重组腺病毒载体携带反义微小RNA-21对膀胱癌细胞生长的作用

目的探讨重组腺病毒载体介导的微小RNA-21(miRNA-21)反义寡核苷酸(ASOND)对人膀胱癌细胞株T24生长的影响。方法构建反向插入miRNA-21基因的重组腺病毒载体(rAV-miRNA-21),并用反义rAV-miRNA-21转染T24,即病毒载体用药组。采用噻唑蓝(MTT)法和原位末端标记(TUNEL)法检测T24细胞的增殖和凋亡情况。同时设对照组和空病毒组作为对比。结果 rAV-miRNA-21用药组、对照组和空病毒组T24细胞的增殖率分别为(37.1±6.8)%(、95.7±5.8)%(、86.3±7.5)%;凋亡率分别是(31.6±4.7)%(、8.4±2.9)%(、7.3±4.6)%。用药组的增殖率和凋亡率分别与对照组和空病毒组相比较,差异均有统计学意义(P0.01),而对照组与空病毒组之间差异无统计学意义(P0.05)。结论反义miRNA-21重组腺病毒载体转染T24细胞可以抑制肿瘤细胞增殖,增加细胞凋亡,进而抑制膀胱癌细胞生长。     

AMN107联合血红素加氧酶-1抑制剂诱导慢性髓系白血病细胞凋亡

运用AMN107(尼洛替尼)联合血红素加氧酶-1(HO-1)抑制剂锌原卟啉Ⅸ(ZnPPⅨ)作用于慢性髓系白血病(CML)细胞株K562细胞,研究其对CML细胞增殖的影响并探讨其作用机制。采用MTT法和台盼蓝染色法检测AMN107(10μmol/L)及ZnPPⅨ(10μmol/L)单独或联合处理不同时间的细胞增殖率;半定量RT-PCR法和Westernblot法检测空白对照组、ZnPPⅨ(10μmol/L)组、AMN107(10μmol/L)组、AMN107(10μmol/L)联合ZnPPⅨ(10μmol/L)组48 h时细胞HO-1的表达;AnnexinⅤ/PI双染色法检测处理48 h时各组细胞凋亡情况。结果表明:联合用药对细胞的抑制作用最强,且呈时间依赖性;联合用药组HO-1的表达量最低;空白对照组、ZnPPⅨ(10μmol/L)组、AMN107(10μmol/L)组、AMN107(10μmol/L)联合ZnPPⅨ(10μmol/L)组48 h时细胞凋亡率分别为(11.38±0.02)%、(17.44±0.08)%、(39.81±0.07)%和(56.46±0.19)%。结论:第二代酪氨酸激酶抑制剂AMN107具有诱导CML细胞凋亡的作用;抑制HO-1表达能加强AMN107对CML细胞的杀伤作用,这为临床进一步提高CML的疗效提供实验依据。     

逆转录病毒介导的HO-1基因在尼洛替尼诱导K562/A02耐药细胞凋亡中的作用

目的 研究逆转录病毒介导的血红素加氧酶-1(HO-1)基因在尼洛替尼(Nilotinib,AMN107)诱导慢性髓性白血病(CML)耐药细胞凋亡中的作用.方法 制备高病毒滴度的逆转录病毒载体pQCXIP-EGFP-HO-1,建立稳定转染HO-1基因的K562/A02细胞.采用RT-PCR鉴定K562/A02细胞中HO-1基因的表达.RT-PCR和Western blot法检测AMNl07作用24 h后K562/A02细胞中HO-1 mRNA和蛋白的表达,采用MTT法观察细胞增殖变化,通过实时荧光定量PCR(RQ-PCR)法检测bcr-abl融合基凶的表达.通过流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布.结果 成功构建重组逆转录病毒载体,并建立稳定转染HO-1基因的K562/A02细胞系;证实转基冈组细胞HO-1 mRNA显著表达.AMN107作用3组细胞后,转基因组细胞HO-1 mRNA和蛋白的表达明显高于转空载体组和未转染组,差异有统计学意义(P<0.05);MTT法检测显示AMN107处理后细胞增殖受抑.而转基因组细胞存活率明显高于转空载体组和未转染组,差异有统计学意义(P<0.05);RQ-PCR法检测结果显示,10 ILLmol/L AMNl07抑制bcr-abl基因的表达,但转基因组的bcr-abl基因表达水平(Ct值18.15±0.18)高于转空载体组(20.32±0.20)和未转染组(20.51±0.21),差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测结果显示10 μmol/L AMNl07作用24 h后,转基因组、转空载体组、未转染组细胞凋亡率分别为(17.26±0.23)%、(39.47±0.17)%、(41.84±0.09)%.未加药转基因组、未加药未转染组细胞凋亡率分别为(3.74±0.03)%、(5.91±0.08)%;细胞周期分析结果显示经AMNl07处理后,Go/G1期和S期细胞明显减少,细胞阻滞在G2/M期,而转基因细胞组细胞周期改变不如转空载体组、未转染组明显.结论 AMN107可抑制CML耐药细胞增殖且诱导细胞凋亡,HO-1基因在CML耐药细胞凋亡过程中起保护作用,与促进CML耐药细胞的生长有关.     

慢病毒介导shRNA LINGO-1质粒转染促进骨髓间充质干细胞向神经细胞转化的研究

目的:探究慢病毒介导shRNA LINGO-1质粒转染促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)向神经细胞转化的研究。方法:利用shRNA基因干扰技术,构建shRNA LINGO-1干扰载体,慢病毒转染BMSCs,根据病毒转染情况分成空白对照组(未转染慢病毒的BMSCs)、空载体病毒组(转染不含shRNA LINGO-1干扰载体慢病毒的BMSCs)、干扰载体病毒组(转染shRNA LINGO-1干扰载体慢病毒的BMSCs)。利用流式细胞仪检测BMSCs的表面蛋白,利用RT-PCR和Western-Blot检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、巢蛋白的表达。结果:CD44和CD29在第2代BMSCs的表达为60.2%和58.3%;CD34和CD45在第2代BMSCs的表达为3.4%和2.6%。慢病毒转染效率为90%以上。空白对照组、空载体病毒组和干扰载体病毒组的GFAP、NSE、NF和巢蛋白m RNA的相对表达量比较差异有统计学意义(P<0.05),其中空载体病毒组和空白对照组的比较差异无统计学意义(P>0.05),干扰载体病毒组和空载体病毒组的差异有统计学意义(P<0.05)。Western-blot检测蛋白表达量也具有同样的表达特点。结论:慢病毒介导shRNA LINGO-1干扰载体转染促进BMSCs可提高BMSCs向神经细胞转化的效率。     

谷氨酰胺对内毒素血症大鼠肠道损伤的保护作用及对血红素加氧酶-1表达的影响

目的 探讨谷氨酰胺(Glu)对内毒素血症大鼠肠道损伤的保护作用以及对血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响.方法 按随机数字表法将32只雄性SD 大鼠分为正常对照组、模型组、Glu组和Glu+锌原卟啉(ZnPP)组,每组8只.腹腔注射内毒素脂多糖(LPS)10 mg/kg制备内毒素血症动物模型.Glu组注射LPS前12 h灌胃Glu 1 g/kg;Glu+ZnPP组注射LPS前12 h灌胃Glu 1 g/kg,注射LPS前1 h静脉注射ZnPP 10 mmol/kg.术后12 h取回肠组织,测定髓过氧化物酶(MPO)活性及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)含量,并进行肠组织学评分;用免疫组化法检测回肠组织HO-1表达.结果 与正常对照组比较,模型组回肠组织学评分、MPO活性及TNF-α、IL-10含量显著升高[组织学评分(分):3.3±0.4比1.1±0.6,MPO活性(U/g):0.40±0.08比0.26±0.07,TNF-α含量(ng/g):25.2±6.9比6.5±2.8,IL-10含量(ng/g):27.6±10.2比5.7±2.9,均P<0.01];HO-1表达较低.与模型组比较,Glu组组织学评分、MPO活性和TNF-α含量明显减低[组织学评分(分):1.6±0.5比3.3±0.4,MPO活性(U/g):0.25±0.05比0.40±0.08,TNF-α含量(ng/g):13.4±3.2比25.2±6.9,均P<0.01],IL-10含量(ng/g)显著升高(47.3±5.5比27.6±10.2,P<0.01),HO-1表达明显增加.Glu+ZnPP组与模型组各指标比较差异无统计学意义.结论 Glu能明显增强内毒素血症大鼠肠组织HO-1表达,明显减轻肠道炎症反应,从而保护肠黏膜.

Abstract：

Objective To investigate the protective effect of glutamine (Glu) pretreatment on intestinal injury induced by endotoxin and expression of heme oxygenase-1 (HO-1) in rats.Methods Thirty-two male Sprague-Dawley (SD) rats were randomly divided into four groups (n=8 in each group): normal control group, model group, Glu group and Glu+zinc protoporphyrin (ZnPP) group. In model group, endotoxemia was produced by intraperitoneal injection of lipopolysaccharide (LPS, 10 mg/kg). In Glu group, the rats received intragastraiclly 1 g/kg of Glu 12 hours before LPS intraperitoneal injection. In Glu+ZnPP group, the rats received 1 g/kg of Glu by gavage 12 hours before LPS intraperitoneal injection and ZnPP 10 mmol/kg intravenously via tail vein 1 hour before LPS injection. The distal ileum was harvested in full thickness 12 hours after LPS injection. The myeloperoxidase (MPO) activity, tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-10 (IL-10) in the intestine were determined, the pathologic changes were observed and expressed in Chiu grade. The expression of HO-1 was evaluated by immunohistochemistry method. Results Compared with normal control group, the Chiu grade, MPO activity, the content of TNF-α and IL-10 were significantly increased in model group [Chiu grade: 3.3±0.4 vs. 1.1±0.6, MPO activity (U/g): 0.40±0.08 vs. 0.26±0.07, TNF-α (ng/g): 25.2±6.9 vs. 6.5±2.8, IL-10 (ng/g): 27.6±10.2 vs. 5.7±2.9, all P<0.01], and the expression of HO-1 was decreased. Compared with model group, the Chiu grade, MPO activity, the content of TNF-α in Glu group were significantly decreased [Chiu grade: 1.6±0.5 vs. 3.3±0.4, MPO activity (U/g): 0.25±0.05 vs. 0.40±0.08, the content of TNF-α (ng/g): 13.4±3.2 vs. 25.2±6.9, all P<0.01], while the level of IL-10 (ng/g) elevated (47.3±5.5 vs. 27.6±10.2, P<0.01), and the expression of HO-1 was increased. There was no difference in above mentioned indexes between model group and Glu+ZnPP group. Conclusion Glu pretreatment significantly ameliorates the expression of HO-1 of intestinal tissue induced by LPS in rats, and intestinal mucosa is protected with alleviation of inflammatory reaction in intestinal tract.     

血红素加氧酶-1表达对大鼠呼吸机相关性肺损伤的作用及机制研究

目的 观察呼吸机相关性肺损伤(VILI)模型大鼠肺组织中血红素加氧酶-1(HO-1)表达的变化,探讨HO-1诱导剂血晶素拮抗VILI的作用机制.方法 56只雄性SD大鼠按照随机数字表法分成对照组(C组),VILI模型组(M组),诱导剂血晶素1、2、3、4组(H1、 H2、H3、H4组,制模前24 h分别腹腔注射血晶素40、80、120、160 μmol/kg)和抑制剂Z组[制模前24 h腹腔注射锌原卟啉(ZnPP)10 μmol/kg].除C组外各组机械通气4 h后处死大鼠,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),测定总蛋白、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-10(IL-10)含量;取肺组织,测定肺湿/干重(W/D)比值、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平及HO-1蛋白表达;光镜下行肺组织病理观察.结果 与C组相比,M组大鼠肺病理损伤严重,BALF中总蛋白、TNF-α、IL-10,肺组织W/D比值、MDA、LDH及HO-1蛋白表达均明显增加, VILI模型复制成功.与M组比较,随着血晶素剂量的增加,H1、H2、H3组总蛋白(g/L)显著下降(0.74±0.06、0.73±0.07、0.70±0.07比0.84±0.08,均P<0.01);W/D比值下降(4.93±0.27、4.91±0.24、4.87±0.23比5.53±0.48,均P<0.01);SOD活性(U/mg)显著升高(85±9、82±15、93±11比55±12,均P<0.01);MDA含量(nmol/mg)显著降低(15±3、15±3、13±2比18±4,P<0.05或P<0.01);IL-10含量(pg/L)逐渐升高(0.42±0.06、0.46±0.06、0.47±0.05比0.36±0.07),TNF-α含量(pg/L)逐渐降低(0.18±0.07、0.14±0.03、0.10±0.07比0.23±0.06),但只有H2、H3组差异有统计学意义(均P<0.01);LDH活性(U/g)降低(11 353±1 317、11 516±1 613、9 631±1 520比12 361±1 841),但仅H3组差异有统计学意义(P<0.01);HO-1蛋白表达[吸光度(A)值]逐渐增强(0.164±0.010、0.190±0.149、0.205±0.018比0.122±0.016,均P<0.01);肺病理损伤逐渐减轻.而随着剂量进一步增加,H4组肺组织损伤较H1、H2、H3组加重.给予HO-1抑制剂ZnPP后HO-1的保护作用消失.结论 血晶素诱导HO-1适度表达可以减轻VILI,其适度表达的最佳剂量为120 μmol/kg,其机制可能通过抗炎和抗氧化应激发挥对肺组织的保护作用.     

血红素氧合酶对复苏后心功能不全的保护作用

目的 探讨诱导血红素氧合酶表达对复苏后心肌损伤的保护作用,为复苏后心功能不全探索新的治疗手段.方法 采用窒息法制作大鼠心跳骤停与心肺复苏(CPR)模型.实验动物分为4组:假手术组、CPR组、血晶素组(Hemin组)、血晶素+锌原卟啉组(Hemin+ZnPP组),各复苏组又分复苏后6 h及24 h 2个亚组.各实验组记录血流动力学资料;测定血清肌酸肌酶同功酶(CPK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)含量;测定心肌组织匀浆HO-1含量;观察心肌超微结构变化.对结果进行方差分析.结果 各复苏组复苏后平均动脉压(MBP)显著低于复苏前(均P＜0.05),但组间比较差异无统计学意义.CPR组、Hemin+ZnPP组复苏后各时相点dp/dt40值、-dp/dt值均显著低于复苏前(P＜0.05),但Hemin组复苏前后dp/dt40值无显著性变化,-dp/dt值仅复苏后0.5 h和1 h低于复苏前(P＜0.05);Hemin组复苏后各时相点dp/dt40值、-dp/dt值均高于其他两组(P＜0.05).复苏后6h及24 h血清CPK-MB、LDH水平,Hemin组均低于CPR组及Heroin+ZnPP组(P＜0.05),但CPR组和Hemin+ZnPP组两组之间比较差异无统计学意义.Hemin组复苏后6 h心肌超微结构完整性明显优于CPR组及Hemin+ZnPP组.复苏后6 h及24 h心肌组织匀浆HO-1水平,Hemin组均高于CPR组及Hemin+ZnPP组(均P＜0.05),但CPR组和Hemin+ZnPP组两组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 诱导HO-1表达可有效改善复苏后心功能不全,减轻心肌损伤,保存心肌细胞超微结构的完整性,为复苏后心功能不全的治疗提供了新的手段.     

siRNA真核表达载体对白血病K562/ADR细胞凋亡的实验研究

目的特异性siRNA真核表达载体pSilenceneoMDR1和pSilenceneoGSTπ对白血病多药耐药细胞K562/ADR凋亡的影响。方法特异性siRNA真核表达载体pSilenceneoMDR1、pSilenceneoGSTπ共转染K562/ADR细胞,同时以空载体pSilencer2.1U6转染K562/ADR细胞(mock)作为对照。流式细胞仪检测细胞凋亡;MTT法检测阿霉素的半数抑制浓度(IC50)。结果流式细胞仪显示空载体pSilencer2.1U6转染细胞凋亡率为(11.65±4.06)%,pSilenceneoMDR1和pSilenceneoGSTπ共转染组细胞凋亡率(44.98±11.27)%,重组质粒转染组与空质粒转染组比较,差异有统计学意义,P<0.01。K562/ADR细胞对阿霉素的耐药指数为24,空载体转染后耐药指数为23,pSilenceMDR1、pSilenceGST共转染后耐药指数降低为7,半数抑制浓度(IC50)值分别从转染前(1.16±0.38)mol/ml下降为(0.33±0.04)mol/ml,重组质粒转染组与空质粒转染组比较,差异有统计学意义,P<0.01。结论siRNA真核表达载体pSilenceMDR1和pSilenceneoGSTπ可以诱导K562/ADR细胞发生凋亡,并且可有效逆转K562/Adr细胞株的多药耐药。     

川陈皮素对脑梗死大鼠HIF-1α和VEGF含量及神经细胞凋亡的影响与机制

目的探讨川陈皮素对脑梗死大鼠低氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)含量及神经细胞凋亡的影响与机制。方法 SD大鼠随机分为假手术组(Sham-OP)、大脑中动脉闭塞组(MCAO)、尼莫地平组(NIM)、中动脉闭塞+低剂量川陈皮素组(MCAO+NOB-L)和中动脉闭塞+高剂量川陈皮素组(MCAO+NOB-H);2周后ELISA试剂盒检测血清VEGF和HIF-1α的含量;Image Pro Plus 6.0软件分析并计算脑梗死体积;TUNEL法检测神经细胞凋亡情况;Western blot检测Cleaved caspase3蛋白表达。结果 MACO组HIF-1α含量、脑梗死体积、神经细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达均显著高于Sham-OP组,VEGF含量显著低于Sham-OP组;NIM组、MCAO+NOB-L组和MCAO+NOB-H组HIF-1α含量、脑梗死体积、神经细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著低于MACO组,VEGF含量显著高于MACO组;MCAO+NOB-H组HIF-1α含量、脑梗死体积、神经细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著低于NIM组和MCAO+NOB-L组,VEGF含量显著高于NIM组和MCAO+NOB-L组(P0.05)。NIM组和MCAO+NOB-L组HIF-1α和VEGF含量、脑梗死体积、神经细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达差异无统计学意义(P0.05)。结论川陈皮素可降低脑梗死大鼠血清HIF-1α含量,提升VEGF含量,通过下调Cleaved caspase3蛋白表达抑制神经细胞凋亡。     

充血性心力衰竭患者血清对内皮祖细胞凋亡的影响及卡维地洛对凋亡的干预作用

目的 观察充血性心力衰竭(CHF)患者血清对内皮祖细胞(EPCs)凋亡的影响及卡维地洛对凋亡的干预作用.方法 选取2007年6月至2007年8月南昌大学第一附属医院心内科CHF患者20例,各抽外周血1OmL获取血清用于实验.20例健康人(南昌大学第一附属医院门诊体检者)抽取外周血密度梯度离心法获取单个核细胞,贴壁法培养获得EPC$.流式细胞术及免疫荧光染色鉴定EPCs.EPCs分4组:A组加入健康人血清;B组加入CHF血清;c组加入CHF血清与卡维地洛;D组加入CHF血清与美托洛尔.继续培养24 h后,膜联蛋白V/碘化丙啶(AnexinV/PI)双染色法检测EPIcs凋亡率,并测EPCs的半胱胺酸蛋白酶蛋白-3(caspase 3)活性.ELISA法测CHF血清中TNF-α含量,组问均数比较用方差分析及q检验.结果 B组EPCs凋亡率(7.5±O.9)%,caspase 3活性(3.0±0.25)]明显高于A组[凋亡率(3.4±0,7)%,caspase 3活性(1.37±0.2),P<0.01],C组EPCs凋亡率[(4.0±0.9)%,3活性(1.54±0.12)较B组明显下降,P<0.01],而D组[凋亡率(7.2±1.2)%.casoase 3活性2.9±0.3)较B组变化不明显,P>0.05.B组中EPCs凋亡率与相应CHF血清TNF-α含量呈正相关(r=0.476,P=0.03).结论 CHF患者血清能促进EPCs凋亡,卡维地洛能有效的抑制这种现象,其作用与抑制Caspase 3活性有关.     

丹参对大鼠移植肝血红素氧合酶1表达的影响

背景：器官移植前使用丹参预处理能够保护组织缺血-再灌注损伤,改善移植器官存活率。目的：观察含丹参的冷灌注液对同种异体大鼠移植肝脏中血红素氧合酶1表达的影响,以及对供体肝脏缺血-再灌注损伤的保护作用。方法：将SD雄性大鼠随机分成UW液组（术中使用UW液灌注保存）、丹参＋UW液组（术中使用丹参＋UW液灌注保存）、ZnPP预处理组（移植前24h腹腔内注射ZnPP,术中使用丹参＋UW液灌注保存）,建立稳定的大鼠同种异体肝移植模型。同时取10只正常大鼠作为正常对照。结果与结论：丹参＋UW液组和UW液组血清总胆红素、谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平明显低于ZnPP预处理组（P〈0.01）。血红素氧合酶1mRNA及其蛋白在丹参＋UW液组中较UW组表达更明显,在ZnPP预处理组中表达明显受到抑制（P〈0.05）。丹参＋UW液组肝脏Suzuki标准评分明显低于ZnPP预处理组及UW液组（P〈0.05）。表明丹参能上调同种异体的大鼠移植肝脏中血红素氧合酶1mRNA及其蛋白的表达,减轻供肝缺血-再灌注损伤,保护移植大鼠肝脏。     

Transplantation of adipose tissue-derived stem cells overexpressing heme oxygenase-1 improves functions and remodeling of infarcted myocardium in rabbits

Adipose tissue-derived stem cells (ADSCs) are a promising source of autologous stem cells that are used for regeneration and repair of infracted heart. However, the efficiency of their transplantation is under debate. One of the possible reasons for marginal improvement in ADSCs transplantation is the significant cell death rate of implanted cells after being grafted into injured heart. Therefore, overcoming the poor survival rate of implanted cells may improve stem cell therapy. Due to limited improvement concerning direct stem cell therapy, gene-transfer methods are used to enhance cellular cardiomyoplasty efficacy. Heme oxygenase-1 (HO-1) can provide various types of cells with protection against oxidative injury and apoptosis. However, exact effects of autologous ADSCs combined with HO-1 on cardiac performance remains unknown. In this study, rabbits were treated with ADSCs transduced with HO-1 (HO-1-ADSCs), treated with non-transduced ADSCs, or injected with phosphate buffered saline 14 days after experimental myocardial infarction was induced, when autologous ADSCs were obtained simultaneously. Four weeks after injection, echocardiography showed significant improvements for cardiac functions and left ventricular dimensions in HO-1-ADSCs-treated animals. Structural consequences of transplantation were determined by detailed histological analysis, which showed differentiation of HO-1-ADSCs to cardiomyocyte-like tissues and lumen-like structure organizations. Apart from improvement in angiogenesis and scar areas, more connexin 43-positive gap junction and greater tyrosine hydroxylase-positive cardiac sympathetic nerves sprouting were observed in the HO-1-ADSCs-treated group compared with ADSCs group. These data suggest that the transplantation of autologous ADSCs combined with HO-1 transduction is a feasible and efficacious method for improving infarcted myocardium.     

血红素加氧酶1在间充质干细胞上调哮喘患者外周血调节性T细胞中的作用

背景：上调CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞是目前治疗哮喘的新靶点。骨髓间充质干细胞在体外可上调正常人外周血的调节性T细胞,但机制尚未明确。目的：观察血红素加氧酶1对间充质干细胞上调哮喘患者外周血CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞的影响。方法：分别加入0,15,30,45,60μmol/L氯化高铁血红素和0,5,10,15,20μmol/L锌-原卟啉对骨髓间充质干细胞进行预处理,荧光定量PCR检测各组间充质干细胞中血红素加氧酶1mRNA的表达量。密度梯度离心法分离哮喘急性发作期患者和健康对照者的外周血单个核细胞,分别与经氯化高铁血红素预处理、经锌-原卟啉预处理、不经预处理的间充质干细胞共孵育,加入植物血凝素反应72h,流式细胞仪检测各组CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞占CD4＋T细胞的比例。结果与结论：人骨髓间充质干细胞中有血红素加氧酶1表达,其表达在体外可被诱导和抑制。间充质干细胞中血红素加氧酶1mRNA的表达量随氯化高铁血红素浓度增加而增加（P〈0.05）,随锌-原卟啉浓度增加而减少（P〈0.05）,具有剂量依赖性。间充质干细胞在体外可提高哮喘患者和健康对照者CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞的水平（P〈0.01）,诱导间充质干细胞中血红素加氧酶1的表达可使共孵育后CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞水平提高（P〈0.01）,抑制间充质干细胞中血红素加氧酶1的表达可使共孵育后CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞的水平降低（P〈0.01）,但仍高于对照组（P〈0.01）。提示骨髓间充质干细胞部分通过血红素加氧酶1上调哮喘患者外周血CD4＋CD25＋CD127low/-调节性T细胞。     

竹节香附素A通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察竹节香附素A（RDA）对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 分别使用0、5、10、20及40μmol/L的RDA干预HeLa细胞48 h,CCK-8实验测定细胞增殖率,计算半抑制浓度（IC₅₀）,确定药物浓度。流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹法检测细胞中B细胞淋巴瘤2家族蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、活化胱天蛋白酶-3（Cleaved-caspase-3）、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）的蛋白表达水平。将HeLa细胞分为4组,即空白对照组、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）组、RDA组和联合用药组,检测及比较各组细胞增殖率、凋亡率和p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量。结果 随着RDA浓度的增加,HeLa细胞的增殖率降低、凋亡率升高（P均< 0.05）,Bax、Cleaved-caspase-3蛋白相对表达量升高（P均< 0.05）,Bcl-2、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量降低（P均< 0.05）;IGF-1激活PI3K/Akt/mTOR信号通路后,RDA仍然能抑制HeLa细胞增殖（P均< 0.05）,降低p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量（P均< 0.05）。结论 RDA可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路对人宫颈癌HeLa细胞产生抑制增殖与促进凋亡的效果。     

汉防己甲素预防K562细胞获得性耐药机制的研究

本研究从MDR1基因转录调控和细胞凋亡两方面探讨汉防己甲素(TTD)预防K562细胞阿霉素(ADM)诱导性多药耐药(MDR)产生的作用机制。本实验分3组,第1组为K562细胞空白对照组;第2组用ADM作用K562细胞24小时诱导细胞耐药;第3组采用TTD预处理K562细胞24小时后,再用ADM诱导耐药。采用RT-PCR检测各组细胞转录因子c-Jun、YB-1及Survivin的mRNA表达水平;Western blot法检测c-Jun、YB-1的核内蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞的凋亡程度。结果表明,0.6μg/ml阿霉素作用后K562细胞MDR1基因转录上调;与空白对照组(第1组)相比,ADM诱导的耐药细胞组(第2组)c-Jun mRNA和蛋白表达减低(p均<0.05),YB-1 mRNA和蛋白表达明显上调(p均<0.05);Survivin mRNA表达无明显差异(p>0.05);细胞凋亡率(8.31%)比空白对照组(0.75%)稍有增加;TTD预处理后再用ADM诱导组(第3组)与ADM作用组相比,c-Jun mRNA和蛋白表达增加(p均<0.05);YB-1 mRNA和蛋白表达下调(p均<0.05);Survivin mRNA表达明显减少(p<0.05),细胞凋亡率(97.2%)明显增加。结论:TTD预防白血病细胞耐药形成的机制可能与其下调YB-1基因和蛋白的表达、上调c-Jun基因和蛋白的表达,从而下调MDR1基因表达有关,另外,TTD与ADM联合作用还能抑制Survivin的表达,增加白血病细胞的凋亡。     

转化生长因子β1诱导人肾小管上皮细胞转分化：Notch1受体阻断剂的影响

背景：研究发现,在病理状态下各种细胞可通过转化生长因子β1的介导,促进肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化为肌成纤维细胞,进而加速肾小管间质纤维化的进展。目的：验证Notch1受体特异性阻断剂γ-分泌酶抑制剂DAPT能否有效阻断、部分逆转或者完全逆转转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化。方法：以体外培养的人近端肾小管上皮细胞株HK-2细胞为观察对象,建立转化生长因子β1诱导的肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化体外模型,实验分为空白对照组、10μg/L转化生长因子β1组、转化生长因子β1（10μg/L）＋γ-分泌酶抑制剂DAPT（5μmol/L）组、转化生长因子β1（10μg/L）＋γ-分泌酶抑制剂DAPT（5μmol/L）部分延迟加入组、转化生长因子β1（10μg/L）＋γ-分泌酶抑制剂DAPT（5μmol/L）延迟加入组。分别于12,24,48,72 h,在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;用免疫组织化学法和RT-PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白、E-钙粘连素蛋白和mR NA表达变化。结果与结论：1在干预后在12,24,48,72 h,与空白对照组相比较,转化生长因子β1组α-平滑肌肌动蛋白蛋白和mR NA表达均明显增加（P〈0.05）,E-钙粘连素蛋白和mR NA表达逐渐减少（P〈0.05）。2转化生长因子β1＋γ-分泌酶抑制剂DAPT组α-平滑肌肌动蛋白的蛋白和mR NA、E-钙粘连素蛋白和mR NA的表达各时间段均接近空白对照组（P〉0.05）。3γ-分泌酶抑制剂DAPT部分延迟加入组,α-平滑肌肌动蛋白的蛋白和mR NA的表达在12 h增加（P〈0.05）,之后其表达逐渐减少（P〈0.05）,E-钙粘连素蛋白表达在24 h开始减少（P〈0.05）,之后逐渐增加,E-钙粘连素mR NA各时间段都与空白对照组相接近,72 h时α-平滑肌肌动蛋白与E-钙粘连素的蛋白及mR NA表达均与空白对照组无显著差异（P〉0.05）。4与空白对照组相比较,延迟加入组各时间点的α-平滑肌肌动蛋?     

乌司他丁对骨水泥颗粒诱导MC3T3-E1鼠前成骨细胞凋亡的干预作用

背景：前期研究发现,乌司他丁对RANKL诱导RAW264.7细胞活化为成熟破骨细胞具有一定的抑制作用,并可降低基质金属蛋白酶9的表达,但其对聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥促成骨细胞凋亡效应是否有干预作用尚不清楚。 目的：探讨乌司他丁对骨水泥颗粒诱导MC3T3-E1鼠前成骨细胞凋亡及Ⅰ型胶原、骨钙素、基质金属蛋白酶2 mRNA表达的影响。 方法：取第六七代生长状态良好的MC3T3-E1鼠前成骨细胞,分4组培养,骨水泥组加入1 g/L的聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥悬液;高、低剂量乌司他丁组在加入1g/L 的聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥悬液后,再分别加入5000,500 U/mL的乌司他丁;设置单独培养的细胞为空白对照。MTT法检测细胞增殖活性,茜素红染色检测细胞矿化程度,流式细胞仪检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR检测细胞中Ⅰ型胶原、骨钙素、基质金属蛋白酶2 mRNA的表达。 结果与结论：与空白对照组比较,骨水泥抑制了MC3T3-E1细胞增殖活性（P＜0.05）,促进了细胞凋亡（P＜0.05）,在加入不同浓度乌司他丁后,细胞增殖活性逐渐增强（P＜0.05）,凋亡率降低（P＜0.05）,且呈剂量时间依赖关系;骨水泥降低了细胞中Ⅰ型胶原、骨钙素表达（P ＜0.05）,升高了基质金属蛋白酶2表达（P ＜0.05）,在加入5000 U/mL乌司他丁后,细胞基质金属蛋白酶2表达降低,Ⅰ型胶原、骨钙素表达升高（P＜0.05）。骨水泥组无矿化结节,其他组均有矿化结节形成。结果表明乌司他丁对骨水泥诱导MC3T3-E1鼠前成骨细胞凋亡具有一定的抑制作用,可促进成骨细胞中Ⅰ型胶原、骨钙素的生成,并降低基质金属蛋白酶2的表达水平。     

脂肪源性干细胞移植急性心肌梗死后心脏缝隙连接蛋白43的表达

背景：脂肪源性干细胞作为一种新型的种f细胞,移植后对大鼠一15肌梗死治疗作用的研究报道较少。目的：观察脂肪源性干细胞移植后对急性心肌梗死人鼠心功能和缝隙连接蛋白43表达的影响。方法：分离培养SD火鼠脂肪源性干细胞。将SD大鼠分为3组,心肌梗死组、脂肪源性千细胞移植组均建立急性心肌梗死模型,假手术组开胸不结扎。脂肪源性干细胞移植组于心肌梗死后30min心肌内分4点注射脂肪源性干细胞．每点25μL;其他2组分别注射等量的PBS。移植2周后行相应指标观察。结果与结论：心脏彩超结果显示,与心肌梗死组相比,脂肪源性干细胞移植组的左室射血分数、短轴缩短率均上升（P〈0．0S）。马森三色染色结果显示,脂肪源性干细胞移植组纤维渗出率明显低于心肌梗死组（P〈0．05）。免疫荧光结果显示,与心肌梗死组比较,脂肪源性干细胞组缝隙连接蛋白43表达和血管密度均显著上升（P〈0．05-0．01）。实时聚合酶链反应结果表明,脂肪源性干细胞移植组缝隙连接蛋白43mRNA的表达高于心肌梗死组（P〈0．01）。提示脂肪源性千细胞移植不仅可以显著改善心肌梗死后心功能,还可以减少纤维渗出,上调缝隙连接蛋白43的表达。     

TGF-β1和(或)三氧化二砷作用于HL-60细胞后P27~(Kip1)表达及凋亡情况的研究

本研究观察三氧化二砷(As2O3)和/或TGF-β1对HL-60细胞凋亡及细胞周期的影响,以及作用前后P27Kip1、内源性TGF-β1、cyclinE和BCL-2的变化情况。As2O3和/或TGF-β1作用于HL-60细胞,用细胞形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期改变情况,应用免疫组织化学检测药物处理前后P27Kip1、内源性TGF-β1、cyclinE以及BCL-2表达的变化情况。结果表明:As2O3和TGF-β1单用均可以诱导HL-60细胞发生凋亡,联合处理对HL-60细胞生长抑制作用强于单药处理,其中5μmol/LAs2O3作用最强,5ng/mlTGF-β1处理可引起HL-60细胞的细胞周期阻滞于G1期(p0.05)。5ng/mlTGF-β1和联合处理组P27Kip1的表达较对照组增强(p0.05);5μmol/LAs2O3处理组P27Kip1的表达与对照组比较无明显差异(p0.05)。5ng/mlTGF-β1和联合处理组均可见cyclinE蛋白表达下调(p0.05)。5μmol/LAs2O3和联合处理组可见内源性TGF-β1表达上调(p0.05)。结论:As2O3、外源性TGF-β1均可诱导HL-60细胞凋亡,联合处理组诱导凋亡作用强于对照组和单药处理组,TGF-β1处理可引起HL-60细胞周期阻滞于G1期。TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡过程中P27Kip1表达增强,拮抗cyclinE和BCL-2的作用,细胞周期阻滞,诱导细胞发生凋亡,这表明P27Kip1是TGF-β引起细胞周期阻滞的关键效应物,外源性TGF-β1又通过上调内源性TGF-β1的表达增强As2O3诱导原代APL细胞凋亡的作用。     

卵巢上皮癌组织Id-1和HO-1表达及临床意义

目的探讨分化抑制因子-1（Id-1）和血红素加氧酶-1（HO-1）在卵巢上皮癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系。方法采用免疫组化S-P法,检测50例卵巢上皮癌、45例良性卵巢肿瘤及15例正常卵巢组织中Id-1和HO-1的表达。结果卵巢癌组织中Id-1和HO-1的阳性表达率明显增高,与良性卵巢瘤组织比较,差异有显著性（χ2=17.083、6.838,P〈0.05）;与卵巢正常组织比较,差异有显著性（χ2=31.097、27.444,P〈0.05）。Id-1、HO-1在卵巢上皮癌组织中的表达与术前CA125水平、病理分级和淋巴结转移密切相关（χ2=4.678-7.739,P〈0.05）。卵巢上皮癌组织中Id-1和HO-1的表达呈正相关（r=0.390,P〈0.05）。结论 Id-1和HO-1的高表达在卵巢上皮癌的发生、发展中起重要作用。