威灵仙皂苷对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞的凋亡诱导作用及其机制

目的探讨威灵仙皂苷对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞的凋亡诱导作用及其机制。方法以NB4细胞为实验对象,1.0 μmol/L的三氧化二砷为阳性对照,0.01% DMSO为阴性对照,用不同浓度的威灵仙皂苷作为实验组,利用MTT法观察细胞的增殖抑制状态,瑞氏染色进行细胞形态学观察,流式细胞术检测细胞凋亡率及进行细胞周期测定,Real-time PCR检测威灵仙皂苷干预细胞后PML-RARa mRNA的变化。结果不同浓度的威灵仙皂苷作用细胞后,均能抑制细胞增殖,具有时间和浓度依赖性,但抑制率低于砷剂组。瑞氏染色可见典型凋亡细胞的形态学改变,与砷剂组有同样的改变。流式细胞术检测发现凋亡细胞随时间延长而增多,组间差异有统计学意义,凋亡率低于砷剂组。细胞周期测定提示G2期细胞增多,G1期细胞明显减少,组间差异有统计学意义（P<0.05）。威灵仙皂苷作用后的NB4细胞PML-RARa mRNA的表达无统计学意义（P>0.05）。结论威灵仙皂苷可能通过诱导NB4细胞凋亡抑制细胞生长,可能的机制是通过细胞周期阻滞,但不影响PML-RARa mRNA的表达。     

二硫化二砷对维甲酸耐药急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4-R2增殖和凋亡的影响

目的:研究As2S2对维甲酸耐药急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4-R2增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法:CCK-8法检测不同浓度As2S2作用于NB4-R2细胞24、48和72h对细胞的生长抑制率,计算半数抑制浓度（IC50）,Annexin V-FITC/PI双染法检测As2S2对NB4-R2细胞凋亡的影响,实时定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）和Western blot检测As2S2作用前后NB4-R2细胞PML-RARα融合基因和融合蛋白的表达水平。结果:不同浓度As2S2分别作用于NB4-R2细胞24、48和72h后,细胞增殖均受到不同程度抑制,且该抑制作用呈时间和剂量依赖性,As2S2对NB4-R2细胞的IC50分别为（17.64±2.11）μmol/L、（8.57±1.03）μmol/L和（5.82±0.71）μmol/L。流式细胞术结果表明As2S2处理24、48和72h后细胞凋亡率分别为正常对照组的（4.43±0.12）倍、（6.50±0.09）倍和（8.63±0.36）倍。qRT-PCR结果表明PML-RARα mRNA表达水平较作用前分别降低了（1.47±0.09）倍、（2.86±0.82）倍和（7.46±1.09）倍,同时,PML-RARα融合蛋白表达水平较作用前分别降低了（1.36±0.16）倍、（1.85±0.33）倍和（3.99±0.63）倍（P<0.05）。结论:As2S2可显著抑制NB4-R2细胞增殖并促进细胞凋亡,其机制与诱导PML-RARα融合基因和融合蛋白降解密切相关。     

塞来昔布对NB4细胞增殖、凋亡及VEGF表达的影响

目的 探讨塞来昔布对急性早幼粒细胞白血病细胞的抑制作用及可能机制.方法 不同浓度塞来昔布处理急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4,MTT法检测塞来昔布作用后细胞的增殖情况.采用流式细胞术测定NB4细胞周期分布及凋亡;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2表达以及RTPCR检测塞来昔布作用对VEGF、HIF-1α在mRNA水平的表达.结果 MTT显示塞来昔布对NB4细胞生长有明显抑制作用.20～80 μmol/L塞来昔布作用24 h,NB4细胞G0/G1期比例明显升高,而S期细胞比例下降(P＜0.05);塞来昔布处理组细胞凋亡率明显高于对照组,Western blot显示Bcl-2蛋白表达下调(P＜0.05);RT-PCR显示塞来昔布可抑制VEGF及HIF 1α的mRNA表达.结论 塞来昔布在体外可抑制急性早幼粒细胞白血病细胞增殖并诱导凋亡.     

雷公藤红素对人前列腺癌细胞凋亡及SENP1基因表达的影响

目的：研究雷公藤红素对人前列腺癌（PCa）细胞生长、凋亡及SUMO特异蛋白酶1（SUMO-specificproteases 1,SENP1）基因表达的影响。方法：对前列腺癌细胞PC-3和LNCaP进行雷公藤红素处理,通过测定细胞生长曲线,荧光染色,荧光显微镜观察,流式细胞仪分析和实时定量PCR,检测雷公藤红素对前列腺癌细胞生长、凋亡及SENP1 mRNA表达水平的影响。结果：雷公藤红素能够显著抑制PCa细胞的生长,并且抑制作用呈剂量依赖性;雷公藤红素能够诱导PCa细胞凋亡,1μmol/L雷公藤红素处理24h诱导14.8%的PC-3细胞和23.2%的LNCaP细胞发生凋亡或死亡;雷公藤红素还能够降低PCa细胞中SENP1 mRNA水平,尤其是PC-3细胞。结论：雷公藤红素能够显著抑制PCa细胞的生长并诱导细胞凋亡,表明雷公藤红素具有抗前列腺癌作用,雷公藤红素能够降低PCa细胞中SENP1 mRNA水平,揭示雷公藤红素可能通过SENP1相关信号通路达到抗前列腺癌作用。     

雷公藤红素对人前列腺癌细胞凋亡及SENP1基因表达的影响

目的:研究雷公藤红素对人前列腺癌(PCa)细胞生长、凋亡及SUMO特异蛋白酶1(SUMO-specificproteases 1,SENP1)基因表达的影响。方法:对前列腺癌细胞PC-3和LNCaP进行雷公藤红素处理,通过测定细胞生长曲线,荧光染色,荧光显微镜观察,流式细胞仪分析和实时定量PCR,检测雷公藤红素对前列腺癌细胞生长、凋亡及SENP1 mRNA表达水平的影响。结果:雷公藤红素能够显著抑制PCa细胞的生长,并且抑制作用呈剂量依赖性;雷公藤红素能够诱导PCa细胞凋亡,1μmol/L雷公藤红素处理24h诱导14.8%的PC-3细胞和23.2%的LNCaP细胞发生凋亡或死亡;雷公藤红素还能够降低PCa细胞中SENP1 mRNA水平,尤其是PC-3细胞。结论:雷公藤红素能够显著抑制PCa细胞的生长并诱导细胞凋亡,表明雷公藤红素具有抗前列腺癌作用,雷公藤红素能够降低PCa细胞中SENP1 mRNA水平,揭示雷公藤红素可能通过SENP1相关信号通路达到抗前列腺癌作用。     

雷公藤红素体外抑制人类急性髓系白血病细胞的实验研究

 目的　研究雷公藤红素体外对人类急性髓系白血病（AML）细胞的体外抑制作用。方法　应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和流式细胞术（FCM）等方法研究雷公藤红素对人类AML细胞的影响。结果　MTT实验显示,与空白组比较,培养不同时间后不同浓度组雷公藤红素的细胞增殖抑制率均明显升高,差异有统计学意义（P＜0.01）。FCM检测结果显示,1 μmol／L以上浓度雷公藤红素作用不同时间,AML细胞均可出现凋亡现象,凋亡率明显高于不加药物的对照组（P＜0.01）。结论　雷公藤红素对AML有明显的抑制作用,其作用可能与其诱导细胞凋亡有关。     

二甲双胍对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨二甲双胍对急性早幼粒细胞白血病（acute promyelocytic leukemia, APL）NB4细胞增殖与凋亡的影响及其可能的机制。方法：二甲双胍单独或联合多柔比星处理NB4细胞后,采用MTT法检测NB4细胞的增殖,采用流式细胞术检测细胞的凋亡,采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白caspase-9及caspase-3的活化。结果：二甲双胍可剂量（r=0952,P<0.01）和时间（r=0.967,P<0.01）依赖性抑制NB4细胞的增殖,处理72 h后,其对NB4细胞的IC50值为（6.39±037）mmol/L。二甲双胍可增加NB4细胞对多柔比星的化疗敏感性,0.625 mmol/L二甲双胍联合0.02 μmol/L的多柔比星对NB4细胞的增殖抑制率明显高于单用多柔比星组\[（29.84±0.21）% vs （10.68±0.45）%,P<0.05\]。5 mmol/L二甲双胍处理48 h后,NB4细胞的凋亡率明显高于未处理对照组\[（43.95±0.29）% vs （7.12±0.29）%,P<0.01\];二甲双胍处理NB4细胞后,凋亡蛋白caspase-3、caspase-9活化片段表达上调。结论：二甲双胍能够有效抑制APL细胞株NB4的增殖、促进其凋亡,并能增强其对多柔比星的化疗敏感性,caspase-3和caspese-9凋亡蛋白可能参与二甲双胍诱导NB4细胞凋亡的过程。     

桂皮酸对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞增殖和分化作用

目的　探讨桂皮酸 (CinnamicacidCINN )对急性早幼粒细胞白血病 (APL)细胞增殖和分化的作用。方法　将APL细胞株NB4细胞与不同浓度CINN在体外共同培养 ,应用台盼蓝拒染试验及MTT比色法观察细胞生长曲线、生长抑制率 ;用光学显微镜观察细胞形态变化 ;以NBT还原试验检测药物作用前后NB4细胞NBT还原能力改变 ;用流式细胞仪测定细胞周期及细胞分化抗原CDlla、CDllb的表达。结果　lmmol/LCINN、3mmol/LCINN和 5mmol/LCINN能明显抑制NB4细胞增殖 ,呈剂量时间依赖性 ;lmmol/L、3mmol/LCINN能诱导NB4分化 ,表现在NBT还原能力显著增强 ,CDlla、CDllb表达升高 ,药物组与对照组之间差异有显著性 (P <0 .0 1) ,流式细胞术分析发现 ,CINN处理组细胞被阻滞于S期 ,S期细胞数明显增多 ,G2 期细胞数减少。结论　CINN体外能诱导NB4细胞分化 ,增殖能力下降。     

槲皮素对NB4细胞株的抑制增生和促凋亡作用

目的：研究黄酮类化合物槲皮素对白血病细胞株NB4的抑制作用。方法：应用细胞计数、细胞形态、DNA凝胶电泳等方法,在体外研究槲皮素诱导NB4细胞凋亡的作用。结果：10μmol/L浓度的槲皮素无明显抑制NB4增殖作用,过高的浓度可能发生细胞变性,而当作用浓度为30μmol/L-90μmol/L时,就能显示抑制效应,其抑制作用呈剂量依赖性,细胞表现典型的凋亡特征。结论：槲皮素在一定的浓度范围内能抑制NB4细胞增生,其作用随时间和浓度增加而增强,并诱导凋亡。     

塞来昔布抑制NB4细胞增殖并诱导凋亡的体外研究

目的 探讨塞来昔布对急性早幼粒细胞白血病细胞的抑制增殖及诱导凋亡作用.方法 应用光镜和透射电镜观察细胞形态学改变;MTT法分析塞来昔布对细胞增殖的影响;琼脂糖凝胶电泳进行DNA片段化分析;流式细胞仪检测不同浓度(0、20、40、80、120和160 μmol/L)塞来昔布处理24小时后细胞周期的变化以及凋亡情况.结果 镜下观察细胞出现凋亡形态学表现.MTT示塞来昔布对NB4细胞具有明显的增殖抑制作用,并具有时间和剂量依赖性.琼脂糖凝胶电泳见DNA片段化,形成典型梯状条带.流式细胞仪检测发现塞来昔布处理24小时后,随着作用浓度增加,NB4细胞凋亡率提高;同时细胞周期阻滞于G1/S期.结论 塞来昔布能够抑制急性早幼粒细胞白血病细胞增殖并诱导凋亡.     

白细胞介素-33对急性髓系白血病细胞株HL-60、NB4凋亡和周期的调控作用及机制研究

目的  探讨白细胞介素-33（interleukin-33,IL-33）对急性髓系白血病细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法 急性髓系白血病细胞株HL-60、NB4经外源性IL-33以及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）特异抑制剂（SB203580）处理72 h后,采用Annexin V/DAPI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率,细胞周期检测试剂盒检测细胞周期,Western blot 检测细胞周期蛋白依赖性激酶1（cyclin-dependent kinases 1,CDK1）蛋白表达以及p38 MAPK的磷酸化水平。结果 与对照组相比,IL-33组的HL-60和NB4细胞经IL-33作用后,细胞凋亡水平降低（P<0.05）,细胞周期中S期比例升高（P<0.001）;而SB+IL-33组细胞经SB203580和IL-33联合处理后,细胞凋亡水平高于IL-33组（P<0.05）,S期细胞的百分比低于IL-33组（P<0.05）;Western blot检测结果表明,与对照组相比,IL-33组细胞的p38 MAPK磷酸化（p-p38 MAPK） 水平和CDK1蛋白表达水平均显著增高（均P<0.05）,而SB+IL-33组的p-p38 MAPK水平以及CDK1水平较IL-33组显著下降（均P<0.05）。 结论 IL-33可通过激活p38 MAPK,抑制急性髓系白血病细胞株HL-60、NB4细胞的凋亡,抑制细胞周期停滞。     

IFNγ联合全反式维甲酸对白血病细胞株NB4、MR2增殖和分化的影响

背景与目的:全反式维甲酸(all-transretinoicacid,ATRA)的应用,使90%以上的急性早幼粒细胞白血病(acutepromyelocyticleukemia,APL)患者获得了完全缓解,但维甲酸耐药的快速发生成为ATRA治疗APL的一大缺憾。许多研究表明ATRA耐药与缺乏干扰素合成的某些蛋白质有一定的关系,本研究拟探讨干扰素联合ATRA作用抑制ATRA耐药APL细胞增殖和分化的可能性及其机制。方法:γ干扰素(interferonγ,IFNγ)、ATRA单独或联合作用于ATRA敏感细胞株(NB4)及ATRA耐药细胞株(MR2)后,采用MTT法检测细胞的增殖,用光镜观察和NBT还原实验检测细胞的分化,间接免疫荧光法观察早幼粒细胞白血病(promyelocyticleukemia,PML)蛋白表达的情况。结果:第8天时,IFNγ组、ATRA组和(IFNγ ATRA)组NB4细胞的生长抑制率依次为68.0%、85.0%和95.2%;MR2细胞的生长抑制率依次为24.1%、4.3%和51.5%。联合用药组NB4细胞、MR2细胞的生长抑制率明显高于单独用药组(P<0.05)。第3天时,IFNγ组、ATRA组和(IFNγ ATRA)组NB4细胞的NBT阳性率依次为19.3%、74.7%和93.3%,MR2细胞的NBT阳性率依次为16.8%、5.2%和31.5%,联合用药组NB4细胞、MR2细胞的NBT阳性率明显高于单独用药组(P<0.05)。IFNγ作用后,NB4细胞和MR2细胞核内的荧光颗粒较对照组明显增多。结论:IFNγ与ATRA具有协同作用,二者联合应用不仅能够增强ATRA对NB4细胞和MR2细胞的增殖抑制作用,而且能够部分诱导对ATRA耐药的MR2细胞发生分化。     

氧化酚砷诱导急性早幼粒细胞性白血病细胞凋亡的研究

目的：了解氧化酚砷（ｐｈｅｎｙｌａｒｓｉｎｅ ｏｘｉｄｅ,ＰＡＯ）对急性早幼粒细胞性白血病（ＡＰＬ）细胞系ＮＢ４细胞的可能作用。方法：在台盼蓝排除法计数活细胞和细胞活力的基础上,通过细胞形态不和流式细胞仪检测细胞凋亡。通过对细胞进行Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ（Ｒｈ）１２３和碘化丙啶双重染色,并应用流式细胞仪检测其荧光强度,以反映细胞线粒体跨膜电位（ΔΨｍ）。结果和结论：低浓度（０．０５和０．０１μｍｏｌ／     

辛伐他汀对NB4细胞分化与凋亡的影响

 目的　探讨磁性纳米Fe3O4颗粒（Fe3O4-MNP）联合多柔比星（ADM）对Raji细胞的影响。方法　采用MTT法检测细胞的增殖,锥虫蓝染色计数细胞的活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测p53和NF-κB的表达水平。结果　ADM及Fe3O4-MNP-ADM对Raji细胞的生长抑制率与药物浓度、作用时间呈正相关（r＝0.412,P＝0.027;r＝0.523,P＝0.014）;12、24、48 h细胞凋亡率二者分别为8.76 % 比 14.85 %、35.08 %比 44.50 %、44 %比69.4 %,差异有统计学意义（P＝0.012、0.041、0.024）;Western blot检测示ADM组与Fe3O4-MNP-ADM组NF-κB蛋白的灰度条带与内参比较分别为4.22±0.32、3.31±0.28,p53蛋白的条带灰度值分别为1.042±0.114、1.270±0.091,差异具有统计学意义（t＝-54.416,P＝0.035;t＝33.963,P＝0.047）。结论　Fe3O4-MNP联合ADM能够有效抑制Raji细胞增殖并诱导其凋亡,作用机制可能与增强p53蛋白活化、抑制NF -κB通路的激活有关。     

三氧化二砷对人白血病细胞株NB4和K562及MOLt4的增殖、周期及凋亡的影响

目的 :观察三氧化二砷 (As2 O3 )对人白血病细胞株NB4、K5 62、MOLt4的增殖 ,周期及凋亡的影响。方法 :采用台盼蓝拒染法计数活细胞数 ,并计算细胞生长率 ;细胞涂片经Wright Giemsa染色 ,光镜下观察细胞的形态 ;流式细胞仪解析细胞周期。结果 :1)As2 O3 能够抑制NB4、K5 62、MOLt4细胞的增殖。 2 ) 4μmol/LAs2 O3 能够使K5 62细胞发生M期阻滞。但NB4、MOLt4细胞未见明显改变。 3 ) 2、4μmol/L的As2 O3 处理NB4、MOLt4和K5 62细胞 48h ,NB4、MOLt4细胞株的凋亡细胞明显增多。但是 ,K5 62细胞未见明显改变。结论 :As2 O3 不但对NB4细胞具有抑制增殖 ,诱导细胞凋亡的作用 ,而且对非t( 15 ;17)的K5 62、MOLt4细胞也具有抑制增殖的作用 ,同时诱导MOLt4细胞凋亡 ,使K5 62细胞发生M期阻滞。     

黄芪及其与柔红霉素联用对白血病NB4细胞株增殖的影响

背景与目的蒽环类药物对心脏的毒性不同程度的限制了其临床应用,中药黄芪对心肌细胞有一定的保护作用,而黄芪对白血病细胞的干预情况了解甚少。本实验旨在了解黄芪以及与柔红霉素(DNR)联合应用时对培养的人白血病细胞株NB4增殖的影响。方法以NB4细胞株为实验模型,实验细胞分为4组空白对照组(不加任何药物)、黄芪组、DNR组及黄芪+DNR组。分别于24、48和72h3个时相收集细胞分析,应用Annexin V+碘化丙锭双染色法观察细胞凋亡情况,以及激光共聚焦显微镜(LSCM)对细胞内DNR蓄积情况进行定性和定量分析检测。结果3个时相收集细胞,黄芪组细胞凋亡率分别为(4.11±0.45)%、(4.68±0.59)%和(6.76±0.85)%,空白对照组为(3.58±0.48)%、(4.81±0.62)%和(5.88±0.82)%,两组差异无显著性(P>0.05);DNR组为(24.31±4.21)%、(39.74±5.26)%和(53.99±7.20)%,黄芪+DNR组为(25.13±4.82)%、(38.92±5.40)%和(60.48±7.89)%,两组差异无显著性(P>0.05)。LSCM检测DNR在细胞内的蓄积情况显示,3个时相DNR组荧光强度分别为112.87±31.68、173.54±38.15和179.33±40.95,黄芪+DNR组为146.67±42.47、148.87±50.28和157.04±43.67,两组差异无显著性(P>0.05)。而DNR组、黄芪+DNR组与空白对照组相比,差异均有显著性(P<0.05)。结论黄芪对NB4细胞的增殖无明显促进或抑制,与DNR联用时,不会影响DNR对白血病细胞的抑制作用。     

Effects of gemcitabine on cell proliferation and apoptosis in non-small-cell lung cancer (NSCLC) cell lines

We evaluated the antiproliferative and the proapoptotic ability of gemcitabine in three non-small-cell lung cancer (NSCLC) cell lines. NCI-H292 (mucoepidermoid carcinoma), NCI-CorL23 (large-cell carcinoma) and NCI-Colo699 (adenocarcinoma) cells were cultured with and without 0.5, 0.05 and 0.005 μM gemcitabine for 24, 48 and 72 h, respectively. Gemcitabine exerted a stronger and earlier antiproliferative and proapoptotic effect on H292 cells than on CorL23 or Colo699 cells. Fas receptor expression was increased in all three cell lines and was higher in Colo699 than in CorL23 cells. The incubation of NSCLC with anti-Fas agonistic monoclonal antibody (CH11) induced cell apoptosis in H292 cells, demonstrating that the Fas receptor was functionally active. Finally, gemcitabine and CH-11 exerted a synergistic effect on cell apoptosis in H292 cells. This study demonstrates that gemcitabine induces apoptosis in NSCLC and that this effect might be exerted by modulating functionally active Fas expression, and these effects of gemcitabine were stronger in H292 cells than in either CorL23 or Colo699 cells. Received: 24 March 1999 / Accepted: 25 July 2000