VEGF的表达水平。 结果 : 与SNC组和空白对照组比较,裸siRNA CD31和siRNA CD31-FAM转染的EOMA细胞中的 PECAM-1 mRNA和蛋白、VEGF mRNA和蛋白的表达量均显著降低（均P < 001）。与SNC组比较,裸siRNA CD31组、siRNA CD31-FAM组的EOMA细胞增殖抑制率明显上升［（1882±146）%、（1891±221）% vs （061±106）%,均P<001］。 结论: 采用siRNA CD31-脂质体复合物沉默EOMA细胞中的 PECAM-1 基因可抑制VEGF mRNA和蛋白的表达,从而抑制EOMA细胞的增殖。     

生存素siRNA对结肠癌细胞凋亡增殖和侵袭性的影响

目的研究siRNA表达质粒沉默Survivin基因的效率及其对大肠癌细胞株SW480凋亡、增殖和侵袭性的影响.方法构建Survivin基因的siRNA表达质粒(pRNAT/sur-siRNA),用Westeron-blot和半定量RT-PCR研究该表达质粒转染SW480后Survivin蛋白和mRNA表达的变化,流式细胞仪检测Survivin基因沉默后SW480细胞凋亡的变化,MTT法检测SW480细胞体外增值的变化细胞侵袭性实验研究SW480细胞的侵袭性变化.结果针对Survivin的siRNA的表达质粒下调大肠癌SW480细胞株Survivin蛋白和mRNA的表达水平,分别为85.0%,80.0%;pRNAT/sur-siRNA转染SW480后,SW480细胞凋亡率为16.9%;细胞增殖抑制率为37.4%,与对照组相比有显著差异(P＜0.01);细胞侵袭实验示pRNAT/sur-siRNA/SW480细胞、pRNAT/SW480、SW480细胞的细胞穿透数分别为153±66、505±65、578±98个,(P＜0.01).结论针对Siurvivin的siRNA可以显著降低Survivin的表达,从而抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭,促进肿瘤细胞的凋亡.     

Bcl-3表达对结直肠癌组织和HCT 116细胞恶性生物学行为的影响

目的：探讨Bcl-3蛋白在人结直肠癌组织中的表达以及沉默Bcl-3基因后对结肠癌HCT 116细胞增殖与凋亡的影响。方法：选取2012年1月至2015年12月于江苏大学附属昆山医院行结直肠癌根治术的86例患者结直肠癌组织及相对应的癌旁组织标本,应用免疫组织化学法检测结直肠癌组织中Bcl-3蛋白的表达。将HCT 116细胞分为3组：空白对照组、Control siRNA组和Bcl-3 siRNA组,按分组转染Bcl-3 siRNA和Control siRNA,Western blotting法检测各组Bcl-3表达量以鉴定转染效率;MTT法、平板克隆实验、流式细胞术分别检测各组增殖能力、克隆形成能力、细胞周期分布及细胞凋亡率的变化。结果： Bcl-3蛋白在结直肠癌组织明显高于相应癌旁组织阳性表达率（72.09% vs 48.84%,P<0.05）。结直肠癌组织中Bcl-3蛋白的表达与组织学分级、淋巴结转移及Dukes分期有关（P<0.05）。转染48 h后,空白对照组、Control siRNA组Bcl-3相对蛋白量表达水平明显高于Bcl-3 siRNA组（P<0.05）。MTT实验中可见Bcl-3siRNA组光密度（D）值在转染24、48、72、96 h时均明显低于空白对照组和Control siRNA组（P<0.05）,Bcl-3 siRNA组克隆形成率明显低于其他2组（P<005）。流式细胞术显示,Bcl-3 siRNA组G2期细胞比例及凋亡率高于空白对照组和Control siRNA组（P<0.05）。结论： 结直肠癌组织中Bcl-3蛋白的高表达与组织学分级、淋巴结转移及Dukes分期有关;沉默Bcl-3可能导致结肠癌HCT 116细胞的细胞周期停滞在G2期,抑制细胞增殖能力及克隆形成能力,并促进细胞凋亡。     

生存素siRNA表达质粒对结肠癌细胞侵袭和增殖能力的抑制作用

 目的 构建针对生存素的小分子RNA干扰表达质粒，研究siRNA表达质粒沉默生存素基因后对大肠癌细胞株SW480侵袭性和增殖性的影响。方法 用pRNAT U6.1/Neo载体构建生存素 siRNA表达质粒（pRNAT/sur siRNA），该质粒转染SW480细胞株48小时后，用Westeron blot和半定量 RT PCR分析生存素蛋白和mRNA表达的变化。G418 400μg/L筛选阳性克隆细胞株（sur siRNA/SW480），MTT法检测SW480细胞体外增殖的变化；细胞侵袭性实验研究SW480细胞的侵袭性变化。结果 成功地构建了pRNAT/sur siRNA表达质粒，并且该质粒明显下调SW480细胞生存素蛋白和mRNA的表达水平，分别下调85%，80%。G418 400μg/L筛选出转染pRNAT/sur siRNA的SW480细胞株（sur siRNA/SW480）；sur siRNA/SW480细胞增殖受到显著抑制，抑制率为37.4% (P<0.01)；细胞侵袭实验示sur siRNA/SW480细胞的穿透数为(153±66)个，而对照组pRNAT/SW480、SW480细胞的穿透数为(505±65)，(578±98)个细胞，sur siRNA/SW480细胞的穿透数与对照组相比显著减少(P<0.01)。结论 针对生存素siRNA可以显著降低生存素的表达，抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭，该生存素siRNA序列可能成为治疗结肠癌的一种有效手段。     

慢病毒介导 EGFL7 沉默对肺癌A549细胞体外生物学行为的影响

目的：通过慢病毒介导沉默表皮生长因子样结构域7基因 (epidermal growth factor-like domain 7, EGFL7 )在肺癌A549细胞的表达,探讨 EGFL7对A549细胞的增殖、凋亡、侵袭和血管生成的影响。 方法： 利用慢病毒介导靶向 EGFL7的shRNA 转染A549细胞,实验分三组： LV-RNAi组（转染LV-RNAi）,LV-NC组（转染空病毒）和对照组（A549细胞）。Real-time PCR和Western blotting分别检测LV-RNAi感染对A549细胞 EGFL7 mRNA和蛋白水平表达的影响,MTT法和流式细胞术分别检测沉默〖STBX〗EGFL7〖STBZ〗对A549细胞增殖和凋亡的影响,Transwell侵袭实验和鸡胚绒毛尿囊膜（chick embryo chorioallantoic membrane,CAM）实验分别检测沉默 EGFL7 对A549细胞侵袭和血管生成能力的影响。 结果： 慢病毒稳定高效地转染A549细胞,LV-RNAi组细胞内 EGFL7 mRNA\[（0.18±0.03） vs （0.98±0.05）、（1.03±0.09）,P<0.05\]和蛋白表达较LV-NC组和对照组显著降低。与LV-NC组及对照组相比,沉默EGFL7 对LV-RNAi组A549细胞的增殖活力\[感染120 h 时：（073±0.22） vs （0.79±0.08） vs （0.81±0.11）,P>0.05\]与和凋亡率\[感染120 h 时：（1.92%±0.06） vs （2.11%±0.07） vs （1.85%±0.13）, P>0.05\]均无显著影响;同时,LV-RNAi组A549细胞侵袭入下室细胞数\[（61.7±14.5） vs （272.8±215）、（286.6±40.0）/mm2,P<0.05\]与血管生成指数\[（31.7±4.1） vs （96.3±4.4）、（103.3±6.5）,P<0.05\]均显著减少。 结论： 沉默 EGFL 基因能够抑制A549细胞侵袭和血管生成能力,但不影响其增殖与凋亡。     

siRNA沉默 KLF4 的表达促进食管癌KYSE140细胞的增殖及迁移

目的： 探讨体外沉默Kruppel样因子4（Kruppel like factor 4, KLF4 ）基因的表达对食管癌KYSE140细胞增殖及迁移的影响。 方法: Western blotting法检测人食管癌细胞株KYSE140、KYSE150、EC109及EC9706及食管永生化细胞NE3中KLF4蛋白的表达,化学合成2对靶向 KLF4 的siRNA（KLF4-siRNA1,KLF4-siRNA2）,并设对照siRNA（Ctrl-siRNA）,分别体外转染至高表达 KLF4 的食管癌KYSE140细胞中,形成KLF4-siRNA1-KYSE140、KLF4-siRNA2-KYSE140 及Ctrl-siRNA-KYSE140细胞,通过MTT实验、Transwell实验分别检测转染后食管癌 KYSE140细胞的增殖及迁移。 结果: 食管癌细胞株KYSE140 中 KLF4蛋白的表达明显高于KYSE150、EC109及EC9706细胞株\[（5.62±0.02） vs （1.71±0.23）、（3.24±0.35）、（3.16±041）,均P<005\]。KLF4-siRNA1-KYSE140、KLF4-siRNA2-KYSE140与Ctrl-siRNA-KYSE140细胞相比,KLF4蛋白表达明显降低\[（0.49±0.18）、（0.32±0.09） vs （0.98±0.19）,均P<0.05\],细胞增殖能力明显增高\[（1.2±0.8）、（1.4±0.1） vs （06±0.1）,均P<005\],迁移细胞数量也明显增加\[(780±22)、（475±25） vs （83±17）个,P<0.05\]。 结论： KLF4 在人食管癌细胞的增殖和迁移过程中起着负调控作用。     

Cx43通过P38/MAPK信号途径增强膀胱癌细胞的侵袭能力

目的：探讨连接蛋白43（connexin 43,Cx43）对膀胱癌细胞侵袭能力的影响及其可能的作用机制。方法: 选取2014年6月至2015年9月间承德医学院附属医院泌尿外科52例膀胱癌手术组织标本及32例癌旁组织,以及人膀胱癌细胞株5637。用免疫组化方法检测膀胱癌组织中Cx43蛋白表达。将Cx43脂质体、空白脂质体、siRNA及siRNA对照质粒转染5637细胞,Western blotting验证过Cx43表达和干扰效果;用Transwell侵袭实验检测5637细胞侵袭能力的变化,用Western blotting检测5637细胞MMP-2、MMP-9和P-P38蛋白表达水平的变化。结果: 膀胱癌组织中Cx43蛋白的表达水平明显高于癌旁组织\[(5.21±0.33) vs（2.84±0.19）,P<0.01\]。转染Cx43脂质体和siRNA成功上调/下调5637细胞中Cx43的表达。Cx43过表达组5637细胞的侵袭能力高于对照组\[穿膜细胞数：（1.36±0.04） vs （0.70±0.15）个,P<0.01\], siRNA干扰组细胞的侵袭能力低于对照组\[穿膜细胞数：（0.20±0.08） vs （0.59±0.13）个,P<0.05）。Cx43过表达组细胞MMP-2、MMP-9、P-P38/P38蛋白水平均高于对照组（P<0.01或P<0.05）,siRNA干扰组均低于对照组低(均P<0.01)。结论: Cx43增强膀胱癌5637细胞的侵袭能力,其机制可能是通过激活P38/MAPK信号途径实现的。     

下调GnTⅣa表达对肝癌Hca-F细胞增殖及侵袭的影响

目的：探讨慢病毒介导的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅳa （N-acetylglucosaminyltransferase Ⅳa,GnTⅣa）表达下调对小鼠肝癌Hca-F细胞体外增殖及侵袭能力的影响。方法：针对GnTⅣa的编码基因Mgat4a,构建含shRNA干扰序列的慢病毒表达载体pll3.7/Mgat4a-shRNA并包装慢病毒颗粒,感染Hca-F细胞。RT-PCR 及流式细胞术分别检测Mgat4a-shRNA重组慢病毒感染对Hca-F细胞Mgat4a mRNA及GnTⅣa表达的影响,CCK-8法和Transwell侵袭实验分别检测Mgat4a-shRNA重组慢病毒感染在体外对Hca-F细胞增殖和侵袭能力的影响。结果：慢病毒能够高效感染小鼠肝癌细胞Hca-F,Mgat4a-shRNA组感染效率达72%。与Hca-F细胞和Mock-shRNA组相比,Mgat4a-shRNA组细胞内Mgat4amRNA\[（0.53±0.2） vs（2.97±02）、（2.90±0.1）;均P<0.05\]和GnTⅣa\[（47.80±2.25）vs（394.61±5.27）、（378.61±4.38）;均P<0.05\]表达显著降低;增殖能力\[细胞增殖抑制率：（46.9±0.02）%vs （0.82±0.03）%、 0,P<0.01\]和体外侵袭能力\[穿过滤膜的细胞数：（18±3）vs （42±4）、（38±3）个,均P<0.05\]显著下降。结论：慢病毒介导shRNA下调GnTⅣa的表达能够抑制小鼠肝癌细胞 Hca-F的增殖及体外侵袭。     

抑制TPD52基因表达对结直肠癌细胞凋亡及ROS含量的影响

目的:探讨抑制肿瘤蛋白D52（TPD52）基因表达对结直肠癌细胞活力、凋亡率及活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量的影响及机制。方法:正常结肠NCM460细胞作为对照细胞,分别用RT-PCR及Western blotting检测人结直肠癌Caco2、SW480、HCT116、HT29细胞TPD52的mRNA及蛋白表达。以LipofectamineTM 2000为载体,将抑制TPD52表达的siRNA（TPD52-siRNA）及阴性对照siRNA（NC）转染HCT116细胞,转染48 h,MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率及ROS含量;Western blotting检测各组细胞增殖相关蛋白Ki67和PCNA及凋亡相关蛋白Bax和Survivin的蛋白表达。结果:与正常结肠NCM460细胞比较,Caco2、SW480、HCT116、HT29细胞中TPD52的mRNA及蛋白表达均明显升高,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。转染TPD52-siRNA的HCT116细胞TPD52的mRNA及蛋白表达均明显降低,与空白对照组和NC组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。与NC组比较,TPD52-siRNA组细胞活力明显降低,凋亡率升高,ROS含量升高,Ki67、PCNA和Survivin的蛋白表达明显降低,Bax的蛋白表达明显升高,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论:TPD52基因表达抑制可降低结直肠癌细胞活力和诱导凋亡,机制可能与细胞内ROS水平提高及Ki67、PCNA、Survivin表达下调和Bax表达上调有关。     

siRNA对人结肠癌细胞黏附力和侵袭性的抑制作用

目的: 探讨VEGFR3对人结肠癌细胞黏附力和侵袭性的影响。方法:构建携靶向 VEGFR3基因siRNA(small interfering RNA)表达载体，转染人结肠癌LoVo细胞， 半定量RTPCR和Western blotting检测转染前后LoVo细胞VEGFR3mRNA和蛋白表达的变化，基质黏附实验检测细胞转染后的黏附能力，细胞侵袭实验检测转染后肿瘤细胞侵袭性的改变。结果:携靶向 VEGFR3 基因siRNA的表达载体成功构建，RTPCR检测转染siRNA后LoVo细胞 VEGFR3mRNA表达水平降低；Western blotting检测转染siRNA后72 h LoVo细胞VEGFR3蛋白表达下降，其表达相对值由(1.26±0.19)降至(0.39±012)(P<0.05)。转染siRNA 72 h后LoVo细胞的黏附能力显著下降\[（0.626±0.047）vs (0.407±0.029), P＜0.05\]；LoVo细胞穿膜细胞数(6.38±3.25)明显低于空白对照组(24.82±3.44)、非特异性对照组(23.58±3.73) (P＜0.05)。结论:siRNA能够在LoVo细胞中引发RNA干扰效应，下调VEGFR3基因的表达，进而抑制LoVo细胞的黏附能力和侵袭性。     

Heparanase表达下调对结肠癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨乙酰肝素酶（Heparanase）对结肠癌细胞生物学功能的影响。方法 采用荧光定量PCR检测人结肠癌细胞株SW620、SW480、LoVo和CACO 2中Heparanase的表达水平;设计并合成3条Heparanase特异性的小分子干扰RNA（siRNA1、siRNA2、siRNA3）,用于转染4株结肠癌细胞中Heparanase表达水平最高者;荧光定量PCR和Western blotting检验3条siRNA的干扰效果;MTT法检测结肠癌细胞的增殖能力;Transwell小室法检测结肠癌细胞的侵袭能力。结果 SW480细胞中Heparanase的表达水平高于其他3株结肠癌细胞;3条特异性siRNA转染SW480细胞后,均能在蛋白和mRNA水平抑制Heparanase的表达,以siRNA3的效果最佳,且呈剂量依赖性。siRNA3介导的Heparanase基因沉默可呈剂量依赖地降低SW480细胞的增殖能力并减弱侵袭能力（P＜0.05）。结论 Heparanase表达下调可导致结肠癌细胞生物学恶性程度降低,提示Heparanase可作为结肠癌靶向治疗的一个重要靶点。     

CDX1对结直肠癌细胞增殖凋亡及p38MAPK磷酸化水平的影响

目的:探讨尾侧同源盒转录因子1（CDX1）对结直肠癌细胞增殖凋亡及p38MAPK磷酸化水平的影响。方法:用荧光定量PCR和Western blot检测正常肠上皮细胞FHC和结直肠癌细胞SW480、HCT116、Caco2中CDX1 mRNA和蛋白表达水平。在SW480细胞中转染pIRES-CDX1和pIRES记为CDX1组和载体组,以不做转染的细胞为对照组,荧光定量PCR和Western blot测定CDX1 mRNA和蛋白表达水平,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot测定细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、信号转导与转录因子3(STAT3)、磷酸化的STAT3（p-STAT3）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、磷酸化的p38MAPK（p-p38MAPK）蛋白水平。结果:结直肠癌细胞SW480、HCT116、Caco2中CDX1 mRNA和蛋白表达水平均明显低于正常肠上皮细胞FHC（P<0.05）,SW480细胞中CDX1 mRNA和蛋白表达水平明显低于HCT116、Caco2（P<0.05）。CDX1组细胞中CDX1 mRNA和蛋白水平明显高于对照组（P<0.05）,载体组细胞中CDX1 mRNA和蛋白水平与对照组相比没有统计学差异（P>0.05）。CDX1组细胞存活率明显降低,细胞凋亡率明显升高,细胞中Cleaved Caspase-3、p-p38MAPK水平升高,细胞中Bcl-2、p-STAT3水平降低,与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。载体组细胞存活率、凋亡率及细胞中Cleaved Caspase-3、Bcl-2、STAT3、p-STAT3、p38MAPK、p-p38MAPK蛋白水平与对照组相比没有明显变化（P>0.05）。结论:CDX1抑制结直肠癌细胞增殖,诱导Caspase-3介导的细胞凋亡,促进细胞中p38MAPK磷酸化,抑制细胞中STAT3磷酸化。