桔梗皂苷D诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡

目的:研究来自桔梗的天然单体化合物桔梗皂苷D(platycodin D,PD)对高转移性乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的影响,初步探索其可能的作用机制.方法:以不同浓度(0、2.5、5、10 μmol/L)PD处理乳腺癌MDA-MB-231细胞后,采用MTT法检测细胞增殖率并计算IC50值,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达水平.结果:PD呈剂量依赖性显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P＜0.01),作用72 h的IC50值为(7.30±2.67) μmol/L.与对照组相比,10 μmol/L的PD可显著促进MDA-MB-231细胞的凋亡(P＜0.05).PD激活了caspase家族蛋白,上调有活性的cleaved caspase-3、cleaved caspase-8和cleaved caspase-9的表达,下调无活性的caspase-8和caspase-9的表达;PD同时减少Bcl-2的表达,增加Bax的表达,使Bcl-2/Bax的比值降低.研究还发现PD使突变型P53蛋白的表达减少、E2F1的表达增加.结论:PD抑制乳腺癌细胞增殖具有明显的抗肿瘤效应,而诱导凋亡的发生可能是其发挥抗肿瘤效应的机制之一.     

不同药物麻醉的乳腺癌患者血清对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的:探究不同药物麻醉的乳腺癌患者血清对体外乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响。方法:收集我院2016年2月至2017年12月期间采用丙泊酚麻醉的乳腺癌患者血液样本28例，七氟醚麻醉的乳腺癌患者血液标本32例，乳腺癌术后镇痛使用曲马多的患者血液样本25例，未使用任何麻醉药的普通乳腺癌患者血液样本20例。将血清作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞24 h后，采用流式细胞法检测细胞的凋亡率，ELISA法检测各组细胞中半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）和半胱氨酸蛋白酶8（caspase-8）的表达情况。结果:流式细胞法检测结果显示，使用丙泊酚、七氟醚麻醉和曲马多术后镇痛的患者血清均能够显著提高乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡率；ELISA结果显示，使用丙泊酚、七氟醚麻醉和曲马多术后镇痛的患者血清均能够显著提高乳腺癌MDA-MB-231细胞caspase-3的表达（P＜0.05），且各组之间无统计学差异（P＞0.05）；而使用丙泊酚和七氟醚麻醉的患者血清均能够显著提高乳腺癌MDA-MB-231细胞caspase-8的表达（P＜0.05），曲马多却未能影响乳腺癌MDA-MB-231细胞caspase-8的表达（P＞0.05），丙泊酚和七氟醚组与曲马多组对比，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:使用丙泊酚、七氟醚麻醉和曲马多术后镇痛的患者血清均能够显著提高乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡率及caspase-3的表达；而使用丙泊酚和七氟醚麻醉的患者血清能够显著提高乳腺癌MDA-MB-231细胞caspase-8的表达，曲马多对乳腺癌MDA-MB-231细胞caspase-8的表达没有明显影响。     

KOZAK序列对乳腺癌MDA-MB-231细胞CCNL1基因表达的影响

目的：探讨KOZAK序列对细胞周期调节蛋白1（CCNL1）基因在人乳腺癌细胞MDA-MB-231中表达的影响。方法：构建pcDNA3.1-CCNL1和pcDNA3.1-CCNL1-K（含有KOZAK序列）的真核重组表达质粒,采用Fugene HD转染试剂将重组表达质粒转染入MDA-MB-231细胞,并用荧光定量PCR和Western blot方法检测pcDNA3.1-CCNL1和pcDNA3.1-CCNL1-K重组质粒在MDA-MB-231细胞中表达的差异。结果：在MDA-MB-231细胞中质粒pcDNA3.1-CCNL1-K比空白对照细胞mRNA和蛋白质表达量要高;而质粒pcDNA3.1-CCNL1比空白对照细胞mRNA和蛋白质表达量也高。结论：在MDA-MB-231细胞中,质粒pcDNA3.1-CCNL1-K较pcDNA3.1-CCNL1的mRNA和蛋白表达水平均存在差异,KOZAK序列能够提高CCNL1基因在MDA-MB-231细胞中的表达。     

KOZAK序列对乳腺癌MDA-MB-231细胞CCNL1基因表达的影响

目的:探讨KOZAK序列对细胞周期调节蛋白1(CCNL1)基因在人乳腺癌细胞MDA-MB-231中表达的影响。方法:构建pcDNA3.1-CCNL1和pcDNA3.1-CCNL1-K(含有KOZAK序列)的真核重组表达质粒,采用Fugene HD转染试剂将重组表达质粒转染入MDA-MB-231细胞,并用荧光定量PCR和Western blot方法检测pcDNA3.1-CCNL1和pcDNA3.1-CCNL1-K重组质粒在MDA-MB-231细胞中表达的差异。结果:在MDA-MB-231细胞中质粒pcDNA3.1-CCNL1-K比空白对照细胞mRNA和蛋白质表达量要高;而质粒pcDNA3.1-CCNL1比空白对照细胞mRNA和蛋白质表达量也高。结论:在MDA-MB-231细胞中,质粒pcDNA3.1-CCNL1-K较pcDNA3.1-CCNL1的mRNA和蛋白表达水平均存在差异,KOZAK序列能够提高CCNL1基因在MDA-MB-231细胞中的表达。     

骨形态发生蛋白9对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein9,BMP9)在体内、外对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响。方法:将pAdtrack-CMV/BMP9和pAdtrack-CMV/GFP腺病毒感染MDA-MB-231细胞,RT-PCR法检测MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231/BMP9细胞中BMP9mRNA的表达,MTT法、平板集落形成实验和FCM法检测细胞增殖和凋亡的情况。建立裸鼠MDA-MB-231、MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231/BMP9移植瘤模型,测量移植瘤体积,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果:MDA-MB-231和MDA-MB-231/GFP细胞中无BMP9mRNA的表达,MDA-MB-231/BMP9细胞中有明显BMP9mRNA表达;MDA-MB-231/BMP9细胞增殖抑制率高于MDA-MB-231/GFP细胞(P<0.05),而细胞集落形成率明显低于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.05),细胞凋亡率则明显高于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.05)。MDA-MB-231/BMP9组的裸鼠移植瘤体积明显小于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.001),而移植瘤细胞中的凋亡指数则明显高于MDA-MB-231/GFP和MDA-MB-231组(P<0.001)。结论:BMP9可在体内、外抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖并促进其凋亡。     

二甲双胍联合多西他赛对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响

目的:通过二甲双胍联合多西他赛观察对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的抑制作用。方法:实验分为4组:多西他赛联合二甲双胍组、单用多西他赛组、单用二甲双胍组以及空白对照组。平板克隆实验检测多西他赛联合二甲双胍对MDA-MB-231细胞克隆形成能力的影响,MTT实验检测多西他赛联合二甲双胍对MDA-MB-231细胞克增殖能力的影响,流式细胞仪检测多西他赛联合二甲双胍对MDA-MB-231细胞凋亡能力的影响。结果:平板克隆实验、MTT实验和流式细胞仪凋亡检测实验结果分别显示:多西他赛联合二甲双胍中细胞的克隆率、增殖能力下降高于单用多西他赛组、单用二甲双胍组以及空白对照组（P<0.05）,而凋亡率多西他赛联合二甲双胍组亦高于其它各对照组（P<0.05）。结论:二甲双胍联合多西他赛能够显著降低乳腺癌细胞MDA-MB-231的克隆和增殖能力,同时增加MDA-MB-231的凋亡能力,两者的联合具有协同杀伤肿瘤细胞的作用。     

沉默CD44表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与侵袭的影响

目的:探索乳腺癌细胞MDA-MB-231及MCF-7中CD44分子的表达水平差异及沉默CD44对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移的影响。方法:利用qRT-PCR及Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平;设计并合成CD44的siRNA片段(CD44-siRNA)转染乳腺癌细胞,利用qRT-PCR、Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平的变化;MTT检测MDA-MB-231细胞增殖;Transwell侵袭实验检测MDA-MB-231细胞的迁移与侵袭能力变化。结果:CD44在侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达高于非侵袭性乳腺癌细胞MCF-7,CD44-siRNA下调了 MDA-MB-231细胞中CD44 mRNA与蛋白水平的表达,并抑制了细胞的增殖和侵袭转移能力。结论:CD44-siRNA能够下调CD44的表达,并有效抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖及其侵袭迁移力。     

黄芪注射液对basal-like型乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖和凋亡的影响

目的 探讨黄芪注射液作用于basal-like型乳腺癌MDA-MB-231细胞株后对其增殖和凋亡的影响.方法 将实验细胞分为对照组和5种不同剂量的黄芪注射液作用组.用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期,碘化丙啶染色检测细胞凋亡率.黄芪注射液作用于MDA-MB-231细胞48 h和72 h的OD值采用多个均数比较的方差分析;48 h时细胞周期各阶段细胞比率的比较用χ2检验.结果 作用48 h时,各剂量组均可抑制MDA-MB-231细胞增殖(P<0.01),其效应呈质量浓度依赖性.作用48 h时,高剂量组(2×10-1～2×10-2 g/ml)黄芪注射液还可促进细胞凋亡(χ2＝8.01,P=0.00);作用72 h时,高剂量组仍呈抑制作用,但随质量浓度的降低,抑制作用减少,低剂量黄芪组(2×10-4 ～2×10-5 g/ml)有促进增殖作用(P<0.01);中高剂量组(2×10-3 g/ml)可改变细胞周期的分布.结论 黄芪注射液可抑制MDA-MB-231细胞增殖,并诱导其凋亡,可能为basal-like乳腺癌的治疗带来益处..     

乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、黏附及侵袭的影响

目的:研究乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)对乳腺癌细胞增殖、凋亡、黏附和侵袭能力的影响.方法:首先,从6例乳腺癌病人肿瘤及癌旁正常乳腺组织块分别分离培养成对的CAFs和正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs).然后,通过Transwell小室将CAFs或NFs与乳腺癌MDA-MB-231细胞体外共培养,进行增殖(MTT)、侵袭、黏附实验及流式细胞仪细胞凋亡检测.结果:MDA-MB-231与CAFs或NFs共培养后乳腺癌细胞的增殖活性显著增强(P＜0.05).与NFs相比,这种差异在同CAFs共培养组更为明显(P =0.011).与CAFs共培养之后,MDA-MB-231的早期凋亡显著减少(P=0.026);而与NFs共培养之后则无显著差异.CAFs或NFs对MDA-MB-231细胞的细胞周期和晚期凋亡无明显影响.与CAFs或NFs共培养24小时后,MDA-MB-231细胞的侵袭、黏附能力明显增强,黏附数目为(34.7±4.84)个/视野(CAFs)和(20.16±0.09)个/视野(NFs),(P =0.000);侵袭数为(89±4.62)个/视野(CAFs)和(81.6±6.08)个/视野(NFs),(P＜0.05).结论:CAFs能促进乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、减少其早期凋亡;同时对乳腺癌细胞的黏附和侵袭能力有促进作用.可是NFs的作用较CAFs为弱.有关CAFs影响乳腺癌肿瘤细胞的生物学特性的机制有待于进一步研究.     

Celecoxib下调NF-kB信号通路促进人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的体外研究

背景与目的:Celecoxib可以抑制多种肿瘤细胞增殖、诱导其凋亡,但具体的作用机制尚不明确.本研究探讨Celecoxib是否通过阻断NF-kB信号途径诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡.方法:RT-PCR法检测MDA-MB-231细胞中COX-2 mRNA的表达.MTT法检测Celecoxib、PGE2与Celecoxib联合应用对MDA-MB-231细胞增殖的影响.流式细胞术检测细胞周期、凋亡的变化.Westernblot法检测0、40、80、120 μmol/L Celecoxib作用MDA-MB-231细胞24 h后细胞中Caspase-3、p65蛋白的表达变化.结果:RT-PCR检测显示MDA-MB-231细胞中COX-2 mRNA的表达随着Celecoxib浓度的增加而逐渐降低.Celecoxib能够显著地抑制MDA-MB-231细胞增殖(P<0.05),但Celecoxib联合PGE2与单独应用Celecoxib对细胞增殖的影响差异无统计学意义(P>0.05).流式细胞术结果显示Celecoxib可使MDA-MB-231细胞阻滞在G0/G1期,并可诱发细胞凋亡.Western blot检测发现Celecoxib作用MDA-MB-231细胞24 h,随着Celecoxib浓度的增加,Caspase-3蛋白表达增加,P65蛋白表达下调.结论:Celecoxib可以通过下调P65蛋白的表达从而阻断NF-kB信号途径,抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,促进其凋亡.     

氯化锂抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭的机制研究

目的：探讨LiCl对乳腺癌细胞系MDA-MB-231侵袭能力的影响, 及其对侵袭关键因子NGAL表达的调控。方法： LiCl处理后, MTT测定细胞活力, 光镜观察细胞伪足形成; Transwell观察细胞侵袭能力的变化; 实时定量PCR及Western blotting观察NGAL在转录和翻译水平的表达; 使用小分子药物Bay117082 （NF-κB通路抑制剂） 和FH535 （Wnt/β-catenin通路抑制剂） 处理细胞, 检测关键通路对NGAL表达的调控。结果： 在浓度低于10 mmol/L时, LiCl对细胞活性的影响无显著性差异。5 mmol/L或10 mmol/L LiCl处理细胞24 h后, 细胞形态发生明显改变, 其伪足形成受到影响, 但在NHE1抑制剂Cariporide作用下, 细胞伪足破坏的情况有所减轻; Transwell结果显示5、 10 mmol/L LiCl分别处理细胞24 h后, 细胞的侵袭能力受到明显抑制。实时定量PCR和Western blotting结果显示, LiCl处理后NGAL mRNA和蛋白表达均明显下降, 表明LiCl对NGAL的调控可能始于转录水平。小分子药物处理分别使Wnt/β-catenin和NF-κB信号通路抑制后, NGAL的表达均受到明显抑制, 表明这两条通路都参与了NGAL表达的调控。结论： LiCl通过抑制NF-κB调控NGAL的表达, 抑制伪足形成以及细胞侵袭。     

TRAIL联合白藜芦醇对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡影响的研究

目的:探讨 TRAIL 联合白藜芦醇对乳腺癌MDA-MB-231 细胞株增殖及凋亡的影响.方法:MTT 法和软琼脂集落形成实验检测细胞增殖;DAPI染色法及流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞表面DR4、DR5蛋白表达.结果:50 ng/mL TRAIL与50和100 μmol/L白藜芦醇联合作用14 d后,MDA-MB-231细胞在软琼脂中集落形成率分别为(2.49±0.08)%和(1.38±0.07)%,与相应浓度TRAIL、白藜芦醇单独应用比较及组间比较,差异有统计学意义,P<0.01.50 ng/mL TRAIL与50和100 μmol/L白藜芦醇联合作用后,对MDA-MB-231细胞增殖抑制率为(62.43±2.07)%、(87.32±1.44)%;细胞凋亡率为(53.59±1.44)%、(73.72±1.96)%,与单独应用相应浓度TRAIL、白藜芦醇比较及组间比较,差异有统计学意义,P<0.01.50、100和200 μmol/L白藜芦醇作用后,细胞膜表面DR4、DR5的荧光指数分别为1.80±0.07、2.11±0.14、2.59±0.16和2.16士0.08、2.92±0.25、3.90±0.06,与对照组(FI 值分别为1.52±0.04和1.61±0.13)比较及组间比较差异有统计学意义,P<0.05.结论:TRAIL与白藜芦醇联合可协同抑制MDA-MB-231 细胞增殖并诱导其凋亡,DR4,DR5蛋白表达的上调可能是其协同效应的机制之一.     

沉默ERK增强A375黑素瘤细胞对TRAIL诱导细胞凋亡的敏感性

目的:探讨直接抑制细胞外信号调节激酶(extra cellular signal-regulated kinase,ERK)表达后,对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对黑素瘤细胞杀伤作用的影响及其作用机制.方法:用携带ERK特异或对照shRNA的慢病毒感染A375黑素瘤细胞,48 h后加入终浓度为100 μg/ml基因重组TRAIL蛋白继续培养6h,收获细胞,碘化丙啶染色,用流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和TRAIL受体的表达;Western blotting检测相关蛋白的表达水平.结果:亚型特异的ERK shRNA分别沉默ERK1或ERK2,导致A375细胞出现G1期阻滞(对照shRNA组的G1期细胞比例为71％,ERK1、ERK2、ERK1 +2 shRNA组分别增加到85％、90％和81％,P＜0.01);S期细胞从对照组的11％减少到2％左右(P＜0.001)、G2/M期细胞也从对照组的17％减少到3％(P＜0.01).细胞周期改变伴有P21、P27蛋白上调和Cyclin D1蛋白降低,但未见明显的细胞凋亡.经对照shRNA和TRAIL处理的细胞,仅有15％的凋亡率,而ERK shRNA和TRAIL联合处理则使凋亡率达到40％ ～60％ (P＜0.01).抑制ERK蛋白表达能显著上调细胞表面TRAIL受体DR4的表达(从对照组32％增加到75％～80％,P＜0.01),但DR5变化不明显.ERK抑制还明显降低A375细胞的葡萄糖转运受体1(Glut 1)和己糖激酶Ⅱ(HK-Ⅱ)的蛋白表达水平.结论:直接抑制ERK不仅可以抑制肿瘤细胞周期的进展,而且可以增强TRAIL对A375黑素瘤细胞的杀伤作用,其机制与上调细胞表面DR4的表达和干扰肿瘤细胞糖代谢有关.     

白藜芦醇诱导MDA-MB-231细胞凋亡及其对活性氧和Caspase-3的影响

目的探讨白藜芦醇对MDA-MB-231细胞的凋亡诱导效应和对细胞内活性氧水平(reactive oxygen species,ROS)及Caspase-3的影响。方法用不同浓度的白藜芦醇诱导培养MDA-MB-231细胞24h后,采用流式细胞术(FCM)和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,FCM测定细胞内活性氧(ROS)水平,免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白的变化。结果白藜芦醇能诱导MDA-MB-231细胞凋亡,DNA电泳可见梯状条带出现,并呈现典型的凋亡改变,60μmol/L白藜芦醇作用MDA-MB-231细胞4、12和24h后细胞ROS生成量分别为:50.0±5.7、115.0±10.6、79.2±6.9;Caspase-3蛋白活性逐渐增加。结论白藜芦醇诱导MDA-MB-231细胞凋亡与细胞ROS水平升高和Caspase-3活化有关,可能是白藜芦醇诱导MDA-MB-231细胞凋亡机制之一。     

没食子酸乙酯对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力及其作用机制研究

目的：研究没食子酸乙酯（EG）对高转移性乳腺癌细胞株黏附、侵袭和迁移能力影响及其作用机制。方法观察EG干预后高转移性乳腺癌MDA-MB-231与对照组相比黏附、侵袭、迁移能力的变化,采用SABC法和实时PCR法检测EG对丝/苏氨酸激酶（AKT-2）和eIF-4E的蛋白表达及mRNA表达的影响。结果加入EG干预的高转移性乳腺癌细胞株的黏附、侵袭和迁移能力均低于对照组（P﹤0.05）;EG组的AKT-2和eIF-4E蛋白表达及mRNA表达量均低于对照组,两组间差异有统计学意义（P﹤0.05）。结论体外EG能降低MDA-MB-231的侵袭能力,可能与抑制癌细胞中原癌基因和延长因子蛋白以及mRNA的表达有关。     

TET1-CD对乳腺癌细胞MDA-MB-231 增殖和迁移的影响及其作用机制

[摘要] 目的：探讨TET1 催化结构域（TET1-CD）基因高表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231 增殖、迁移的影响及其可能的作用机制。方法：慢病毒感染建立高表达TET1-CD的MDA-MB-231 细胞系,用qPCR检测细胞中TET1-CD mRNA的表达,Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,MTT 法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力,WB实验检测MDA-MB-231 细胞上皮间质转化（EMT）途径相关蛋白E-cadherin、Vimentin、MMP2 以及Wnt、Hedgehog(HH)通路相关蛋白的表达水平。结果：过表达TET1-CD提高乳腺癌MDA-MB-231 细胞TET1-CD的表达水平（P<0.01）,明显抑制MDA-MB-231 细胞的增殖和迁移能力（均P<0.01）。过表达TET1-CD 可使乳腺癌MDA-MB-231 细胞E-cadherin 表达上升,Vimentin、MMP2 表达下调（均P<0.05）;可使β-catenin、C-myc、CyclinD1、Gli1 蛋白表达水平降低（均P<0.05）。结论：过表达TET1-CD可能通过Wnt、HH信号通路抑制EMT途径进而抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231 的增殖和迁移。     

金雀异黄素诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的研究

目的 探讨金雀异黄素（genistein,GEN）诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的分子机制.方法 用0、5、10、20 μmol/L GEN处理MDA-MB-231 细胞24 h.采用CCK-8、Hoechst 33342染色和流式细胞仪测定不同浓度GEN对 MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响.采用Western blotting检测不同浓度GEN处理前后MDA-MB-231细胞中Fas相关死亡域蛋白（FADD）、活性半胱天冬酶8（cleaved caspase-8）、Fas、FasL蛋白表达水平.采用实时RT-PCR分析不同浓度GEN处理前后MDA-MB-231细胞中Fas、FasL基因表达水平.多组均数比较采用方差齐性检验后进行单因素方差分析.结果 在GEN作用24 h后,0、5、10和20 μmol/L组对MDA-MB-231细胞增殖的抑制率分别为（3.00±1.41）%、（14.02±1.57）%、（27.5±1.52）%、（48.90±1.44）%.与0 μmol/L组相比,5、10和20 μmol/L组呈浓度依赖性增加（F=528.119,P=0.000）.两两比较显示：各浓度组之间差异均有统计学意义（P〈0.05）.0、5、10和20 μmol/L组诱导MDA-MB-231细胞的早期凋亡率分别为（3.40±0.40）%、（9.34±1.34）%、（19.26±0.93）%、（27.41±1.12）%.与0 μmol/L组相比,5、10和20 μmol/L组呈浓度依赖性增加（F=379.573,P=0.000）.两两比较显示：各浓度组之间差异均有统计学意义（P〈0.05）.Western blotting结果显示,与0 μmol/L组相比,其他浓度组经GEN处理的MDA-MB-231细胞FADD、cleaved caspase-8、FasL蛋白表达升高（F=368.621、456.744、419.129,P均=0.000）,Fas蛋白表达差异无统计学意义（F=0.800,P=0.528）;与10（μmol/L组相比,20 μmol/L组FasL蛋白表达降低有统计学意义（F=92.235,P=0.001）.实时RT-PCR结果显示,与0 μmol/L组相比,其他浓度组经GEN处理的MDA-MB-231细胞FasL mRNA表达升高（F=646.983,P=0.000）,Fas mRNA表达差异无统计学意义（F=1.556,P=0.274）;与10 μmol/L组相比,20 μmol/L组FasL mRNA表达降低有统计学意义（F=52.562,P=0.020）.结论 GEN通过上调Fas/FasL途径中FasL基因表达诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡.     

金雀异黄素协同TRAIL诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡作用的研究

目的：研究金雀异黄素是否协同TRAIL诱导乳腺癌MCF-7细胞发生凋亡, 并探讨其可能的内在机制。方法： 首先,MCF-7细胞分别经过1.25, 2.5, 5, 10, 20, 40 μg/mL金雀异黄素及1, 10, 100, 1 000 ng/mL TRAIL单独处理后, 应用MTT法检测MCF-7细胞增殖情况, 根据其结果选择终浓度为20 μg/mL金雀异黄素及100 ng/mL TRAIL作为后续试验的浓度; 接着, MCF-7细胞分为4组, 即对照组、 Gen组 （终浓度为20 μg/mL）、 TRAIL组 （终浓度为100 ng/mL） 及Gen+TRAIL组。细胞经不同处理后, 流式细胞仪检测细胞凋亡率; 免疫荧光法检测细胞凋亡中Caspase-3活性; 应用酶联免疫吸附方法检测细胞NF-кB含量。结果： 联合应用Gen后, 明显增强TRAIL对MCF-7细胞增殖的抑制 ［抑制率为 （63.78±2.61） %］, 并且促进TRAIL诱导细胞凋亡的发生 ［凋亡率为 （42.20±1.35） %］, 均分别高于相应的单独TRAIL处理组 （P<0.01）。另外, 经TRAIL单独处理的MCF-7细胞Caspase-3活性为17.324±0.880 μmol/L/hr/mg protein, NF-κB的含量为343.333±8.064 pg/mL; 而在联合应用Gen以后, Caspase-3活性增高 （44.000±0.445 μmol/L/hr/mg protein）, 同时NF-κB的合成受到抑制 （177.453±25.389 pg/mL）, 与相应单独用药组比较差异具有统计学意义（P<0.01）。结论： 金雀异黄素可协同TRAIL诱导乳腺癌MCF-7细胞发生凋亡、 增加乳腺癌细胞对TRAIL的敏感性, 其可能的机制是Gen协同TRAIL激活了细胞凋亡过程中Caspase-3, 并进一步抑制了NF-κB的合成, 从而最终导致乳腺癌MCF-7细胞凋亡的发生。     

NRP-1过表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231、SK-BR-3生物学行为的影响

目的 通过上调乳腺癌细胞MDA-MB-231、SK-BR-3中NRP-1的表达,观察NRP-1对细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响。方法 构建pcDNA3.1-NRP-1表达载体,脂质体介导NRP-1 表达质粒转染MDA-MB-231、SK-BR-3细胞,用G418筛选出稳定转染的乳腺癌细胞株。利用RTqPCR、Western blot法分别检测NRP-1基因mRNA及其蛋白表达;CCK-8法、AnnexinⅤ-APC/7-AAD法、Transwell小室分别检测转染细胞增殖率、凋亡率及侵袭、迁移能力。结果 成功构建pcDNA3.1- NRP-1表达载体,转染MDA-MB-231、SK-BR-3细胞并筛选稳定表达系。与对照组相比,过表达组细胞的NRP-1 mRNA及蛋白表达水平明显升高（均P<0.05）;NRP-1过表达组的细胞较对照组增殖率增加、凋亡率降低、侵袭及迁移能力增强（均P<0.05)。结论 NRP-1在乳腺癌发展、浸润、转移中起着一定的作用,它可促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,抑制其凋亡。