TGF-β_1在MHV-3诱导的小鼠暴发型肝炎模型中的表达研究

目的检测MHV-3诱导的小鼠暴发型肝炎模型中肝脏和外周血中的TGF-β1表达水平,探讨该疾病模型中TGF-β1的变化及其与疾病进程的关系。方法通过腹腔注射MHV-3感染BALB/cJ小鼠诱导暴发型肝炎,采用ELISA检测血清TGF-β1表达水平改变,实时定量聚合酶链反应及免疫组织化学检测肝脏组织TGF-β1水平变化。结果BALB/cJ小鼠感染MHV-3后,小鼠血清TGF-β1表达水平于感染72 h显著升高,与之相应的是小鼠肝脏内TGF-β1水平于感染72 h显著升高。结论 MHV-3诱导的小鼠暴发型肝炎模型中TGF-β1的表达在血清和肝脏中均显著升高,提示TGF-β1可能参与免疫诱导的肝细胞损伤的病理过程。本研究为进一步阐明小鼠暴发型肝炎的发病机制提供更充分的理论基础。     

TGF-β3与熊果酸抑制人结肠癌细胞增殖作用的研究

目的研究TGF-β3与熊果酸(ursolic acid,UA)抑制结肠癌细胞增殖作用的关系及可能的分子机制。方法采用结晶紫染色法和流式细胞术分析不同浓度UA对HCT116细胞增殖的作用。利用Western blot和流式细胞术等方法分析UA对HCT116细胞凋亡的影响。通过RT-PCR和(或)Western blot实验分析UA在HCT116细胞中对TGF-β3、Smad2/3和β-catenin表达及磷酸化水平的影响。采用TGF-β3重组腺病毒和特异性抑制剂以及萤光素酶报告质粒分析TGF-β3介导UA抑制结肠癌细胞增殖的可能分子机制。结果UA能明显抑制HCT116细胞增殖,诱导G1期阻滞,并促进其凋亡。UA能明显降低TGF-β3的mRNA和蛋白表达水平;UA对Smad2/3的总蛋白水平无明显影响,但能明显降低Smad2/3的磷酸化水平;外源性过表达TGF-β3可部分逆转UA对HCT116细胞增殖的抑制作用,TGF-β3特异性抑制剂则增强UA对HCT116细胞增殖的抑制作用;UA降低β-catenin蛋白水平,并明显抑制Wnt/β-catenin信号转导;外源性过表达TGF-β3促进β-catenin蛋白表达,并部分逆转UA对β-catenin蛋白表达的抑制效应;TGF-β3特异性抑制剂增强UA对β-catenin蛋白表达的抑制作用。结论 UA能抑制结肠癌细胞HCT116增殖并诱导凋亡,其作用可能是通过下调TGF-β3表达,进而抑制Wnt/β-catenin信号转导。     

转化生长因子-β_1siRNA表达载体的构建

目的构建人转化生长因子β1(TGF-β1)基因siRNA质粒载体,为放射性肺损伤以及其他TGF-β1高表达疾病的基因治疗提供新的方法。方法根据人TGF-β1mRNA序列为模板,设计合成相应的寡核苷酸序列,经退火形成双链DNA片段,克隆到线性pRNAT载体中,用酶切方法对重组体进行鉴定,最后将构建的TGF-β1特异性siRNA质粒载体转染人胚肺成纤维细胞HFL-I细胞,通过通过荧光定量PCR检测和ELISA检测TGF-β1mRNA和蛋白的表达水平,以及流式细胞仪检测细胞凋亡。结果酶切和测序证实目的寡核苷酸片段已被准确克隆到线性pRNAT载体质粒中,与对照组相比,TGF-β1mRNA水平及蛋白水平的表达量均受到明显抑制,人胚肺成纤维细胞凋亡明显增加,统计有显著性差异(P<0.05)。结论成功构建了人TGF-β1基因siRNA质粒载体,对于放射性肺损伤以及其他TGF-β1高表达疾病的基因治疗奠定了基础。     

转化生长因子- 亚型在溃疡性结肠炎患者结肠黏膜中的表达

目的:探讨转化生长因子-β(TGF-β)亚型在溃疡性结肠炎(UC)患者结肠黏膜中的表达及其在UC发病中的作用.方法:免疫组化Envision法检测UC、肠易激综合征(IBS)患者结肠黏膜中TGF-β亚型的表达,分析其与UC严重程度和病变范围的关系.结果:TGF-β1、TGF-β2的表达在活动期UC高于缓解期UC(Z分别为7.924,7.122,P＜0.01)和IBS组(Z分别为36.954,33.485,P＜0.01),缓解期UC高于IBS组(Z分别为12.211和10.621,P＜0.01);TGF-β3的表达在活动期UC、缓解期UC和IBS组间差异无统计学意义(P＞0.05).在活动期UC中,TGF-β1、TGF-β2的表达与UC的严重程度均呈正相关(rs分别为0.566,0.564,P＜0.05),TGF-β3的表达与UC的严重程度无线性相关性(P＞0.05);TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3的表达与UC病变范围均无线性相关性(P＞0.05);疾病严重程度和病变范围呈正相关(rs=0.337,P＜0.05).结论:在UC结肠黏膜中TGF-β1、TGF-β2表达增强,与UC的严重程度密切相关.TGF-β1、TGF-β2可作为反映UC疾病活动度的指标.     

原发性干燥综合征患者外周血中 IL-10和 TGF-β1的表达水平及其临床意义

目的：探讨白细胞介素-10（IL-10）和转化生长因子-β1（TGF-β1）在原发性干燥综合征（pSS）发病中的作用。方法酶联免疫吸附试验（ELISA）测定56例 pSS 患者（pSS 组）及39例健康体检者（正常对照组）血清中 IL-10和 TGF-β1的表达水平,比较治疗前、后 pSS 患者与正常健康对照组血清 IL-10和 TGF-β1表达水平之间的差异及相关性,并比较其与 ESR、Ig、C3、C4之间的相关性。结果 pSS 患者血清 IL-10和 TGF-β1表达水平在 pSS 患者中血清的表达水平显著高于健康对照组正常人（P ＜0．05）,经治疗后,其血清 IL-10和 TGF-β1表达水平较治疗前均显著减低,差异有统计学意义（P ＜0．05）,血清 IL-10和 TGF-β1表达水平呈正相关性（r＝0．613,P ＜0．05）;血清IL-10和 TGF-β1表达水平与 ESR 呈正相关性（r＝0．592,P ＜0．05;r＝0．316,P ＜0．05）。结论 IL-10和 TGF-β1参与 pSS 的发病过程且与疾病活动性相关。     

妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中TGF-β1 MMP-9表达的研究

目的通过研究转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中的表达,探讨其与该病发病的关系。方法采用免疫组化二步法分别检测TGF-β1、MMP-9在20例正常孕妇和40例妊娠期高血压疾病患者(其中妊娠期高血压20例,子痫前期20例)胎盘组织中的表达。结果妊娠期高血压疾病组胎盘TGF-β1表达明显高于正常妊娠组(P<0.01),妊娠期高血压疾病组胎盘MMP-9表达明显低于正常妊娠组(P<0.01)。结论胎盘组织中TGF-β1、MMP-9的异常表达引起滋养细胞浸润不足,提示可能共同参与妊娠期高血压疾病的发生和发展。     

FGF21对HepG2细胞TGF-β信号通路的影响

目的研究FGF21对TGF-β/Smads信号通路中相关蛋白和mRNA表达的影响。方法采用Western blot法检测HepG2 cells的TGF-1,TGF-βRⅡ,Smad 2,3,4,7的蛋白表达水平和采用Q-PCR方法检测HepG2 cells的TGF-β1,TGF-βRⅡ,Smad 2,3,4,7的mRNA表达水平。结果在不同FGF21浓度下,TGF-β1,TGF-βRⅡ,Smad 2,3,4,7蛋白和mRNA表达水平不同(P<0.05)。结论 FGF21通过促进TGF-β信号通路中的信号分子或受体的表达,或者通过下调此信号通路的阻断分子而抑制肿瘤发生。     

多西环素对大鼠急性心肌梗死后转化生长因子-β1表达及心肌细胞凋亡的影响

目的：探讨多西环素对大鼠急性心肌梗死(MI)后转化生长因子-β1(TGF-β1)表达及心肌细胞凋亡的影响。方法将30只成年Wistar大鼠随机分为假手术组、MI组及多西环素组。通过结扎冠状动脉左前降支建立大鼠MI模型。采用ELISA检测血清心肌肌钙蛋白I(c-TnI)水平,Western blot检测心肌组织TGF-β1及caspase-3蛋白表达,末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡。结果与假手术组比较,MI组及多西环素组c-TnI水平升高,TGF-β1及caspase-3蛋白表达水平升高,心肌细胞凋亡指数明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。多西环素可降低c-TnI水平,下调心肌组织TGF-β1及caspase-3蛋白表达,抑制心肌细胞凋亡,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MI后TGF-β1表达明显上调,心肌细胞凋亡增加,是心室重塑发生的重要机制。多西环素可通过下调TGF-β1表达,抑制心肌细胞凋亡,进而延缓心室重塑进程。     

伤疡愈软膏对烫伤大鼠创面转化生长因子β1的影响

目的探讨伤疡愈软膏在烫伤创面愈合过程中对转化生长因子β1(TGF—β1)的影响。方法选用SD大鼠建立烫伤模型,应用逆转录聚合酶链反应,检测烫伤创面TGF-β1 mRNA的表达水平。结果烫伤后创面TGF-β1 mRNA的表达水平与正常对照组有显著差异,单纯烫伤组创面愈合时间明显长于伤疡愈软膏用药组。结论伤疡愈软膏可促进伤口的愈合,但内源性TGF-β1 mRNA表达的上调并不是其主要作用机理。     

FGF21对大鼠肝癌模型中TGF-β信号通路的影响

目的研究FGF21通过TGF-β／Smads信号通路延缓肝癌发生发展的分子机制。方法采用Westernblot法检测各组大鼠肝癌组织的TGF-β1,TGF-β R Ⅱ,Smad2,3,4,7的蛋白表达水平,采用Q-PCR法检测各组大鼠肝癌组织的TGF-β1,TGF-β R Ⅱ,Smad2,3,4,7的mRNA表达水平。结果在不同FGF21浓度下,TGF-β1,TGF-β R Ⅱ,Smad2,3,4,7表达水平不N（P〈0．05）。结论FGF21通过促进TGF-β／Smads信号通路中的信号分子或受体的表达,或者通过下调此信号通路的阻断分子而抑制肿瘤发生。     

TGF-β1、LMO1在胃癌组织中的表达及意义

目的 观察转化生长因子β1(TGF-β1)、LMO1在胃癌组织的表达及二者的相关性,探讨TGF-β1、LMO1在胃癌发生发展中的作用.方法 选取60例胃癌和50例正常胃组织,采用Real time-PCR和Western Blot检测TGF-β1、LMO1 mRNA和蛋白表达水平.采用免疫组织化学SP法检测TGF-β1、LMO1蛋白表达,分析TGF-β1、LMO1表达与胃癌临床病理特征的关系.结果 胃癌组织TGF-β1、LMO1基因的mRNA和蛋白表达水平均比正常胃黏膜组织明显增强(P＜0.05).TGF-β1、LMO1蛋白在胃癌组织中阳性表达率明显高于正常胃黏膜组织(P＜0.05).TGF-β1、LMO1表达与年龄、性别、发病部位无关(P＞0.05),而与肿瘤浸润深度、分化程度、TNM临床分期、淋巴结转移有关(P＜0.05).TGF-β1、LMO1表达呈正相关(r=0.875,P=0.001).结论 胃癌组织TGF-β1、LMO1表达异常增高,可能参与了胃癌发生发展.TGF-β1、LMO1可作为反映胃癌恶性生物学行为及治疗的分子指标之一.     

PTEN与TGF-β在前列腺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨PTEN (phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)与TGF-β(transforminggrowth factor beta)在前列腺癌中的表达及其临床意义.方法 选取不同TNM分期的前列腺癌石蜡组织共32例,正常前列腺组织8例,通过Real-Time PCR对组织中PTEN和TGF-β的mRNA水平进行相对定量,比较二者在不同TNM分期的前列腺癌中表达水平;通过免疫组织染色对上述前列腺组织中PTEN和TGF-β蛋白的进行定位和阳性率分析.结果 在T1、T2期前列腺癌组织中PTEN和TGF-β的mRNA水平与蛋白阳性率与正常组织比较差异无统计学意义(P＜0.05);在T3、T4期的前列腺癌组织中,PTEN的mRNA水平与蛋白阳性率较正常组织和T1、T2期显著提高(P＜0.0l),TGF-β则明显下调(P＜0.0l),二者呈负相关(P＜0.05).结论 PTEN和TGF-β与前列腺癌的发展及恶性程度有关,与中晚期的肿瘤的增殖与迁移关系密切,二者的表达水平可辅助鉴定前列腺癌的分化程度与分期.     

氟伐他汀对糖尿病大鼠肾组织TGF-β1表达的影响

目的探讨氟伐他汀对糖尿病大鼠肾组织TGF-β1表达的影响。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组、糖尿病氟伐他汀治疗组,经氟伐他汀治疗糖尿病大鼠2,4,8周后,分别观察其对大鼠血胆固醇、血肌酐及24 h尿蛋白定量和肾组织TGF-β1表达的变化。结果与正常对照组相比糖尿病大鼠的24 h尿蛋白以及肾组织TGF-β1表达显著增加,经氟伐他汀治疗后8周,糖尿病大鼠的24 h尿蛋白明显下降,肾组织TGF-β1在蛋白和基因水平表达明显减少。结论糖尿病大鼠肾组织TGF-β1表达增加,氟伐他汀可能通过抑制糖尿病大鼠肾组织TGF-β1表达而达到延缓糖尿病肾病的进展。     

胃癌组织TGF-β1、TGF-βRⅡ、p27^kipl的表达水平及临床意义

目的探讨胃癌组织TGF-βRⅡ及p27kipl表达水平与临床病理因素间的关系。方法采用免疫组化EnVision二步法对胃癌组织、切端胃粘膜组织进行GF-βRⅡ及p27kipl染色,图像分析系统测定癌组织、邻癌粘膜组织及切端粘膜组织的实质细胞数和阳性细胞数,计算阳性细胞比率。结果癌组织TGF-β1表达水平高于切端粘膜组织,p27kipl及GF-βRⅡ的表达水平低于切端粘膜组织。p27kipl与GF-βRⅡ两者间表达水平呈正相关。p27kipl表达水平与肿瘤的分化程度、浸润深度及淋巴结转移相关GF-βRⅡ表达水平与肿瘤的浸润深度相关。结论胃癌组织TGF-βRⅡ、p27kipl表达显著降低,并与胃癌的一些临床病理因素相关;TGF-β1表达增高并可能通过GF-βRⅡ、p27kipl等对肿瘤的生物学行为产生影响,对相邻上皮细胞的恶性转化可能也有促进作用。     

转化生长因子-β1及其受体表达与白血病病情的相关性研究

目的 探讨急性白血病患者的转化生长因子-β1（TGF-β1）及其受体表达与白血病治疗、预后的相关性。方法 收集42例初诊和经化疗完垒缓解后白血病患者的外周血和骨髓，用ELISA法检测外周血、骨髓及骨髓基质细胞的可溶性TGF-β1含量；用免疫组织化学法检测外周血白血病细胞和骨髓有核细胞上的TGF-β1，及其Ⅱ受体（TGFR2）。结果 急性白血病患者外周血、骨髓、骨髓基质细胞的TGF-β1含量明显低于对照（P〈0.01），尤以血清为甚，经化疗缓解后，TGF-β1含量又升高至接近正常水平。外周血白血病细胞和骨髓有核细胞上的TGF-β1表达与对照弛比较无明显差异（P〉0．05）。初诊患者外周血TGFR2表达明显低下，缓解后，TGFR2表达又升高至接近正常。结论 急性白血病血浆、骨髓、骨髓基质TGF-β1含量与TGFR2与临床病情密切相关，可作为了解病情、观察疗效、判断预后的指标之一。     

人参皂苷Rb1对人脐静脉内皮细胞一氧化氮释放和TGF-β1表达的影响及意义

目的:研究人参皂苷Rb1对白消安(BU)致血管内皮细胞一氧化氮(NO)产生和转化生长因子(TGF-β1)表达的影响,探讨人参皂苷Rb1对内皮细胞的保护作用机制并确定其作用的最佳浓度。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,采用不同浓度的人参皂苷Rb1和BU干预,以硝酸还原酶法检测HUVEC培养上清液中一氧化氮水平,ELISA方法检测TGF-β1、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)和TF的蛋白含量,实时荧光定量PCR检测HUVECTGF-β1、PAI-1和TFmRNA的表达。结果:BU(60mg.L-1)能使HUVEC一氧化氮产生减少,TGF-β1、PAI-1和TF蛋白水平明显增高及mRNA表达显著增强,一定质量浓度的人参皂苷Rb1(80mg.L-1)则可明显抑制BU对HUVEC的这种作用;各组一氧化氮水平与TGF-β1表达成负相关,TGF-β1表达与PAI-1和TF表达成正相关。结论:人参皂苷Rb1可能通过增加一氧化氮产生,抑制TGF-β1相关信号转导途径,降低PAI-1及TF的表达,具有纠正内皮细胞高凝、低纤溶活性异常状态的作用。     

酒精对HBV转基因小鼠肝脏的损伤作用及其机制

目的探讨在肝损伤早期酒精和HBV协同作用的分子机制。方法20只HBV转基因小鼠和20只普通小鼠随机分为4组:转基因小鼠酒精组(alcohol-fed Tg mice)和普通小鼠酒精组(alcohol-fed Wt mice),以白酒灌胃;转基因小鼠对照组(control Tg mice)和普通小鼠对照组(control Wtmice),以生理盐水灌胃。连续处理10wk后检测各组小鼠血清ALT、AST水平,肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3、Smad7、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达水平及TGF-β1、CTGF、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平。结果酒精可升高转基因小鼠血清ALT、AST水平,诱发其肝脏病理损伤,但纤维化不明显;肝组织TGF-β1、Smad3、Smad7、CTGF mRNA及TGF-β1、CTGF、α-SMA蛋白表达增加。结论酒精和HBV对肝损伤协同作用的机制可能与TGF-β1、Smad3、CTGF、α-SMA表达增加以及TGF-β1/Smads通路信号分子表达比例失调有关。     

二烯丙基二硫下调TGF-β1/Rac1通路抑制人胃癌细胞β-catenin表达

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)是否通过下调TGF-β1/Rac1通路抑制人胃癌MGC803细胞β-catenin表达。方法实验组分为6组,对照组(Control),DADS处理组,TGF-β1处理组,TGF-β1+SB431542组,TGF-β1+DADS组,TGF-β1+NSC23766组。RT-PCR、Western blot分别检测TGF-β1、Rac1、β-catenin、E-cadherin和vimentin mRNA和蛋白水平。结果DADS下调TGF-β1、Rac1、β-catenin和vimentin,上调E-cadherin表达。TGF-β1受体阻断剂SB431542和Rac1抑制剂NSC23766下调β-catenin和vi-mentin,上调E-cadherin表达。结论DADS通过下调TGF-β1/Rac1通路抑制人胃癌MGC803细胞β-catenin表达。     

苦参碱对模型大鼠胃癌前病变的保护作用研究

目的:研究苦参碱对模型大鼠胃癌前病变的保护作用。方法:实验分为正常(自来水)、模型(自来水)、叶酸(40mg·kg-1)、苦参碱(180mg·kg-1)组。灌胃给药,每天1次,持续45d。灌胃结束后分析大鼠体质量变化情况,通过肉眼和显微镜进行病理评分,盲法检测胃组织增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、干扰素-γ(INF-γ)、白介素-4(IL-4)、血清转化生长因子β(1TGF-β1)的表达水平。结果:苦参碱可以控制萎缩和炎症达到正常(P<0.05),治疗非典型增生(P<0.05),降低PCNA、Bcl-2、INF-γ、TGF-β1表达水平(P<0.05),与叶酸组比较无统计学意义。结论:苦参碱可治疗慢性胃萎缩和通过降低INF-γ的表达来控制胃黏膜炎性细胞浸润;还可通过降低Bcl-2、PCNA、TGF-β1的表达来促进胃癌前病变细胞凋亡,抑制其增殖和胃癌前病变恶化。     

胆汁酸膜受体TGR5对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞FN、TGF-β1的调控作用

目的探究G蛋白偶联受体TGR5在大鼠肾小球系膜细胞中的表达以及高糖条件下对纤维连接蛋白(fibronectin,FN)以及转化生长因子(transforming growth factor-β1,TGF-β1)蛋白水平的影响,探索其在糖尿病肾病中可能发挥的作用。方法高糖(30 mmol·L-1glucose,HG)条件下,用特异性激动剂INT-777激活TGR5,或者对TGR5进行过表达、干扰处理,通过Western blot来检测大鼠肾小球系膜细胞中TGR5的表达情况以及FN、TGF-β1蛋白水平的变化。结果在大鼠肾小球系膜细胞中存在TGR5的表达;与对照组相比,激活TGR5后,由高糖引起的FN、TGF-β1蛋白水平的上升受到抑制(P<0.01,P<0.05);另一方面,干扰TGR5后,FN、TGF-β1的蛋白水平与对照组相比异常升高,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论在大鼠肾小球系膜细胞中,TGR5可以抑制由高糖引起的FN、TGF-β1蛋白水平的升高,在糖尿病肾病的发生发展中可能发挥保护作用。