胡椒碱及其衍生物对原代培养心肌细胞损伤的保护作用

背景：胡椒碱是滇产回心草心脏保护作用的主要物质基础,同时,其化学结构相对简单,可进行结构修饰,为进一步研发新型的抗心肌缺血的化合物奠定基础。 目的：观察胡椒碱及其7个衍生物对异丙肾上腺素和过氧化氢损伤心肌细胞的保护作用。 方法：采用异丙肾上腺素和H2O2诱导原代培养大鼠心肌细胞致心肌细胞损伤模型,MTT法检测不同剂量胡椒碱及其衍生物对损伤心肌细胞的影响。 结果与结论：7×10-8 mol/L胡椒碱、7×10-8,7×10-7mol/L胡椒酸甲酯、7×10-8,7×10-7,7×10-6 mol/L吡咯烷产物、7×10-8,7×10-7,7×10-6 mol/L二乙胺产物可不同程度地提高异丙肾上腺素诱导的心肌细胞损伤模型中心肌细胞的存活比例(P < 0.05),但未见剂量相关性; 7×10-8 mol/L胡椒碱(P < 0.05)、7×10-8,7×10-7 mol/L吡咯烷产物和7×10-8,7×10-7 mol/L二乙胺产物可提升过氧化氢诱导的心肌细胞损伤模型中心肌细胞存活比例,未见明显的剂量相关性。由此推测胡椒碱及其衍生物可显著缓解异丙肾上腺素和过氧化氢所致的心肌细胞损伤,且其吡咯烷产物和二乙胺产物作用效果优于胡椒碱。     

5-HT1受体激动剂对偏头痛大鼠脑膜神经源炎症的影响

目的探讨5-HT_1受体激动剂94-95-10Y及二氢麦角胺(DHE)对偏头痛大鼠神经源性脑膜炎症的作用与机制。方法采用静脉注射硝酸甘油(GTN)制备大鼠偏头痛模型;94-95-10Y10、20、30mg/kg组在制作模型前20min腹腔注射94-95-10Y10、20、30mg/kg,DHE组在GTN静脉注射15min时静脉注射DHE;在GTN静脉注射后2h、4h,分别取脑膜组织,Western印迹法检测脑膜核因子-kB(NF-kB)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)蛋白表达水平,部分脑膜制成组织切片,观察脑膜病理变化。结果94-95-10Y10、20、30mg/kg组及DHE组大鼠脑膜炎性细胞明显减少,血管扩张程度减轻;94-95-10Y10、20、30mg/kg组及DHE组均能抑制GTN静脉注射大鼠脑膜NF-kB、I- CAM-1蛋白表达,94-95-10Y10、20、30mg/kg各组呈剂量依赖关系。结论94-95-10Y及DHE能够抑制偏头痛大鼠脑膜NF-kB、ICAM-1蛋白表达增强及脑膜炎症反应,提示5-HT_1受体激动剂可以阻断NF-kB信号通路发挥其抗偏头痛时神经源性脑膜炎症的作用。     

PrP106—126对原代大脑皮质神经元的毒性作用

目的:探讨PrP10 6- 12 6对神经元的毒性作用。方法:原代培养的皮质神经元暴露于合成多肽PrP10 6 -12 6,观察细胞存活率的变化,采用流式细胞术检测有无凋亡的发生,用免疫印迹法检测caspase 3的活性。结果:在PrP10 6 -12 6的作用下,神经元存活数较对照组减少,随着作用时间的延长,存活率明显下降。在PrP10 6- 12 6作用下神经元的凋亡比例明显增加,PrP10 6- 12 6组凋亡细胞为2 4.93 % ,对照组为6.95 %。与对照组比,PrP10 6 -12 6组在培养第6、8、10天时均有较明显的caspase- 3表达,且伴有caspase 3的活化。结论:PrP10 6- 12 6对原代培养的皮质神经元有毒性作用,呈时间依赖性。PrP10 6 -12 6毒性作用涉及了细胞凋亡机制,激活caspase -3诱导细胞凋亡可能是途径之一。     

Aβ_(3-10)多价腺病毒疫苗鼻粘膜免疫阿尔茨海默病转基因鼠的炎症反应研究

目的探讨基因重组腺病毒疫苗Ad-Aβ_((3-10)10)-CpG鼻粘膜免疫APPswe/PSEN1d E9双转基因鼠诱导的炎症反应。方法 18只雄性10月龄APPswe/PSEN1dE9鼠,随机分为3组,分别以Aβ_(3-10)多价腺病毒疫苗AdAβ_((3-10)10)-CpG、空腺病毒载体鼻粘膜免疫及Aβ_(1-42)肽肌内注射免疫,用MTT法检测脾细胞增殖反应、ELISA法检测脾细胞培养上清和脑组织匀浆中IL-4和INF-γ水平,免疫组化法检测脑内星形胶质细胞及淋巴细胞浸润。结果 Ad-Aβ_((3-10)10)-CpG组和Aβ_(1-42)组,在相对应的免疫原刺激孔产生较高水平的增殖率,高于非相应免疫原刺激孔(P0.05),但低于Con A刺激孔(P0.05)。皮质和海马区GFAP阳性细胞所占面积百分比为:空腺病毒载体组Aβ_(1-42)组Ad-Aβ_((3-10)10)-CpG组。各组小鼠脑组织在血管内和脑实质偶尔发现个别CD3、CD5阳性细胞,3组没有显著差异。Ad-Aβ_((3-10)10)-CpG组和Aβ_(1-42)组中在其相对应的免疫原刺激时检测到较高水平的IL-4、IFN-γ。Aβ_(1-42)组在Aβ_(1-42)肽刺激孔的IFN-γ水平显著高于Ad-Aβ_((3-10)10)-CpG组在Aβ_(3-10)肽刺激孔的IFN-γ水平(P0.05)。AdAβ_((3-10)10)-CpG组脑组织匀浆IL-4水平大于Aβ_(1-42)组,但没有显著性差异(P0.05),Ad-Aβ_((3-10)10)-CpG组脑组织匀浆中IFN-γ水平显著小于Aβ_(1-42)组(P0.05)。结论腺病毒疫苗Ad-Aβ_((3-10)10)-CpG鼻粘膜免疫APPswe/PSEN1dE9双转基因鼠主要产生Th2型免疫应答,可以减少脑内星形胶质细胞活化,未引起脑内炎症反应,即避免了Aβ_(1-42)全肽段所引起的炎症反应。     

Aβ_(3-10)多价腺病毒疫苗鼻粘膜免疫AD转基因鼠的治疗效果研究

目的探讨Aβ_(3-10)多价腺病毒疫苗鼻粘膜免疫AD转基因鼠的治疗效果。方法 18只雄性10月龄AD转基因鼠,随机分为3组,分别以Aβ_(3-10)多价腺病毒疫苗Ad-Aβ_((3-10)10)-Cp G、空腺病毒载体及Aβ1-42免疫,ELISA法检测血清抗Aβ抗体滴度及亚型,Morris水迷宫检测转基因鼠的学习记忆能力,免疫组化法检测转基因鼠脑内Aβ沉积;ELISA法检测转基因鼠脑组织匀浆和血清中可溶性Aβ42水平。结果 Ad-Aβ_((3-10)10)-Cp G组和Aβ1-42组抗体水平随着免疫次数逐渐增加,第7次免疫后Ad-Aβ_((3-10)10)-Cp G组和Aβ1-42组血清中抗Aβ抗体水平分别为(67.42±13.68)μg/ml和(94.41±14.01)μg/ml,而空载体组一直在基线水平。Ad-Aβ_((3-10)10)-Cp G组Ig G1/Ig G2a比值明显高于Aβ1-42组(P0.05)。在Morris水迷宫实验中Ad-Aβ_((3-10)10)-Cp G组的逃避潜伏期明显小于空载体组(P0.01);Ad-Aβ_((3-10)10)-Cp G组在靶象限的停留时间明显长于空载体组(P0.01);Ad-Aβ_((3-10)10)-Cp G组穿越平台所在位置的次数明显多于空载体组(P0.05)。Ad-Aβ_((3-10)10)-Cp G组脑组织Aβ沉积所占面积百分比与空载体组比较明显减少(P0.01)。Ad-Aβ_((3-10)10)-Cp G组脑组织匀浆和血清中可溶性Aβ42水平明显高于空载体组(P0.01)。结论 Aβ_(3-10)多价腺病毒疫苗鼻粘膜免疫AD转基因鼠,主要引起Th2型免疫应答,可以改善AD转基因鼠学习和记忆能力,促进转基因鼠脑内Aβ清除,可以减少由细胞免疫应答引起的炎症反应。Aβ_(3-10)多价腺病毒疫苗是AD免疫治疗的安全有效的候选疫苗。     

糖尿病周围神经病变患者IL-6及IL-10水平与神经纤维损伤程度的相关性分析

目的探讨糖尿病周围神经病变患者IL-6、IL-10水平与神经纤维损伤程度的相关性。方法选取2013-01—2015-01我院收治的2型糖尿病患者100例,根据血清IL-6和IL-10表达水平将患者分为IL-6+组和IL-6-组,以及IL-10+组和IL-10-组。比较不同血清IL-6、IL-10表达水平的糖尿病周围神经病变患者的临床资料、电生理检测结果以及温度感觉检测结果。结果 IL-6+组患者血清糖化血红蛋白浓度明显高于IL-6-组(P0.05);IL-6+组患者腓肠神经SNAP振幅以及腓总神经CMAP振幅明显低于IL-6-组(P0.05),IL-10+组患者腓肠神经SNAP振幅以及腓总神经CMAP振幅、MNCV、F波最小潜伏期均明显低于IL-10-组(P0.05);IL-6+组WDT明显高于IL-6-组(P0.05);IL-10+组WDT明显高于IL-10-组(P0.05),IL-10+组CDT明显低于IL-10-组(P0.05)。结论血清IL-6和IL-10表达水平与糖尿病周围神经病变患者神经纤维损伤程度有相关性,细胞因子IL-6和IL-10可能在糖尿病周围神经病变发生过程中发生作用。     

阿仑磷酸钠对人成骨细胞增殖和护骨素/核因子κB受体活化因子配体mRNA表达的影响

背景：阿仑磷酸钠是新一代的二磷酸盐,属第2代骨质疏松药,临床上广泛用于治疗骨吸收增加类疾病。 目的：观察阿仑磷酸钠对人成骨细胞增殖和核因子κB受体活化因子配体(RANKL)及护骨素(OPG) mRNA表达的影响。 设计、时间及地点：单一样本观察,于2007-11/2008-03在重庆医科大学基础研究所完成。 材料：成骨细胞来源于手术中取得的松质骨骨块;阿仑磷酸钠为杭州默沙东制药有限公司生产,批号：06130。 方法：在含1×10-9,1×10-8,1×10-7,1×10-6,1×10-5,1×10-4 mol/L不同浓度的阿仑磷酸钠培养液中培养成骨细胞,以不加阿仑磷酸钠培养为对照。 主要观察指标：①成骨细胞观察。②以四甲基偶氮唑盐检测阿仑磷酸钠对成骨细胞的增殖的影响。③以半定量反转录-聚合酶链反应方法观察不同浓度阿仑磷酸钠对成骨细胞表达OPG/RANKL mRNA的影响。 结果：1×10-5,1×10-4 mol/L的阿仑磷酸钠抑制成骨细胞增殖,1×10-9~10-6 mol/L的阿仑磷酸钠促进成骨细胞增殖,其中1×10-8 mol/L的阿仑磷酸钠对成骨细胞的增殖作用最强。阿仑磷酸钠呈浓度依赖性降低RANKL mRNA表达,干预72 h,1×10-5 mol/L抑制作用最大(P < 0.01)。阿仑磷酸钠呈浓度依赖性增加护骨素 mRNA表达,干预72 h,1×10-6 mol/L增加作用最明显(P < 0.01),而1×10-5 mol/L时又减低。 结论：阿仑磷酸钠能使成骨细胞增殖,1×10-8 mol/L浓度增殖作用最强,其可能通过调节OPG/RANKL mRNA表达而影响骨代谢。     

乙烯雌酚可诱导骨髓基质干细胞向成骨细胞分化

背景：关于雌激素对骨髓基质干细胞作用的报道尚不多。 目的：观察乙烯雌酚对兔骨髓基质干细胞成骨分化的影响。 方法：体外培养骨髓基质干细胞,用0,10-7,10-6,10-5 mol/L浓度乙烯雌酚干预,并设地塞米松10-8 mol/L、β-甘油磷酸钠10 mmol/L、维生素C 50 mg/L为阳性对照。 结果与结论：乙烯雌酚干预培养24,48,72 h,10-6 mol/L组显著促进了骨髓基质干细胞增殖(P < 0.01)。干预48 h 10-5 mol/L组显著抑制细胞增殖,干预72 h 10-7 mol/L组显著抑制细胞增殖(P < 0.01)。10-7 mol/L组乙烯雌酚干预25 d后开始出现钙化结节;10-7,10-6 mol/L组干预14,21 d碱性磷酸酶活性显著增加。证实乙烯雌酚能促进兔骨髓基质干细胞的成骨分化。     

血浆microRNA-135a及microRNA-210在轻度认知损害患者中的检测价值

目的探讨血浆microRNA-135a、microRNA-210在轻度认知损害患者中的诊断价值。方法收集于我院就诊的轻度认知损害患者及健康体检者的血液标本共80例,其中AMC组28例,VD-MCI 28例,AD-MCI 24例,采用RT-qPCR的方法进行血浆miRNA检测。结果 VD-MCI组血浆microRNA-135a为(4. 17×10~(-7)±8. 35×10~(-8)); AD-MCI组血浆microRNA-135a为(2. 83×10~(-7)±1. 72×10~(-7)); AMC组血浆microRNA-135a为(9. 87×10~(-7)±5. 66×10~(-7))。3组患者组间比较存在显著差异(F=30. 76,P=0. 00,P 0. 05)。VD-MCI组血浆microRNA-210为(4. 27×10~(-5)±1. 09×10~(-5)); AD-MCI组血浆microRNA-210为(6. 96×10~(-5)±2. 48×10~(-5)); AMC组血浆microRNA-210(1. 30×10~(-5)±7. 07×10~(-6))。3组患者组间比较存在显著差异(F=80. 43,P=0. 00,P 0. 05)。3组患者MMSE评分与两个检测指标间无明显相关性(P 0. 05)。结论血浆microRNA-135a及microRNA-210检测可辅助诊断轻度认知功能损害,对AD-MCI诊断价值更大。     

缺陷腺病毒载体表达重复10次的Aβ3-10基因疫苗鼻黏膜免疫APPswe, PSEN1dE9转基因小鼠可诱导出Th2型免疫反应

Immunotherapy for Alzheimer’s disease (AD) is effective in improving cognitive function in transgenic mouse models of AD. Because the AN1792 [beta-amyloid (Aβ) 1-42] vaccine was halted because of T cell mediated meningoencephalitis, many scientists are searching for a novel vaccine to avoid the T cell mediated immune response caused by the Aβ1-42. Importantly, the time when the immunization is begun can influence the immune effect. In this study, an adenovirus vaccine was constructed containing 10 × Aβ3-10 repeats and gene adjuvant CpG DNA. Transgenic AD mice were immunized intranasally for 3 months. After 10 × Aβ3-10 vaccine immunization, high titers of anti-Aβ42 IgG1 predominant antibodies were induced. In spatial learning ability and probe tests, the 10 × Aβ3-10 immunized mice showed significantly improved memories compared to control mice. The 10 × Aβ3-10 vaccine resulted in a robust Th2 dominant humoral immune response and reduced learning deficits in AD mice. In addition, the 10 × Aβ3-10 vaccine might be more efficient if administered before Aβ aggregation at an early stage in the AD mouse brain. Thus, the adenovirus vector encoding 10 × Aβ3-10 is a promising vaccine for AD.     

维甲酸体外诱导大鼠胚胎垂体生长激素细胞的分化

目的 探讨维甲酸(RA)在体外诱导大鼠胚胎垂体生长激素(GH)细胞的分化作用.方法 原代培养大鼠胚胎垂体细胞,采用不同浓度的维甲酸(10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L)诱导大鼠胚胎垂体细胞分化,以DMEM培养基为作为对照组,诱导2、4、6d后,利用免疫组化检测GH细胞百分比,放射免疫分析检测细胞上清GH...     

Aβ3-10s基因疫苗免疫AD小鼠诱导Th2型免疫反应的研究

目的探讨新型AD疫苗AdCpG-(Aβ3-10)10诱导转基因小鼠产生的免疫反应类型。方法将人工合成的Aβ3-10的基因片段插入到真核表达质粒pcDNA3.1+,以CpG为基因佐剂,使用E1/E3缺陷的腺病毒载体pAxCAwtit作为基因载体,获得基因重组缺陷腺病毒AdCpG-(Aβ3-10)10。以3月龄的转基因小鼠18只为研究对象,实验分为3组,每组各6只小鼠:免疫含有目的基因的AdCpG-(Aβ3-10)10组、不含目的基因的AdCpG组及Aβ1-42全肽链组。各组均经鼻粘膜分别免疫AdCpG-(Aβ3-10)10、不含目的基因的AdCpG及Aβ1-42全肽链,每组均免疫8次,每3个月1次。用ELISA方法检测小鼠血清中IgG抗体含量及抗体分型,用MTT方法观察脾细胞增值反应;用ELISA法检测IL-2、IL-4、IL-10及γ-干扰素等细胞因子含量。结果小鼠经过6次免疫后,AdCpG-(Aβ3-10)10组和Aβ1-42组抗Aβ42 IgG抗体浓度分别为21.17±1.59ng/ml、23.93±1.66ng/ml,较AdCpG组(1.08±0.16)明显升高(P<0.05),但AdCpG-(Aβ3-10)10组的IgG1/IgG2a(12.94±3.79)较Aβ1-42组的IgG1/IgG2a(6.13±2.21)明显增高(P<0.01);AdCpG-(Aβ3-10)10组和Aβ1-42组的脾细胞在体外培养,经Con A刺激后细胞增殖明显,OD值分别为0.37±0.059,0.3237±0.048与AdCpG(0.1692±0.072)比较有明显差异(P<0.05)。经AdCpG-(Aβ3-10)10免疫的小鼠脾细胞体外培养液中IL-4和IL-10含量分别为342.34±45.68μg/ml、329.46±112.99μg/ml,经Aβ1-42免疫的小鼠脾细胞体外培养液中IL-2、INF-γ、IL-4和IL-10含量分别为284.81±22.55μg/ml、361.96±26.47μg/ml、223.19±22.45μg/ml、258.68±102.42μg/ml,与AdCpG(149.03±27.34μg/ml、291.92±45.92μg/ml、169.52±25.68μg/ml、134.85±21.67μg/ml)比较有明显差异(P<0.05)。结论 AdCpG-(Aβ3-10)10主动免疫幼龄双转基因小鼠主要产生Th2型体液免疫应答反应,可以减少细胞免疫应答反应引起的炎性反应。     

烟酸皮肤潮红反应用于抑郁症诊断的研究

目的探讨烟酸皮肤潮红反应在抑郁症患者与健康对照者之间的差异,及其用于抑郁症诊断的价值。方法纳入未用药抑郁症急性发作患者21例及年龄、性别匹配的健康对照28名,收集一般人口学与临床资料,均采用8个浓度梯度(10~(-5)mol/L、10~(-4)mol/L、10~(-3.5)mol/L、10~(-3)mol/L、10~(-2.5)mol/L、10~(-2)mol/L、10~(-1.5)mol/L、10~(-1)mol/L)烟酸溶液刺激双前臂皮肤,应用激光多普勒血流仪采集血流灌注量等信号以评价受试者的皮肤潮红情况。结果抑郁症患者在不同浓度(10~(-2.5)mol/L、10~(-2)mol/L、10~(-1.5)mol/L、10~(-1)mol/L)烟酸溶液刺激下,其皮肤血流量与对照相比升高有统计学意义(P0.01)。患者烟酸敏感性(the logarithm of median effect concentration,logEC50)与抑郁严重程度呈反比(r=-0.57,P=0.01)。由烟酸皮肤潮红反应引起的最大反应血流量(maximal blood flow,MBF)可有效区分抑郁症组和对照组(AUC=0.90,P0.01)。结论抑郁症患者存在烟酸皮肤潮红反应亢进,烟酸皮肤潮红反应可能有助于抑郁症的诊断。     

依达拉奉在神经系统疾病应用研究

<正>依达拉奉是一种强效自由基清除剂,其化学名为3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮(3-methyl-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one),分子式为C10H10N2O,相对分子质量为174.20,由日本三菱制药公司研发并于2001年5月首次在日本批准上市,临床主要用于急性缺血性脑血管病的治疗[1]。依达拉奉上市10余年来,备受各国研究人员关注,国内外诸多研究提示依达拉奉不仅对急性     

易卒中型自发性高血压大鼠(SHR-SP)基底动脉反应性的研究

应用细胞内微电极记录法,以血管平滑肌细胞膜电位为指标,研究了易卒中型自发性高血压大鼠基底动脉对有代表性的二类激动剂氯化钾(KCl),去甲肾上腺素(NE)及乙酰胆碱(ACh)的反应性.观察到SHR-SP基底动脉平滑肌细胞膜电位(Em)为(-45.7±3.9)mV,明显低于Wistar大鼠的(-55.1±2.0)mV(P＜0.05),故其反应性增强.KCl(10～50 mmol/L)及NE(10-8～10-6mol/L)引起膜电位的去极化,ACh(10-7～10-5mol/L)引起膜电位超极化,且皆呈剂量依赖性特征.     

小剂量尿激酶与疏血通治疗时间窗外脑梗死临床观察

我院于2005-10～2008-10采用小剂量尿激酶联合疏血通治疗时间窗外的脑梗死,疗效满意,现报告如下.     

前颅底缺损的生物力学测试

采用生物力学方法,分别测试了新鲜硬脑膜,冻干硬脑膜,医用硅胶和医用涤纶膜作受力和变形关系的力学测试,4种材料的柔度分别为0.6×10~(-7)、0.72×10~(-7)、3.44×10~(-7)和6.89×10~(-7)Pa.颅底缺损的膨出实验,在颅底缺损达3cm,28h后的膨出度为3.16 mm.     

非酮症高血糖性舞蹈病一例

1病例报告患者女,68岁,因四肢及面部不自主运动10d,于2010-11-8入院。患者于2010-10-29无明显诱因下出现发作性的四肢不自主舞动,不能自控,同时伴有面部肌肉不自主抽动,清醒时出现,睡眠时消失。既往患糖尿病10余年,近半年未监测血糖。体格检查:生命体征平稳,一     

老年高血压病人脉压与心脑血管事件的关系分析

选取我院2010-10-2012-10收治的老年高血压合并心脑血管患者288例,脉压与心脑血管事件的关系,取得满意效果,现将结果报道如下。1资料与方法1.1一般资料我院2010-10—2012-10收治的老年高血压合并心脑血管的患者288例,根据患者入院时的血压水平计算脉压分成A、B、C 3组,A组(<40mmHg)79例,男49例,女30例;年龄60～75岁,平均(78.5±2.5)岁;B组(>40     

缩宫素对大鼠背根神经节神经元胞体膜的作用

应用细胞内记录技术,观察了缩宫素(OXT,10 -8～10-5 mol/L)对2～3周龄大鼠背根神经节神经元的作用.在受检的92个细胞中,有71个神经元滴加缩宫素产生明显的超极化反应.在滴加10-5mol/L缩宫素后, 膜电导由平均的3.68×10-7S增加约21.43%.灌流平衡液中的NaCl以氯化胆碱置代或用C d2+阻断Ca2+通道后,OXT引起超极化反应的幅值无明显变化.当灌流平衡液中含10-2 mol/L四乙基碘化铵后,OXT引起的超极化反应幅值明显减小.